北京市2016—2017年耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌分子流行病学和遗传特征调查

目的 调查北京市2016—2017年耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌中碳青霉烯酶基因流行现状和遗传背景。方法 挑选2016—2017年北京市细菌耐药监测项目收集的厄他培南耐药肺炎克雷伯菌为碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌(carbapenem-resistant Klebsiella pneumoniae, CRKP)。PCR扩增检测CRKP中碳青霉烯酶基因(blaKPC、blaSME、blaIMI、blaGES、blaIMP、blaVIM、blaSPM、blaSIM、blaGIM、blaNDM和blaOXA-48)；mCIM和eCIM法检测碳青霉烯酶。脉冲场凝胶电泳和多位点序列分析检测不同菌株的同源性。采用美国临床实验室标准协会(CLSI)推荐的琼脂二倍稀释法检测常见抗菌药物对其最低抑菌浓度(MIC)。采用S1-PFGE和Southern Blotting技术进行blaKPC-2和blaNDM-5基因定位。采用接合实验检测blaKPC-2和blaNDM-5基因的水平传递性。三代测序技术分析blaNDM-5基因遗传背景。结果 2016—2017年北京14家二级和三级医院收集的肺炎克雷伯菌中共筛选出78株CRKP，其中64株检出blaKPC-2基因，1株检出blaNDM-1基因，1株检出blaNDM-5基因，检出率分别为82.1%、1.3%和1.3%。mCIM和eCIM检测的敏感度和特异度均为100%。MLST将66株碳青霉烯酶基因阳性菌分为12个不同的ST型，其中以ST11为主，共46株(69.7%)。PFGE结果显示共有52个PFGE型别。所有碳青霉烯酶基因阳性菌均对碳青霉烯类抗生素耐药，对其他常见抗菌药物如β-内酰胺类合剂、第三/四代头孢菌素、单环β-内酰胺类、喹诺酮类抗菌药物的耐药率大于87%。对携带blaKPC-2和blaNDM-5基因的CRKP进行基因定位分析发现，仅一株菌所携带blaKPC-2基因定位在染色体上，其他均定位在质粒上，有4株细菌接合成功，其中携带blaNDM-5基因的是一个大小约为46kb的质粒，质粒类型为IncX3型。遗传背景分析blaNDM-5基因上游为Tn3、IS3000、ISAba125和IS5，下游为bleMBL、trpF、dsbC和IS26。结论 北京地区耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌分子型别多态性大，同时又存在优势序列型，为ST11型。携带blaKPC-2基因的质粒大小不一，提示其遗传背景可能比较复杂。与blaKPC-2基因不同，对比国内外其他研究发现blaNDM-5基因的遗传背景比较稳定，IncX3型质粒在介导blaNDM-5基因的传播上发挥着重要作用。     

北京市2016—2017年耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌分子流行病学和遗传特征调查

目的 调查北京市2016—2017年耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌中碳青霉烯酶基因流行现状和遗传背景。方法 挑选2016—2017年北京市细菌耐药监测项目收集的厄他培南耐药肺炎克雷伯菌为碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌(carbapenem-resistant Klebsiella pneumoniae, CRKP)。PCR扩增检测CRKP中碳青霉烯酶基因(blaKPC、blaSME、blaIMI、blaGES、blaIMP、blaVIM、blaSPM、blaSIM、blaGIM、blaNDM和blaOXA-48);mCIM和eCIM法检测碳青霉烯酶。脉冲场凝胶电泳和多位点序列分析检测不同菌株的同源性。采用美国临床实验室标准协会(CLSI)推荐的琼脂二倍稀释法检测常见抗菌药物对其最低抑菌浓度(MIC)。采用S1-PFGE和Southern Blotting技术进行blaKPC-2和blaNDM-5基因定位。采用接合实验检测blaKPC-2和blaNDM-5基因的水平传递性。三代测序技术分析blaNDM-5基因遗传背景。结果 2016—2017年北京14家二级和三级医院收集的肺炎克雷伯菌中共筛选出78株CRKP,其中64株检出blaKPC-2基因,1株检出blaNDM-1基因,1株检出blaNDM-5基因,检出率分别为82.1%、1.3%和1.3%。mCIM和eCIM检测的敏感度和特异度均为100%。MLST将66株碳青霉烯酶基因阳性菌分为12个不同的ST型,其中以ST11为主,共46株(69.7%)。PFGE结果显示共有52个PFGE型别。所有碳青霉烯酶基因阳性菌均对碳青霉烯类抗生素耐药,对其他常见抗菌药物如β-内酰胺类合剂、第三/四代头孢菌素、单环β-内酰胺类、喹诺酮类抗菌药物的耐药率大于87%。对携带blaKPC-2和blaNDM-5基因的CRKP进行基因定位分析发现,仅一株菌所携带blaKPC-2基因定位在染色体上,其他均定位在质粒上,有4株细菌接合成功,其中携带blaNDM-5基因的是一个大小约为46kb的质粒,质粒类型为IncX3型。遗传背景分析blaNDM-5基因上游为Tn3、IS3000、ISAba125和IS5,下游为bleMBL、trpF、dsbC和IS26。结论     

2013~2017某医院耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌耐药基因检测及分析

目的分析耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌耐药基因,为进一步控制耐碳青霉烯类抗生素的肺炎克雷伯菌感染提供参考。方法收集2013~2017年某院培养、保存的81株耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌株,成功复活55株。经MALDI-TOF-MS鉴定为肺炎克雷伯菌。采取琼脂稀释法进行包括美罗培南在内13种抗生素药敏试验,采用PCR分析耐碳青霉烯酶基因,采用PFGE对菌株进行分型。结果复活的肺炎克雷伯菌共55株,药敏提示对多种抗生素耐药,采取琼脂稀释法进行包括美罗培南在内13种抗生素药敏试验,55株CRKP复活菌株美罗培南耐药率达95%(52株),其中18株呈现高度水平耐药,仅2株对美罗培南敏感,采用PEGE分型,存在17个分型,显示菌株之间差异明显。结论某院耐肺炎克雷伯菌耐碳青霉烯类情况突出,耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌共分为A~Q 17个型,以A型株数最多。     

肺炎克雷伯菌临床分离株的耐药性与分子流行病学分析

目的了解我院住院患者临床肺炎克雷伯菌分离株的耐药性与分子流行特征,为临床抗感染及合理用药提供依据。方法收集2018年4-12月我院住院病人肺炎克雷伯菌临床分离株,采用纸片扩散法或自动化仪器法按统一方案进行抗菌药物敏感性试验;聚合酶链反应(PCR)法检测耐药基因;脉冲场凝胶电泳(PFGE)和多位点序列分型(MLST)技术对菌株进行同源性分析和分型。结果共分离到肺炎克雷伯菌211株,对第3代头孢(头孢噻肟)和第四代头孢(头孢吡肟)的耐药率分别为54.5%和44.1%,对碳青霉烯类抗菌药物亚胺培南和美罗培南的耐药率为32.7%和34.1%;其中107株(107/211,50.6%)菌株分离自ICU病房,56株(56/107,52.3%)为碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌(CR-KP),MLST分型显示以ST11为主,PFGE分型结果主要为A型和F型两大聚类。结论肺炎克雷伯菌耐药率高,特别是分离自ICU病房的菌株耐药情况尤为严重,且携带KPC-2基因的ST11克隆株在ICU病房流行传播。     

耐碳青霉烯类抗生素肺炎克雷伯菌种群结构和耐药机制研究

耐碳青霉烯类抗生素肺炎克雷伯菌(carbapenem-resistant Klebsiella pneumoniae, CRKP)是临床常见的耐药菌之一。本研究对88株全国49家医院收集的CRKP菌株进行碳青霉烯类耐药基因检测,其中65株(73.9%)检出blaKPC类基因(64株检出blaKPC-2、1株检出blaKPC-3)、9株(10.2%)检出blaNDM类基因(均为blaNDM-1)、7株(8.0%)检出blaIMP类基因(均为blaIMP-4)。通过多位点序列分型(multi-locus sequence typing, MLST)将88株CRKP分为25个MLST型,其中ST11型为优势型别,包含48株菌。88株CRKP通过脉冲场凝胶电泳(pulsed field gel electrophoresis, PFGE)分为79个PFGE型,呈现高度多态性。本研究揭示了我国blaKPC-2阳性CRKP菌株存在克隆化现象,存在ST11型流行克隆;而blaNDM-1和blaIMP-4阳性CRKP菌株分子型别多态性大,还没形成流行克隆。需要密切监测并采取措施控制携带blaKPC-2基因的ST11型CRKP的传播扩散。     

碳青霉烯类肺炎克雷伯菌耐药基因分布特征及其机制探讨

目的分析碳青霉烯类肺炎克雷伯菌耐药基因分布特征及其机制。方法收集青岛大学附属威海市中心医院2021年1-12月临床标本分离得到的耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌58株, 通过改良Hodge试验和改良碳青霉烯灭活试验确认表型, 聚合酶链式反应(PCR)扩增后纯化测序, 脉冲场凝胶电泳法(PFGE)聚类分析和多位点序列分型(MLST)分析其分子流行病学特征。结果碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌(CRKP)对阿米卡星敏感率为51.7%, 对环丙沙星、左旋氧氟沙星、复方磺胺甲噁唑、哌拉西林/他唑巴坦等抗生素均具有较高耐药率(> 60%), 对头孢唑林、头孢他啶、头孢替坦及头孢吡肟耐药率为100.0%。58株菌株中46株(79.3%)改良Hodge试验阳性, 31株(53.5%)改良碳青霉烯灭活试验阳性。PCR扩增及基因测序显示, 42株(72.4%)菌株主要携带KPC-2基因, 12株(20.7%)菌株携带IMP-4基因, 4株(6.9%)菌株携带NDM-1基因。且携带IMP-4基因的12株菌株均携带KPC-2基因, 表现为改良Hodge试验和改良碳青霉烯灭活试验双阳性。PFGE聚类分析和MLST分析...     

97例碳青霉烯类耐药肠杆菌脓毒症患者病原菌分布及耐药性分析

目的 分析碳青霉烯类耐药肠杆菌脓毒症患者的病原菌分布、耐药特点和抗感染治疗选择,为临床上优化和选用有效治疗方案提供科学依据。方法 收集徐州医科大学附属医院2019年～2020年耐碳青霉烯类肠杆菌脓毒症患者的一般资料、药敏结果及抗菌药物使用情况等临床资料,并进行回顾性分析。结果 共收集血培养阳性的耐碳青霉烯类肠杆菌97株,其中耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌76株,耐碳青霉烯类大肠埃希菌14株,耐碳青霉烯类阴沟肠杆菌4株,耐碳青霉烯类摩氏摩根菌1株,耐碳青霉烯类产气肠杆菌1株,耐碳青霉烯类产酸克雷伯菌1株。此外,肺炎克雷伯菌对多粘菌素的耐药性最低（0.00%）,大肠埃希菌对多粘菌素和替加环素的耐药性最低（0.00%）。替加环素+亚胺培南西司他丁治愈率83.33%,替加环素+美罗培南治愈率80.00%,而头孢哌酮舒巴坦+美罗培南+替加环素治愈率100.00%。结论 替加环素联合碳青霉烯类药物可用于碳青霉烯类耐药肠杆菌脓毒症患者的治疗,临床上应综合考虑患者情况、药敏结果及最小抑菌浓度合理选用抗菌药物,以减少耐碳青霉烯类菌株的出现。     

2016—2018年某医院CRE临床分布、耐药性及碳青霉烯酶基因检测

目的 了解耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌(carbapenem-resistant Enterobacteriaceae, CRE)的临床分布、耐药性及碳青霉烯酶基因型,为临床抗感染治疗及医院感染防控提供依据。方法 收集2016年1月至2018年12月蚌埠医学院第一附属医院临床分离的CRE菌株,采用VITEK 2 Compact全自动细菌鉴定药敏分析仪进行药敏实验。药敏结果判读参照CLSI 2018版标准,WHONET 5.6软件统计分析。PCR方法检测常见碳青霉烯酶基因。结果 2016年1月至2018年12月我院临床标本中共分离出626株CRE,总检出率为12.46%。其中主要为肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌,分别占84.35%(528/626)和9.27%(58/626)。标本来源主要为痰56.87%(356/626)、尿液12.14%(76/626)、血液10.38%(65/626)。病区分布主要为急诊内科32.75%(205/626)和重症监护病房25.08%(157/626)。626株CRE菌株对甲氧苄啶-磺胺甲噁唑和阿米卡星耐药率分别为56.07%和69.65%,其余在测试的抗菌药物耐药率均高于80%。626株CRE中602株检出携带常见碳青霉烯酶基因。602株菌主要包括肺炎克雷伯菌515株(510株携带blaKPC-2基因,5株携带blaNDM-1基因,2株携带blaIPM基因);大肠埃希菌54株(43株携带blaKPC-2基因,13株携带blaNDM-1基因,1株携带blaIPM基因)。其中3株大肠埃希菌和2株肺炎克雷伯菌同时检出blaKPC-2基因和blaNDM-1基因。未检出blaVIM和blaOXA-48基因。结论 CRE菌株对常用抗菌药物耐药严重,主要的碳青霉烯酶基因为blaKPC-2型。应加强对CRE菌株的医院感染防控。     

碳青霉烯耐药肺炎克雷伯菌在某院的耐药流行分析

目的:了解我院碳青霉烯耐药肺炎克雷伯菌(CRKP)耐药流行情况.方法:收集佳木斯大学附属第一医院CRKP,VITEK 2 Compact药敏鉴定,K-B法复核;mCIM初步鉴定碳青霉烯酶,PCR扩增相关耐药基因进行验证.结果:31株CRKP对亚胺培南、美罗培南及哌拉西林/他唑巴坦耐药率较高,对左氧氟沙星及阿米卡星耐药率较低;31株CRKP经表型鉴定有30株产碳青霉烯酶;30株CRKP全部携带KPC-2型碳青霉烯酶基因,1株携带NDM型,未检出OXA-48型,31株CRKP菌株12株分离自ICU病房.结论:CRKP以产KPC-2型酶为主,在ICU病房CRKP易传播流行.     

碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌临床分离株中质粒介导的喹诺酮类耐药基因检测

目的：探讨质粒介导的喹诺酮类耐药（PMQR）基因在碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌（CRKP）临床分离株中的分布情况。方法：收集CRKP29株,聚合酶链反应（PCR）扩增并确定产物基因型。结果：CRKP中PMQR基因检出率为48．3％（14／29）,其中qnrB5株,包括qnrB21株、qnrB43株、qnrB101株;qnrS 5株,均为qnrS1;1株同时携带qnrS1和qnrB4;有3株携带aac（6′）-Ib-cr基因。所有PMQR基因阳性菌株均同时携带β-内酰胺酶基因,其中8株同时携带碳青霉烯酶基因,占57．1％（8／14）,以blaKPC-2（4／14）及blaNDM-1（3／14）为主。结论：PMQR基因在临床分离的CRKP中较为普遍,以qnr基因为主,且qnr阳性菌株碳青霉烯酶基因携带率较高,均为多重耐药株。     

2016—2018年某医院CRE临床分布、耐药性及碳青霉烯酶基因检测

目的 了解耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌(carbapenem-resistant Enterobacteriaceae, CRE)的临床分布、耐药性及碳青霉烯酶基因型,为临床抗感染治疗及医院感染防控提供依据。方法 收集2016年1月至2018年12月蚌埠医学院第一附属医院临床分离的CRE菌株,采用VITEK 2 Compact全自动细菌鉴定药敏分析仪进行药敏实验。药敏结果判读参照CLSI 2018版标准,WHONET 5.6软件统计分析。PCR方法检测常见碳青霉烯酶基因。结果 2016年1月至2018年12月我院临床标本中共分离出626株CRE,总检出率为12.46%。其中主要为肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌,分别占84.35%(528/626)和9.27%(58/626)。标本来源主要为痰56.87%(356/626)、尿液12.14%(76/626)、血液10.38%(65/626)。病区分布主要为急诊内科32.75%(205/626)和重症监护病房25.08%(157/626)。626株CRE菌株对甲氧苄啶-磺胺甲噁唑和阿米卡星耐药率分别为56.07%和69.65%,其余在测试的抗菌药物耐药率均高于80%。626株CRE中602株检出携带常见碳青霉烯酶基因。602株菌主要包括肺炎克雷伯菌515株(510株携带blaKPC-2基因,5株携带blaNDM-1基因,2株携带blaIPM基因);大肠埃希菌54株(43株携带blaKPC-2基因,13株携带blaNDM-1基因,1株携带blaIPM基因)。其中3株大肠埃希菌和2株肺炎克雷伯菌同时检出blaKPC-2基因和blaNDM-1基因。未检出blaVIM和blaOXA-48基因。结论     

细菌NDM-1质粒耐药表型与其表达的相关性研究

目的 探讨NDM-1质粒携带菌株耐药表型与其基因表达的相关性，为临床抗菌药物选择提供理论参考。方法 携带NDM-1的质粒电转化入大肠埃希菌TOP10，采用琼脂平板倍比稀释法测定碳青霉烯类药物对野生株和电转化子的最低抑菌浓度(minimal inhibitory concentration, MIC)，TaqMan RT-PCR检测碳青霉烯类耐药菌株的blaNDM-1基因表达及亚-MIC亚胺培南诱导对blaNDM-1基因表达的影响。结果 12株产NDM-1菌株中共有8株电转化成功，电转化子对碳青霉烯类药物的耐药性与野生菌株基本一致。细菌对碳青霉烯类的耐药性与blaNDM-1基因表达成正比。亚-MIC亚胺培南诱导后菌株对碳青霉烯类药物的MIC值和blaNDM-1基因表达均显著高于野生株。结论 碳青霉烯类耐药菌株耐药表型与blaNDM-1基因表达具有正相关性，TaqMan RT-PCR检测可快速准确地为临床治疗提供依据。     

细菌NDM-1质粒耐药表型与其表达的相关性研究

目的 探讨NDM-1质粒携带菌株耐药表型与其基因表达的相关性,为临床抗菌药物选择提供理论参考。方法 携带NDM-1的质粒电转化入大肠埃希菌TOP10,采用琼脂平板倍比稀释法测定碳青霉烯类药物对野生株和电转化子的最低抑菌浓度(minimal inhibitory concentration, MIC),TaqMan RT-PCR检测碳青霉烯类耐药菌株的blaNDM-1基因表达及亚-MIC亚胺培南诱导对blaNDM-1基因表达的影响。结果 12株产NDM-1菌株中共有8株电转化成功,电转化子对碳青霉烯类药物的耐药性与野生菌株基本一致。细菌对碳青霉烯类的耐药性与blaNDM-1基因表达成正比。亚-MIC亚胺培南诱导后菌株对碳青霉烯类药物的MIC值和blaNDM-1基因表达均显著高于野生株。结论 碳青霉烯类耐药菌株耐药表型与blaNDM-1基因表达具有正相关性,TaqMan     

耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌对抗菌药物的耐药研究

目的 探讨耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌(CRKP)对抗菌药物的敏感性及耐药方式.方法 选取医院2017年1月至2020年12月收治的非重复性CRKP感染患者的耐药菌株97株,参考美国临床和实验室标准协会发布的《抗菌药物敏感试验执行标准第27版信息增刊》,采用VITEK2-Compact型全自动微生物分析仪和Kirby-Ba...     

2016—2018年成都某院耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌耐药变迁#br# 及耐药机制分析

目的 分析2016—2018年四川省中医医院临床分离的耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌(carbapenem resistant Klebsiella pneumoniae, CRKP)的耐药性变迁及耐药机制。方法 收集本院临床分离的CRKP菌株,PCR扩增碳青霉烯酶基因A类(blaKPC、blaGES、blaSME、blaIMI和blaNMC),B类(blaNDM、blaVIM、blaIMP、blaSPM、blaGIM、blaSIM)和D类(blaOXA)。结果 近3年分离的CRKP对临床常用抗生素呈高水平耐药。经PCR扩增及测序确认,74株CRKP中,82.43%携带blaKPC-2型,10.81%携带blaNDM-1型,5.41%携带blaKPC-19型。结论 3年间本院分离的CRKP对临床常用抗生素呈高度耐药,菌株产blaKPC-2和blaNDM-1是本院CRKP最主要的耐药机制。     

海南耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌的耐药基因分析

目的 检测海南省5家综合医院临床送检微生物标本中的耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌,了解其耐药基因及流行现 状。方法 收集2014年6月—2016年6月期间住院患者各种培养标本中耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌菌株,对其进行菌种鉴定和药 敏分析试验;然后对筛选出的菌株进行blaKPC-2 、blaNDM-1 和blaIMP 耐药基因PCR特异性扩增,扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳和测 序分析,经BLAST比对,确定耐药基因的基因型。结果 从5家医院的临床各种标本中,收集到75株耐碳青霉烯类肠杆菌科细 菌(CRE),主要为肺炎克雷伯菌45株占60.0%,阴沟肠杆菌13株占17.3%;科室分布主要为ICU占43.9%,儿科占10.7%;通过药 敏实验表明75株CRE除对替加环素(10.6%)、阿米卡星(23.3%)、左氧氟沙星(37.3%)、环丙沙星(40.0%)的耐药率较低外,第一到 第三代头孢及氨苄西林、氨苄西林/舒巴坦的耐药率均为100%;第四代头孢头孢吡肟也达到89.3%,复方磺胺甲噁唑的耐药率 78.7%,哌拉西林/三唑巴坦耐药率也达到64%;75株CRE细菌中11株blaKPC-2 基因阳性占14.6%;25株为blaNDM-1 基因阳性占33.3% 和12株blaIMP 基因阳性占16%。结论 NDM-1型金属酶为海南省CRE菌株的主要耐药基因型,KPC-2型为首次发现占12%。未检 测出目的基因的CRE菌株的耐药机制有待于进一步的研究。