低氧对鼠雪旺氏细胞增殖的影响

目的观察低氧对鼠雪旺氏细胞体外增殖的影响，为雪旺氏细胞扩增培养探索新方法。方法原代分离培养雪旺氏细胞并鉴定，将培养至第三代的细胞分为3组，分别为对照组，10组和3%O2组。对各组细胞记数；测定培养液中氧含量和乳酸浓度及各组细胞的增殖指数。结果随着环境氧浓度的下降，细胞培养液中的氧含量也逐渐下降（P〈0.05），而乳酸浓度逐渐升高（P〈0.05）。低氧组雪旺氏细胞数目比常氧组明显增加，尤以10%O2组更为明显（P〈0.05），3%O2组在低氧1d和2d时增殖指数低于常氧组，低氧4时，增殖指数增加；而10%O2组增殖指数一直高于常氧组（P〈0.05）。结论轻中度低氧有利于鼠雪旺氏细胞的体外增殖。     

低氧对鼠雪旺氏细胞增殖的影响

目的观察低氧对鼠雪旺氏细胞体外增殖的影响,为雪旺氏细胞扩增培养探索新方法。方法原代分离培养雪旺氏细胞并鉴定,将培养至第三代的细胞分为3组,分别为对照组,10%02组和3%O2组。对各组细胞记数;测定培养液中氧含量和乳酸浓度及各组细胞的增殖指数。结果随着环境氧浓度的下降,细胞培养液中的氧含量也逐渐下降(P<0.05),而乳酸浓度逐渐升高(P<0.05)。低氧组雪旺氏细胞数目比常氧组明显增加,尤以10%O2组更为明显(P<0.05),3%O2组在低氧1d和2d时增殖指数低于常氧组,低氧4时,增殖指数增加;而10%O2组增殖指数一直高于常氧组(P<0.05)。结论轻中度低氧有利于鼠雪旺氏细胞的体外增殖。     

氧浓度对人胎盘间充质干细胞生物学特性的影响

[摘要]　目的　比较不同氧浓度对人胎盘间充质干细胞生物学特性的影响。　方法　组织块培养法分离人胎盘间充质干细胞pMSCs,并利用流式细胞技术进行表面标志鉴定。将第3代pMSCs分别培养于常氧（21%O2）及不同浓度的低氧（5%O2、3%O2、1%O2、0.5%O2）环境中,观察各组细胞形态,MTT检测细胞增殖情况,划痕实验检测细胞迁移能力,ELISA检测细胞VEGF分泌表达量情况。　结果　成功从人胎盘组织分离出间充质干细胞pMSCs,阳性表达CD29、CD44,阴性表达CD31、CD34、CD45、HLA-DR。低氧培养的pMSCs形态均一,细胞伸展为长梭形,漩涡状排列明显。与常氧组相比,一定范围内低氧（5%O2~1%O2） 培养的pMSCs增殖、迁移增快,分泌VEGF增多,氧浓度越低,变化越明显。过低氧浓度（0.5%O2）培养的pMSCs增殖减慢,分泌VEGF减少。 　结论　一定范围内的低氧可促进pMSCs增殖、迁移及分泌VEGF,氧浓度越低,促进作用越明显。而过低氧浓度则产生抑制作用。     

肿瘤坏死因子和干扰素对体外培养乳鼠雪旺氏细胞的增殖影响

目的 :探讨肿瘤坏死因子 (TNF -α)与干扰素 (IFN -γ)联合应用对体外乳鼠雪旺氏细胞增殖的抑制作用。方法 :建立体外乳鼠雪旺氏细胞培养体系 ;经分离、纯化、传代的雪旺氏细胞通过免疫组化、电镜鉴定后 ,纯度达到90 %以上后进行实验。实验分为空白组、对照组、TNF -α组、IFN -γ组及TNF -α +IFN -γ组 ,分别作用 72h后 ,应用四氮唑蓝 (MTT)比色法测定各组的OD值 ,计算其抑制率。结果 :TNF -α和IFN -γ对乳鼠雪旺氏细胞生长增殖均有直接抑制作用 ,其中TNF -α在 10 0～ 2 0 0 0U/ml浓度范围内对正常雪旺氏细胞增殖有抑制作用 ,呈剂量依赖关系 ,在10 0 0U/ml抑制率达到最大。联合用药能明显提高TNF -α对乳鼠雪旺氏细胞生长增殖的抑制效应。结论 :TNF -α对乳鼠雪旺氏细胞生长增殖起抑制作用 ,并呈剂量依赖性。IFN -γ与TNF -α联合用药有明显的协同抑制效应。     

低氧浓度与常规氧浓度对胚胎早期发育及妊娠结局的影响

目的比较低氧浓度（5%O2）与常规氧浓度（20%O2）胚胎培养在体外受精（in vitro fertilization,IVF）或卵胞浆内单精子注射（Intracytoplasmic sperm injection,ICSI）中对胚胎早期发育及妊娠结局的影响。方法本中心195例IVF/ICSI周期接受常规促排卵,取卵后随机分为低氧浓度组与常规氧浓度组分别培养,观察其受精情况、胚胎发育情况、冷冻情况及妊娠结局。结果低氧组共纳入周期101例,常氧组94例。两组正常受精率、多精受精率、D1卵裂率、D2D3优胚率比较均无统计学差异（P〉0.05）;两组新鲜移植率、胚胎冷冻率、解冻移植率比较均无统计学差异（P〉0.05）;两组新鲜移植周期妊娠率,低氧组高于常氧组（χ2=3.963,P〈0.05）,两组解冻移植周期妊娠率相比无统计学差异。结论低氧浓度胚胎培养可一定程度提高IVF/ICSI妊娠结局,但仍需大样本的随机对照研究进一步证实。     

腺病毒介导的p53消减基因对慢性低氧性肺动脉高压大鼠的影响

目的 探讨p53消减基因对低氧性肺动脉高压（pulmonary artery hypertension,PAH）大鼠肺动脉压力及平滑肌细胞凋亡的影响。 方法 SD大鼠60只随机分为常氧对照组、常氧实验Adeno-null组、常氧实验Adeno-p53组、低氧对照组、低氧实验Adeno-null组和低氧实验Adeno-p53组各10只。低氧组大鼠置于含有10% O2浓度的低氧舱中。培养2周后气管滴入3×108 MOI腺病毒,继续培养2周。利用右心导管测压法测定各组大鼠平均颈总动脉压、平均肺动脉压;称重右心室、室间隔+左心室的重量,计算右心室肥厚指数,TUNEL染色法检测左肺肺动脉平滑肌细胞的凋亡指数,评价p53消减基因转染对大鼠肺动脉压力及平滑肌细胞凋亡的影响。 结果 常压下持续通入10.0% O2培养4周的大鼠与正常情况下培养的大鼠相比,平均肺动脉压力显著升高,右心室明显肥厚（P＜0.01或P＜0.05）。低氧培养条件下,与低氧实验Adeno-null组相比,低氧实验Adeno-P53组肺动脉压和右心室肥厚指数降低(P＜0.05)。低氧实验Adeno-P53组的肺动脉平滑肌细胞的凋亡指数显著高于低氧实验Adeno-null组常氧实验Adeno-p53组大鼠肺动脉平滑肌细胞的凋亡指数高于常氧实验Adeno-null组(P＜0.05)。 结论 p53消减基因能在一定程度上缓解低氧性PAH的发展,其机制可能与p53消减基因诱导肺动脉平滑肌细胞的增加有关。     

高表达低氧诱导因子-1对成骨细胞增殖及细胞周期的调控研究

目的探讨低氧情况下高表达低氧诱导因子HIF-1对成骨细胞增殖及细胞周期的影响。方法获取大鼠颌面部成骨细胞,分别在低氧含量（2%O2）、常规氧含量（21%O2）及低氧含量（2%O2）＋二甲氧乙二酰甘氨酸（DMOG）条件下进行培养,在不同培养时间分别检测成骨细胞表达的增殖能力、细胞周期变化及HIF-1蛋白的表达。结果在低氧情况下,成骨细胞增殖活性降低,细胞周期分析可见处于分裂期细胞减少,加入DMOG后细胞的HIF-1蛋白处于高表达,细胞增殖特性与常规氧含量相比无统计学差异。结论 DMOG可促进低氧状态下成骨细胞低氧诱导因子-1的高表达,有利于低氧状态下成骨细胞的增殖活性回复,可加快骨生长,为骨缺损的治疗开辟了新途径。     

雪旺氏细胞源活性物质对周围神经再生影响的实验研究

采用１６４０培养液体外培养ＳＤ乳鼠雪旺氏细胞，吸取其培养液，内含雪旺氏细胞分泌的活性物质。以硅胶管桥接３组ＳＤ大白鼠２ｃｍ有神经缺损，第一组硅胶管内注入雪旺氏细胞培养液，第２组注入１６４０培养液，第３组空白对照，术后４个月第１组，第２组髓鞘直径，动作电位传导速率比较差异有极显著性（Ｐ〈０．０１），实验结果显示雪旺氏细胞泊活性物质对周围神经再生有益。     

低氧对大鼠骨髓间质干细胞的影响

目的 探讨低氧培养对大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)增殖、粘附及分泌的影响.方法 通过细胞增殖实验、细胞粘附实验及Western-blotting,分别观察大鼠MSCs在低氧(6%O2)和常氧(21%O2)的增殖、粘附,及纤连蛋白(FN)和玻璃粘连蛋白(VN)的表达.结果 低氧组10d内培养即可扩增到(1.3±0.12)×105细胞/孔,明显高于常氧组((0.68±0.06)×105)细胞/孔(P＜0.05);低氧组24h细胞粘附率((89.14±2.4)%)高于常氧组((62.13±2.6)%)(P＜0.05),同时FN和VN的蛋白表达显著增加(P＜0.05).结论 低氧作为体外的一种可控制因素,调节MSCs的增殖及粘附功能,对于MSCs的组织工程的应用具有一定的意义.     

苦参碱对常氧及低氧下人肺成纤维细胞增殖、结缔组织生长因子和低氧诱导因子1α表达的影响

目的研究不同浓度苦参碱对常氧及低氧下人肺成纤维细胞株MRC-5的增殖及结缔组织生长因子(CTGF)、低氧诱导因子1α(HIF-1α)表达的影响。方法采用MRC-5常规体外培养传代,细胞培养至80%融合时,将细胞分组,分别在常氧(21%O2,74%N2,5%CO2)及低氧(1%O2,94%N2,5%CO2)下采用不同浓度苦参碱(终浓度0～3.2mmol/L)干预24h。按培养条件不同分为8组:常氧组(N0组)、常氧+苦参碱0.2mmol/L组(N0.2组)、常氧+苦参碱0.4mmol/L组(N0.4组)、常氧+苦参碱0.8mmol/L组(N0.8组)、低氧组(H0组)、低氧+苦参碱0.2mmol/L组(H0.2组)、低氧+苦参碱0.4mmol/L组(H0.4组)和低氧+苦参碱0.8mmol/L组(H0.8组)。采用四氮甲基唑蓝比色法(MTT法)检测细胞活性,采用Westernblot法检测细胞CTGF、HIF-1α蛋白表达情况。结果低氧对各组细胞增殖有促进作用(P0.05);苦参碱对常氧及低氧下细胞增殖有抑制作用(P0.05),具有浓度依赖性。CTGF、HIF-1α在常氧下有低水平表达,低氧下表达明显增强(P0.01);苦参碱对常氧及低氧下CTGF、HIF-1α的表达均有抑制作用(P0.05)。结论苦参碱对常氧及低氧下培养的MRC-5细胞增殖有抑制作用,对细胞CTGF和HIF-1α表达有抑制作用,且具有一定浓度依赖性。     

低氧对大鼠海马神经干细胞增殖的影响

目的观察和分析不同低氧浓度对海马神经千细胞（NSCs）增殖的影响。方法在体积分数4％O2、1％O2及常氧环境下培养新生SD大鼠海马神经干细胞,观察低氧对神经球数量和直径的影响。结果（1）对海马神经干细胞增殖效率的影响：体积分数1％低氧组神经球数量明显低于常氧对照组,具有显著性差异（P〈0．05）;体积分数4％低氧组神经球数量有高于对照组的趋势,但不具有显著性差异。（2）对海马神经干细胞增殖速度的影响。在培养24h、36h和48h后,体积分数1％低氧组神经球的直径都小于对照组,且在24h和36h时具有显著性差异（P〈0．05）,在48h具有极显著性差异（P〈0．01）;在培养24h、36h和48h后,体积分数4％低氧组神经球的直径都大于对照组,在36h时具有显著性差异（P〈0．05）,在48h时具有极显著性差异（P〈0．01）。结论体积分数4％低氧浓度环境既提高海马神经干细胞的增殖效率也提高海马神经千细胞的增殖速麾体积分数1％低氧浓度环境则既抑制海马神经干细胞的增殖效率也抑制海马神经干细胞的增殖速度。提示中度低氧有利于海马神经干细胞的增殖：过度低氧不利于海马神经千细胞的增殖。     

慢性宫内缺氧对子代兔成年期血管内皮舒张功能及血清ox-LDL、CRP的影响

目的 研究慢性宫内缺氧（CIH）对子代兔成年期血管内皮舒张功能（EVR）及血清氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）和C反应蛋白（CRP）的影响. 方法 新西兰孕兔16只,分CIH组和非CIH组,待分娩后随机取每只母兔的雄性子代2只,母乳饲养3月后,CIH和非CIH组子代兔均再分高脂和正常饮食,即得4组：A组为CIH并高脂饮食组（CIH＆HFD）、B组为非CIH并高脂饮食组（NCIH＆HFD）、C组为CIH并正常饮食组（CIH＆ND）、D组为非CIH并正常饮食组即正常对照组（NC）,每组各8只.至6月末超声检测各组兔腹主动脉内皮舒张功能,同时检测血清ox-LDL和CRP水平. 结果 CIH可引起主动脉内皮依赖性舒张功能（EDV）降低（P＜0.05）,血清的ox-LDL和CRP水平升高（均P＜0.05）.CIH与高脂血症能协同加重上述各观察指标变化（P＜0.05或P＜0.01）.结论 CIH可能通过升高子代兔成年期血清的ox-LDL和CRP水平导致腹主动脉EDV降低,可能是动脉粥样硬化的一个重要影响因素.     

脑组织氧代谢监测在心肺复苏后缺血缺氧性脑病患者中的临床研究

目的探讨颈内静脉球血氧饱和度、氧利用率、乳酸及乳酸清除率在早期心肺复苏后缺血缺氧性脑病患者中的变化及评价它们反映脑氧代谢改变中的意义。方法29个心肺复苏成功的患者,分为缺血缺氧性脑病（A组）和非缺血缺氧性脑病组（B组）,比较复苏时间,颈内静脉球血氧饱和度、氧利用率、乳酸及乳酸清除率在心肺复苏后缺血缺氧性脑病和非缺血缺氧性脑病患者间的差别。结果①2组患者性别、年龄差异无统计学意义（P〉0．05）;②A组患者复苏时间长于B组（P〈0．05）;③2组患者在心肺复苏5min左右时SjVO2明显降低,O2UC、乳酸含量明显增高两者差异无统计学意义（P〉0．05）。B组患者SjVO2及O2UC约4h左右恢复正常,24h及72h持续稳定。与B组相比,A组患者在复苏后4h内SjVO2仍明显降低（P〈0．05）,O2UC仍明显增高（P〈0．05）,缺氧持续存在,24h、72h SjVO2恢复较高水平（P〈0．05）,02UC持续降低（P〈0．05）。④B组心肺复苏后1～72h内乳酸含量进行性下降,各时间点相比于A组含量明显减低（P〈0．05）,约24h恢复正常。A组乳酸72h内也呈下降趋势且72h内仍高于正常,4h乳酸清除率约为0．25±0．18,72h内乳酸清除率为0．61±0．15,明显低于B组的0．67±0．11及0．9l±0．62。结论心肺复苏时间及4h左右的脑颈静脉球血氧饱和度、乳酸及乳酸清除率、脑氧利用率在一定程度上能早期预测心肺复苏后患者缺血缺氧性脑病的发生。     

TRPC_3参与缺氧诱导人脐静脉血管内皮细胞凋亡

目的:探讨瞬时受体电位通道蛋白3(TRPC3)在缺氧诱导人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)凋亡中的作用。方法:采用HUVECs细胞株,复苏传代后计数稀释,接种于6孔培养板中,实验组分为常氧对照组(5%CO2+95%空气)和缺氧组(1%O2+5%CO2+94%N2),处理24h后,应用实时荧光定量RT-PCR法及WesternBlot法检测TRPC3mRNA和蛋白水平的表达变化。构建靶向TRPC3基因的siRNA和无关序列质粒表达载体,分别转染至HUVECs,缺氧处理后再用四甲基偶氮唑盐比色法(Methods the tetrazolium,MTT)检测各组细胞存活率,Hoechest33342荧光染色观察细胞凋亡。结果:缺氧处理24h,HUVECs中TRPC3mRNA和蛋白表达明显升高,细胞存活率为67.4%,与常氧对照组有显著性差异(P<0.05);缺氧+TRPC3干扰组细胞存活率为92.7%,与缺氧组有显著性差异(P<0.05);缺氧+TRPC3假干扰组与缺氧组无显著性差异(P>0.05)。荧光显微镜下观察,常氧对照组胞核均匀蓝染;缺氧处理组和缺氧+TRPC3假干扰组胞核明显固缩、凝聚,可见凋亡小体;而缺氧+TRPC3干扰组胞核均匀蓝染。结论:TRPC3参与缺氧诱导HUVECs凋亡。     

叶酸对缺氧新生鼠神经干细胞体外增殖的影响

目的：探讨叶酸（FA）对缺氧条件下体外新生大鼠神经干细胞（NSCs）增殖的影响。方法：取24h内新生SD大鼠大脑半球,进行NSCs原代培养。分为正常对照组、缺氧模型组、缺氧叶酸添加组、缺氧叶酸缺乏组共4组。培养第3天除正常对照组外其他3组进行缺氧处理,造成缺氧损伤：培养6d后收集细胞,进行MTT法、5-溴脱氧尿苷（BrdU）掺入法和免疫组化双标记法检测叶酸对缺氧NSCs增殖的影响。结果：MTT检测显示,正常对照组细胞OD值较缺氧模型组高,差异有统计学意义（P〈0．05）;缺氧叶酸添加组OD值明显高于其它缺氧组,差异均有统计学意义（P〈0．05）;免疫组化双标阳性率比较,缺氧模型组双标阳性率明显下降,与正常对照组比较差异有统计学意义（P〈0．05）,缺氧叶酸添加组明显高于其它几组,差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论：长时间持续缺氧可造成神经干细胞缺氧损伤;添加叶酸使缺氧神经干细胞增长率增加．提示叶酸能促进体外缺氧新生鼠神经干细胞的增殖。     

宫内缺氧对新生儿红细胞渗透脆性的影响

【目的】探讨宫内缺氧对新生儿红细胞渗透脆性的影响。【方法】选择湘雅医院2012～2013年新生儿科27例无新生儿窒息的住院患儿,根据出生前有无缺氧病史将患儿分为对照组（ n ＝20）和宫内缺氧组（ n ＝7）。于生后1 h内抽取动脉血进行血气、乳酸（LA）和微量血胆红素（BIL）测定,生后24 h内抽取静脉血进行红细胞渗透脆性的测定。【结果】宫内缺氧组出生时 Apgar 评分,血液 pH 值,动脉二氧化碳分压（PaCO2）与对照组差异无显著性（ P＞0．05）,但其动脉氧分压（PaO2）、动脉血样饱和度（SaO2）和微量血BIL明显低于对照组（ P ＜0．05～0．01）,而血L A浓度明显高于对照组（ P ＜0．01）;当溶血率分别为20％、50％、80％和90％时,宫内缺氧组所需NaCl缓冲液浓度均明显低于对照组（ P ＜0．05～0．01）,而当溶血率分别为10％和100％时,宫内缺氧组所需NaCl缓冲液浓度与对照组相比显差无异统计学意义（ P ＞0．05）。【结论】宫内缺氧可引起新生儿红细胞的渗透脆性降低。     

白藜三醇对缺氧状态下人脐静脉内皮细胞增殖及HIF—1α表达的影响

摘要：目的研究白藜三醇（resveratrol,Res）对缺氧状态下人脐静脉内皮细胞（humanumbilicalveinendothelialcell,HUVEC）增殖及低氧诱导因子（hypoxia-induciblefactor1,HIF-1μ）表达的影响。方法自藜三醇预孵育HUVEC2h后,采用氯化钴（CoCl2）化学方法制作缺氧模型,实验分为3组进行：正常组（NC）、缺氧组（HY）、药物组（0．1、1、5、10、50μmoL／LRes）。应用CCK-8法检测各组HUVEC增殖情况,免疫细胞化学法和Westernblot检测各组细胞内HIF-1α的表达。结果①缺氧组及药物组（0．1、1、5、10μmol/L）与正常组相比细胞增殖增加（P〈0．01）;1、5μmoL／L药物组与缺氧组比较细胞增殖增加（P〈0．01）,5μm0L／L药物组与其他各浓度组比较细胞增殖增加（P〈0．01）。②正常组HUVEC胞质内HIF-1α 仅微量表达;缺氧组胞质内HIF-1α阳性表达,较正常组增多,显色呈黄褐色;药物组（5μmol／L）胞质内HIF-1α强阳性表达,显色呈深黄褐色。③缺氧组与正常组相比HIF-1α 蛋白表达增加（P〈0．05）,药物组（1、5μmol／L）与正常组相比HIF-1α蛋白表达增加（P〈0．01）;1μmol／L药物组与缺氧组相比HIF-1α蛋白表达增加（P〈0．05）,5μmol／L药物组明显增加（P〈0．01）。结论白藜三醇可能通过促进HIF-1α 的表达而促进血管内皮细胞增殖,从而对新生血管的形成起到一定促进作用。