熊果酸通过下调COX-2表达降低人胃癌HGC-27细胞侵袭能力研究

目的观察熊果酸对人胃癌HGC-27细胞侵袭能力的影响,并探讨可能的作用机制。方法体外培养HGC-27细胞,分为对照组和实验组,实验组用不同浓度(15、30、60μmol/L)熊果酸处理HGC-27细胞24 h,对照组加入等体积的培养基,Transwell小室实验检测细胞侵袭能力;Western blotting检测基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、环氧化酶-2(COX-2)及p-NF-κB的表达。结果与对照组比较,熊果酸可显著降低HGC-27细胞侵袭能力;经熊果酸处理后,MMP-9表达下调;熊果酸可抑制COX-2及其上游调控基因pNF-κB的表达。结论熊果酸可降低人胃癌HGC-27细胞侵袭能力,其机制可能与抑制p-NF-κB、下调COX-2表达、降低MMP-9表达有关。     

异丙酚对胃癌HGC-27细胞侵袭能力的影响

目的观察异丙酚对人胃癌HGC-27细胞侵袭能力的影响,并探讨可能的作用机制。方法体外培养HGC-27细胞,分为对照组和实验组,实验组用不同浓度(5、10、20μg/m L)异丙酚处理HGC-27细胞24 h,对照组加入等体积的培养基,Transwell小室实验检测细胞侵袭能力;Western blotting检测基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、Akt、p-Akt及p-GSK-3β的表达。结果与对照组比较,异丙酚可显著降低HGC-27细胞侵袭能力;异丙酚处理后,MMP-9表达下调;异丙酚可抑制p-Akt及其下游蛋白p-GSK-3β的表达。结论异丙酚可降低人胃癌HGC-27细胞侵袭能力,其机制可能与抑制Akt通路、下调MMP-9表达有关。     

miR-155-5p通过下调SOX4抑制胃癌细胞增殖和侵袭机制

目的:探究mi R-155-5p抑制胃癌细胞增殖和侵袭的机制.方法:采用实时定量PCR检测胃癌中mi R-155-5p的表达.采用m i m i c s-m i R-155-5p转染胃癌细胞,然后利用荧光素酶检测和Western blot检测mi R-155-5p在胃癌细胞的增殖和侵袭.结果:mi R-155-5p在胃癌细胞中比正常组细胞显著下调(P0.05).体外过表达mi R-155-5p,可抑制胃癌细胞的增殖和侵袭,反之,下调mi R-155-5p促进胃癌细胞增殖和侵袭.SOX4与mi R-155-5p表达负相关,下调SOX4较未处理组胃癌细胞增殖侵袭受到抑制(P0.05).结论:mi R-155-5p可能通过下调SOX4抑制胃癌细胞的增殖和侵袭.mi R-155-5p可能在将来作为GC治疗的潜在治疗靶点.     

INPP4B调控Akt信号通路抑制胃癌HGC-27细胞增殖并诱导细胞凋亡

目的 探讨磷脂酰肌醇4-磷酸酶Ⅱ型(INPP4B)调控蛋白激酶B(Akt)信号通路影响胃癌HGC-27细胞增殖和凋亡的机制.方法 实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)和Western印迹分别测定胃癌细胞和正常胃黏膜细胞中INPP4B表达变化.INPP4B过表达慢病毒感染HGC-27细胞,四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测...     

去氢骆驼蓬碱通过下调COX-2表达抑制胃癌细胞迁移和侵袭

目的探讨去氢骆驼蓬碱对人胃癌MKN-45细胞环氧化酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)表达、迁移和侵袭的影响。方法 MKN-45细胞接种于含10%胎牛血清的RPMI-1640培养液中,常规培养24h后加去氢骆驼蓬碱(2、4、8、16、32μg/ml),同时设置对照组不加药物,空白组只加培养液不含细胞,分别培养24h、48h、72h,MTT法检测细胞增殖率;western blot法检测COX-2表达;划痕损伤愈合实验及Transwell小室基质侵袭实验检测胃癌细胞体外迁移和侵袭。结果去氢骆驼蓬碱剂量依赖性抑制MKN-45细胞COX-2表达(P0.01);与对照组相比,去氢骆驼蓬碱组MKN-45细胞迁移和侵袭能力明显下降(P0.01)。结论去氢骆驼蓬碱可能通过下调COX-2表达抑制胃癌细胞迁移和侵袭。     

PRR11蛋白的表达及其与胃癌进展和预后的关系

目的探讨PRR11蛋白在胃癌(gastric cancer,GC)中的表达,分析其表达异常与GC进展和预后的关系.方法应用免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)法检测PRR11在436例GC组织中的表达,并用免疫印迹(Western blot)比较GC和正常胃黏膜组织中PRR11的表达,统计学分析其与临床病理参数之间的关系.结果 Western blot定量分析中PRR11在GC组织中的表达显著高于正常胃黏膜组织;同时IHC显示PRR11在GC中呈特异性表达,其阳性定位于胞浆和胞膜,GC组织阳性表达率为41.8%(182/436),而在正常胃黏膜组织中不表达或微弱表达.PRR11的过表达与GC的分化程度(P0.01)、浸润深度(P=0.03)、TNM分期(P0.01)、淋巴结转移(P0.01)和远处转移(P=0.05)密切相关.结论 PRR11在GC中过表达,过表达的PRR11与GC的发生、进展以及预后密切相关,PRR11可作为判断GC患者预后的重要指标.     

PTEN下调paxillin的表达抑制胃癌转移

目的检测PTEN(phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome10,10号染色体缺失的磷酸酶与张力蛋白同源物)及桩蛋白(paxillin)在胃癌细胞系BGC823中的表达,并探讨PTEN对paxillin的调节作用及其在胃癌的发生、发展中的意义。方法体外培养胃癌细胞BGC823,利用脂质体介导法瞬时转染pEAK8及pEAK8-PTEN质粒,获得pEAK8-BGC823(pE-B)和pEAK8-PTEN-BGC823(pE-P-B)细胞,采用免疫印迹法检测PTEN、paxillin及actin蛋白水平的表达,免疫荧光检测paxillin在细胞内的定位。结果 Western blot显示,pE-P-B细胞PTEN蛋白表达水平(1.013±0.074)明显高于pE-B细胞(0.513±0.006)和BGC823细胞(0.506±0.015),而paxillin的蛋白表达水平(0.883±0.032)明显低于后两者(2.747±0.047,2.663±0.096),BGC823与pE-B相比,PTEN和paxillin蛋白表达差异均无统计学意义(P>0.05),Sperman等级相关分析证明PTEN蛋白与paxillin蛋白的表达呈负相关(r=-0.12,P<0.05);免疫荧光显示,paxillin在pE-B细胞伸出伪足处聚集,在pE-P-B细胞中较少。结论过表达PTEN可能通过下调paxillin的表达从而抑制胃癌的转移。     

下调miR-25抑制胃癌细胞增殖和诱导其凋亡的作用研究

目的探讨下调miR-25对胃癌SGC-7901细胞增殖凋亡的影响及可能的作用机制。方法将SGC-7901细胞分为对照组(不做处理)、阴性组(转染miR-25 inhibitor control)和干扰组(转染miR-25 inhibitor)3组,利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测转染效果,采用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)检测miR-25对SGC-7901细胞增殖影响,流式细胞仪检测miR-25对细胞凋亡的影响,蛋白质免疫印迹法(Western blotting)检测各组细胞中PTEN蛋白表达量。结果转染miR-25 inhibitor后,细胞中miR-25的表达量较对照组显著降低(P0.05),阴性组和对照组间差异无统计学意义(P0.05)。与对照组相比,干扰组中细胞存活率显著降低,凋亡率显著升高,差异均有统计学意义(P0.05)。干扰组细胞中PTEN蛋白的表达量较对照组明显增加(P0.05),对照组和阴性组间差异无统计学意义(P0.05)。结论下调miR-25可抑制胃癌SGC-7901细胞增殖和诱导细胞凋亡,其作用机制可能与上调PTEN蛋白的表达有关。     

氨氯地平下调内皮细胞源性PDGF-B表达抑制平滑肌细胞增殖和迁移

目的 观察人脐静脉内皮细胞12(HUVEC-12)受氧化型低密度脂蛋白刺激及氨氯地平作用后,血小板源生长因子B(PDGF-B)的内源性表达改变对人脐动脉平滑肌细胞(HUASMC)增殖和迁移的影响.方法 酶联免疫吸附法检测不同浓度氨氯地平预孵育对氧化型低密度脂蛋白诱导的HUVEC-12细胞培养上清液中PDGF-B蛋白的表达.选择10.0 μmol/L氨氯地平和20 μmol/L PDGF-B抗体分别预孵育HUASMC 30 min,然后与PDGF-B上清液共同孵育24h,噻唑蓝法检测不同细胞增殖能力的变化,Transwell迁移实验检测细胞迁移能力的改变.结果 氨氯地平可下调氧化型低密度脂蛋白诱导的HUVEC-12细胞培养上清液中PDGF-B的蛋白表达,并能使预孵育HUASMC组细胞的增殖和迁移能力明显降低.结论 氨氯地平下调内皮细胞源性PDGF-B的表达可抑制HUA-SMC的增殖和迁移.     

miR-133靶向JAK2抑制胃癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的研究miR-133对胃癌(gastric cancer, GC)细胞增殖、迁移和侵袭的影响,并探讨其作用机制。方法运用qRT-PCR法检测组织和细胞中miR-133、JAK2的mR NA表达;将miR-133组(转染miR-133 mimics)、miR-NC组(未转染细胞)、miR-133 inhibitors组(转染miR-133 inhibitors)、inhibitors-NC组(转染inhibitors)、JAK2WT(载体psiCHECK2-JAK2-32 MUT(载体pUT和miR-133共转染)、miUTRWT和miR-133共转染)、JAKsiCHECK2-JAK2-3UTR MR-133+JAK2组(miR-133 mimics和JAK2共转染)、miR-133+Vector组(miR-133 mimics和pc-DNA 3。1共转染)均用脂质体法转染至AGS、MGC-803细胞;用Western blot检测细胞中JAK2的蛋白表达; MTT法检测细胞增殖;Transwell法检测细胞迁移和侵袭;双荧光素酶报告基因检测实验检测细胞荧光素酶活性。结果与人癌旁组织、人正常胃黏膜细胞GES-1相比, GC组织、GC细胞AGS、MGC-803中miR-133均低表达,JAK2均高表达;且过表达miR-133、沉默JAK2均可抑制GC细胞增殖、迁移和侵袭; JAK2为miR-133的靶点,且回补JAK2可逆转miR-133对GC细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用。结论miR-133可抑制GC细胞增殖、迁移和侵袭,其可能与靶向JAK2有关,将可为GC的临床诊断治疗提供新靶点。     

miR-134通过介导CCND1表达下调抑制食管癌细胞增殖

目的探讨人食管鳞状细胞癌组织中miR-134的表达及对癌症细胞增殖、凋亡的影响。方法食管癌组织及体外培养细胞中的miR-134表达水平采用PCR法检测;在TE-1细胞内过表达miR-134,细胞活力检测采用噻唑蓝(MTT)实验,细胞增殖检测采用平板克隆实验;细胞凋亡检测采用流式细胞仪;PCR及蛋白免疫印迹检测miR-134潜在靶点CCND1表达变化。结果 miR-134在食管癌组织中的表达水平较食管黏膜组织显著降低(P0.001);过表达miR-134能够抑制食管鳞状细胞癌TE-1的细胞活力(P=0.023)和增殖能力(P=0.029),并促进细胞凋亡(P=0.010);过表达miR-134后显著抑制TE-1细胞中CCND1 mRNA(P=0.011)及蛋白(P=0.042)的表达水平。结论食管鳞状细胞癌组织中miR-134表达水平降低,过表达miR-134能够通过下调CCND1的表达发挥抗食管鳞状细胞癌生长作用。     

miR-515-5p通过靶向Wnt3抑制胃癌细胞增殖和侵袭

目的旨在研究miR-515-5p在调控胃癌进展过程中的作用及机制。方法通过qRT-PCR实验检测胃癌患者标本和胃癌细胞系中miR-515-5p的表达情况。将miR-515-5p模拟物转染至人MGC-803和SGC-7901细胞系。采用CCK-8和transwell实验检测细胞增殖和侵袭能力。qRT-PCR和Western blot实验检测相关mRNA和蛋白表达情况。荧光素酶报告基因实验证实miR-515-5p和Wnt3的靶向关系。结果 miR-515-5p在人胃癌组织和细胞系中的表达水平下调。过表达miR-515-5p可显著抑制胃癌细胞的增殖和侵袭能力。双荧光素报告实验证明Wnt3是miR-515-5p在胃癌细胞中的直接作用靶点。同时,拯救实验证明过表达Wnt3可以逆转miR-515-5p抑制胃癌细胞增殖和侵袭的能力。结论 miR-515-5p可以通过靶向Wnt3抑制胃癌细胞增殖和侵袭。     

抑制TUBB3基因表达对胃癌细胞增殖 、凋亡 、侵袭和迁移的影响及机制研究

目的探讨抑制3型β微管蛋白(TUBB3)基因的表达对人胃癌细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的影响及机制。方法将TUBB3 siRNA和阴性对照分别转染人胃癌SGC-7901细胞,记为TUBB3 siRNA组和阴性对照组(NC组),将未行转染的细胞记为Control组,转染48 h后,通过qRT-PCR和Western blot检测各组细胞中TUBB3 mRNA和蛋白的表达水平,CCK-8实验检测细胞增殖能力,流式细胞仪检测细胞凋亡率,Transwell实验检测SGC-7901细胞侵袭和迁移能力,Western blot检测细胞中PNCA、Cleaved Caspase-3、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)蛋白的表达水平。结果与NC组相比,TUBB3 siRNA组细胞中TUBB3 mRNA和蛋白表达明显下降,细胞增殖能力、侵袭和迁移能力均明显降低,细胞凋亡率明显升高,PNCA和MMP-2蛋白表达明显下降,Cleaved Caspase-3蛋白表达明显升高,差异均有统计学意义(P均0.05)。Control组与NC组细胞的上述各指标的差异均无统计学意义(P均0.05)。结论抑制TUBB3基因表达能够显著抑制人胃癌SGC-7901细胞的增殖、侵袭和迁移能力,诱导细胞凋亡,其作用机制与调控细胞中PNCA、Cleaved Caspase-3、MMP-2蛋白表达水平有关。     

MicroRNA-129通过靶向调控HMGA2抑制胃癌细胞增殖、侵袭

背景:越来越多的研究表明microRNA在胃癌发生、发展中起重要作用。有研究表明miR-129在胃癌组织中表达异常,但其对胃癌细胞增殖、侵袭的作用仍不明确。目的:探讨miR-129在胃癌组织和胃癌细胞株中的表达及其影响胃癌细胞增殖和侵袭的机制。方法:收集82例胃癌组织及其相应癌旁组织,培养人胃黏膜上皮细胞株和不同的胃癌细胞株,以q PCR法检测miR-129表达。将miR-129 mimic或miR-NC转染胃癌SGC-7901细胞后,转染HMGA2过表达质粒。以克隆形成实验观察细胞增殖情况,Transwell小室法检测细胞侵袭情况,Pearson相关分析评估miR-129表达与HMGA2表达的相关性,荧光素酶实验检测荧光素酶活性,q PCR和蛋白质印迹法分别检测miR-129、HMGA2 mRNA和蛋白表达。结果:与癌旁组织相比,胃癌组织中miR-129表达明显下降(P0.05);与人胃黏膜上皮细胞株GES-1相比,各胃癌细胞株中miR-129表达明显下降(P0.05)。与miR-NC组相比,miR-129 mimic组SGC-7901细胞增殖、侵袭能力均明显下降(P0.05)。胃癌组织中HMGA2 mRNA表达明显增加(P0.05),并与miR-129表达呈负相关(r=-0.543 9,P0.01)。野生型miR-129 mimic组荧光素酶活性显著低于miR-NC组(P0.05);转染miR-129 mimic后HMGA2 mRNA和蛋白表达显著降低(P0.05)。与miR-129+阴性对照组相比,miR-129 mimic+HMGA2组细胞增殖、侵袭能力明显升高(P0.05)。结论:miR-129在胃癌组织和细胞中低表达,其可通过下调HMGA2抑制SGC-7901细胞的增殖和侵袭。     

下调ATAD2表达对胃癌细胞增殖的影响及其机制探讨

目的观察下调三磷酸腺苷酶家族蛋白2(ATAD2)表达对胃癌细胞增殖的影响,并探讨其作用机制。方法将过表达ATAD2胃癌细胞株MGC-803分为4组,A、B、C组分别给予siRNA1、siRNA2、Neg.siRNA转染48h,D组不转染。采用流式细胞仪检测MGC-803细胞周期,Western blot法检测ATAD2蛋白及细胞周期相关蛋白Cyclin D1、CDK4、Rb。结果与C、D组比较,A、B组G0/G1期细胞比例升高(P均<0.01),S期细胞比例降低(P均<0.05),细胞周期蛋白Cyclin D1和CDK4表达减少,但不引起Rb的表达变化。结论下调ATAD2表达能够抑制胃癌细胞增殖、细胞周期进展,其作用机制与降低Cyclin D1、CDK4等细胞周期相关调节蛋白表达有关。     

通过下调Lewis肺癌细胞Vav3基因的表达抑制细胞增殖

目的 通过下调Lewis肺癌细胞Vav3基因的表达,观察Vav3表达对Lewis肺癌细胞体外增殖能力的影响.方法 设计合成3条针对小鼠Vav3的小干扰RNA序列(Vav3 -mus-163,Vav3-mus-309,Vav3-mus-375),瞬时转染至Lewis肺癌细胞,采用Real-time PCR和Western印迹方法检测干扰前后Vav3的表达,并挑选出下调效果最好的一条干扰序列进行细胞MTT实验,分别在24、、72 h观察下调Vav3基因表达后对Lewis肺癌细胞体外增殖能力的影响.结果 瞬时转染三条siRNA序列Vav3-mus-163、Vav3-mus-309、Vav3-mus-375,检测Vav3基因相对表达含量分别为1.1217 ±0.105 5、2.030 5 ±0.386 1和3.175 9 ±0.730 4.分别与Lewis肺癌细胞组(6.7045±0.183 3)和阴性对照组(6.083 7±0.317 2)相比,转染Vav3 -mus-163组和转染Vav3-mus-375组的Lewis肺癌细胞Vav3基因表达明显下调(P＜0.01,P＜0.05).在蛋白水平瞬时转染三条小于扰RNA序列Vav3的表达分别为0.112 8 ±0.005 8、0.203 2±0.008 3、0.293 8 ±0.219 1,与Lewis肺癌细胞组(0.408 3 ±0.0046)和阴性对照组(0.388 9±0.005 4)比较,转染Vav3-mus- 163组Vav3蛋白表达明显下调(P＜0.05).Vav3-mus-163序列能够在mRNA水平和蛋白水平显著下调Vav3的表达.MTT法检测瞬时转染Vav3-mus-163后72 h细胞的增殖率为78.4％,与阴性对照组细胞增殖率92.9％相比差异显著(P＜0.05).结论 下调Lewis肺癌细胞中Vav3的表达,可使癌细胞的增殖能力下降,说明Vav3具有促进Lewis肺癌细胞增殖的作用.Vav3表达与肺癌的发生发展有关联.     

下调BAP31基因表达抑制结直肠癌细胞增殖侵袭及Wnt/β-catenin信号

目的探讨下调B细胞受体相关蛋白(BAP)31基因表达对结直肠癌细胞增殖侵袭及Wnt/β-catenin信号的影响。方法以正常结肠上皮细胞NCM460为对照细胞,Western印迹检测结直肠癌DLD-1,HT29,SW620和HCT116细胞中BAP31的蛋白表达。设计合成BAP31的特异性siRNA及阴性对照siRNA,分别命名为si-BAP31组和NC组,参照LipofectamineTM 2000说明转染HCT116细胞,仅加入脂质体的为空白对照组,Western印迹检测BAP31、β-catenin、增殖细胞核抗原(PCNA)和基质金属蛋白酶(MMP)-2的蛋白表达;细胞计数试剂盒(CCK)8检测细胞活力;Transwell小室检测穿膜细胞数。结果结直肠癌DLD-1,HT29,SW620和HCT116细胞中BAP31的表达均显著高于在NCM460细胞表达(P0.05)。转染si-BAP31的HCT116细胞BAP31表达明显受到抑制,与空白对照组比较差异有统计学意义(P0.05)。与NC组比较,si-BAP31组在24、48和72 h的细胞活力显著降低,在48 h的细胞侵袭能力及β-catenin、PCNA和MMP-2的蛋白表达均显著降低(P0.05)。结论下调BAP31基因表达可抑制结直肠癌细胞增殖侵袭能力,机制可能与下调Wnt/β-catenin信号通路有关。     

木犀草素对人胃癌HGC-27细胞迁移的影响及机制

目的 观察木犀草素对人胃癌细胞系HGC-27细胞迁移能力的影响,并探讨其作用机制.方法 用10、20、40 μmol/L木犀草素培养HGC -27细胞.用划痕实验、Transwell实验观察不同浓度木犀草素对同样条件培养下胃癌HGC-27细胞迁移能力的影响,并采用Westem blot方法检测金属基质蛋白酶-7(MMP-7)mRNA.结果 划痕实验中培养24h后,未经木犀草素处理的HGC-27细胞运动迁移基本完全覆盖了划痕区域,而经10、20、40 μmol/L 木犀草素处理的HGC-27细胞仅覆盖了96.2％、72.3％、55.6％的划痕区域.Transwell实验中经10、20、40 μmol/L木犀草素处理的HGC细胞穿膜数量占对照组细胞穿膜数量的百分比分别为97.6％、59.5％、20.0％.经10、20、40μmol/L木犀草素处理的HGC-27细胞内MMP-7蛋白的表达水平明显降低,并与木犀草素的浓度呈负相关.结论 木犀草素抑制了胃癌HGC-27细胞的迁移能力,其作用与抑制HGC-27细胞内的MMP-7蛋白表达水平有关.