植生克雷伯菌与肺炎克雷伯菌β-内酰胺酶编码基因研究

目的调查一组耐药克雷伯菌属β-内酰胺酶编码基因表达状况以及KPC型β-内酰胺酶编码基因与插入序列的关系,为临床治疗提供参考依据。方法收集医院2009年10月-2011年3月分离出的20株克雷伯菌属,采用K-B纸片扩散法进行抗菌药物敏感性判断;采用聚合酶链反应(PCR)法检测A、B、C、D等4类40种β-内酰胺酶基因,PCR法连锁检测KPC型β-内酰胺酶编码基因与插入序列,采用Chromas软件对PCR阳性产物测序结果进行读序,并对测序结果用Chromas直接作BLAST Search比对。结果 20株克雷伯菌属共检出5种A类β-内酰胺酶编码基因TEM、SHV、CTX-M-1群、LAP、KPC,1种C类β-内酰胺酶编码基因DHA,1种D类β-内酰胺酶编码基因OXA-1群,阳性检出率依次为SHV100.0%、TEM8 5.0%、DHA85.0%、CTX-M-1群55.0%、KPC45.0%、LAP10.0%和OXA-1群5%;9株KPC阳性菌株KPC-ISKpn6连锁检测均为阳性。结论产β-内酰胺酶是克雷伯菌属耐β-内酰胺类药物的重要成因之一,KPC型β-内酰胺酶编码基因由插入序列ISKpn6介导。     

耐药肺炎克雷伯菌β-内酰胺酶编码基因及KPC-ISKpn6连锁检测

目的研究和分析18株耐药肺炎克雷伯菌产β-内酰胺酶基因表达及KPC型阳性菌株与插入序列ISKpn6的关联。方法采用微生物鉴定仪鉴定并通过gyrA、parC基因测序和比对确认了18株肺炎克雷伯菌,对抗菌药物的药敏试验采用K-B纸片扩散法;40种β-内酰胺酶基因和KPC型β-内酰胺酶编码基因与插入序列(KPCISKpn6)连锁检测均采用PCR法,β-内酰胺酶编码基因的亚型通过测序和比对进行确认。结果 18株耐药肺炎克雷伯菌除对四环素、米诺环素的敏感率>83.3%外,对其余抗菌药物的敏感率均<50.0%,有的甚至100.0%耐药;40种β-内酰胺酶基因中共检出TEM-1 17株、CTX-M-3 4株、LAP-2 1株、KPC-2 14株、IMP-4 2株、DHA-1 4株、OXA-1 1株共7种耐药基因亚型,且基因检出与其细菌耐药表型相符合;14株KPC-2型阳性菌株KPC-ISKpn6连锁检测均为阳性。结论耐药肺炎克雷伯菌每一株均有阳性基因检出,且检出的7种耐药基因亚型分布于β-内酰胺酶4个类别中,显示耐药株携带的β-内酰胺酶编码基因多种性;14株携带KPC-2型基因的阳性株其KPC-ISKpn6连锁检测均为阳性,提示KPC-2型β-内酰胺酶编码基因与插入序列ISKpn6高度关联。     

肺炎克雷伯菌耐药性及16种β-内酰胺酶基因分型研究

目的:了解20株肺炎克雷伯菌(KPN)耐药性及β-内酰胺酶产生状况.方法:对20株KPN菌进行了16种β-内酰胺酶基因(TEM、SHV、CTX-M-1群、CTX-M-2群、CTX-M-9群、OXA-1群、OXA-2群、OXA-10群、PER、GES、VEB、CARB、DHA、ACT-1)检测.结果:20株KPN菌检出TEM、SHV、CTX-M-1群、CTX-M-9群、OXA-1群、DHA等6种β-内酰胺酶基因,阳性率分别为85%、25%、25%、20%、25%、70%.20株KPN菌中有19株至少检出1种β-内酰胺酶基因,最多同时检出6种β-内酰胺酶基因.并在国内首次发现CTX-M-55型.结论:该20株KPN菌β-内酰胺类抗菌药物耐药与产β-内酰胺酶密切相关.     

肺炎克雷伯菌超广谱β-内酰胺酶表型及β-内酰胺酶基因型检测

目的 了解临床分离的肺炎克雷伯菌(KPN)产超广谱β-内酰胺酶(ESBIs)及β-内酰胺酶(BLA)基因型存在状况.方法 在2005年9月-2006年4月从住院患者中分离25株KPN,采用美国CLSI推荐的表型确证试验方法检测ESBLs,用PCR及序列分析的方法分析21种(群、簇)BLA基因bla_(TEM)、bla_(SHV)、bla_(LEN)、bla_(OKP)、bla_(CTX-M-1)群、bla_(CTX-M-2)群、bla(CTX_M_9)群、bla_(OXA-1)群、bla_(OXA-2)群、bla_(CARB)、bla_(PER)、bla_(VEB)、bla_(GES)、bla_(LAP)、bla_(DHA)、bla_(ACT/MIR)、bla_(CMY/MOX)、bla_(FOX)、bla_(CMY/LAT)、bla_(ACC).结果 25株KPN中,ESBLs阳性14株(56.0%)、阴性5株(20.0%)、"不确定"6株(24.0%);bla_(TEM)、bla_(SHV)、bla_(CTX-M-1)群、bla_(OXA-10)群、bla_(LAP)和bla_(DHA)基因阳性株数(%)分别为20株(80.0%)、1株(4.0%)、1株(4.0%)、20株(80.0%)、1株(4.0%)、8株(32.0%),而其余15种(群、簇)基因均阴性;21种(群、簇)BLA基因总阳性率为92.0%;其中HZ12593号菌株bla_(LAP-2)基因序列已登录GenBank,注册号为EU529981.结论 临床分离的KPN产ESBIs比例较高,至少存在6种BLA基因,BLA基因型以bla_(TEM)和bla_(OXA-10)群为主,KPN携带bla_(DHA)基因可以影响ESBLs表型确证试验结果.     

1株携带6种β-内酰胺酶基因的肺炎克雷伯菌

目的了解对亚胺培南敏感的肺炎克雷伯菌（KPN）β-内酰胺酶产生状况。方法对1株KPN用PCR法进行了16种β-内酰胺酶基因（TEM、SHV、LEN、OKP、CTX-M-1群、CTX-M-2群、CTX-M-9群、OXA-1群、OXA-2群、OXA-10群、PER、GES、VEB、CARB、DHA、ACT-1）检测。结果检测显示TEM、SHV、CTX-M-1群、CTX-M-9群、OXA-1群、DHA等6种阳性。结论该株KPN同时携带6种β-内酰胺酶基因。     

产ESBLs肺炎克雷伯菌β-内酰胺酶基因检测

目的 了解产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)肺炎克雷伯菌临床分离株中β-内酰胺酶(bla)基因流行状况.方法 采用美国临床实验室标准化研究所(CLSI)推荐的的表型筛选与确证试验检测ESBLs,应用PCR扩增产ESBLs菌株bla(TEM)、bla(SHV)、bla(CTX-M)基因,并对PCR阳性产物进行克隆后测序确定其基因亚型.结果 46株产ESBLs肺炎克雷伯菌中,基因检出率分别为bla(TEM)11株,占23.9%;bla(SHV)13株,占28.3%;bla(CTX-M)43株,占93.5%;携带1种bla基因菌株21株,占45.7%;携带2种20株,占43.5%;携带3种3株,占6.5%;全部菌株bla(TEM)基因测序结果均为TEM-1亚型,bla(SHV)基因为SHV-11、12、28亚型;部分菌株bla(CTX-M)基因测序结果为CTX-M-15、24、38亚型.结论 产ESBLs肺炎克雷伯菌中ESBLs基因型以CTX-M型为主,其次为SHV型,部分菌株同时携带广谱β-内酰胺酶基因TEM-1或SHV-11;监测产ESBLs细菌β-内酰胺酶基因流行状况,有助于指导临床合理应用抗生素.     

老年人肺炎克雷伯菌耐药性和β-内酰胺酶基因分析

目的分析老年人肺炎克雷伯菌的耐药谱及其携带的β-内酰胺酶基因。方法抗菌药物敏感试验采用微量肉汤稀释法测定临床分离的肺炎克雷伯菌对抗菌药物的耐药性，采用PCR法检测pβ-内酰胺酶耐药基因型。结果20株肺炎克雷伯菌对阿莫西林、替卡西林、哌拉西林、头孢噻吩、头孢他啶、头孢吡肟的耐药率均为100％，复方阿莫西林60％、头孢西丁40％、复方哌拉西林30％。PCR扩增后有19株均发现有产酶基因，阳性率为95％，最多的一株有4种基因。基因型主要是TEM型，20株中有19株为TEM型，少数为CTX—M型。结论肺炎克雷伯菌株大多携带β-内酰胺酶耐药基因，其对β-内酰胺类的高耐药率与TEM型基因有关。     

老年患者肺炎克雷伯菌分离株β-内酰胺酶基因分型研究

目的了解肺炎克雷伯菌(KPN)老年患者分离株β-内酰胺酶产生状况。方法对20株KPN进行了15种β-内酰胺酶基因(blaTEM、blaSHV、blaLEN、blaOKP、blaCTX-M-1群、blaCTX-M-2群、blaCTX-M-9群、blaOXA-1群、blaOXA-2群、blaOXA-10群、blaPER、blaGES、blaVEB、blaDHA、blaACT-1)检测。结果20株KPN检出blaTEM、blaSHV、blaCTX-M-1群、blaCTX-M-9群、blaOXA-1群、blaDHA等6种β-内酰胺酶基因,阳性率分别为95%、30%、50%、5%、5%、15%;20株KPN中有19株至少检出1种β-内酰胺酶基因,15株同时检出>2种β-内酰胺酶基因,最多同时检出4种β-内酰胺酶基因。结论该20株KPNβ-内酰胺类抗菌药物耐药与产β-内酰胺酶密切相关。     

4种β-内酰胺酶基因在一组耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌中的流行分析

目的调查一组耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌(Carbapenem-resistant Klebsiella pneumoniae,CRKP)β-内酰胺酶基因的存在状况。方法收集分离自2016年某医院ICU的20株CRKP菌;采用K-B纸片扩散法进行17种药物敏感性判断,采用聚合酶链反应(PCR)法检测A、B、C、D四类36种β-内酰胺酶基因,PCR法连锁检测KPC型β-内酰胺酶编码基因与插入序列(KPC-ISKpn6)。结果 20株CRKP菌每株均检出blaTEM、blaSHV、blaKPC和blaNDM型β-内酰胺酶基因,阳性率分别为100.00%、100.00%、75.00%、100.00%;15株KPC阳性菌株KPC-ISKpn6连锁检测均为阳性。结论 blaTEM、blaSHV、blaKPC、blaNDM等4种基因的菌株在该组CRKP菌中流行;KPC型β-内酰胺酶编码基因由插入序列ISKpn6介导。     

医院感染肺炎克雷伯菌耐药趋势及β-内酰胺酶基因型分析

目的 了解医院重症监护病房2009-2013年医院感染肺炎克雷伯菌的耐药趋势以及10种β-内酰胺酶耐药基因的分布,为临床正确选择抗菌药物提供依据。方法 K-B法检测165株肺炎克雷伯菌对20种抗菌药物的耐药性,PCR方法检测:CTX-M、TEM、SHV、GES、KPC、IMI、IMP、VIM、NDM、GIM耐药基因。结果 ICU 5年共分离165株肺炎克雷伯菌,产ESBLs菌株88株,KPN对三代头孢菌素的耐药率逐年升高;自2011年出现碳青霉烯耐药的菌株,耐药率约10.0%;114株扩增到耐药基因片段,检测出CTX-M、TEM、SHV、KPC共4种耐药基因,165个基因片段;最主要的耐药基因型为SHV型,占46.5%。结论 产ESBLs菌株的增加和耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌的出现,应引起高度重视,关注细菌的变迁和耐药性变化,并合理选用抗菌药物治疗。     

肺炎克雷伯菌耐药性及16种β-内酰胺酶基因分型研究

目的：了解20株肺炎克雷伯菌（KPN）耐药性及β-内酰胺酶产生状况。方法：对20株KPN菌进行了16种β-内酰胺酶基因（TEM、SHV、CTX—M—1群、CTX—M-2群、CTX—M-9群、OXA—1群、OXA-2群、OXA—10群、PER、GES、VEB、CARB、DHA、ACT—1）检测。结果：20株KPN菌检出TEM、SHV、CTX-M—1群、CTX-M-9群、OXA-1群、DHA等6种β-内酰胺酶基因，阳性率分别为85％、25％、25％、20％、25％、70％。20株KPN菌中有19株至少检出1种β-内酰胺酶基因，最多同时检出6种β-内酰胺酶基因。并在国内首次发现CTX-M-55型。结论：该20株KPN菌β-内酰胺类抗菌药物耐药与产β-内酰胺酶密切相关。     

产超广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌β-内酰胺酶与Ⅰ类整合酶基因研究

目的了解产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)肺炎克雷伯菌中β-内酰胺酶和Ⅰ类整合酶(intⅠ1)基因存在状况。方法对35株肺炎克雷伯菌,采用聚合酶链反应(PCR)检测TEM、SHV、OKP、CTX-M-1群、CTX-M-2群、CTX-M-9群、GES、PER、VEB、OXA-10、ACT-1、LEN、DHAi、ntⅠ1基因。结果35株肺炎克雷伯菌中检出β-内酰胺酶基因22株,阳性率62.9%;intⅠ1阳性21株,阳性率60.0%。结论产ESBLs肺炎克雷伯菌β-内酰胺酶基因和intⅠ1基因携带率高。     

儿科产超广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌检测与耐药性分析

目的 了解医院儿科患者产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)肺炎克雷伯菌耐药性变化情况,为临床合理选用抗菌药物提供依据.方法 按照NCCLS标准操作,用头孢噻肟、头孢噻肟/克拉维酸等药敏纸片以扩散法检测,样本为2010年1-12月分离的肺炎克雷伯菌,对其产ESBLs肺炎克雷伯菌耐药率与2008年进行比较.结果 2010年1-12月分离的产ESBLs肺炎克雷伯菌占57.2％,而2008年为36.8％,差异有统计学意义(P＜0.05),产ESBLs肺炎克雷伯菌,对氨曲南敏感率2010年为19.3％,而2008年为47.8％,呈显著下降(P＜0.05),磺胺甲噁唑/甲氧苄啶及利福霉素仍保持较高的敏感率,3年差异无统计学意义,亚胺培南对产ESBLs肺炎克雷伯菌仍100.0％敏感.结论 近年儿科产ESBLs肺炎克雷伯菌检出数及检出率均有明显增加,耐药性也明显增加,应加强儿科抗菌药物使用的管理.     

套式PCR法检测肺炎克雷伯菌染色体介导β-内酰胺酶基因

目的 了解国内肺炎克雷伯菌连续分离株SHV、LEN、OKP3个基因家族存在情况。方法 应用套式聚合酶链反应（nPCR）法对耐药的肺炎克雷伯菌进行SHV、LEN、OKP基因检测与分析。结果 44株中SHV基因阳性28株（63．6％），LEN基因阳性4株（9．1％），无OKP基因检出。结论 SHV、LEN、OKP3个基因家族主要由染色体介导，三者的同源性80％～92％，它们在细菌耐药性播散过程中起非常重要的作用，nPCR是检出染色体介导β-内酰胺酶基因的实用简便的方法。     

肺炎克雷伯菌产β-内酰胺酶类型的动态比较研究

目的动态比较研究肺炎克雷伯菌(KPN)所产各种β-内酰胺酶(β-lase)分布情况. 方法采用多底物改良相邻纸片法检测230株,S1期(2000年1月～2001年6月)70株、S2期(2001年7月～2002年7月)70株和S3期(2003年1月～2004年11月)90株;KPN所产各种β-lase. 结果 S1期Kpn总β-lase检出率为28.7%,其中产青霉素酶、头孢菌素酶各1株(1.4%),产广谱酶4株(5.7%),产ESBLs14株(20.0%);S2期70株KPN总β-lase检出率为85.7%,其中产青霉素酶4株(5.7%),头孢菌素酶3株(4.3%),产广谱酶11株(15.7%),产ESBLs 42株(60.0%);S3期KPN总β-lase检出率为64.0%,其中产青霉素酶9株(10.0%),AmpCs酶3株(3.3%),广谱酶3株(3.3%),单纯产ESBLs20株(22.2%),同时产ESBLs AmpCs产酶株15株(16.7%),酶抑制剂耐药的β-内酰胺酶14株(15.6%,1株IRT、13株IRESBLs),ESBLs总检出率为53.3%;3期均未检出碳青酶烯酶. 结论本组KPN所产各种β-lase的总产酶率、β-lase类型数均随时间而提高.     

多药耐药肺炎克雷伯菌β-内酰胺酶基因及膜孔蛋白突变检测

目的了解多药耐药肺炎克雷伯菌耐药性及耐药基因的表达,为临床治疗肺炎克雷伯菌致呼吸机相关性肺炎(VAP)提供理论依据和指导。方法收集医院2011年7月-2012年6月入住儿童重症监护病房(PICU)20例呼吸机相关性肺炎患儿下呼吸道痰液标本,通过药敏试验检测耐药率,PCR法及基因测序检测β-内酰胺酶和膜孔蛋白的表达。结果共20株肺炎克雷伯菌对头孢类抗菌药物均存在耐药,对头孢唑林、头孢呋辛、头孢他啶、头孢噻肟、头孢吡肟、头孢西丁耐药率分别为100.0%、95.0%、70.0%、70.0%、55.0%、30.0%;共检出6种β-内酰胺酶基因,分别为A类SHV、TEM、CTX-M-1、LAP,C类DHA-1和D类OXA-1,ompK35膜孔蛋白基因检测10株为基因缺失和8株为基因突变,ompK36膜孔蛋白基因7株缺失和2株突变;6株非产ESBLs株均同时存在ompK35/36的突变或缺失,且伴有β-内酰胺酶基因的表达。结论 20株肺炎克雷伯菌均检出1³种β-内酰胺酶基因;ompK35/36膜孔蛋白基因检测结果显示,该蛋白几乎均有缺陷;提示该组耐β-内酰胺类药物为产β-内酰胺酶和ompK膜孔蛋白缺陷的双重作用,特别是非产ESBLs菌株。     

超广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌耐药性分析

目的 对超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)肺炎克雷伯氏菌的耐药性研究,更好的指导临床用药.方法 采用Kirby.Bauer纸片扩散法进行药敏试验检测52株产ESBLs的肺炎克雷伯菌的体外抗生素的耐药性.结果 ESBLs肺炎克雷伯菌的阳性率为21.1%,对头孢噻肟、头孢曲松、头孢唑啉耐药率达95%,所有受试菌对亚胺培南均敏...     

产超广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌的耐药特点与基因型分析

菌具有多药耐药的特点;TEM型和CTXM型是医院产ESBLs肺炎克雷伯菌中流行的基因型.     

肺炎克雷伯菌新生儿医院感染分离株耐药性及β-内酰胺酶CTX-M基因检测

目的了解新生儿医院感染产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)肺炎克雷伯菌分离株的耐药性及β-内酰胺酶CTX-M耐药基因的存在状况. 方法对表型确认证实产ESBLs肺炎克雷伯菌进行药敏试验并用PCR扩增检测CTX-M基因. 结果 14株产ESBLs肺炎克雷伯菌药敏结果一致,耐三代头孢和耐酶抑制剂,均检出CTX-M基因. 结论随着CTX-M酶分布日渐广泛,有必要对其进行深入研究,了解不同的产CTX-M酶菌株耐药水平之差异.     

医院感染肺炎克雷伯菌耐药趋势及β-内酰胺酶基因型分析北大核心CSCD

目的了解医院重症监护病房2009-2013年医院感染肺炎克雷伯菌的耐药趋势以及10种β-内酰胺酶耐药基因的分布,为临床正确选择抗菌药物提供依据。方法 K-B法检测165株肺炎克雷伯菌对20种抗菌药物的耐药性,PCR方法检测:CTX-M、TEM、SHV、GES、KPC、IMI、IMP、VIM、NDM、GIM耐药基因。结果 ICU 5年共分离165株肺炎克雷伯菌,产ESBLs菌株88株,KPN对三代头孢菌素的耐药率逐年升高;自2011年出现碳青霉烯耐药的菌株,耐药率约10.0%;114株扩增到耐药基因片段,检测出CTX-M、TEM、SHV、KPC共4种耐药基因,165个基因片段;最主要的耐药基因型为SHV型,占46.5%。结论产ESBLs菌株的增加和耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌的出现,应引起高度重视,关注细菌的变迁和耐药性变化,并合理选用抗菌药物治疗。