间接原位巢式PCR法在结核病与结节病鉴别中的应用

目的观察结核病和结节病病理组织中结核分枝杆菌DNA检出率及分布,探讨间接原位巢式聚合酶链反应(PCR)方法在结核病与结节病鉴别中的作用。方法以结核分枝杆菌内插入序列IS6110为扩增靶序列,用间接原位巢式PCR法,检测30例结核病和30例结节病石蜡包埋病理组织中结核分枝杆菌DNA,以抗酸染色阳性之结核病石蜡包埋病理组织作阳性对照,分别以鼠胎肺及抗酸染色阳性、原位杂交时无TB-DNA探针的石蜡包埋肺组织作阴性对照。结果光镜下观察,30例结核病组织标本中有28例阳性,阳性率为93.3%;30例结节病组织标本中有1例阳性,阳性率为3.3%,经统计学分析两组差异有统计学意义(P<0.01);从病理组织形态学方面观察,两组标本阳性结果中结核分枝杆菌DNA分布有所不同,结核病组中具有向郎罕氏巨细胞周围集中的特征,而结节病组中则无此特征。结论用间接原位巢式PCR法检测石蜡包埋病理组织中结核菌DNA,可作为鉴别结核病和结节病的较可靠且直观的方法之一。     

淋巴结结核脓液病原学诊断特点

目的　分析首次诊断为淋巴结结核病例的脓液病原学诊断特点,为临床医生提供选择诊断方法的理论依据。方法　收集我中心结核临床实验室2016年1月—2017年12月所有淋巴结结核脓液标本的病例资料,从中选出首诊时在超声引导下或无超声引导下用注射器穿刺抽脓的初诊淋巴结结核病例51例。分析病例的相关临床资料,包括性别、年龄、病原学检验结果、病理学结果、影像学结果等。结果　51例病例中,女性31例;年龄18～78岁,平均为（33.0±13.7）岁,20～30岁者占54.8%;肺部CT无异常表现的有32例;15例病例行细针穿刺病理学检查,呈典型干酪样坏死改变3例。将同时行脓液结核分枝杆菌核酸检测（nucleic acid amplification tests, NAAT）和抗酸染色涂片的标本检测结果进行比较,NAAT阳性率为88.2%,抗酸染色涂片阳性率为19.6%,2者比较差异有统计学意义（P＜0.05）;将同时行结核分枝杆菌NAAT和分枝杆菌快速培养的标本检测结果进行比较,NAAT阳性率为91.3%,分枝杆菌快速培养阳性率为30.4%,2者比较差异有统计学意义（P＜0.05）。结论　对于淋巴结结核的诊断,将抽吸的脓液行NAAT可以作为首选诊断方法。     

噬菌体生物扩增法检测肺结核患者痰标本的临床应用价值

目的探讨噬菌体生物扩增法对肺结核临床诊断的应用价值。方法对298例肺结核患者的痰标本,20例非结核性其他肺部疾病患者痰标本进行噬菌体生物扩增法检测,同份标本同时进行涂片抗酸染色、分枝杆菌罗氏培养。结果 298例痰标本有167例噬菌体生物扩增法检测结果阳性,阳性率56.0%;有78例涂片抗酸染色阳性,阳性率26.2%;有129例罗氏培养阳性,阳性率43.3%。结论噬菌体生物扩增法检测肺结核痰标本中结核分枝杆菌只需2d时间,操作简便、灵敏度高、特异性强,可作为诊断肺结核的一种检测方法。     

检测结核分枝杆菌两种不同方法的比较

目的比较实时荧光定量PCR法与细菌培养法检验结核分枝杆菌的能力。方法收集2013-2014年天津市某三甲医院痰涂片抗酸染色阳性肺结核患者的痰液标本200份,分别应用细菌培养法与实时荧光定量PCR法,对上述患者的痰标本进行检测。结果痰涂片抗酸染色阳性结核病患者的痰标本中,应用实时荧光定量PCR法检测结核分枝杆菌的阳性率为58.5%,应用结核分枝杆菌培养法检测的阳性率为42.0%,差异有统计学意义(P0.05)。结论荧光定量PCR技术与细菌培养法尚不能取代痰涂片抗酸染色检测结核分枝杆菌。     

巢式PCR扩增IS6110技术用于诊断结核病的实验研究

目的：探讨巢式聚合酶链反应（PCR）技术在部队结核病患者诊断中的实用价值。方法：根据结核分枝杆菌特有的插入序列IS6110基因序列,设计内外引物组成套式PCR,用于结核分枝杆菌DNA的检测,并与Bactec快速培养法和涂片抗酸染色镜检法比较。结果：套式PCR对分枝杆菌参考菌株的检测,仅人型和牛型结核分枝杆菌呈阳性。检测24例非结核病患者痰标本呈阴性。以巢式一PCR,Bactec快速培养法和抗酸染色涂片法分别检测116份可疑结核病患者痰标本,阳性率分别为67．2％,40．5％,37．1％。培养与涂片阳性者,PCR检测均呈阳性,巢式－PCR检出率明显高于后两法结果,且有显著性差异（P＜0．01）。结论：巢式－PCR用于部队结核病患者的实验室诊断,具有灵敏、特异、准确、快速的特点,有较好的实用价值。     

荧光定量PCR技术在痰结核菌检测中的应用

目的 比较荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)技术与痰涂片抗酸染色、改良罗氏培养法在检测结核分枝杆菌的灵敏度和特异性,探讨FQ-PCR检测痰标本中结核分枝杆菌的应用价值.方法 对240例临床确诊的肺结核病患者和107例非结核呼吸系统疾病患者的痰标本分别应用FQ-PCR法、痰涂片抗酸染色法、改良罗氏培养法检测结核分枝杆菌;另用FQ-PCR法检测14例非结核分枝杆菌DNA以评价该方法对非结核分枝杆菌检测的特异性.结果 FQ-PCR检测结核分枝杆菌的敏感性分别为52.1％ (125/240),明显高于抗酸染色法的24.2％ (58/240)和改良罗氏培养法的35.4％ (85/240),x2=39.36,P＜0.01;FQ-PCR法对14例非结核分枝杆菌检测结果全部为阴性,特异性为100％.结论 FQ-PCR是一种快速、敏感性高、特异性强的结核分枝杆菌辅助诊断方法,并且可以有效地鉴别非结核分枝杆菌感染,在肺结核的临床实验室诊断上有重要的应用价值.     

荧光定量PCR在结核分枝杆菌检测中的应用价值

目的比较荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)与抗酸染色、改良罗氏培养法检测结核分枝杆菌的灵敏度和特异性,探讨FQ-PCR检测痰标本中结核分枝杆菌的应用价值。方法对311例临床确诊的肺结核病患者和40例非结核呼吸系统疾病患者的痰标本应用FQ-PCR法、痰涂片抗酸染色法、改良罗氏培养法检测结核分枝杆菌。结果FQ-PCR、抗酸染色法、改良罗氏培养法检测结核分枝杆菌的阳性率分别为47.0%(146/311)、28.3%(88/311)、35.4%(110/311),特异性分别为100.0%、100.0%、95.2%,以FQ-PCR检测的阳性率最高。结论FQ-PCR是一种快速、敏感性高、特异性强的结核分枝杆菌辅助诊断方法,在临床上有重要应用价值。     

针灸后局部结核感染的实验室检测报告

目的：检测某中医诊所受诊者局部感染病原菌,为探索事件致病原因提供科学依据。方法：采集病人局部感染脓液和痰液标本,进行涂片、分离培养、药敏试验、结核分枝杆菌鉴定等检测。结果：检测46例病人的脓液标本78份,其中48份标本检出人结核分枝杆菌,涉及病例32人,受检病例阳性率为69.57%（32/46）,脓液标本检出率为61.54%（48/78）。检测11例患者痰液标本,9例结核分枝杆菌阳性,阳性率为81.82%（9/11）。9例痰液阳性标本与48份脓液阳性标本结核分枝杆菌鉴定,为同源人结核分枝杆菌。结论：该中医诊所在诊疗过程中陆续引发受诊者针灸部位局部感染,其病原菌为人结核分枝杆菌。为现场流行病学分析致病原因和受感染患者的医疗救治提供了科学依据。     

结核分枝杆菌DNA分子生物学检测

目的探讨利用结核分枝杆菌的核酸扩增(PCR)技术,检测结核杆菌DNA在临床诊断中的价值。方法采用病例对照研究方法,各组诊断采用双盲法,对健康对照组血标本,胸膜炎的胸水标本、腹膜炎的腹水标本、脑膜炎的脑脊液标本和有泌尿系症状的尿液标本,咳痰患者的痰标本进行PCR扩增及ABI-7300仪器荧光检测结核分枝杆菌DNA定量。应用统计学分析阳性率、敏感性、特异性及各组间的统计学意义。结果共检测427例,其中初治涂阳肺结核100例,初治涂阴肺结核100例,肺外结核100例,肺部其他疾病77例,健康对照50例。结核杆菌DNA检测初治涂阳肺结核的阳性率86.0%、敏感性86.0%、特异性96.0%;阳性预测值97.7%、阴性预测值77.4%。初治涂阴肺结核的阳性率42.0%、敏感性42.0%、特异性96.0%;阳性预测值95.5%、阴性预测值45.3%。肺外结核的阳性率34.0%、敏感性34.0%、特异性96.0%。阳性预测值94.4%、阴性预测值42.1%。结论结核分枝杆菌DNA分子生物学检测技术是对传统诊断活动性结核病实验室诊断方法的补充,具有较高的敏感性和特异性,对结核病的诊断有重要的诊断价值,成为结核病诊断和研究的重要手段。     

实时荧光PCR方法检测结核分枝杆菌mRNA的研究

目的建立检测结核分枝杆菌mRNA表达水平的实时荧光PCR反应体系,快速鉴定结核分枝杆菌。方法设计合成结核分枝杆菌mRNA相应引物和探针,探针标记以JOE为报告基团,BHQ1为猝灭基团。优化反应条件,建立结核分枝杆菌mRNA的实时荧光PCR检测方法。通过检测22份肺结核患者痰液、10份健康无症状人群痰液、结核分枝杆菌标准菌株和偶然分枝杆菌菌株培养菌落,检验方法的特异性、重复性和灵敏度。结果肺结核患者痰液检测均出现典型扩增曲线,CT均值31.35,标准差4.31。健康无症状人群痰液及偶然分枝杆菌未出现扩展曲线。对痰液标本及稀释RNA重复检测的变异系数在2.54%以下,检测CT值与痰涂片抗酸染色分枝杆菌的数量呈良好相关性。结论建立了一种快速实时检测结核分枝杆菌mRNA基因的荧光PCR方法,具有良好的敏感性和特异性。