X线照射对人鼻咽癌细胞株MRP基因和MRP表达的影响

化疗药物可以诱导肿瘤细胞多药耐药相关基因(MRP基因)及其蛋白(MRP)的过度表达,从而产生多药耐药,导致化疗疗效降低[1-2].放疗也能引起肿瘤细胞的MRP基因和MRP表达增强[3],但照射后肿瘤细胞MRP基因和MRP表达随时间的变化情况,目前少见报道.本研究采用体外培养的鼻咽癌CNE-1细胞株,检测照射前、后细胞MRP基因和MRP的表达随时间变化情况以及细胞对顺铂(DDP)敏感性的变化,从而探讨照射与鼻咽癌多药耐药性的关系.     

顺铂体外诱导的人肝癌耐药细胞株(QGY/DDP)的建立

目的 建立顺铂(DDP)诱导的人肝癌耐药细胞株(QGY/DDP),研究其生物学特性和耐药机制.方法 采用间歇诱导法,逐步递增DDP浓度,获得耐药细胞株QGY/DDP;MTT法测定药物敏感性;细胞计数法计算倍增时间,流式细胞术检测细胞周期;原子吸收光谱法测定细胞内铂离子蓄积量,流式细胞仪测定P-糖蛋白(P-gp)和谷胱甘肽S-转移酶-π(GST-π)的表达水平.结果 成功建立了顺铂诱导的人肝癌耐药细胞株QGY/DDP,耐药指数为10.81,与5-氟尿嘧啶、长春新碱等抗癌药有明显的交叉耐药;与QGY细胞相比,QGY/DDP细胞增殖减慢、倍增时间延长,G0/G1期细胞增多、S期与G2/M期细胞减少,细胞内Pt含量降低,GST-π的表达升高,而P-gp无明显变化.结论 QGY/DDP细胞具有耐药表型及耐药细胞的生物学特性;其耐药机制与细胞内Pt含量降低和GST-π过表达有关,而与P-gp无关.     

99Tcm-MIBI显像检测乳腺癌多药耐药

探讨了乳腺癌组织的多药耐药现象的主要机制及P-糖蛋白(P-gp)、胎盘型谷胱甘肽硫转移酶(GST-π)与~(99)Tc~m-MIBI显像的关系。尽管文献报道的实验结果不尽相同，但作为一种功能显像技术，~(99)TC~m-MIBI SPECT显像能够用来研究乳腺癌细胞P-gp的表达，可以在体外无创性检测乳腺癌多药耐药，为指导乳腺癌的治疗提供参考。     

P-gp糖蛋白及其编码的基因在受照射鼻 咽癌细胞株中的表达

目的模拟临床放射方法对人鼻咽鳞癌CNE细胞分次照射，检测照射前、后CNE细胞肿瘤多药耐药蛋白P-gp及其编码的基因MDR1的表达和功能。方法对人鼻咽鳞癌CNE细胞进行体外培养，待细胞进入指数生长期后模拟临床放疗方法进行X射线分割照射，2Gy／（d·f^-1），连续5d，总剂量10Gy。于照射前、照射后4、8、13、17和21d分别收取标本进行检测。利用RT-PCR、免疫细胞化学检测照射前、后人鼻咽鳞癌CNE细胞MDR1及P-gp的表达；MTT法检测其耐药指数（RI）的变化，评价P-gp的功能。结果人鼻咽鳞癌CNE细胞MDR1基因照射前呈弱表达，照后4d过度表达，8d到21d表达逐渐降低，与照射前比较，差异有统计学意义（P〈0．05）；其编码的蛋白产物P-gp照射前、照射后4和8d呈弱表达，13至21d表达增高，P-gp迟于MDR1基因高表达。MTT法检测耐药指数结果显示：照射前、照射后4和8d RI值均为1，13、17和21d RI分别增高为8、10和11．2，RI值变化的情况与P-gp的变化情况相一致。结论人鼻咽鳞癌CNE细胞照射前MDR1及P-gp呈弱表达，有原始的低度耐药性；照射后MDR1及功能性P-gp高表达并且持续一段时间。     

MRP在人涎腺腺样囊性癌细胞中的表达及意义

目的:通过检测MRP蛋白的表达,探讨人涎腺腺样囊性癌细胞产生多药耐药的机制。方法:用浓度为1μg/ml的顺铂作用于腺样囊性癌细胞,每次作用时间48 h,经6个月后形成在该药物浓度下生长良好的耐顺铂细胞。运用免疫组化、Western-blot法检测SACC和SACC/DDP细胞株中MRP蛋白的表达,RT-PCR检测SACC和SACC/DDP的MRP mRNA的表达。结果:诱导形成的顺铂作用环境下生长稳定的细胞株SACC/DDP,其MRP蛋白和MRP mRNA表达水平明显高于母本细胞SACC(P<0.01)。结论:SACC/DDP细胞的细胞浆中以及细胞膜上MRP蛋白的表达率很高,可能是涎腺腺样囊性癌细胞产生多药耐药的机制所在。     

PPMP调控KBv_(200)细胞株mdr1基因表达逆转其多药耐药

为研究糖脂合成酶抑制剂苯基棕榈酰胺吗啡丙醇 (DL threo 1 phenyl 2 palmitoylamino 3 morpholi no 1 propanol·HCl,PPMP)对人恶性肿瘤多药耐药细胞株KBv2 0 0 多药耐药mdr1基因的mRNA表达的调控 ,以及PPMP对细胞株KBv2 0 0 的多药耐药性的逆转作用 ,作者应用体外细胞培养技术对细胞株KBv2 0 0 进行PPMP处理 ,用RT PCR技术分析PPMP处理前后细胞mdr1的mRNA表达 ,以流式细胞仪检测PPMP处理前后KBv2 0 0 及其敏感株KB细胞内罗丹明 12 3的药物浓度变化。结果显示 5 μmol/L、15 μmol/LPPMP可部分抑制KBv2 0 0 细胞mdr1mRNA表达 ,2 5 μmol/LPPMP可完全抑制KBv2 0 0 细胞mdr1mRNA表达 ;PPMP可增加KBv2 0 0 细胞内罗丹明荧光强度 ,随着PPMP浓度的增加 ,耐药细胞内的罗丹明荧光强度逐渐增大。提示PPMP对细胞株KBv2 0 0 的多药耐药基因mdr1有抑制作用 ,并可以逆转KBv2 0 0 的多药耐药性 ,逆转作用与PPMP浓度呈正相关     

^99Tc^m—MIBI显像对肿瘤多药耐药检测的应用

MDR（多药耐药）是目前肿瘤化疗失败的主要原因，对MDR的检测可以帮助化疗决策的制定，从而使肿瘤患得到更有效的治疗，^99Tc^m-MIBI^99Tc^m-甲氧基异丁基甲腈）是mdr1基因编码的P-gp(P-糖蛋白）和MRP（多药耐药相关蛋白）的转运底物，肿瘤细胞内^99Tc^m-MIBI摄取减低表明其P-gp的高表达，并与MRP的表达相关，因此，^99Tc^m-MIBI显像可在治疗前预测对化疗的反应，并为选择更有效的化疗策略提供依据。     

ZnPcH1-PDT对鼻咽癌CNE1细胞杀伤作用的实验研究

目的 探讨新型酞菁类光敏剂锌酞菁H_1(ZnPcH_1)介导的光动力疗法(ZnPcH_1-PDT)对鼻咽癌CNE1细胞的杀伤作用.方法 采用人鼻咽癌CNE1细胞作为研究对象,应用MTF比色法和细胞集落形成实验检测PDT对CNE1细胞增殖的影响,采用AO/EB荧光染色法、TUNEL、DNA倍体分析检测细胞的死亡方式.结果 MTT比色法及细胞集落形成实验结果显示,ZnPcH_1-PDT可抑制鼻咽癌CNE1细胞增殖抑制率,并随ZnPcH_1的增加而增高(P<0.05);AO/EB荧光染色法、TUNNEL、DNA倍体分析结果均表明ZnPcH_1-PDT能够诱导CNE1细胞凋亡,凋亡率呈时间依赖性.结论 ZnPcH_1-PDT能够有效地抑制鼻咽癌CNE1细胞增殖,诱导该细胞凋亡,拥有良好的应用前景.     

99Tcm-MIBI显像对肿瘤多药耐药检测的应用

MDR(多药耐药)是目前肿瘤化疗失败的主要原因,对MDR的检测可以帮助化疗决策的制定,从而使肿瘤患者得到更有效的治疗。99Tcm-MIBI(99Tcm-甲氧基异丁基异腈)是mdr1基因编码的P-gp(P-糖蛋白)和MRP(多药耐药相关蛋白)的转运底物,肿瘤细胞内99Tcm-MIBI摄取减低表明其P-gp的高表达,并与MRP的表达相关。因此,99Tcm-MIBI显像可在治疗前预测对化疗的反应,并为选择更有效的化疗策略提供依据。99m     

体内多药耐药的显像研究

探讨了多药耐药产生的各种机制及体内P-糖蛋白(P-gp)和多药耐药相关蛋白(MRP)显像的情况。SPECT和PET都可以用来研究P-gp和MRP介导的转运情况。锝标记的甲氧异腈、p53和Q复合物都是P-gp泵的转运底物。显像剂如11C标记的秋水仙碱、维拉帕米、阿霉素等已经用于体内P-gp介导的转运水平的底量研究。白三烯是MRP的特异转运底物,因此N-11C-乙酰基白三烯E4可用于无创性评价MRP的转运功能。     

青蒿素对人鼻咽癌CNE细胞的放射增敏作用及机制的研究

Objective To investigate the radiosensitizing effects of artemisinin on CNE human nasopharyngeal carcinoma cells in vitro.Methods CNE human nasopharyngeal carcinoma cell line was used in this study.Cell growth kinetics was determined by MTT assay.Effect of the drug on radiosensitivity of CNE cells was analyzed by clonogenic assay.The change of cell cycle was measured by flow cytometry.Results The inhibition of CNE cells growth by artemisinin was increased with concentrations.Artemisinin (1 μmol/L)could enhance the radiosensitizing effects on CNE cell line,and the sensitizing enhancement ratio(SER)was 1.26.Artemisinin abrogated radiation-induced G2/M arrest of the tested CNE cells.Compared with the radiation alone group,the proportion of G2/M phase cells increased in radiation combined with drug group.Conclusions Artemisinin could reduce radiation-induced G2/M arrest and enhance the cytotoxicity of γ-irradiation on the CNE ceils.     

青蒿素对人鼻咽癌CNE细胞的放射增敏作用及机制的研究

目的 探讨青蒿素对人鼻咽癌CNE细胞的放射增敏作用。方法 应用甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测青蒿素对鼻咽癌CNE细胞的抑制效应;克隆形成实验观察青蒿素对CNE细胞的放射敏感性的影响;流式细胞术测定照射后CNE细胞周期的再分布。结果 青蒿素对CNE细胞的抑制率呈药物剂量依赖性增加。青蒿素能明显增加γ射线对CNE细胞的克隆形成抑制作用,1 μmol/L青蒿素对CNE细胞的放射增敏比(SER)为1.26。青蒿素能够去除γ射线照射后CNE细胞的G₂/M期阻滞,与单纯6 Gy照射组相比,青蒿素+照射组G₂/M期阻滞减少。结论 青蒿素通过减弱辐射诱导的G₂/M期阻滞,从而增加γ射线对CNE细胞的杀伤作用。     

青蒿素对人鼻咽癌CNE细胞的放射增敏作用及机制的研究

Objective To investigate the radiosensitizing effects of artemisinin on CNE human nasopharyngeal carcinoma cells in vitro.Methods CNE human nasopharyngeal carcinoma cell line was used in this study.Cell growth kinetics was determined by MTT assay.Effect of the drug on radiosensitivity of CNE cells was analyzed by clonogenic assay.The change of cell cycle was measured by flow cytometry.Results The inhibition of CNE cells growth by artemisinin was increased with concentrations.Artemisinin (1 μmol/L)could enhance the radiosensitizing effects on CNE cell line,and the sensitizing enhancement ratio(SER)was 1.26.Artemisinin abrogated radiation-induced G2/M arrest of the tested CNE cells.Compared with the radiation alone group,the proportion of G2/M phase cells increased in radiation combined with drug group.Conclusions Artemisinin could reduce radiation-induced G2/M arrest and enhance the cytotoxicity of γ-irradiation on the CNE ceils.     

HMME-PDT对C666-1和CNE2细胞杀伤效应的实验研究

目的 比较在血卟啉单甲醚(HMME)介导下C666-1和CNE2鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NTC)细胞对光动力疗法(pho-todynamic therapy,PDT)的杀伤效应和引起差异的可能因素.方法 利用荧光光谱测量技术和激光扫描共聚焦显微技术分别检测HMME在c666-1和CNE2细胞中的潴留浓度和亚细胞分布;用细胞克隆形成方法评估C666-1和CNE2细胞的PDT疗效.结果 C666-1和CNE2细胞中HMME的潴留浓度随着细胞和光敏剂的孵育时间增加而增大,但CNE2细胞对HMME的吸收明显高于C666-1细胞;随着孵育时间的增加,细胞对HMME的吸收趋于饱和.HMME主要分布在c666-1和CNE2细胞的细胞核外周.在相同实验条件下,HMME.PDT对C566-1和CNE2细胞杀伤效果存在显著差异,CNE2的细胞存活率小于C666-1细胞.结论 HMME-PDT作用下C666-1细胞存活率明显高于CNE2细胞,其主要原因是CNF2细胞对HMME的吸收高于C666-1.细胞内光敏剂的潴留浓度是决定PDT疗效的一个关键要素.     

5-ALA-PDT对两种鼻咽癌细胞EBV-C666-1和CNE2的杀伤效应研究

目的比较处于不同细胞生长期的EBV-C666-1和CNE2鼻咽癌细胞加入相同浓度5-氨基酮戊酸(5-Aminolevulinic acid,5-ALA)孵育相同时间后,所产生PpⅨ总量的差异以及对PDT的响应情况。方法通过计数法测定C666-1和CNE2细胞的生长曲线,利用荧光光谱技术检测处于不同生长期的细胞吸收5-ALA所生成的PpⅨ含量,应用激光共聚焦显微技术观察5-ALA-PpⅨ在两种细胞中的亚细胞分布。分别在细胞培养24,48和72 h后,对两株细胞进行光动力(photodynamic therapy,PDT)实验,使用CCK-8(cell counting Kit-8)比色法测定细胞存活率。结果 C666-1细胞中5-ALA-PpⅨ的含量明显低于CNE2细胞。同种细胞在不同生长期吸收5-ALA后所生成的PpⅨ的含量也存在显著差异。5-ALA-PpⅨ主要分布在C666-1细胞的线粒体,而在CNE2细胞中主要分布于细胞膜。相同实验条件下,C666-1细胞在培养24和48 h的PDT实验中,存活率低于CNE2,而在细胞培养72 h后的PDT实验中,存活率高于CNE2。结论处于不同生长期的C666-1和CNE2细胞吸收5-ALA后所生成的PpⅨ的含量存在显著差异,细胞中PpⅨ的含量和分布是影响PDT疗效的重要因素。     

洛铂对鼻咽癌细胞CNE2体外放射增敏作用的研究

目的 研究洛铂联合外照射对人鼻咽癌细胞系CNE2的杀伤和放射增敏作用及其机制。方法 以对数生长期的人鼻咽癌细胞系CNE2为研究对象,MTT法检测单纯洛铂和洛铂联合照射对CNE2细胞的增殖抑制作用;克隆形成试验分析洛铂对CNE2细胞的放射增敏作用;流式细胞仪检测单纯洛铂组和洛铂联合照射组细胞凋亡及细胞周期分布;蛋白免疫印迹检测Bcl-2、 Bax和Caspase-3蛋白表达。结果 洛铂对CNE2有增殖抑制作用,且细胞毒性呈剂量依赖性,IC₅₀为1.610 μmol/L,洛铂联合照射⁶⁰Co γ射线4 Gy对CNE2细胞IC₅₀为0.077 μmol/L。洛铂联合照射组放射增敏比大于3。24 h内随洛铂浓度增加,鼻咽癌细胞进入G₂/M期比例增多。而洛铂联合照射将鼻咽癌细胞更多地阻滞于G₂/M期,当洛铂浓度增大到6 μmol/L,洛铂联合照射组主要将细胞阻滞于S期。洛铂5 μmol/L作用24 h可引起15.6%的细胞凋亡,4 Gy照射可引起11.3%细胞凋亡,洛铂联合照射组可引起61.8%的细胞凋亡。蛋白免疫印迹结果显示,洛铂联合照射组抑制凋亡蛋白Bcl-2表达水平下降,促进凋亡诱导蛋白Bax以及活化的Caspase-3表达水平升高。结论 洛铂对人鼻咽癌CNE2细胞有放射增敏作用,作用机制可能与抑制Bcl-2表达,促进Bax表达,激活Bcl-2（Bax）-Caspase信号通路有关。     

5-氨基乙酰丙酸光动力杀伤人鼻咽癌细胞株的实验研究

目的 探讨5-氨基乙酰丙酸(5-ALA)光动力学效应(PDT)杀伤人鼻咽癌细胞株CNE2的可能性.方法 对培养的CNE2分别加入不同浓度的5-ALA(0.01、0.05、0.10、0.25、0.5、1.0、2.0、4.0mmol/L)孵育4h,予波长630nm的半导体激光照射,照射能量密度分别为20、10、5、2J/cm2,继续孵育6、12、24h,用四唑盐比色法分别测定细胞存活率.结果 5-ALA-PDT能有效杀伤人鼻咽癌CNE2细胞,其杀伤程度与照射后孵育时间、5-ALA浓度和激光剂量呈正相关(P＜0.01).激光照射后12h,激光能量为20J/cm2,5-ALA浓度为0.5mmol/L时,其杀伤作用最明显.结论 体外培养CNE2细胞对5-ALA介导的PDT敏感.     

Knee injury and Osteoarthritis Outcome Score (KOOS) - validation of a Swedish version

The Knee injury and Osteoarthritis Outcome Score (KOOS) is a self-administered instrument measuring outcome after knee injury at impairment, disability, and handicap level in five subscales. Reliability, validity, and responsiveness of a Swedish version was assessed in 142 patients who underwent arthroscopy because of injury to the menisci, anterior cruciate ligament, or cartilage of the knee. The clinimetric properties were found to be good and comparable to the American version of the KOOS. Comparison to the Short Form-36 and the Lysholm knee scoring scale revealed expected correlations and construct validity. Item by item, symptoms and functional limitations were compared between diagnostic groups. High responsiveness was found three months after arthroscopic partial meniscectomy for all subscales but Activities of Daily Living.