人参总皂甙诱导造血生长因子生成的实验研究

为探讨人参“补气生血”的现代生物学机理，采用造血祖细胞体外培养，造血生长因子生物活性检测等技术，研究人参总皂甙（ＴＳＰＧ）对造血生长因子的诱导生成作用。结果表明，经ＴＳＰＧ诱导分别制备的脾细胞、巨噬细胞、成纤维细胞和骨髓基质细胞的培养上清对髓系造血祖细胞（ＢＦＵ－Ｅ、ＣＦＵ－ＧＭ、ＣＦＵ－ＭＫ）的体外集落增殖均有显著刺激作用。ＴＳＰＧ也能促进脾细胞、成纤维细胞和巨噬细胞分泌ＩＬ－６；刺激脾细胞产生     

人参总皂甙诱导L—细胞产生造血调节因子的实验研究

为探讨中药人参的重要有效成分人参总皂甙（TotalSaponinsofPanaxGinseng，TSPG）调节造血的可能机制，在体外祖细胞培养中以TSPG诱导（LCCMTSPG）或未经诱导（LSCM）的L—细胞条件培养液替代祖细胞生长因子，观察集落产率的变化，并与TSPG和LcCM共同作用（LcLM＋TSPG）后的集落产率作比较。结果如下：LcCMTSPG作用后的CFU－GM（位—单系祖细胞）、BFU－E（早期红系祖细胞）、CFU－E（晚期红系祖细胞）的集落产率分别为24．8±9．01、61．73±11．26、145．93±17．22，与LcCM组（51．85±10．08、33．95±825、108．66±13．56）相比分别为下降（P＜0．05）、提高（P＜0．01）、提高（P＜0．01）。提示TSPG可诱导L—细胞产生选择性作用于粒—单系的造血抑制因子和作用于红系的生长因子。LCCM＋TSPG作用后CFU－GM、BFU－E、CFU－E集落产率分别为74．25±10．67、42．5±9．32、98±10．81，与LcCM组相比分别为提高（P＜0．05）、提高（P＜0.05）、无变化，提示TSPG可能与LcCM中促进CFU－E、BFU—E生长的因子协同作用。该研究表明TSPG可经影响基质细胞产生造血调节因子或与造血调节因子共同调节血细胞发生。     

人参总皂甙对小鼠红系造血的影响

人参为中医临床补气要药。人参总皂甙（TSPG）为人参主要有效成份。本应用造血细胞体外培养技术，研究其对小鼠红系血发生的影响，结果提示：TSPG能明显刺激小鼠BFU－E和CFU－E的增殖和分化。根据本实验室工作和其它学的工作，我们推测：人参“补气生血”机理可能系直接和／或间接地通过作用于多能造血干细胞、造血祖细胞、造血微环境和内分泌系统，调控造血活动。     

人参总皂甙对造血生长因子活性及其mRNA表达的影响

目的　探讨人参“补气生血”的现代生物学机理。　方法　采用核酸分子原位杂交和造血生长因子生物活性检测等技术,研究人参总皂甙（ＴＳＰＧ）对造血生长因子活性及其ｍ ＲＮＡ表达的影响。　结果　ＴＳＰＧ能显著促进小鼠骨髓基质细胞（ＢＭＳＣ）、腹腔巨噬细胞（ＰＭ）和脾细胞（ＳＰＣ）的粒－巨噬细胞集落刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）及白细胞介素－６（ＩＬ－６）ｍ ＲＮＡ的表达,经ＴＳＰＧ诱导制备的ＢＭＳＣ、ＰＭ和ＳＰＣ条件培养上清液含有较高的爆式红系集落刺激活性（ＢＰＡ）、粒－巨噬细胞集落刺激活性（ＧＭ－ＣＳＡ）和巨核细胞集落刺激活性（ＭＫ－ＣＳＡ）。　结论　ＴＳＰＧ促进血细胞生成的机理与其诱导造血生长因子的基因表达有密切关系。     

人参总皂甙对人淋巴细胞表达早期造血生长因子的影响

目的：研究人参总皂甙(TSPG)对人淋巴细胞表达早期造血生长因子的影响,探讨人参“补气生血”的现代分子生物学机理。方法：采用造血祖细胞体外培养、造血生长因子生物活性检测、免疫细胞化学、核酸分子原位杂交技术,研究TSPG对胎儿胸腺细胞、脾细胞表达早期造血生长因子的影响及其机理。结果：经TSPG诱导制备的胎儿胸腺细胞条件培养液(HTCM)、脾细胞条件培养液(HSCM)对人髓系多向性造血祖细胞(CFU-Mix)的增殖分化有明显促进作用;经TSPG诱导后胎儿胸腺细胞、脾细胞内IL-3的蛋白及mRNA表达显著提高。结论：TSPG可能诱导人淋巴细胞表达早期造血生长因子,从而促进人早期血细胞增殖分化。     

人参总皂甙对骨髓巨噬细胞的影响及与造血调控的关系

目的：研究人参总皂甙(TSPG)对骨髓巨噬细胞(BMMφ)生物学活性的影响及其与造血调控关系。方法：采用骨髓造血祖细胞体外培养,造血生长因子生物活性检测,免疫细胞化学,核酸探针原位杂交等技术。结果：经TSPG诱导制备的BMMφ的培养上清可提高髓系造血祖细胞的集落产率;经TSPG诱导后,BMMφ表达EPO,IL-3,IL-6,GM-CSF的蛋白水平有不同程度提高;EPO mRNA,GM-CSF mRNA的表达水平和强度明显提高。结论：TBPG可以刺激造血诱导微环境中的巨噬细胞,从基因水平和蛋白水平2级层次上促进造血调控因子的合成和分泌,进而促进CFU-Mix,CFU-E,CFU-GM的增殖分化。     

人参总皂甙诱导人造血基质细胞表达IL-3的实验研究

目的 研究人参总皂甙(TSPG)对人早期血细胞发生的影响及其机理,进一步探讨人参“补气生血”的现代分子生物学机理。方法 采用造血祖细胞体外培养、造血生长因子(HGF)生物活性检测、免疫细胞化学、核酸分子原位杂交技术,研究TSPG对造血基质细胞表达白细胞介素-3(IL-3)的影响及其机理。结果 TSPG体外作用能明显促进人早期髓系多向性造血祖细胞(CFu-Mix)的集落形成;经TSPG诱导制备的人骨髓基质细胞(BMSG)、脐静脉内皮细胞株(EcV304)、单核细胞株(THP)条件培养液对CFU-Mix的增殖分化有明显促进作用;经TSPG诱导后BMSC、EcV304、THP细胞内IL-3的蛋白及mRNA表达显著提高。结论 TSPG能促进人早期血细胞的增殖分化,其机理可能与TSPG诱导人造血基质细胞表达IL-3有密切关系。     

GM-CSF对TNF-α诱导白血病细胞凋亡的抑制作用

通过TNFα以及TNFα+GM-CSF对18例白血病患者髓性白血病细胞凋亡的影响研究,发现加TNFα组凋亡细胞数明显高于TNFα+GM-CSF组,两者比较有显著性差异（P<0.01）。本结果提示TNFα有捉进肿瘤细胞凋亡作用,而 GM-CSF则可抑制这种作用。     

GM-CSF诱导外周血单核细胞的分化及其对混合淋巴细胞反应的影响

作者对 Ｇ Ｍ Ｃ Ｓ Ｆ 作用下的外周血单核细胞（ Ｐ Ｍ Ｃ） 的形态特征及免疫表型进行了测定, 并观察了其对混合淋巴细胞反应（ Ｍ Ｌ Ｒ） 的影响。结果显示, Ｇ Ｍ Ｃ Ｓ Ｆ 可使外周血单核细胞分化为 Ｃ Ｄ１４ ＋ 、 Ｃ Ｄ１ａ 或低表达、 Ｃ Ｄ８０ 、 Ｃ Ｄ８６ 低表达、 Ｈ Ｌ Ａ Ｄ Ｒ＋ 、 Ｃ Ｄ１１ａ ＋ 、 Ｃ Ｄ４５ Ｒ Ａ＋ , 和非特异性酯酶呈强阳性反应的细胞, 符合巨噬细胞的形态及表型特征。在 Ｍ Ｌ Ｒ 体系中加入上述细胞, 发现其 Ｍ Ｌ Ｒ 的结果因巨噬细胞含量的不同而异, 巨噬细胞与反应细胞比例为１∶２ 时抑制 Ｍ Ｌ Ｒ（ Ｐ＜ ００５ ） , １∶４或１∶８ 时刺激 Ｍ Ｌ Ｒ（ Ｐ＜ ００５ ） ; Ｐ Ｈ Ａ 和 Ｉ Ｌ ２ 能够逆转大剂量巨噬细胞对 Ｍ Ｌ Ｒ 的抑制作用, 抗 Ｃ Ｄ３ 单抗可增强其对 Ｍ Ｌ Ｒ 的抑制作用, 消炎痛不影响巨噬细胞对 Ｍ Ｌ Ｒ 的作用。     

人参总皂甙体外诱导CD34+造血干/祖细胞增殖的作用

目的：探讨人参总皂甙(TSPG)协同造血生长因子体外诱导CD34~ 造血干/祖细胞(HSC/HPC)增殖的作用。方法：收集人脐血细胞,采用Stemsep TM干细胞分选系统分离纯化CD34~ HSC/HPC,经不同剂量TSPG加入不同造血生长因子组合进行培养,检测细胞总数、CD34~ 细胞及集落形成细胞总数(CFCs)的变化。结果：TSPG 10、20、50和70μg/ml均可不同程度地提高细胞总数、CFCs和CD34~ 细胞扩增倍数,TSPG 50μg/ml是最佳刺激浓度,可使细胞总数、CFCs和CD34~ 细胞分别增至(2470．50±79．96)倍、(53．96±4．29)倍和(21．86士3．09)倍。结论：合适剂量的TSPG能够促进CD34~ 造血干/祖细胞体外增殖。     

人参总皂苷促进再生障碍性贫血小鼠造血及其机制探讨

目的:观察人参总皂苷(TSPG)对免疫介导型再生障碍性贫血(再障)小鼠的疗效及其相关作用机制。方法:BALB/c小鼠经亚致死剂量照射后输入DBA/2小鼠淋巴细胞,制成再障小鼠模型。实验分6组,正常小鼠组,模型组,TSPG低、中和高剂量治疗组,环孢菌素A(Cs A)阳性对照组,灌胃给药15 d。观察外周血象,检测血清Th1/Th2/Th17因子含量、骨髓造血祖细胞集落生成率及细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase1/2,ERK1/2)的磷酸化水平。结果:TSPG治疗再障小鼠的疗效显著,中、高剂量组的血红蛋白含量、白细胞和血小板计数均明显高于模型组;红、粒和巨核系造血祖细胞集落生成率均明显高于模型组。同时,显著上调骨髓细胞磷酸化ERK1/2蛋白表达,降低血清Th1和Th17因子含量,并升高Th2因子含量。结论:人参总皂苷有效地治疗再障小鼠,具有一定程度的促进造血和调节免疫的功效,其作用机制可能是调节Th1/Th2/Th17因子的表达及ERK1/2的磷酸化。     

三七总皂苷抑制铁死亡和炎症反应减轻大鼠脑缺血再灌注损伤

目的:基于三七总皂苷(PNS)对铁死亡和炎症反应的调控作用,探讨PNS抗脑缺血再灌注损伤(CIRI)机制。方法:采用大脑中动脉阻塞/复灌注(MCAO/R)方法建立大鼠CIRI模型,PNS干预后,各组大鼠进行Longa评分比较;观察脑梗死体积;试剂盒检测缺血侧大脑皮质组织中Fe2+、GSH、MDA、IL-1β、TNF-α和IL-6含量;Western blot检测脑组织中铁死亡关键调控蛋白谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)的表达水平。结果:MCAO/R后,大鼠神经评分显著增加,有明显脑梗死区,皮层组织中Fe2+和MDA及IL-1β、TNF-α、IL-6含量显著增加,而GSH含量和GPX4水平显著降低。与MCAO/R组相比,PNS干预组大鼠神经功能评分显著降低、脑梗死体积减小、脑组织中Fe2+和MDA及IL-1β、TNF-α、IL-6含量显著降低,而GSH含量和GPX4水平显著增加。结论:PNS可有效减轻CIRI,其机制与抑制铁死亡和炎症反应有关。     

西洋参茎叶总皂苷通过抑制过度内质网应激减轻大鼠心肌缺血/再灌注损伤

 目的：观察西洋参茎叶总皂苷（PQS）对大鼠心肌缺血/再灌注（ischemia/reperfusion, I/R）损伤的保护作用,并从内质网应激(ERS)的角度探讨其可能的分子机制。方法：采用SD大鼠心肌I/R模型,随机分为正常对照组、模型组与药物预处理组,检测血流动力学及血清心肌肌钙蛋白T（cTnT）含量,以氯化三苯基四氮唑（TTC）和伊文思蓝双染法检测心梗面积,采用HE染色和TUNEL法分别评估心肌病理损伤和心肌细胞凋亡程度,Western blotting法检测心肌组织凋亡调节因子以及内质网应激相关蛋白的表达。结果：与I/R组相比,PQS+I/R组平均动脉压降低32.0%（P<0.05）,左室±dp/dtmax分别升高64.0%和35.0%（P<0.05）,血清cTnT含量降低53.3%（P<0.05）,坏死面积/缺血面积(AN/AAR)百分比降低65.5%（P<0.05）,心肌细胞凋亡率降低54.9%（P<0.05）;心肌组织病理损伤程度减轻;抗凋亡蛋白Bcl-2表达升高110.0%（P<0.05）,促凋亡蛋白Bax表达降低47.8%（P<0.05）,钙网蛋白(CRT)表达降低43.4%（P<0.05）,C/EBP同源蛋白（CHOP）和剪切后的caspase-12蛋白表达分别降低38.6%和23.7%（P<0.05）。结论：PQS可显著减轻大鼠心肌I/R损伤,其机制与降低I/R诱导的CRT过表达,抑制CHOP、caspase-12等内质网凋亡通路激活,从而抑制过度ERS介导的细胞凋亡有关。     

Panax notoginseng saponins attenuates cisplatin-induced nephrotoxicity via inhibiting the mitochondrial pathway of apoptosis

The goal of this experiment was to investigate the protective effect and the molecular mechanism of Panax Notoginseng Saponins (PNS) on cisplatin-induced nephrotoxicity through mitochondrial pathway of apoptosis. The rats underwent intraperitoneal injection with a single dose of cisplatin, a subset of rats were also intraperitoneally injected with 31.35 mg/kg PNS once a day for 8 days. At day 1, 4 and 8 after exposure to cisplatin, the concentrations of blood urea nitrogen (BUN), serum creatinine (Scr) and urinary N-acetyl-β-D-Glucosaminidase (NAG) were determined using commercial kits. The pathological change of renal tissue were examined using H & E staining and transmission electron microscopy. The rate of apoptosis and the expression of Bcl-2 in rat renal tissue were detected by using TUNEL staining and Western bloting, respectively. And the expressions of Bax and caspases 9 were detected by immunnohistochemistry. The results showed that PNS significantly protected against cisplatin-induced nephrotoxicity, as evidenced by the decrease in concentration of blood BUN, Scr and urinary NAG, as well as the attenuation of renal histopathological damage. Furthermore, PNS reduced the rate of apoptosis, and the mechanism studies showed that PNS inhibited the expression of Bax and caspase 9, while increased the expression of Bcl-2. This study first demonstrated that PNS can protect against cisplatin-induced nephrotoxicity and reduce renal tissue apoptosis via inhibiting the mitochondrial pathway.     

三七总皂甙对慢性低氧性肺动脉高压大鼠的防治作用

目的:探讨三七总皂甙(PNS)对慢性常压低氧性肺动脉高压大鼠的防治效果及其机制。方法: 将雄性SD大鼠随机分为:正常对照组(C组)、单纯低氧组(H组)、低氧+PNS组(HT组)。进行血流动力学、红细胞比积(Hct)、透射电镜和有关生化指标检测。结果:(1)H组平均肺动脉压(mPAP)、平均右室压(RVMP)和Hct显著高于C组而HT组显著低于H组;(2)H组血浆、肺匀浆一氧化氮(NO₂^-/NO₃^-)含量、一氧化氮合酶(NOS)活性及血浆总超氧化物歧化酶(T-SOD)、铜/锌超氧化物歧化酶(Cu/ZnSOD)活性显著低于C组, HT组显著高于H组,但HT组血浆、肺匀浆NO₂^-/NO₃^-、NOS仍显著低于C组;(3) HT组肺小动脉内皮细胞损伤显著轻于H组 。结论: 三七总皂甙可抑制大鼠慢性低氧性肺动脉高压的形成,其机制可能与其调节NO含量、抗氧自由基损伤、减轻细胞损伤和降低红细胞比积有关。     

三七总皂苷对神经胶质瘤细胞增殖、迁移及凋亡的影响

目的:探讨三七总皂苷(Panax notoginseng saponins,PNS)对神经胶质瘤U251和U87细胞增殖、迁移和凋亡的影响及其作用机制。方法:将U251和U87细胞各分为两组:对照(control)组和三七总皂苷(PNS)组。CCK-8检测细胞增殖水平;划痕实验检测细胞迁移能力;流式细胞仪检测细胞凋亡水平;Western Blot检测Caspase-3、Bax、Bcl-2、p-AKT、AKT、p-mTOR和mTOR的蛋白表达水平。结果:U251和U87细胞中的检测结果一致。与control组相比,PNS组的细胞增殖能力和迁移能力均显著下降(P0.05);细胞凋亡率显著升高(P0.05);Bcl-2的蛋白表达水平显著下调(P0.05),而Bax和Caspase-3的表达水平显著上调(P0.05);p-Akt和p-mTOR的蛋白表达水平下降,且差异具有显著性(P0.05)。结论:PNS能够抑制U251和U87细胞的增殖和迁移,促进细胞凋亡,这可能与PI3K-Akt-mTOR信号通路的抑制有关。     

三七总皂甙对脑出血大鼠前脑兴奋性氨基酸受体GluR2表达的作用

目的：研究三七总皂甙对脑出血大鼠前脑兴奋性氨基酸受体AMPA受体亚基GluR2表达的作用。方法：用免疫组织化学法观察胶原酶诱导的脑出血大鼠前脑内GluR2在给药组和对照组的表达变化。结果：脑出血后大鼠前脑病灶内部GluR2表达呈阴性,海马很少表达,但病灶周围和同侧皮质神经元的表达增强。给药组在皮层、病灶周围阳性细胞增多,反应强度增强。结论：三七总皂甙对GluR2阳性表达有增强作用,从而发挥对受损神经元的保护作用。     

Ginseng total saponin improves podocyte hyperpermeability induced by high glucose and advanced glycosylation endproducts

Early diabetic nephropathy is characterized by glomerular hyperpermeability as a result of impaired glomerular filtration structure caused by hyperglycemia, glycated proteins or irreversible advanced glycosylation endproducts (AGE). To investigate the effect of ginseng total saponin (GTS) on the pathologic changes of podocyte ZO (zonula occludens)-1 protein and podocyte permeability induced by diabetic conditions, we cultured mouse podocytes under: 1) normal glucose (5 mM, = control); 2) high glucose (HG, 30 mM); 3) AGE-added; or 4) HG plus AGE-added conditions and treated with GTS. HG and AGE increased the dextran filtration of monolayered podocytes at early stage (2-8 hr) in permeability assay. In confocal imaging, ZO-1 colocalized with actin filaments and β-catenin at cell contact areas, forming intercellular filtration gaps. However, these diabetic conditions suppressed ZO-1 immunostainings and disrupted the linearity of ZO-1. In Western blotting, diabetic conditions also decreased cellular ZO-1 protein levels at 6 hr and 24 hr. GTS improved such quantitative and qualitative changes. These findings imply that HG and AGE have an influence on the redistribution and amount of ZO-1 protein of podocytes thereby causing hyperpermeability at early stage, which can be reversed by GTS.     

三七总皂苷对异丙肾上腺素所致大鼠心肌肥厚和纤维化的影响

目的：研究三七总皂苷（PNS）对异丙肾上腺素所致大鼠心肌肥厚和纤维化的保护作用。方法： 用异丙肾上腺素（ISO）5 mg·kg^-1·d^-1,sc,连续7 d，建立大鼠心肌肥厚和纤维化模型。造模第2 d开始给大鼠腹腔注射PNS 25和50 mg· kg^-1·d^-1,连续14 d，测定全心重量指数（HW/BW）、左心室重量指数（LVW/BW即LVI）；采用试剂盒用分光光度法检测左心室心肌组织中羟脯氨酸（Hyp）、丙二醛（MDA）、一氧化氮（NO）含量和超氧化物歧化酶（SOD）、谷光苷肽过氧化酶（GSH-Px）、一氧化氮合酶（NOS）活性；用放免分析法检测左心室心肌组织中血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）含量。结果： ISO模型组大鼠的HW/BW、LVI、左心室HyP、AngⅡ、MDA含量和诱生型NOS(iNOS)活性显著高于生理盐水对照组，SOD、GSH-Px及结构型NOS(cNOS)活性和NO含量明显比生理盐水对照组低；PNS治疗组左心室心肌组织中NO含量、cNOS 、SOD和GSH-Px活性明显高于ISO模型组；MDA和AngⅡ含量及iNOS活性和心脏重量指数比ISO模型组低。结论： PNS有抗心肌肥厚和纤维化作用，该作用与清除氧自由基及升高NO含量有关。