院内外环境分离金黄色葡萄球菌的耐药性及毒素基因检测

目的检测医院及环境样中金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus,SA）耐药基因及毒素基因,了解其分布情况。方法采用多重聚合酶链反应（multiplex polymeras chain reaction,PCR）技术分别检测耐药基因mecA、femA与毒素基因TSST、PVL。结果 83株金黄色葡萄球菌,仅3株（3.61%）菌检出mecA基因,22株菌（26.50%）检出femA基因,15株菌（18.07%）同时检出mecA与femA基因。医院样本检出12株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（methicillin-resistantStaphylococcus aureus,MRSA）,3株甲氧西林耐药凝固酶阴性的金黄色葡萄球菌（methicillin-resistant and coagulasenegative Staphylococcus aureus,MRCNS）。83株分离自医院及环境样本SA,2株分离自咽拭子的样本检出TSST基因,检出率4.54%（2/44）;1株分离自血液的样本检出PVL基因,检出率2.27%（1/44）,其余菌株未检出毒素基因。结论院内样本中,部分菌株携带mecA基因,环境样本未发现携带mecA菌株,两者存在差异。83株SA菌,毒素基因携带率较低。检测耐药、毒素基因携带率,为临床治疗及院内感染控制,食物中毒溯源提供依据。     

金黄色葡萄球菌临床分离株生物膜形成能力及其相关基因的检测

目的： 检测临床分离金黄色葡萄球菌（金葡菌）的生物膜形成能力及其相关基因。方法： 用半定量微量平板法检测临床分离的92株金葡菌生物膜形成能力,并通过扫描电镜观察生物膜形态,用PCR法来检测生物膜形成的相关基因ica和sarA。结果： 92株临床分离金葡菌菌株均可形成生物膜,PCR结果显示100%的分离株均含有sarA基因,78株（84.78%）含有ica基因。结论： 临床分离的金葡菌都具有形成生物膜的能力,生物膜形成的相关基因ica和sarA的携带率较高。     

金黄色葡萄球菌毒素基因的检测及临床应用

目的:了解医院获得性金黄色葡萄球菌(HA-SA)和社区获得性金黄色葡萄球菌(CA-SA)所携带肠毒素、表皮剥脱性毒素(ETs)、中毒性休克综合征毒素-1(TSST-1)及杀白细胞素基因(PVL)的特点. 方法:应用PCR法检测肠毒素A、B、C、D、E基因,ETs A、B基因,TSST-1以及PVL. 结果:116株金黄色葡萄球菌中,85株为HA-SA,检出肠毒素A基因6株,肠毒素C基因1株,肠毒素D基因1株,PVL2株;31株为社区获得性金黄色葡萄球菌,检出肠毒素A基因1株,肠毒素B基因1株,肠毒素D基因1株,PVL7株;所有菌株均未检测到肠毒素E、ETs A、B和TSST-1基因. CA-SA PVL检出率显著高于HA-SA,两者比较差异有统计学意义(P＜0.005),而肠毒素、ETs和TSST-1基因检出率比较差异均无统计学意义(P＞0.05).结论:金黄色葡萄球菌可分泌多种毒素,在分离金黄色葡萄球菌的同时,应注意其毒素检测.     

老年病房耐甲氧西林金黄色葡萄球菌葡萄球菌染色体mec基因盒基因型和杀白细胞素基因的检测及特点

目的 了解复旦大学附属华东医院老年科临床分离的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)葡萄染色体mec基因盒(SCCmec)的分布和杀白细胞毒素(PVL)基因的携带状况.方法 收集复旦大学附属华东医院老年科病房2011年2-7月从临床标本中分离的不重复MRSA共57株.运用多重聚合酶链反应检测金黄色葡萄球菌16S rRNA基因、PVL基因和mecA基因,并同时检测SCCmec的基因型及亚型.采用琼脂稀释法进行13种药物的药物敏感试验.结果 57株MRSA中,SCCmec Ⅰ型1株(1.8％),SCCmec Ⅰ A型5株(8.7％),SCCmecⅡ型30株(52.6％),SCCmecⅢ型15株(26.3％),SCCmecⅢA型2株(3.5％),4株(7.0％)未能分型.57株MRSA中,PVL基因均为阴性.MRSA菌株最敏感的药物为万古霉素和利奈唑胺(敏感率均为100.0％),其次为呋喃妥因和甲氧苄啶-磺胺甲(哑)唑(98.2％、96.5％).结论 复旦大学附属华东医院老年科临床分离的MRSA呈多重耐药,其SCCmec型别主要以SCCmecⅡ型和SCCmecⅢ型为主,未发现PVL基因阳性菌株.     

非PBP2a型苯唑西林耐药金黄色葡萄球菌的研究

目的：探讨从临床分离的表型为苯唑西林(OXA)耐药(OR)的金黄色葡萄球菌(金葡菌)是否存在mecA基因以外的耐药机制。方法：表型为OXA耐药(OR)的金葡菌130株，其中五种非β—内酰胺类药物(庆大霉素、环丙沙星、林可霉素、四环素、红霉素)三种以上耐药(OR—R)125株，三种以上敏感(OR—S)5株；表型为OXA敏感(OS)的金葡菌，五种非β—内酰胺类药物3种以上耐药(OS—R)14株。采用OXA，OXA／克拉维酸(CA)双纸片扩散试验，青霉素和苯唑西林酶浸出三维试验和mecA基因聚合酶链反应(PCR)三种试验，分别检测青霉素酶、苯唑西林酶和mecA基因。结果：130株OR和14株OS双纸片试验均为阴性，三维试验中青霉素酶均阳性，苯唑西林酶均阴性。125株OR—R型菌均检出mecA基因；5株OR—S菌中有3株未检出mecA基因，2株检出mecA基因；14株OS—R菌均未检出mecA基因。结论：表型为OXA耐药而非β—内酰胺类药物以敏感为主的金葡菌中，存在mecA基因和苯唑西林酶均为阴性的耐药型菌株，占OXA耐药株中的2．3％(3／130)。其耐药机制可能与青霉素结合蛋白(PBPs)的改变导致了OXA的亲和力下降有关。     

多重耐药鲍曼不动杆菌抗菌药物、消毒剂耐药基因研究

目的了解多重耐药的鲍曼不动杆菌（ABA）11簇β-内酰胺酶、3簇金属β-内酰胺酶、4簇OXA类碳青烯酶、2簇AmpC酶、6簇氨基糖苷类修饰酶基因和消毒剂耐药基因携带状况。方法采用PCR检测203株多重耐药的ABA菌耐药基因。结果203株中ADC阳性186株（91．6％）、TEM阳性124株（61．1％）、OXA-23cluster阳性66株（32．5％）、SHV阳性18株（8．9％）、PER阳性6株（3．0％）、DHA阳性1株t（0．5％）；ant（3”）-I阳性189株（93．1％）、aac（6’）一Ib阳性118株（58_3％）、aac（3）-I阳性114株（56．2％）、aac（6’）-II阳性13株（6．4％）、ant（2”）-I阳性13株（6．4％）、aac（3）-II阳性10株（4．9％）；qacE△1阳性164株（80．8％）。结论多重耐药的ABA菌β-内酰胺酶、OXA类碳青烯酶、AmpC酶、氨基糖苷类修饰酶基因携带率高。     

多重耐药耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的红霉素耐药基因和PVL基因检测

目的 了解耐甲氧西林金黄色葡萄球菌红霉素耐药基因和杀白细胞毒素基因的检出情况。 方法 收集MRSA 45株,采用聚合酶链式反应对45株MRSA的红霉素耐药基因ermA/B/C和杀白细胞毒素基因PVL进行检测。 结果 45株MRSA中有33株检出红霉素耐药基因,的检出率为73.3％;有12株检出杀白细胞毒素基因,检出率为26.7%。结论 多重耐药的MRSA中红霉素耐药基因ermA/B/C检出率较高,是MRSA对大环内酯类抗生素耐药的主要机制;杀白细胞毒素基因PVL检出率较高,是MRSA的重要致病因子。     

耐甲氧西林葡萄球菌的多重PCR快速检测

目的 采用多重聚合酶链反应（PCR）检测耐甲氧西林葡萄球菌（MRS）,并对我院葡萄球菌的耐药率进行调查。方法 对262株葡萄球菌（金黄色葡萄球菌86株,凝固酶阴性葡萄球菌176株）进行多重PCR扩增,并与琼脂稀释法作比较。对我院葡萄球菌的耐药率进行统计分析。结果 以mecA基因阳性判断MRS,灵敏度为100％,特异度为96．6％,阴性预测值为1.0％,阳性预测值为99．0％;以mecA基因和femA基因阳性判断耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）,灵敏度为100％,特异度为99．5％,阴性预测值为100％,阳性预测值为98．5％。我院葡萄球菌耐药率为78．6％,其中凝固酶阴性葡萄球菌耐药率为79．0％,金黄色葡萄球菌耐药率为78．0％。结论 多重PCR技术检测mecA基因能快速、敏感、准确地检测MRS,与femA基因联合检测能有效检测MRSA。MRS已成为日益严重的葡萄球菌感染问题。     

耐亚胺培南铜绿假单胞菌β内酰胺类药物耐药相关基因的研究

目的为了解临床分离的耐亚胺培南的铜绿假单胞菌（imipenem—resistante pseudomon asaeruginosa,IMPRPa）β内酰胺类药物耐药相关基因存在状况。方法将分离所得的18株全部耐亚胺培南的PA菌株进行产金属β内酰胺酶表型检测,聚合酶链反应（PCR）法对耐亚胺培南的铜绿假单胞菌进行β内酰胺类药物耐药相关基因在检测,并对部分耐药基因进行了DNA测序。结果10（55．6％）株产金属β内酰胺酶纸片协同法检测阳性,IMP、VIM、DHA、GES、CARB、TEM阳性率分别为22．2％（4／18）、33.3％（6／18）、11．1％（2／18）、33．3％（6／18）、16．7％（3／18）、22．2％（4／18）,oprD2缺失率77．8％（14／18）。结论铜绿假单胞菌可存携带2种以上β内酰胺酶基因,能在同种和不同种细菌间横向传播,并产生多重耐药,严重影响临床的抗感染治疗。     

80株大肠埃希菌耐药性及氨基糖苷类修饰酶基因分析

目的：了解临床分离的80株大肠埃希菌耐药性及氨基糖苷类修饰酶（AMEs）基因的存在状况。方法：采用MH平板法测试14种抗菌药物的敏感性，采用PCR技术检测氨基糖苷类修饰酶基因。结果：80株大肠埃希菌呈现多重耐药，对氨基糖苷类抗生素的耐药率在57．5％-80％之间，氨基糖苷类修饰酶基因aac（3）-I、aac（3）-Ⅱ、aac（6’）-I、ant（3”）-I基因的阳性率分别为20％、30％、32．5％、20％。携带1种或1种以上基因的菌株有65株（81．25％）。结论：临床分离的大肠埃希菌多重耐药严重，氨基糖苷类修饰酶基因携带率较高。     

医院感染的金黄色葡萄球菌耐药性与耐药基因检测

目的研究医院感染的金黄色葡萄球菌的耐药性与耐药基因状况,指导临床合理用药。方法对本院感染标本分离出的120例金黄色葡萄球菌（SAU）进行药敏试验,多重PCR法检测aph（2＂）、aph（3）’Ⅲ、ant（4’,4）＂、TEM、tetM、macA、erm和qacA/B基因。结果 120株SAU中,耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）有71株,占59.1%;甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌（MSSA）有49株（40.9%）。MSSA对15种抗生素制药率超过50%的只有6种,而MRSA对15种抗生素耐药率超过50%的12种;经8种基因进行检测,MRSA与MSSA对8种耐药基因携带率各不相同,MRSA高于MSSA。结论医院感染的金黄色葡萄球菌对抗菌药物有很高的耐药性,MRSA较MSSA的耐药性更高、更复杂,必须加强金黄色葡萄球菌的耐药性监控,以最大限度降低其耐药性的发生。     

三重聚合酶链反应快速诊断耐甲氧西林葡萄球菌感染

目的建立一种能快速有效地对葡萄球菌感染进行病原体诊断的方法.方法利用三重聚合酶链反应技术(Triplex PCR)同时检测葡萄球菌特异性16S rRNA 基因、金黄色葡萄球菌特异性Sa442基因和编码青霉素结合蛋白(PBP2a)的mecA基因.结果 84株葡萄球菌的16S rRNA 基因100%阳性,其中33株金黄色葡萄球菌的Sa442基因100%阳性,mecA基因阳性率为78.8%.51株凝固酶阴性葡萄球菌的Sa442基因100%阴性,mecA基因阳性率为76.5%.30株其他临床常见菌16S rRNA、Sa442、mecA基因100%阴性.结论该技术具有简便、快速、特异性强等特点,是一种非常有效的耐甲氧西林葡萄球菌感染快速诊断方法.     

肺结核感染金黄色葡萄球菌的基因分型及耐药研究

目的通过对肺结核患者分离出的金黄色葡萄球菌进行基因谱型和药敏检测研究,了解肺结核并发金黄色葡萄球菌的院内流行状况。方法对,晦床分离出的30株金黄色葡萄球菌进行药敏试验和SCCmec基因盒的多重PCR检测。结果药敏结果显示30株金黄色葡萄球菌对青霉素和甲氧西林的耐药率最高。甲氧西林的耐药率达到62．8％。MecA阳性菌株SCCmec的分型显示均为Ⅱ型或Ⅲ型,且所占比例相近,未见Ⅰ型和Ⅳ型。结论肺结核患者并发金黄色葡萄球菌耐药性普遍,MecA基因介导的MRSA在分离菌株分型以Ⅱ型或Ⅲ型为主。     

压电基因传感器阵列检测MRSA的实验研究

目的：探讨以压电传感阵列技术检测耐甲氧西林葡萄球菌的可行性。方法：收集临床64株葡萄球菌标本，对其耐药标志基因mecA基因和金黄色葡萄球菌特有基因femA增后应用压电传感器阵列进行检测，并以PCR电泳检测作参照，与目前采用的常规药物敏感试验进行对比分析。结果：传感器分析与PCR电泳分析结果完全一致，而此两种方法与常规培养加药敏法比较。结果略有差异。所有64株葡萄球菌中，2株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）的mecA为阴性，2株甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌（MSSA)的mecA为阳性，1株耐甲氧西林凝固酶性葡萄球菌（MRCNS）的mecA为阴性；2株甲氧西林敏感凝固酶阴性葡萄球菌（MSCNS）的mecA为阳性。结论：以压电传感阵列技术同时检测femA基因和mecA基因，既可鉴定出是否为金黄色葡萄球菌，又可判断其耐药类型，能为危重病人感染MRSA时的诊断和治疗提供依据。     

多重PCR在诊断慢性上颌窦炎耐甲氧西林金黄色葡萄球菌中的作用

目的　设计慢性上颌窦炎中耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 (MRSA)的快速检出方法。方法　利用多重聚合酶链反应 (MPCR)技术 ,同时检测同一DNA模板中的金黄色葡萄球菌耐药基因mecA及金黄色葡萄球菌固有的femA基因。结果　femA基因为金黄色葡萄球菌的特有基因 ,mecA基因在MRSA中检出率为 96 .2 %(5 1/ 5 3例 )。结论　MPCR方法能快速准确地鉴定MRSA。     

几种检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌方法的评价

目的对三种检测耐甲氧西林葡萄球菌方法的可靠性和临床实用性进行评价。方法以PCR检测金黄色葡萄球茵甲氧西林决定因子A（mecA）为金标准,按临床实验室标准化委员会（CLSI）操作规程用苯唑西林纸片扩散法、头孢西丁纸片扩散法、苯唑西林琼脂稀释法对临床分离的155株金黄色葡萄球菌进行检测。结果155株金黄色葡萄球菌经mecA基因检测,耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）为61．9％（96／155）;头孢西丁纸片扩散法检测MRSA的敏感性和特异性均为100％;苯唑西林纸片扩散法的敏感性为95．8％,特异性为91．5％;苯唑西林琼脂稀释法的敏感性为100％,特异性为98．3％;头孢西丁纸片扩散法优于苯唑西林纸片扩散法和苯唑西林琼脂稀释法。结论头孢西丁纸片扩散法操作简便、敏感性高、特异性好、结果可靠,可作为医院微生物实验室日常工作中检测耐甲氧西林葡萄球菌的常规方法。     

金黄色葡萄球菌抗生素耐药相关基因检测

目的检测医院及环境样中金黄色葡萄球菌（Staphylococcusaurell,SA）耐药基因,了解耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌（MethicillinResistantStaphylococcusaUleus,MRSA）和甲氧西林耐药凝固酶阴性葡萄球菌（MethiciUinResistantcoagulaseStaphylococcusanl＇e118,MRCNS）检出率以及金黄色葡萄球菌耐药基因分布情况。方法应用多重聚合酶链反应（Multiplexpolymeraschmnreaction,muhiplexPCR）检测医院及环境样中金黄色葡萄球菌的mecA、居mA基因。采用聚合酶链反应（Polymeraschmnreaction,PCR）技术检测金黄色葡萄球菌的11种耐药基因,分别是Bβ内酰胺类耐药基因blaTEM,氨基糖苷类耐药基因Aac（6’）／aph（2”）、aph（3’）-Ⅲ、ant（3”）-I、ant（4’,4”）与ant（6）-I,四环素耐药基因tetM,红霉素耐药基因erm,万古霉素耐药基因vanA、vanB,耐消毒基因qacA。结果44株菌分离自医院病人样本,检出12株MRSA,3株MRCNS。其中29株菌携带1种以上耐药基因,14株携带tetM基因,5株携带vanB基因,7株携带A0c（6’）伽h（2”）基因,9株携带aph（3’）-Ⅲ基因,7株携带ant（4＇,4”）基因,5株携带ant（6）-I基因。29株菌分离自环境样本,未检出MRSA与MRCNS。仅1株检出Aac（6’）/aph（2”）基因,16株检出ant（4＇,4”）基因,其余10种耐药基因未检出。结论院内样本中,不同样本分离菌株携带耐药基因存在差异,未检出携带qacA基因的菌株。环境样本携带肌￡（4’,4”）基因较高。检测耐药基因分布情况,为指导临床用药、控制院内感染及监测环境中菌株耐药情况提供依据。