用生物传感器测定重组人α2a-干扰素单克隆抗体的亲和力及抗原识别表位

目的 :测定抗重组人α2a 干扰素单克隆抗体的抗原识别表位及其亲和常数。方法 :借助于生物传感器技术进行抗原抗体相互作用的动力学分析。结果 :抗体的亲和常数介于 10 -5～ 10 -7之间 ,5株抗体识别干扰素分子上 4种不同的抗原表位。结论 :生物传感器在研究抗原抗体相互作用中确为一个理想的工具 ,适合于抗原抗体结合与解离的动力学分析及预测表位的构像关系     

重组人α干扰素单克隆抗体的研制及其应用

目的　研制抗干扰素的单克隆抗体 (McAb)及其应用。方法　应用杂交瘤技术 ,获得 4 0株抗重组人α干扰素的单克隆抗体细胞株 ;用ELISA方法检测腹水滴度 ,用辛酸法纯化McAb。结果　 4 0株细胞中 2E9、4G1能稳定分泌抗重组人α1b干扰素的单克隆抗体 ,2C9为抗重组新型干扰素 ,2A7、4G10分泌抗重组人α干扰素 (α1b、α2b、α2a、)和重组集成干扰素、重组新型干扰素的单克隆抗体细胞系 ;体外连续传代 6个月 ,分泌抗体能力不变 ,特异性专一。 5株单克隆抗体均为IgG。采用辛酸方法提纯抗体纯度达到 95 %以上。粗制的重组人α干扰素经 4G10单克隆抗体亲和层析柱提纯后 ,获得的干扰素纯度 95 %以上 ,平均收率 93% ,残余鼠IgG含量 <10 0ng 剂量 (5 0 μg)。 2C9单克隆抗体亲和层析柱适用于纯化新型干扰素。结论　 4G10单克隆抗体亲和层析柱可以应用于大规模重组人α干扰素生产。     

人α-干扰素上单克隆抗体表现型结合位点的研究

单克隆抗体NK2特异地中和某些人α-干扰素(INF-α)亚种。如IFN-α2和IFN-αB(B)。作者用在酵母中生产的重组IFN-α2研究了NK2表现型。这些研究旨在搞清IFN分子上的受体     

单克隆抗体识别人类T细胞生长因子受体及受体的部分特性

T细胞生长因子(TCGF或白细胞间介素-2)是一分子量为15,000的糖蛋白,是由抗原或丝裂原活化的T淋巴细胞所合成与分泌。已有人制备出结合TCGF的单克隆抗体,但还无针对TCGF膜受体的特异性抗体的报道,也没有闸明此受体的特性。本文作者报道一种单克隆抗体——抗-Tac抗体     

干扰素增强单克隆抗体的体内抗癌靶向作用

在癌细胞间,其肿瘤特异性抗原(TSA)并不一致,这就限制了单克隆抗体在诊断和治疗上的应用。已知干扰素(IFN)司增强肿瘤特异性抗原和组织相容性抗原(HLA)的显露,对此,Greiner等用抗癌细胞的单克隆抗体探讨干扰素对增强靶向性(Targetng)的影响。方法是用结肠癌细胞进行免疫,获得单克隆抗体B6.2。结果发现B6.2可与90k糖蛋白     

用生物传感器测定重组人α2a—干扰素单克隆抗体的亲和？…

测定抗重组人α２ａ－干扰素单克隆抗体的抗原识别表位其亲和常数。方法：借助于生物传感器技术进行抗原抗体相互作用的动力学分析。结果：抗体的亲和常数介于１０＾－５－１０＾－７之间,５株抗体识别干扰素分析上４种不同的抗原表位。结论：生物传感器在研究抗原抗体相互作用中确为一个理想的工具,适合于抗原抗体结合与解离的动力学分析及预测表位的构像关系。     

干扰素增强单克隆抗体的体内抗癌靶向作用

在癌细胞间，其肿瘤特异性抗原(TSA)并不一致，这就限制了单克隆抗体在诊断和治疗上的应用。已知干扰素(IFN)可增强肿瘤特异性抗原和组织相容性抗原(HLA)的显露，对此，Greiner等用抗癌细胞的单克隆抗体探讨干扰素对增强靶向性(Targeting)的影响。方法是用结肠癌细胞进行免疫，获得单克隆抗体B6．2。结果发现B6．2可与90k糖蛋白反应，并与75-80％乳癌和90％以上的结肠癌呈阳性反应。     

抗重组人肿瘤坏死因子-α(rHTNF-α)单克隆抗体特性及功能的研究

应用杂交瘤技木制备抗重组人肿瘤坏死因子-α单克隆抗体对于r-HTNF-α的纯化和TNF-α分子的抗原性及功能的研究将是一种主要工具。本实验对一组抗rHTNF-α单克隆抗体的特性和功能进行了研究。Western blotting结果表明Z_4、Z_8、Z_(12)、Z_ (20)、Z_(21)、B_3和E_6 抗体特异性地识别分子量为17000道尔顿的TNF-α它们与rIL-1、rIL-2、rIFNγ、rIFNα、和E coli菌裂解液无交叉反应。竞争性ELISA结果证实7种抗体分别识别TNF-α分子上5个不同的抗原决定簇。其中4个抗体可以识别TNF-α活性中心部位。两个抗体还可以识别天然TNF-α分子。     

用生物素-抗生物素酶联免疫吸附试验作单纯疱疹病毒分型并与限制性核酸内切酶分析和应用单克隆抗体免疫荧光法的比较

应用捕捉法生物素-抗生物素酶联免疫收附试验(Capture B/SA ELISA)测定单纯疱疾病毒(HSV)的型别是在用单克隆抗体(McAb)分型的基础上发展起来的。兔抗HSVIgG用作捕捉抗体,生物素连接的特异性鼠抗HSV-1单克隆抗体或兔抗HSV-1、HSV-2型特异性多克隆抗体作为检测抗体。被捕捉的抗原用抗生物素连接的碱性磷酸酶以ELISA法检测,该抗生物素可与检测抗体中生物素分子反应。将捕捉法B/SA ELISA分型的效率     

用HRP——抗IgM法快速诊断流行性出血热

本文报道用流行性出血热(EHF)病毒抗原片,以酶标抗人IgMu链单克隆抗体染色法(简称HRP-抗IgM)检测患者血清中的IgM抗体,从而对EHF进行早期诊断。为确证本方法的可靠性,同时与间接免疫荧光IgG法(IFA-IgG)进行了比较.经阻断试验和2-巯基乙醇耐性试验证明,HRP-抗IgM检出的抗体系EHF特异性抗体.用双盲法检测了51份血清,结果全部符合。实验结果表明,HRP-抗IgM特异性强.敏感性高,用普通显微镜便可观察,结果清晰.4小时内可获得诊断结果,可以用作早期诊断.     

抗G-蛋白偶联受体自身抗体与甲状腺毒症性心脏病的关系

目的:探讨AT1-受体、α1-肾上腺素能受体(α1-受体)和β1-肾上腺素能受体(β1-受体)自身抗体与甲状腺毒症性心脏病的关系。方法:237例甲亢患者中包括甲状腺毒症性心脏病(甲亢心组,n=46)及非甲状腺毒症性心脏病(非甲亢心组,n=191),后者中又分为甲亢治疗组(n=106)和甲亢恢复组(n=85)。另选41例体检健康者为正常对照组。以细胞外第二环表位肽段的合成肽作为抗原,应用酶联免疫吸附测定技术,检测各组血清抗AT1、α1和β1-受体自身抗水平。结果:(1)237例甲亢患者抗AT1、α1和β1-受体自身抗体阳性率分别为31.65%(75/237)、27.85%(66/237)和23.63%(56/237),明显高于正常对照组的9.76%(4/41)、12.20%(5/41)和7.20%(3/41)(P均0.05);(2)甲亢心组抗AT1和α1-受体自身抗体阳性率分别为52.17%(24/46)和43.48%(20/46),明显高于非甲亢心组的26.70%(51/191)和24.08%(46/191)(P均0.05);而抗β1-受体自身抗体阳性率在两组间差异无统计学意义(P0.05)。(3)进一步分析表明,甲亢心组抗AT1和α1-受体自身抗体阳性率分别为52.17%(24/46)和43.48%(20/46),明显高于甲亢治疗组的30.19%(32/106)和23.58%(25/106)以及甲亢恢复组的22.35%(19/85)和24.71%(21/85)(P均0.05)。而抗β1-受体自身抗体在三组差异无统计学意义(P0.05)。结论:抗G蛋白偶联型AT1-受体、α1-受体和β1-受体自身抗体可能与甲状腺功能亢进症有关,且抗AT1和α1-受体自身抗体可能参与了甲状腺毒症性心脏病的病理生理过程。     

重组人γ-干扰素单克隆抗体杂交瘤细胞建株研究

本文报道重组人γ-干扰素单克隆抗体杂交瘤细胞株建立的方法及结果。为获得供融合用的小鼠脾细胞,用两种不同的方案免疫了两组(每组3只)BALB/c小鼠。血清抗体效价最高的第4号小鼠,于加强免疫4天后取脾,制成脾细胞悬液。按照常规方法与小鼠骨髓瘤SP 2/0·Ag 14细胞融合。采用直接中和试验法筛选融合细胞孔的上清液,从中选出两株(A3和B3)分泌抗重组人γ-干扰素的杂交瘤细胞。交叉中和试验显示,A_3和B_3抗体只中和重组或自然的人γ-干扰素;与α-干扰素或β-干扰素无反应。此两株单克隆抗体的效价分别超过128,000和25,600。双扩散试验证明,A_3和B_3均为小鼠IgG_1型抗体;液氮中保存半年以上,仍保持原有的各种特性。     

重组人γ-干扰素单克隆抗体杂交瘤细胞建株的研究

本文报道重组人γ-干扰素单克隆抗体杂交瘤细胞株建立的方法及其结果。为获得融合用的小鼠脾脏细胞。用两种不同的免疫方案免疫了A、B两组(每组3只)BALB/c小鼠。血清抗体效价最高的第四号小鼠,于加强免疫四天后取脾,制成脾细胞悬液,按照常规方法与小鼠骨髓瘤Sp2/0细胞融合。采用直接中和试验法筛选融合细胞孔内的上清液,从中选出两株(A_3和B_3)分泌抗人重组干扰素-γ的杂交瘤细胞。交叉中和试验显示,A_3和B_3抗体只中和重组的和自然的人γ-干扰素;不与α-干扰素和β-干扰素反应。以两株单克隆抗体的效价分别可达到128000和25600。双扩试验证明,A_3和B_3均为小鼠IgG_1型抗体,液氮中保存半年后,仍具有原来的各种特性,     

分泌抗人γ干扰素单抗杂交瘤细胞株的建立

干扰素对抗体生成,T细胞,NK细胞以及吞噬细胞的活性等多种免疫功能都具有调节作用。有人报道干扰素水平高低是某些疾病活动与否的一个重要指标。为了寻找一种检测干扰素的良好方法及对干扰素进行多方面研究,我们制作了抗人γ干扰素单克隆抗体。BALB/c小鼠每只多部位皮下或肌肉注射γ干     

用鼠单克隆抗体McAb 17-1A治疗转移性结肠直肠癌(文摘)

肿瘤细胞可表达肿瘤相关抗原(TAA),该抗原能开发用于诊断,也可作为免疫治疗的靶子,几乎每例结肠直肠癌的大部分肿瘤细胞表达有TAA CO17-1A,该抗原为非分泌的糖蛋白,MW 37KD。曾将鼠抗该抗原的单克隆抗体(McAb,IgG2A)用于治疗。在体内未偶合McAb介导的破坏肿瘤细胞的机制尚未完全明瞭。一般认为抗体依赖的细胞毒作用(ADCC)、补体溶解和抗-抗独特型抗体(Ab3)的诱导作用较重要。用细胞抑制剂等不能治愈转移性结肠直肠癌,因此,需要有一种其它疗法。作者研究了患者单独应用McAb-     

一种新颍的抗体包被可磁化固相载体用于酶联免疫测定

用双功能螯合剂2-(4-重氮苯基)1-羟基乙烷-1,1-双磷酸(DHBA)联接可磁化Fe_3O_4颗粒表面多价金属离子及变式单克隆抗体或多克隆抗体,使抗体包被于可磁化Fe_3O_4颗粒的表面,用本颗粒酶联免疫测定人α_1-干扰素(HuIFN-α_1)等.此法快速、敏感,可磁化载体上包被的蛋     

瓜氨酸化α-烯醇化酶特异性单克隆抗体制备及其在阿尔茨海默病动物模型中的检测应用

本研究利用杂交瘤技术制备瓜氨酸化α-烯醇化酶特异性单克隆抗体,并探究瓜氨酸化α-烯醇化酶抗体在检测阿尔茨海默病(AD)动物模型中的作用。利用生物信息学软件分析预测α-烯醇化酶的B细胞优势表位,选取~9R-~(25)F位氨基酸序列,将该表位多肽中2个精氨酸替换为瓜氨酸,化学合成瓜氨酸化α-烯醇化酶~9R-~(25)F多肽(citrullinatedα-enolase peptide,CEP)。采取活泼酯法将CEP多肽与BSA偶联制备CEP-BSA偶联抗原并免疫BALB/c小鼠,杂交瘤技术制备CEP单克隆抗体。免疫组织化学和Western blotting对其特异性进行验证。CEP-BSA偶联抗原免疫小鼠能诱发特异性抗体反应,经细胞融合、筛选得到一株稳定分泌CEP特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞,命名为9B5。Western blotting分析显示该单克隆抗体能特异性结合瓜氨酸化α-烯醇化酶,免疫组织化学检测显示9B5单抗能结合AD模型大鼠脑组织细胞上瓜氨酸化的α-烯醇化酶。本研究成功制备的瓜氨酸化α-烯醇化酶特异性单克隆抗体将有助于进一步研究瓜氨酸化α-烯醇化酶在相关疾病发病中的作用。     

单克隆抗体的标准

近年来单克隆抗体已广泛用于许多学科,到目前为止,此来源于杂交瘤的抗体的特异性最强。这些费时费工制备的抗体由于其单一特异的反应,已日益取代多克隆的免疫血清作为试剂用于:(1)研究;(2)体内外诊断与治疗;(3)从混合物中提纯某一成分。例如:不久将有可能用单克隆抗体代替抗血清来鉴定主要和次要的血型类别,即红细胞抗原。早孕诊断来测定尿中抗绒毛促性腺激素抑制反应,也已逐渐使用抗绒毛促性腺激素的单克隆抗体为结合试剂。正在研究放射性同位素标记的抗肿瘤的单克隆抗体体内诊断恶性肿瘤的应用。     

毒蕈碱受体3抗原表位筛选及其在原发性干燥综合征诊断中的作用

运用计算机软件分析毒蕈碱受体3(M3R)蛋白的结构特点及抗原决定簇分布,根据结果设计合成3条多肽。比较合成多肽与抗M3受体抗体阳性干燥综合征(SS)患者血清IgG的反应强弱,获得一条抗原抗体反应最强的抗原表位多肽(N49)。进一步以多肽N49作为包被抗原,检测原发性SS(pSS)患者41例,继发SS(sSS)患者25例,系统性红斑狼疮(SLE)患者34例,类风湿关节炎(RA)患者80例和正常人174例血清中抗M3多肽IgG抗体,结果显示该多肽抗体在原发性SS患者血清中的阳性率为53.7%,明显高于sSS患者28%、SLE患者8.8%、RA患者25%和正常人12.1%(P<0.05)。抗N49多肽抗体在pSS诊断中的敏感性为53.7%,特异性为83.7%,而且该抗体的检测对于抗SSA抗体、抗SSB抗体或抗α-胞衬蛋白(-αfodrin)抗体阴性的pSS患者的诊断具有补充作用。表明,筛选获得的M3抗原表位多肽N49,其检测抗体在pSS临床血清诊断中具有很好的应用价值。     

中国西部自身免疫性肝病患者自身抗体的分布特征

目的: 探讨中国西部自身免疫性肝病患者中相关自身抗体的存在状况及特征.方法: 57例自身免疫性肝病患者分为3组: 自身免疫性肝炎(AIH)12例、原发性胆汁性肝硬化(PBC)32例、原发性硬化性胆管炎(PSC)13例.用间接免疫荧光法检测抗核抗体(ANA)、平滑肌抗体(SMA)、抗肝肾微粒抗体1型抗体(anti-LKM1)、抗线粒体抗体(AMA)和抗中性粒细胞胞质抗体(ANCA),Western blot检测抗肝细胞胞溶质抗原1型抗体(anti-LC1)、抗可溶性肝抗原/肝胰抗原抗体(anti-SLA/LP)、抗肝肾微粒抗体1型(anti-LKM1)、 AMA-M2亚型等多种肝抗原自身抗体.结果: 57例中ANA、AMA、M-2、pANCA阳性率在组间有统计学差异(P<0.01).PBC中AMA、M-2阳性检出率均为100%, PSC中pANCA阳性检出率为53.8%, Fisher精确检验在α'=0.002水准与其他各组比较有统计学差异.AIH与PBC的ANA阳性率分别为100%和50%,Fisher精确检验在α'=0.002水准二者无统计学意义,与其他各组比较有明显差异.在AIH组SMA阳性率为25%,LKM-1、LC-1、SLA/LP阳性率均为8.3%, 与其他组无统计学意义,可能与病例少有关.PBC中分别有1例患者ANA、SMA以及ANA、LKM-1同时阳性, PSC中有1例ANA、SLA/LP同时阳性,此3例患者结合性别、生化、自身抗体等资料符合AIH诊断条件;AIH中有1例M-2阳性综合各项资料符合PBC(重叠综合征).结论: 肝抗原自身抗体、ANA、AMA及M-2亚型的检测有助于自身免疫性肝病的诊断.对肝炎病毒血清标志物阴性的肝功能异常者应该行肝抗原自身抗体检测协助诊断.