用Fluo3—AM测定2型糖尿病患者淋巴细胞内Ca^2＋浓度及药物对 …

用Ｆｌｕｏ ３－ＡＭ为荧光控针,测定２型糖尿病患者淋巴细胞内Ｃａ＾２＋浓度,观察了肾上腺素、多巴酚丁胺、Ｂａｙ Ｋ８６４４、胰岛素等药物对胞内Ｃａ＾２＋的作用机制。实验表明患者胞浆内Ｃａ＾２＋浓度与正常人相比显著升高;药物对胞内Ｃａ＾２＋的刺激表明,病人地外界钙激动剂更敏感。胰岛素能刺激胞内Ｃａ＾２＋浓度升高,其作用机制是激活钙离子通道。肾上腺素不仅能激活钙离子通道,也能促进钙从钙池中释放。上述研     

舒郁胶囊对大鼠海马神经元5-HT3R激活后Ca~(2+)的影响

目的:观察海马神经元内5-羟色胺3受体(5-HT3R)激活后信号通路中Ca2+浓度的变化,探索复方舒郁胶囊治疗抑郁情绪的微观作用机制。方法:培养大鼠海马神经元,在中药血清药理学指导下进行实验:于培养基中添加5-HT3R激动剂激活其介导的信号通路,再以一定浓度舒郁胶囊和柴胡提取物含药血清孵育神经元。采用荧光探针Fluo-3/AM标记结合激光共聚焦显微镜技术测定海马神经元胞内[Ca2+]i。结果:激动剂激活5-HT3R信号通路,神经元胞内[Ca2+]i显著升高(P0.01)。给予正常大鼠舒郁胶囊和柴胡提取物含药血清干预,再次激活信号通路,胞内[Ca2+]i与正常组相比无明显变化,较激动剂组显著降低(P0.05)。结论:舒郁胶囊通过5-HT3R调控海马神经元胞内[Ca2+]i的变化,可能是其治疗抑郁情绪的作用机制之一。     

辣椒素通过钙信号抑制感觉神经元的电压门控性钙离子通道

目的 研究辣椒素对大鼠背根神经节神经元的电压门控性钙离子通道的抑制效应及其信号机制.方法 在急性分离的大鼠背根神经节(DRG)神经元上,应用全细胞膜片钳技术记录电压激活性钙离子通道电流以及辣椒素诱导的电流,应用钙离子成像技术检测Ca2+浓度的变化.结果 辣椒素能够抑制大鼠DRG神经元的电压激活性钙离子通道电流.细胞外钾离子浓度显著升高引起细胞去极化并打开膜上电压门控性钙离子通道引起胞外Ca2+内流,辣椒素只在引起胞内Ca2+浓度显著升高的情况下才能抑制高钾诱导的电压门控性Ca2+内流.用咖啡因耗竭细胞内Ryanodine敏感性钙库以后,辣椒素引发的胞内钙浓度升高的效应被显著抑制,说明辣椒素可诱导胞内Ryanodine敏感性钙库释放Ca2+.结论 在辣椒素敏感性的大鼠DRG神经元中,辣椒索通过胞内钙信号抑制电压门控性钙离子通道.Ca2+信号部分来源于Ryanodine敏感性钙库.     

高浓度葡萄糖和高浓度胰岛素对体外培养视网膜Müller细胞胞内[Ca2+]i的影响

目的 探讨高浓度葡萄糖、高浓度胰岛素对体外培养的视网膜Müller细胞胞内[Ca2+]i的影响.方法 采用荧光探针技术,应用激光共聚焦显微镜动态、定量测定细胞外高钙、钙拮抗剂条件下,正常、高浓度葡萄糖、高浓度胰岛素、高浓度葡萄糖+高浓度胰岛素培养的视网膜Müller细胞胞内[Ca2+]i的变化.结果 高浓度葡萄糖、高浓度胰岛素、高浓度葡萄糖+高浓度胰岛素培养的视网膜Müller细胞胞内[Ca2+]i明显升高,在细胞外高钙条件下各组[Ca2+]i均降低,在细胞外钙拮抗剂条件下各组[Ca2+]i均再次下降.结论 高浓度葡萄糖和高浓度胰岛素均能使视网膜Müller细胞胞内[Ca2+]i明显升高,而钙拮抗剂通过干扰细胞外钙离子进入细胞来降低[Ca2+]i.     

2型糖尿病患者细胞内钙离子浓度变化的研究

目的:探讨型糖尿病患者血中单个核细胞内2Ca2 浓度变化及其与胰岛素受体活性变化的关系。TPK方法:荧光分光分析法测定例型糖尿病及例正常对照单个核细胞内40220Ca2 浓度,并用酶联免疫法测定单个核细胞胰岛素受体酪氨酸激酶()活性。TPK结果:型糖尿病患者单个核细胞内2Ca2 浓度显著高于正常对照组,胰岛素受体活性显著低于正常对照TPK组。相关分析显示型糖尿病患者单个核细胞内2Ca2 浓度与、显著正相关,与受体活性显著负相关。FBGFINSTPK结论:细胞内Ca2 浓度升高可能通过影响胰岛素受体活性参与胰岛素抵抗的发生。TPK     

荧光比率法测量平滑肌细胞内的钙动力学变化

目的建立一种荧光比率方法来测量细胞内钙离子的动力学变化,并研究血管平滑肌细胞钙动力学变化在重症休克血管反应性降低中的作用.方法复制SD大鼠失血性休克模型,分离肠系膜细动脉血管平滑肌(ASMC),使用荧光探针Fluo-3/AM、FuraRed双标记比率方法结合激光扫描共聚焦显微成像技术测定单个平滑肌细胞钙动力学变化;评估荧光比率法在动态测定胞内钙离子浓度变化中的应用及其观察ATP敏感钾通道(KATP)特异性阻滞剂优降糖对血管反应性和钙动力学影响.结果休克后2 h(失代偿期),血管反应性明显降低,NE作用带来的平滑肌细胞内钙离子浓度升高的程度明显减弱;加入优降糖可明显提高NE对平滑肌细胞内钙离子的升高作用,改善细动脉对NE的反应性,带来血管反应性部分恢复.在37℃,Fluo-3/AM、FuraRed浓度为5μnol/L的条件下,肠系膜细动脉平滑肌细胞负载40 min左右即可获得良好的标记效果.结论优降糖特异性的阻滞ATP敏感钾通道的开放,增多细胞外钙内流并提高血管反应性;使用荧光比率法可以使胞内钙离子浓度的测量不受荧光探针浓度、细胞大小、激光漂白等因素的影响,可以准确、实时、动态测量细胞内钙离子浓度变化.     

平滑肌肌浆网Ca~(2+)释放与STOCs相关性的研究进展

平滑肌细胞肌浆网(SR)上存在两种不同类型的钙释放通道:三磷酸肌醇敏感的钙释放通道(IP3R)和ryanodine敏感的钙释放通道(RyRs)。肌浆网产生的局部瞬时钙释放如钙火花或Ca2+puffs激活邻近胞膜上的钙激活钾通道产生自发性瞬时外向电流(STOCs)。近来研究表明IP3Rs和RyRs都参与肌浆网内钙的调节和平滑肌的舒张。这两种释放通道是否存在协同作用,以及如何影响STOCs,进而调控平滑肌的舒缩活动,不同组织存在很大差异。本文就此方面的研究进展进行综述。     

巨噬细胞钙敏感受体通过TRPC6/Ca2+信号促进炎症反应

目的 观察钙敏感受体(calcium-sensing receptor,CaSR)对RAW264.7细胞炎症反应的影响,并探讨其分子机制.方法 采用Fura-2荧光探针对RAW264.7细胞质中Ca2+进行荧光染色,使用单细胞荧光钙离子检测仪检测CaSR对巨噬细胞内Ca2+信号的影响;采用脂多糖(lipopolysac...     

荧光比率法测量平滑肌细胞内的钙动力学变化

目的 建立一种荧光比率方法来测量细胞内钙离子的动力学变化，并研究血管平滑肌细胞钙动力学变化在重症休克血管反应性降低中的作用。方法 复制SD大鼠失血性休克模型，分离肠系膜细动脉血管平滑肌(ASMC)。使用荧光探针Fluo-3／AM、FuraRed双标记比率方法结合激光扫描共聚焦显微成像技术测定单个平滑肌细胞钙动力学变化；评估荧光比率法在动态测定胞内钙离子浓度变化中的应用及其观察ATP敏感钾通道(KATP)特异性阻滞剂优降糖对血管反应性和钙动力学影响。结果 休克后2h(失代偿期1，血管反应性明显降低，NE作用带来的平滑肌细胞内钙离子浓度升高的程度明显减弱；加入优降糖可明显提高NE对平滑肌细胞内钙离子的升高作用，改善细动咏对NE的反应性，带来血管反应性部分恢复。在37℃，Flu-o-3／AM、FuraRed浓度为5μmol／L的条件下，肠系膜细动脉平滑肌细胞负载40min左右即可获得良好的标记效果。结论 优降糖特异性的阻滞ATP敏感钾通道的开放，增多细胞外钙内流并提高血管反应性；使用荧光比率法可以使胞内钙离子浓度的测量不受荧光探针浓度、细胞大小、激光漂白等因素的影响，可以准确、实时、动态测量细胞内钙离子浓度变化。     

大鼠肠肌间神经元胃动素受体的表达及胃动素引起神经元内钙信号的机制

目的观察大鼠肠肌间神经元胃动素受体(MTLR)的表达,并探讨胃动素引起神经元内钙信号的机制。方法采用免疫荧光双标技术观察大鼠肠肌间神经元MTLR的表达;应用激光共聚焦显微镜技术检测不同药物处理组胃动素引起的单个神经元内Ca2+荧光强度的变化。结果大鼠肠肌间神经元呈MTLR免疫反应阳性表达;在Hank's液中,10-6mol/L胃动素可引起神经元内Ca2+浓度的显著升高,其峰高(峰值减去静息值)为30.6±3.7,荧光强度相对变化百分比为(100.8±18.4)%。在D-Hank's液(去除细胞外Ca2+)中或用L型钙离子通道阻断剂维拉帕米预处理细胞后,胃动素可轻度升高胞内Ca2+浓度。与单独应用胃动素组相比差异有统计学意义(P<0.05)。当分别用G蛋白拮抗剂NEM和PLC抑制剂Compound48/80预处理细胞后再加入胃动素,胞内Ca2+浓度升高的程度明显降低,与单独应用胃动素组相比差异有统计学意义(P<0.05)。当用PKC抑制剂D-鞘氨醇预处理细胞后,再加入胃动素,其峰高和荧光强度相对变化百分比同单独应用胃动素组相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论大鼠肠肌间神经元能自身表达MTLR。胃动素可明显升高神经元内Ca2+浓度,胞内Ca2+浓度的升高既源于外钙的内流又源于内钙的释放。外钙的内流主要通过L型Ca2+通道,G蛋白偶联型MTLR-PLC-IP3途径参与细胞内钙的释放。     

PDGF-BB引起系膜细胞内游离钙浓度变化的机制探讨

目的 研究血小板衍生生长因子BB(PDGF—BB)引起的肾小球系膜细胞内游离钙浓度变化及其离子流动机制。方法 以体外培养的系膜细胞为研究对象，激光共聚焦显微术结合Fura-3染色法动态测定细胞内游离钙浓度。结果 PDGF-BB可浓度依赖性地引起肾小球系膜细胞内游离钙浓度的升高，细胞内钙库释放抑制剂TMB-8、无钙缓冲液和钙通道阻滞剂硝苯地平均可抑制PDGF—BB引起的细胞内钙浓度变化，但其抑制作用发挥的时间和程度均有显著不同。结论 PDGF—BB引起肾小球系膜细胞内游离钙浓度的升高在初期是通过细胞内钙释放与细胞外钙内流共同参与，而在其后的维持升高阶段主要是通过细胞外钙内流，特别是通过电压依赖式钙通道内流引起。     

海嘧啶对SGC—07901人胃癌细胞凋亡的影响

目的 揭示海嘧啶的抗肿瘤作用机制。方法 采用流式细胞仪测定海嘧啶对人胃癌细胞凋亡及细胞周期的影响;采用激光扫描共聚焦技术观察海嘧啶对人胃癌细胞内[Ca^2 ]i的影响及[Ca^2 ]i;变化时Ca^2 的来源。结果 海嘧啶可诱导肿瘤细胞凋亡,可升高肿瘤细胞内[Ca^2 ]i的浓度,[Ca^2 ]i升高时Ca^2 来源于细胞外钙内流和细胞内钙释放。结论 海嘧啶的抗肿瘤机制为诱导肿瘤细胞凋亡,通过开放细胞膜鲺通道和引起细胞内钙释放两条途径升高肿瘤细胞内[Ca^2 ]i,启动细胞凋亡机制,从而诱导肿瘤细胞凋亡。     

灯盏花素抑制肾上腺素诱导的心肌细胞内钙升高的机制

目的探讨灯盏花素抑制肾上腺素诱导的心肌细胞内钙升高的机制。方法培养乳鼠心肌细胞,经Fluo-3/AM染色后应用激光共聚焦技术检测细胞内钙水平。结果灯盏花素(10、30、100μM)显著抑制肾上腺素诱导的细胞内钙升高及细胞体积增大。灯盏花素抑制氯化钾(KCl)诱导的细胞外钙内流,但对L-型钙通道开放剂BAYK8644诱导的细胞内钙升高无影响。另外,灯盏花素能够抑制咖啡因介导的细胞内钙升高。结论灯盏花素通过抑制外钙内流和内钙释放降低细胞内游离钙的浓度,其抑制外钙内流的作用与L-型钙通道无关。     

雷诺定受体与心律失常

雷诺定受体是心肌细胞内的钙释放通道，对心肌细胞内游离钙离子浓度有重要影响。在心脏缺血或肥大等病理过程中雷诺定受体的功能和数量也会发生明显变化，通常是数量减少但敏感性增加。交感神经过度兴奋会引起雷诺定受体过度磷酸化，使其敏感性异常增高。肌浆网(SR)内Ca^2 超载可引起SR在舒张期异常释放钙离子增加，导致钠钙交换及其内向电流加强，后者与钙震荡电流、早后除极、迟后除极、甚至尖端扭转型心律失常的产生有关，是导致心律失常的重要原因之一。     

苯二氮受体调控醛固酮分泌机制中Ca~(2+)和cAMP的作用

外周型苯二氮受体的配体PK11195增强大鼠肾上腺皮质球状带细胞醛固酮分泌的效应可被主要作用于胞浆膜Ca~(2+)通道的阻断剂硝苯啶所取消,而不被选择性作用于线粒体Ca~(2+)通道的阻断剂硝苯啶呋海因(Da—ntrolene)所取消。PK11195在其增强醛固酮分泌的最大效应条件下并不影响球状带细胞内cAMP水平。本文的结果表明苯二氮(?)受体调控醛固酮分泌的机制中,细胞内信使物质不是cAMP,也不是来自线粒体的Ca~(2+),而是来自胞浆膜外的Ca~(2+)。     

不同浓度中药柴胡提取物对人肝癌细胞内Ca2+和p53表达的影响

目的：测定不同浓度中药柴胡（Bupleurun Chinese DC,BCDC）提取物对BEL-7402细胞内游离钙离子浓度（[Ca^2＋]i）和p53表达的影响,以探索柴胡逆转BEL-7402细胞多药耐药的机制。方法：用Fura-2／AM作为细胞内钙离子的荧光指示剂,用双波长荧光分光光度计测定不同浓度柴胡提取物作用下BEL-7402细胞内[Ca^2＋]i及其剂量-效应关系;用免疫组化法检测不同条件下BEL-7402细胞的p53表达。结果：柴胡可使人肝癌细胞BEL-7402细胞内游离钙离子浓度下降（P〈0．001）,但不具有剂量-效应关系;BEL-7402细胞呈p53天然突变。结论：柴胡可使人肝癌细胞BEL-7402细胞内游离钙离子浓度下降,为一种钙离子通道阻滞剂（calcium channel blocker,CCB）,提示钙离子通道阻滞作用为柴胡逆转BEL-7402细胞多药耐药的机制之一;BEL-7402细胞呈p53天然突变也可直接或间接影响肿瘤多药耐药性的表达。     

5-羟色胺对心肌细胞内游离钙浓度的影响

目的　观察 5 -羟色胺 (5 - HT)对新生大鼠心肌细胞内游离 Ca2 + 浓度的影响 ,并探讨其作用机制 .方法　培养 SD大鼠 (1～ 3d)心肌细胞 ,应用特异性 Ca2 +荧光指示剂 Fluo- 3/AM负载细胞 ,激光共聚焦显微镜检测游离 Ca2 + 浓度 .结果　 5 - HT在 10 - 6 ,10 - 5,10 - 4 m ol· L- 1 时均可升高心肌游离Ca2 + 浓度 ,且随剂量增加而加强 ;二氢吡啶类钙通道阻断剂lacidipine可部分拮抗 5 - HT的作用 ;心肌肌浆网内钙释放通道 ryanodine受体调节剂 ryanodine,在 10 - 5mol· L- 1 时也可部分拮抗 5 - HT的作用 ;用 EGTA络合细胞外液中游离Ca2 + ,5 - HT升高心肌游离 Ca2 + 作用明显减弱 ;此外 ,5 - HT二型受体 (5 - HT2 R)阻断剂赛庚定具有显著抑制 5 - HT升高心肌游离 Ca2 + 的作用 .结论　 5 - HT具有升高心肌游离 Ca2 + 的作用 ,其机制可能与细胞外 Ca2 +经 5 - HT2 R或二氢吡啶类钙通道进入细胞以及肌浆网内钙释放有关     

半边莲对Hela细胞钙信号系统的影响

为探讨半边莲对Hela细胞内游离钙浓度的影响及其抗癌机理，利用荧光染料Fura-2在细胞内能与游离钙结合，在一定波长光的激发下可发出荧光的特性，根据荧光的强度来检测游离钙的变化，结果显示半边莲对Hela细胞增殖的抑制作用不明显，但可通过促进细胞内储藏钙的释放和细胞外钙离子的内流，显著提高细胞内游离钙的浓度。     

异氟醚对豚鼠耳蜗外毛细胞内钙离子浓度变化的影响

目的观察不同浓度异氟醚对氯化钾和咖啡因诱发的豚鼠耳蜗外毛细胞内钙离子移动的影响，探讨其对听觉外周感受器（耳蜗）作用的可能机制。方法用Fluo-3AM荧光指示剂染色急性分离的豚鼠耳蜗外毛细胞，在激光共聚焦显微镜下动态观察使用1.0 MAC2、.0 MAC浓度的异氟醚预处理前、后氯化钾和咖啡因分别诱发的细胞内钙离子浓度的变化。结果异氟醚可使氯化钾诱发的外毛细胞内钙荧光染色强度的峰值下降，较对照组有明显差异，并与浓度呈正相关。但该两种浓度的异氟醚对咖啡因诱发的外毛细胞内钙荧光染色强度无明显影响。结论异氟醚浓度依赖性地降低耳蜗外毛细胞内钙离子浓度，部分与抑制细胞外钙内流有关，而对肌浆网功能无明显影响。