衰老皮肤表皮细胞和成纤维细胞生长动力学研究

为了研究衰老表皮细胞和成纤维细胞生长动力学方面的变化，应用细胞培养和流式细胞仪染色体分析技术研究衰老皮肤与小儿皮脸表皮细胞及真皮成纤维细胞的生长曲线，分裂指数，生长周期各期细胞比例等特点，动态观察衰老细胞生长动力学方面的变化，结果发现衰老皮肤的表皮细胞和真皮成纤维细胞Ｇ０－Ｇ１其细胞比例较低，合成期细胞仅占５－６％，而小儿表皮细胞和成纤维细胞Ｇ０－Ｇ１期细胞占６％，合成期细胞占１３～１４％，这说明     

体外培养心脏成纤维细胞增殖的检测方法

在培养的心脏成纤维细胞模型上建立检测增殖的方法。方法（１）差速贴壁分离法培养乳鼠心脏成纤维细胞,用光镜,电镜及免疫细胞化学染色进行鉴定。（２）同步测定心脏成纤维细胞在不同浓度胎牛血清作用下ＢｒｄＵ掺入和ＷＳＴ－１代谢活性。结果（１）培养的细胞经形态学观察和波形蛋白ＳＰ染色,鉴定成纤维细胞。（２）在０．１％,２．５％,５％和１０％的胎牛血清作用下,心脏成纤维细胞ＢｒｄＵ,ＷＳＴ－１的ＯＤ值分别是０．     

激素和干扰素对瘢痕疙瘩成纤维细胞生长影响的研究

为了解氢化可的松和干扰素α－２ｂ对瘢痕疙瘩浸润，增生和老化各部分成纤维细胞的影响是否相同，对６例瘢痕疙瘩不同部位和６例正常皮肤成纤维细胞在培养基中加入氢可的松（０．１ｍｇ／ｍｌ和０．５ｍｇ／ｍｌ）及干扰素α－２ｂ（１０００μ／ｍｌ）后的增殖情况下初步研究，结果：氢化可的松浓度为０．１ｍｇ／ｍｌ时，所有细胞均被抑制，当氢化可的松浓度升至０．５ｍｇ／ｍｌ时，几乎氖的细胞均不能存活，干扰素α－２ｂ对瘢痕     

人表皮细胞的培养方法探讨

目的 探讨适合临床推广、应用的人表皮细胞培养方法。方法 对比人表皮细胞在无血清培养基K—SFM及有血清培养基DMBM中的生长情况。结果 人表皮细胞在无血清培养基K—SFM中生长快，细胞形态好，不易被成纤维细胞污染。结论 应用无血清培养基K—SFM培养人表皮细胞，方法简便，适合临床推广应用。     

改良的胶原酶滑膜细胞分离培养法

目的 探讨一种改良的滑膜细胞培养法。方法 修剪、收集关节滑膜层,依次以胶原酶、０．２％胰蛋白酶、０．２％胰蛋白酶－０．０２％ＥＤＴＡＮａ２消化。１００目筛网过滤,Ｄ－ｈａｎｋｓ洗液网后培养,行显微镜、电镜、ＡＢＣ法免疫组化鉴定。结果 培养的细胞具有成纤维细胞样形态和特征,免疫组化染色显示ｖｉｍｅｎｔｉｎ阳性、ＣＤ６８阴性,纯度达９８％以上,符合Ｂ超滑膜细胞特点,结论 改良的胶原酶消化法是一种有效的     

肾小管周围成纤维细胞的培养及其细胞间粘附分子－1的检测

成功地培养了小鼠肾小管周围成纤维细胞，观察了成纤维细胞的形态、生长周期，并用间接免疫荧光的方法进行了鉴定：成纤维细胞抗细胞角蛋白、角蛋白和结蛋白阴性，抗α－平滑肌肌动蛋白和波形蛋白阳性。同时利用流式细胞仪检测了成纤维细胞在脂多糖刺激６ｈ和２４ｈ后。表达细胞间粘附分子－１的比率和荧光强度，结果发现在接受脂多糖刺激后，成纤维细胞对细胞间粘附分子－１的表达迅速增多。     

生长因子的寡核苷酸对成纤维细胞增生的影响

目的：观察一些生长因子有义和反义寡核苷酸对成纤维细胞增生的影响。方法：采用细胞增生试验。结果：１．酸性成纤维细胞生长因子的寡核苷酸和表皮生长因子的寡核苷酸以抑制细胞增生为主；２．碱性成纤维细胞生长因子有义寡核苷酸对成纤维细胞增生有抑制作用，但其反义寡核苷酸却有促进成纤维细胞增生的倾向。     

枸杞和骨碎补对人牙龈成纤维细胞体寿命的影响

以人二倍体牙龈成纤维细胞为体外寿命实验模型，观察枸杞骨碎补的抗衰老作用。实验发现，１．２５ｍｇ／ｍｌ的枸杞和骨碎补溶液，能使细胞附着率增加，铺展过程加快，群体倍增时间缩短，生长饱和密度增大，分裂代数增加１８．８％和２０．０％；寿命延长４１．２和３８．１％。表明枸杞和骨碎补对体外培养的牙龈成纤维细胞有较明显的延寿作用。     

维胺酸对体外培养人喉癌细胞增殖的影响

采用细胞生长曲线、细胞毒试验、克隆形成试验以及有丝分裂指数和多核率测定，观察了维胺酸（ＲⅡ）对人喉癌ＨＥｐ－２细胞增殖的影响。结果表明：不同浓度ＲⅡ（２～６ｍｇ·Ｌ－１）接触细胞２４ｈ、４８ｈ和９６ｈ，ＨＦｐ－２细胞增殖抑制效应与剂量呈正相关；与溶剂对照相比，当ＲⅡ浓度为２、４和６ｍｇ－Ｌ－１时，ＭＴＴ法的细胞生长抑制率分别为１０．８３％、７１．３４％和８２．１７％（ｒ＝０．９５１，Ｐ＜０．０５），半数抑制浓度（ＩＱ５０）为３．０１ｍｇ·Ｌ－１；克隆形成试验中ＲⅡ组细胞存活率分别为７２．１５％、４９．３２％和４３．３８％（Ｐ＜０．０１），呈现剂量相关性抑制（ｒ＝－０．９６７，Ｐ＜０．０５）；ＲⅡ还抑制细胞有丝分裂指数和多核率（Ｐ＜０．０５或Ｐ＜０．０１），镜下可见癌细胞有形态学改变。表明ＲⅡ对人喉癌细胞的生长增殖具有抑制作用。     

消毒剂对脊髓灰质炎病毒感染力灭活的研究

目的：评价微量组织培养半数感染量病毒滴定法检测４年种常用消毒剂对脊髓灰质炎的灭活效果。方法：将ＰｏｌｉｏＶ滴定于９６孔细胞培养板中的细胞上进行培养，测定病毒接触消毒剂前后感染细胞的滴度。结果：２％碱性戊二醛、１％二氯异氰尿酸钠（５２００ｍｇ．Ｌ＾－１）５ｍｉｎ内能有效杀灭ｐｏｌｉｎｏＶ，０．２％过氧乙酸和０．５％碘伏需１０ｍｉｎ。结论：用微量ＴＣＩＤ５０法评价消毒剂对病毒的灭活效果，客观，灵活、简     

诱导性多潜能干细胞滋养层制备条件的实验研究

目的制备小鼠胚胎成纤维细胞（Mouse Embryonic Fibroblasts,MEFs）滋养层,用于诱导性多潜能干细胞（Induced Pluripotent Stem Cells,iPSCs）的体外培养。方法取13.5～15.5天胎龄的胎鼠,采用组织消化法分离原代培养成纤维细胞,对MEFs的生长形态、生长曲线进行观察。采用10μg/ml丝裂霉素C预处理P2～P3代MEFs 2～3h制备出细胞滋养层,在该滋养层上进行iPSCs培养,观察iPSCs的集落生成情况,并行碱性磷酸酶细胞染色。结果 MEFs经丝裂霉素C预处理后细胞既不增殖,也不会死亡,仍保持分泌多种生长因子的能力。iPSCs在MEFs滋养层上生长良好,类似于胚胎干细胞一样能形成＂鸟巢＂状集落,并可维持iPSCs正常形态,抑制其分化而不影响活力,碱性磷酸酶染色阳性。结论利用诱导性多潜能干细胞滋养层方法制备的细胞滋养层,能有效支持iPSCs的生长,为进一步开展iPSCs的研究提供了理论依据和实验基础。     

KGF在成纤维细胞促进表皮细胞增殖中的作用

目的  研究成纤维细胞产生的角质细胞生长因子（KGF）对表皮细胞增殖的影响。方法  自包皮分离培养成纤维细胞和表皮细胞,采用逆转录-聚合酶链反应法(RT PCR)、酶联免疫吸附法(ELISA)、MTT法和免疫荧光等方法分别检测成纤维细胞KGF基因的转录水平、培养液中KGF的浓度、成纤维细胞培养液对表皮细胞增殖的促进作用。结果  RT-PCR结果显示,成纤维细胞中KGF转录水平显著,ELISA法可检测到成纤维细胞培养液中存在较高水平的KGF,细胞计数结果和MTT结果表明,含有KGF的成纤维细胞培养液能够促进表皮细胞增殖,保持表皮细胞的活性,免疫荧光观察到KGF与表皮细胞表面的特异性受体结合。结论  成纤维细胞能够合成和分泌较高水平的KGF,成为其促进表皮细胞增殖的重要因素。     

Studies on the Cultivation and Transplantation.of Epidermal Cells:Growth of Cultured Human Epidermal Keratinocytes in Three Culture Models

The growth of 111 cultures of human epidermal keratinocytes inexplant culture,dispersed cell culture and 3T3 feeder layer culturewas studied.The rate of monolayer formation was 80.0% in 3T3feeder layer cultures,52.5% in explant cultures and only 11.8% indispersed cell cultures.It is concluded that among the modelsstudied the 3T3 feeder layer culture is the most effective andpossesses many advantages for the cultivation of human keratino-cytes;the explant culture would be a simple and easy method if wecan effectively control the contamination by fibroblasts.The growthpattern of cultured keratinocytes in each model was described.     

人表皮细胞的体外改良培养

目的:探讨人工纯化法去除成纤维细胞对人表皮细胞生长的影响。方法:原代培养人表皮细胞第5天时,采用人工纯化法即用0.25%胰蛋白酶+0.04%EDTA(1∶1)消化细胞2～10min,除去成纤维细胞后,观察表皮细胞生长情况并用台盼蓝染色检测其存活率。结果:细胞存活率为87%,存活率较高。生长状态较传统方法培养的表皮细胞生长状态好。结论:人工纯化法除去成纤维细胞为原代培养表皮细胞的方法改良,有利于表皮细胞更好的生长。     

表皮细胞培养与移植研究Ⅰ、人角化细胞在三种培养法中生长的观察

应用三种培养方法观察人角化细胞生长、增殖与形成膜片的过程,共111次。人表皮细胞单层细胞生长率3T3饲养层培养法最高达80.0％;皮块培养法为52.5％;细胞悬液培养法仅为11.8％。3T3饲养层培养法效果最佳,优点较多,值得选用。皮块培养法简便易行,效果也可,如能设法排除成纤维细胞混合生长,仍为可选用的培养方法。     

组织工程皮肤种子细胞生物学特性的研究

目的建立一种分离培齐组织工程皮肤种子细胞的方法,并对细胞的生物学特性进行研究。方法分别通过Dispase-胰蛋白酶消化法和组织块法对表皮干细胞和成纤维细胞进行分离培养,利用倒置相差显微镜和扫描电镜等对其进行形态学观察,MTT比色法对细胞的增殖动态进行测定,免疫组化法对两种细胞进行鉴定。结果分离的表皮细胞和成纤维细胞可在体外快速贴壁生长、增殖,活力较好,免疫组织化学染色为阳性。结论通过Dispase-胰蛋白酶消化法和组织块法分别获得的表皮干细胞和成纤维细胞在体外能够快速扩增、培养,可为下一步组织工程皮肤的构建提供充足、可靠的细胞源。     

Growth activity of epidermal cells from different parts of human body

Background  Most epidermal cells used in skin tissue engineering are obtained from the skins of fetuses or prepuces, which can not be widely used in culturing and transplanting autologous epidermis for patients with extensive burn wounds. To solve the problem, in this study, we cultured epidermal cells from different parts of human body in vitro, and detected their growth activity.
Methods  Normal epidermal cells obtained from the prepuce, scalp, and axilla of male patients, were cultured and passaged. Their growth characteristics including adherent rate and growth activity were compared. Data were analyzed by homogeneity test of variance.
Results  In primary culture, the growth of epidermal cells from the prepuce was significantly faster than that of the epidermal cells from the scalp and axilla. In the cells obtained from the prepuce, 80% confluence was achieved on day 12, while on day 16 and day 20 in the cells from the scalp and axilla, respectively. However, no significant difference was detected in their growth and proliferation in the second passage.
Conclusions  Although the growth of epidermal cells obtained from the scalp and axilla is slower than that from the prepuce in primary culture, stable cell line can be established and used in preparation of auto-epidermal grafts for patients with extensive burn wounds. Therefore, the scalp and axillary skin should be considered as important sources of epidermal cells other than the prepuce.

     

小鼠胚胎干细胞体外分化为神经前体细胞的研究

目的 探索小鼠胚胎干细胞（Embryonic stem cell,ES cell）体外分化为神经前体细胞（Neural precursor cells,NPC）的无血清培养条件,比较人胚胎成纤维细胞（Human embryonic fibroblasts,HEF）与小鼠胚胎成纤维细胞（Mouse embryonic fibroblasts,MEF）对小鼠ES细胞生长的作用。方法 在MEF或HEF饲养层上培养ES细胞,培养液中含白血病抑制因子。采用无血清方法培养NPC,免疫组化方法检测巢蛋白（Nestin）,用硝基四氮啖蓝/5-溴-4-氯-吲哚基磷酸（NBT/BCIP）显色检测碱性磷酸酶。结果 无血清培养可以获得86%的NPC。HEF与MEF-样能维持ES未分化状态。结论 无血清培养方法有利于ES细胞向NPC分化,HEF可用于小鼠ES细胞的培养,而且比MEF优越。     

组织工程化表皮膜片修复裸鼠创面的实验研究

目的 构建组织工程化表皮细胞膜片并应用于修复裸鼠全层皮肤缺损创面。方法 体外分离、培养、扩增人类表皮细胞，与壳聚糖—明胶膜构建表皮细胞膜片，用于修复裸鼠背部全层皮肤缺损创面，以单纯壳聚糖／明胶膜作为对照；术后行大体、组织学观察及免疫组织化学检测。结果 表皮细胞可以壳聚精—明胶膜作为载体在体外培养，达到60％～70％亚融合状态时，移植人表皮细胞／壳聚糖—明胶膜到裸鼠全层皮肤缺损创面，人表皮细胞可以在创面存活并继续增殖分化，形成连续的表皮覆盖创面。结论 人表皮细胞／壳聚糖—明胶膜是一种理想的组织工程表皮替代物。     

Development of neural precursor cells from mouse embryonic stem cells

Embryonicstemcells(EScells)arederivedfromtotipotentcellsofearlyembryoandpossessunlimited,undifferentiatedproliferationinvitro[1].EScellshavetheinherentcapacityofdifferentiatingintoallcelltypesofthenervoussystemasdemonstratedbytheex-perimentthatchimericmicewereformedfromem-bryosinwhichEScellsaretransplantedintotheinnercellmass[2].ThesuccessfulestablishmentofhumanEScelllineindicatedprofoundimplicationthatEScellsmayprovideavirtuallyunlimiteddonorsourcefortransplantation[3]. Threepaperspublish…