斯氏狸殖吸虫成虫尿素溶解性抗原的分离提取

采用8mol/L尿素并以简化的方法,从斯氏狸殖吸虫成虫水溶性抗原(PsAWA)制备后的离心沉渣中,进一步分离提取出尿素溶解性抗原(PsAWU)。210mg虫体干粉,收获PsAWA 50.18mg,PsAWU 63.19mg,使抗原制备总收获量增加1.26倍。ELISA初步鉴定表明:PsAWU具有比PsAWA更高的血清学活性,4℃保存一定时期其活性变化亦与之相似。     

斯氏狸殖吸虫成虫尿素溶解性抗原蛋白组成及活性成份

采用8M尿素和简化方法分离、提取斯氏狸殖吸虫成虫尿素溶解性抗 原(PsAWU),并对该抗原和水溶性抗原(PsAWA)的血清学特性进行了分析比较,结果表明PsAIVU的敏感性高于PsAWA,初步证明具一定的特异性,是一种可实际应用的新型抗原。为进一步分析两种抗原,对其蛋白组成及活性成份进行了初步研究。 氨基酸组成的分析 两种抗原浓度均为1 mg/ml,用稀盐酸加热处理后,以氨基酸分析仪(Beckman公司)进行测定。结果表明两种抗原的氨基酸种类基本一致,但绝大     

广州管圆线虫成虫尿素溶解性抗原分析及其诊断价值的探讨

目的分析广州管圆线虫成虫尿素溶解性抗原,探讨其诊断价值。方法广州管圆线虫成虫匀浆后沉渣经尿素溶解,与成虫水溶解性抗原同时进行SDS-PAGE和Western-blot,分析蛋白谱与抗原谱;用ELISA检测不同样本中相应抗体。结果SDS-PAGE结果显示尿素抗原蛋白条带少于水溶解性抗原;尿素抗原与感染大鼠血清、免疫兔血清和广州管圆线虫病患者血清在32000Mr处均出现强反应带,尿素抗原的反应带条数较水溶性抗原少。两种抗原包被ELISA检测广州管圆线虫病疑似病人血清和感染大鼠血清的阳性率相同;尿素抗原用于检测血吸虫感染小鼠血清的交叉阳性率明显低于水溶性抗原,检测正常大鼠血清、献血员血清及其他非广州管圆线虫感染血清时,假阳性数较水溶性抗原少。结论广州管圆线虫成虫尿素抗原含有32000Mr抗原;广州管圆线虫尿素抗原用于诊断时,与水溶性抗原有同样的敏感性,而特异性高于水溶解性抗原。     

人精子膜抗原的提取及分析

目的:用两种酶裂解法提取精子膜抗原并对其进行蛋白浓度测定和成分分析。方法:分别用尿素裂解液和表面活性剂Triton X-100﹑脱氧胆酸钠(DOC)的TDOC裂解液裂解液提取精子膜抗原,借助BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度,并通过SDS-PAGE法比较分析蛋白成分。结果:两种方法提取的精子膜抗原经SDS-PAGE,考马斯亮蓝染色后均有条带显示,TDOC裂解液提取的样本中显示仅有一条蛋白带,分子质量集中在100ku左右,尿素裂解液提取的样本中有多条蛋白条带,分子质量集中在130～35ku。结论:尿素裂解液提取法提取精子膜抗原的效果优于TDOC裂解液提取法,为抗精子相关抗体的研究提供了条件。     

斯氏狸殖吸虫成虫尿素溶解性抗原的分离提取

斯氏狸殖吸虫病(四川肺吸虫病)在我国流行分布较广,寄生人体以肺外型为主,虫体多不发育成熟,通常需借助免疫学方法进行诊断。近年来,一些流行区的生态环境受到破坏,影响了囊蚴的采集。加上用囊蚴感染动物至获得成虫费时费事,造成抗原材料来源困难。以往,此病免疫诊断用抗原一般为虫体盐水或盐水缓冲液的浸出物,而将离心后的沉淀作为残渣废弃。最近国内外报导用高浓度尿素从血吸虫卵和成虫的非水溶性部分中分离、提取出尿素溶解性抗原。本实     

感染犬弓首线虫鼠血清抗弓首线虫幼虫抗体和循环抗原检测

采用间接 ELISA 和双抗体夹心 ELISA 检测感染犬弓首线虫小鼠血清抗弓首线虫幼虫抗体和循环抗原。间接 ELISA 用犬弓首线虫幼虫排泄分泌抗原(TES-Ag)包板,二抗用辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠 IgG。夹心 ELISA 用豚鼠抗 TES-Ag 的 IgG 包板,第二抗体用辣根过氧化物酶标记的兔抗TES-Ag 的 IgG。结果表明,感染后第1天血清循环抗原即为阳性,第15天血清抗体出现阳性,第87天实验结束时,血清抗体和循环抗原均是阳性。     

尿素溶解性抗原用于ELISA诊断旋毛虫病的初步研究

文本报告了旋毛虫感染期幼虫虫体尿素溶解性抗原的提取及其用于ELISA诊断旋毛虫病的效果。ELISA检测24例旋毛虫病人血清IgG和12例病人滤纸干血滴IgG,阳性率均为91.67％(22/24和11/12),21例病人血清IgM,阳性率为95.24％(20/21),对日本血吸虫病人血清作IgG和IgM检测时均有一定的交叉反应,而感染其它几种寄生虫的小鼠血清无交叉反应。 本实验结果表明尿素溶解性抗原用于ELISA诊断旋毛虫病具有较高的敏感性、特异性和好的重复性,是一种具有实用价值和经济价值的诊断抗原。     

五种抗原用酶联免疫吸附试验诊断血吸虫病的研究

本文对用5种血吸虫抗原作ELISA诊断血吸虫病的效果进行比较研究.除盐水浸提成虫抗原SEW外,其余4种抗原(可溶性虫卵抗原SEA,尿素溶性虫卵抗原JEU,可溶性成虫抗原SWA,尿素溶性成虫抗原JWU)均具较高的敏感性(88.24%～90.20%)和特异性(86.84%～94.73%),这4种抗原间的敏感性和特异性均无显著性差异(P>0.05).结果表明用本文方法制备的2种尿素溶性抗原JEU和JWU,其制备方法简便、抗原产量高、诊断效果好,使通常废弃的沉渣得到利用,为抗原来源增辟新途径,具有较好的实用和经济价值.     

广西本地华支睾吸虫饱和硫酸铵纯化抗原的应用研究

目前,华支睾吸虫病的确诊一般靠粪检查找虫卵,费时费工常误诊、漏诊.虽然近年来有人采用未经纯化的成虫粗抗原作ELISA,敏感性和特异性有所提高,但效果不太理想,我们参照张夏英等(1)用饱和硫酸铵纯化成虫抗原,所得硫酸铵纯化抗原(AW)与成虫粗抗原作ELISA比较,检测血清中特异性抗体,现将结果报告如下.     

TPHA及ELISA法检测梅毒特异性抗体能力的比较

目的:比较绝大多数实验室常用的梅毒确诊试验TPHA(OMEGA试剂)、与用万泰、科华两试剂厂家的酶联免疫(ELISA)双抗原夹心法三者之间的检测能力。方法:对于186例病人同时作OMEGA试剂的TPHA试验、万泰试剂的ELISA试验、科华试剂的ELISA试验,然后对结果进行比较。结果:万泰试剂的ELISA双抗原夹心法检出89例阳性,科华的双抗原夹心法检出86例阳性,英国(OMEGA)公司的TPHA法检出测82例阳性,三者无统计学差异。结论:在今后的实验室梅毒诊断中完全可以用万泰或科华公司的ELISA双抗原夹心法替代目前的螺旋体血球凝集试验(TPHA)。     

HCV核心抗原检测技术的临床应用

目的:探讨丙型肝炎病毒核心抗原酶联免疫吸附试验(ELISA)检测方法的临床应用价值。方法:采用丙型肝炎病毒核心抗原ELISA试剂盒对临床丙肝感染者血清进行检测,同时用HCV抗体ELISA检测试剂盒和HCV RNA基因扩增试验作为对照进行比较。结果:以HCV RNA PCR检测为对照,HCV抗原检测试剂盒的灵敏度为95.65%,特异性为100%,23例HCV RNA PCR检测阳性血清,用HCV抗体检测法进行检测,其中有3例阴性,将这3例阴性标本用HCV核心抗原检测法进行检测,其中2例为阳性。结论:丙型肝炎核心抗原ELISA检测方法能缩短窗口期,敏感性高,特异性好,费用低廉,在临床上具有很好的推广前景。     

日本血吸虫微粒体抗原的研究——Ⅰ、成虫微粒体的制备及其抗原性质的初步报告

血吸虫病的血清诊断通常用成虫或虫卵的可溶性抗原。鉴于宿主对寄生虫的免疫反应不仅是对可溶性抗原产生抗体,曾用高浓度尿素溶液对血吸虫卵匀浆的离心沉淀物进行再提取,得到的尿素溶解性抗原在与宿主抗体的反应中显示的活力较常用的水溶性虫卵抗原(SEA)高。这种尿素溶解性抗原是大分子量蛋白质的复杂混合物,来自细胞的各种颗粒成分,为进一步阐明颗粒性抗原的性质,我们从日本血吸虫成虫中分离出微粒体部分。以此作为抗原,用ELISA法测定宿主的抗体,效果良好。     

120例HBsAg阳性患者血清前S1抗原测定结果分析

目的探讨乙肝前S1抗原检测的临床应用。方法用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检测120例乙肝病毒表面抗原(HBsAg)阳性标本的乙肝病毒(HBV)血清标志物和前S1抗原,并与HBV-DNA作对比分析。结果120例HBsAg阳性标本检出前S1抗原阳性78例,乙型肝炎e抗原(HBeAg)阳性48例;HBeAg阳性标本中前S1抗原与HBV-DNA的检出率分别为93.75%和95.83%,无显著性差异(P>0.05)。HBeAg阴性标本前S1抗原与HBV-DNA的检出率分别为45.83%和48.61%,前S1抗原与HBV-DNA在HBeAg阳性标本的检出率明显高于HBeAg阴性标本(P<0.01)。结论前S1抗原与HBeAg阳性有密切相关性,较HBeAg更敏感地反映HBV的复制情况。     

血吸虫病间接红细胞凝集试验的标准化研究——抗原的筛选及标准化

分别用日本血吸虫的虫卵可溶性抗原(SEA)、成虫尿素提取抗原(AUA)、成虫表皮膜抗原(ATA)以及SEA与AUA、SEA与ATA的混合抗原致敏绵羊红细胞,并用于检测198例日本血吸虫病人血清,IHA的阳性符合率分别为95.45％、84.67％、90.23％、98.08％、96.25％;检测100例健康人血清,结果全部阴性;检测191例肺吸虫病,旋毛虫病、华枝睾吸虫病和囊虫病患者血清,其总交叉反应率分别为13.61％(SEA)、3.14％(AUA)、4.71％(ATA)、8.37％(SEA+ATA)和3.66％(SEA+AUA)。结果表明:SEA+AUA的制备方法简单,并具有较高的敏感性和特异性。     

丙型肝炎病毒不同编码区His融合抗原的表达与纯化

目的:表达和纯化丙型肝炎病毒(HCV)-Core、NS3和NS4的His融合抗原H-C、H-NS3和H-NS4,并初步探讨其在抗体检测中的应用。方法:用重组基因工程技术,构建3种重组质粒C-pET-28a-c( )、NS3-pET-28a-c( )和NS4-pET-28a-c( )以及相应的工程菌;质粒经双酶切、PCR和测序鉴定正确后,IPTG诱导抗原表达,从IPTG使用浓度、诱导温度与时间3个方面优化抗原表达条件;用NTA柱纯化抗原后,分别用单片段重组抗原和混合抗原以酶联免疫吸附试验(ELISA)检测100份HCV抗体阳性血清和40份健康人血清。结果:用单片段重组抗原和混合抗原检测的100份HCV抗体阳性血清中,H-C、H-NS3和H-NS4的抗体阳性率分别为91%、75%和52%,而H-C、H-NS3和H-NS4混合抗原的抗体检出率为100%;检测40份健康人血清,结果全部为阴性。结论:HCV不同编码区单片段His融合抗原具有不同的抗体检出率,但均低于混合抗原的阳性率;在开发HCV抗体诊断试剂时,应采用HCV混合抗原。     

华支睾吸虫成虫抗原纯化及鉴定

用葡聚糖凝胶Sephadex G-200柱层析法、三氯醋酸-乙醇提取物DEAE-Cellulose(DE52)柱层析法、尿素提取物Sepharose 4B柱层析法对华支睾吸虫成虫可溶性抗原进行部分纯化,获得8种不同的抗原活性组分.并用免疫电泳、聚丙烯酰胺凝胶圆盘电泳(PAGE)、薄层等电聚焦电泳、微板法动力学酶联免疫吸附试验进行鉴定.认为经纯化的抗原组分较粗抗原更适宜于临床诊断及考核疗效     

抗幽门螺杆菌尿素酶抗体的检测及其临床应用

以幽门螺杆菌(HP)特异性尿素酶作为抗原,用间接酶联免疫法(ELISA)检测149例经胃镜检查患者血清抗尿素酶抗体IgG,以≥450EU为阳性标准.结果显示,ELISA检测HP的灵敏性为92.0%,特异性为86.5%;胃窦炎症的存在,HP的检出和血清抗体水平三者间呈现明显的正相关;抗体水平的高低与胃     

单克隆和多克隆抗体对肺癌患者血清循环免疫复合物抗原组份的检测和分析

用五株单克隆抗体(McAb)和一株多克隆抗体(PcAb)以本实验中建立的酶联免疫吸附(ELISA)夹心法检测分析肺癌,肺部良性疾病及正常人血清循环免疫复合物(CIC)的抗原组份。研究结果表明:针对肺癌亚类相关抗原CIC的五个McAb其癌抗原阳性率可分别自20％至32％不等。而PcAb与肺癌及肺部良性疾病血清CIC均可起反应,抗原阳性率分别为45.7％和41.4％。采用多株McAb组合应用可显著提高整个肺癌CIC抗原检出率(49％)。提示多株McAb并用在检测特异性肺癌相关抗原CIC方面优于PcAb。用McAb检测CIC抗原可说明宿主的肿瘤免疫反应状态,并为预后判断提供帮助。     

双抗原夹心法检测抗—HIV的效果评价

<正> 从97年始,我院血库就用间接ELISA法对献血者进行抗—HIV(1+2)的筛选试验,发现间接ELISA法普遍存在特异性、重复性差及灰色带反应较多等缺点。近两年市场上推出了抗—HIV的第三代检测试剂—双抗原夹心法,该法以高纯度基因重组HIV抗原包被反应板、以酶标HIV特异性抗原代替间接ELISA法中的酶标二抗,具双重识别机制,可同时检测IgG和IgM抗体。我科从去年11月份起即用双抗原夹心法对献血者血液进行复检(包括间接法初检阳性的标本),经比较觉得双抗原夹心法的特异性和灵敏度均明显优于间接法。现把有关检测结果总结报告如下。     

乙型肝炎病毒前S1抗原与HBV-DNA和HBeAg的相关性分析

[目的]探讨乙型肝炎病毒前S1抗原与乙型肝炎病毒DNA(HBV-DNA)、乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg)的相关性.[方法]对207例乙型肝炎患者(HBV-DNA阳性)的血清用酶联免疫法(ELISA)进行前S1抗原、HBeAg、Anti-HBe、HBcIgG的检测.用PCR荧光定量法检测HBV-DNA,同时用ELISA法对乙型肝炎病毒血清标志物阴性的80例正常健康人也进行前S1抗原的检测.[结果]207例HBV-DNA阳性的血清中,前S1抗原在HBeAg阳性而Anti-HBe阴性的血清中阳性率为70.5%,在Anti-HBe阳性而HBeAg阴性中的阳性率为68.9%,两组经χ2检验,P》0.05差异无显著性意义.在HBV-DNA低拷贝数时,前S1抗原的阳性率占25.6%,HBeAg的阳性率占11.1%;在高拷贝数时,前S1抗原的阳性率占41.1%,HBeAg的阳性率占46.3%.在低拷贝数时,前S1抗原的阳性率明显高于HBeAg.[结论]前S1抗原、HBeAg与HBV-DNA的符合率较高,对无条件检测HBV-DNA而HBeAg阴性的血清检测前S1抗原,可提示乙型肝炎病毒处于低复制的状态,如与其他乙型肝炎病毒血清标志物同时检测,对临床更有意义.