白英对A2780人卵巢癌细胞增殖的抑制作用

目的：探讨白英的抗肿瘤作用。方法：以MTT法、生长曲线法、集落形成法观察白英对人卵巢癌A2780细胞的体外抑制作用。结果：白英能明显抑制体外培养的A2780细胞的生长,MTT法IC50为20．39mg／ml;细胞生长曲线法提示其对A2780细胞的生长也有明显的抑制作用;集落形成法,当药物浓度为14．81mg／ml、9．88mg／ml时,抑制率均为100％;当药物浓度为6．58mg／ml时,抑制率为41．86％。结论：白英对体外培养的A2780细胞有明显的抑制作用。     

甲氨蝶呤对妊娠小鼠滋养细胞bcl-2/bax表达的影响

目的探讨甲氨蝶呤（MTX）促进滋养细胞凋亡、抑制滋养细胞增生的机制。方法建立正常妊娠小鼠模型、MTX妊娠小鼠模型,运用免疫组化方法检测两组小鼠孕13 d滋养细胞bax、bcl-2的蛋白表达;同时运用原位细胞凋亡（TUNEL）检测两组小鼠孕13 d的滋养细胞凋亡情况。结果与正常妊娠模型小鼠相比,MTX妊娠模型小鼠滋养细胞bax蛋白表达较强（P〈0.01）,bcl-2蛋白表达减弱（P〈0.01）;MTX妊娠模型小鼠滋养细胞凋亡指数明显高于正常妊娠模型小鼠（P〈0.01）。结论 MTX抑制滋养细胞增生、促进滋养细胞凋亡,可能是通过调节bax、bcl-2蛋白的表达实现的。     

射线照射对胰腺癌细胞凋亡及bcl-2、bax基因表达的影响

目的研究不同剂量的γ射线对人胰腺癌细胞凋亡及bcl2,bax基因表达的影响。方法利用不同剂量的γ射线对体外培养的胰腺癌Panc1细胞进行照射,采用PI和AnnexinⅤPI法定量检测细胞凋亡,流式细胞仪检测照射后胰腺癌细胞Panc1的Bcl2、Bax基因表达水平。结果胰腺癌panc1细胞凋亡百分率在一定剂量范围内(≤15Gy)随着照射剂量的提高而增大,在一定时间范围内(≤24h),随着时间的延长而增大。照射组细胞凋亡相关基因Bcl2表达较对照组明显降低,两组相比差异有统计学意义(P<005);照射组bax基因的表达较对照组明显升高,两组相比差异有统计学意义(P<005)。结论γ射线诱导胰腺癌panc1细胞凋亡具有剂量依赖性和时间相关性,bcl2和bax在胰腺癌细胞凋亡调节过程中起着重要作用,不同剂量γ射线照射胰腺癌细胞时Bcl2和Bax表达水平也不相同,通过降低bcl2的表达及提高bax表达来诱导胰腺癌细胞发生凋亡有可能是γ射线杀伤肿瘤细胞的机制之一。     

bcl-2基因转染对大鼠胰岛细胞培养的影响

目的探讨bcl-2基因转染对培养的胰岛细胞凋亡和生物活性的影响。方法用腺病毒介导的基因转染方法把bcl-2转染人胰岛细胞，用RT—PCR和免疫细胞化学方法检测转染细胞中bcl-2的表达，原位末端标记（TUNEL）检测细胞凋亡，台盼蓝测定细胞活度，放免法测定培养液巾胰岛素水平了解胰岛功能。结果转染的胰岛细胞中70％的细胞有bcl-2蛋白的表达，转染细胞的凋亡率为6％，对照组为22死，转染胰岛细胞的活度为91％，对照组为68％，转染胰岛细胞在高糖培养基中胰岛素水平高于对照组。结论腺病毒介导的基冈转染方法能成功转染胰岛细胞，bcl-2基因转染能降低细胞凋亡率，改善胰岛细胞功能。     

环氧合酶2基因沉默诱导人肝癌细胞凋亡的作用观察

目的 观察作用于环氧合酶2(COX-2)mRNA的发卡状COX-2(COX-2 shRNA)真核表达质粒对人肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响.方法 设计靶向COX-2基因的RNA干扰序列,构建COX-2 shRNA表达载体,用阳离子脂质体Lipofectamine 2000转染体外培养的HepG2细胞.半定量RT-PCR检测COX-2 mRNA表达水平的变化,筛选有效抑制COX-2基因表达的序列.采用CCK-8细胞计数法检测COX-2 shRNA对细胞增殖的影响,流式细胞仪测定细胞凋亡率和细胞周期,Western blotting检测细胞内COX-2和Bcl-2蛋白表达水平.结果 测序结果显示成功构建了2个表达COX-2shRNA的质粒载体,转染HepG2细胞后COX-2 mRNA表达下降至阴性对照组的41.66％和77.79％.选择沉默效率较佳者转染细胞并经G418筛选,获得稳定表达COX-2 shRNA的细胞,胞内COX-2 mRNA表达水平下降了75.30％,细胞增殖活性下降了 29.33％.在稳定表达COX-2 shRNA、错义序列以及未转染的细胞中,细胞凋亡率分别为17.83％、4.63％和4.47％,G0/G1期细胞比例分别为73.93％、61.2％和57.630％,而S期细胞比例分别为13.43％、26.03％和26.90％.Westernblotting检测显示,表达COX-2 shRNA的HepG2细胞内COX-2蛋白水平下降至表达错义序列组的31.25％(P＜0.01),Bcl-2蛋白水平下降至表达错义序列组的54.93％(P＜0.01),而转染错义质粒组与未转染组之间比较差异无统计学意义.结论 构建的真核表达载体pSilencer 2.1-U6-COX-2 shRNA能有效沉默人肝癌HepG2细胞内COX-2基因的表达,并具有抑制细胞增殖、促进细胞凋亡和细胞周期阻滞、降低胞内抗凋亡蛋白(H)Bcl-2水平的作用.     

pSVPoMcat微基因修饰雪旺氏细胞移植对脊髓损伤c-fos、bcl-2基因表达的影响

目的探讨pSVPoMcat微基因修饰雪旺氏细胞(SC)移植对脊髓损伤(SCI)后c-fos,bcl-2基因表达的影响.方法用切割法制备大鼠SCI模型,将实验动物分为pSVPoMcat微基因修饰SC组(A组),SC移植组(B组),损伤组(C组),正常对照组(D组),不致伤.用地高辛(DIG)标记的c-fos、bcl-2探针行原位杂交.结果SCI后A、B、C、D四组脊髓c-fos基因表达顺序为C＞B＞A=D;bcl-2基因表达顺序为D=A＞B＞C.结论SCI后C-fos基因表达显著增多,而bcl-2基因表达显著减少,pSVPoMcat微基因修饰SC移植能部分抑制SCI后c-fos基因的表达和促进bcl-2基因的表达.     

溴隐亭对大鼠催乳素瘤细胞表达bcl-2、Bax的影响

 目的 研究溴隐亭对大鼠催乳素（prolactinoma,PRL）瘤表达bcl-2、Bax的影响。方法 （1）用皮下植入17β-雌二醇的方法制备大鼠催乳素瘤模型,同时设立10只大鼠为对照组;（2）将成功诱发出催乳素瘤的大鼠随机分2组,分别给予自来水（安慰剂组）、溴隐亭（溴隐亭组）灌胃,对照组也给予安慰剂灌胃,用药4周后处死动物,垂体称重,测定PRL、Bax、bcl-2的表达水平。结果 （1）17β-雌二醇组大鼠血清PRL水平［（4236.9±416.9） vs （121.2±12.8） ng/ml］和垂体重量［（62.0±5.1） vs （13.8±1.2） mg］均明显高于对照组（P＜0.01）,证实17β-雌二醇组成功诱发出大鼠泌乳素瘤。（2）溴隐亭组血清PRL水平和垂体重量低于安慰剂组（P＜0.01）,bcl-2表达水平较安慰剂组明显下降［（1.8±0.5） vs (4.0±0.6),P＜0.01］,Bax表达水平明显增高［（4.5±0.6） vs ( 1.0±0.3),P＜0.01］。结论 抑制bcl-2的表达,刺激Bax的表达,从而促进催乳素瘤细胞的凋亡可能是溴隐亭抗催乳素瘤的重要机制之一。     

缺氧诱导人卵巢癌OVCAR3细胞亲环素A表达水平变化及其临床意义

目的 探讨缺氧诱导人卵巢癌OVCAR3细胞亲环素A(CypA)表达水平的变化及其临床意义。方法 将人卵巢癌OVCAR3细胞置于Bactron厌氧室,37℃、1%O₂、5%CO₂环境下培养0、3、6、12、24 h。合成以CypA基因为靶点的CypA-siRNA(CypA-siRNA组)和control-siRNA(control-siRNA组),将CypA-siRNA和control-siRNA转染,转染后置于缺氧环境(37℃、1%O₂、5%CO₂)培养48 h;同时,设置对照组,细胞缺氧环境培养48 h,不转染。采用RT-PCR法检测CypA mRNA表达,采用Western Blot法检测CypA蛋白表达,采用MTT比色法检测细胞增殖。结果 缺氧环境下培养3、6、12、24 h时的CypA mRNA和CypA蛋白表达水平均高于培养0 h时(P<0.05)。与对照组比较,control-siRNA组OVCAR3细胞增殖和CypA蛋白表达无明显变化(P>0.05),CypA-siRNA组...     

肝细胞癌bcl-2,bax基因表达及意义

肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)是我国和东亚地区的常见恶性肿瘤之一,最佳治疗方法是外科切除,而对于多数不能切除的中、晚期肝癌,日本学者Nakakuma[1]首创的碘油加抗癌药物经肝动脉化疗栓塞治疗大大提高了肝细胞癌患者的生存期.     

三氧化二砷体外诱导人HepG2细胞铁蛋白基因表达的研究

目的 了解低剂量三氧化二砷诱导的HepG2细胞的差异表达基因，揭示慢性砷中毒对肝细胞损伤的作用机制。方法 在体外用三氧化二砷(Sμmol／L)处理HepG细胞，同时以PBS处理的相同细胞系作为对照；24h后制备细胞裂解液，提取mRNA并逆转录为cDNA，经RsaⅠ酶切后，将实验组cDNA分成2组，分别与2种不同的接头衔接，再与对照组cDNA进行2次消减杂交及2次抑制性聚合酶链反应(PCR)，将产物与T／A载体连接，构建cDNA消减文库，并转染大肠杆菌JM109进行文库扩增，随机挑选克隆PCR扩增后进行测序及同源性分析。结果 成功构建三氧化二砷处理HepG2细胞差异表达基因的cDNA消减文库。文库扩增后得到：109个白色克隆，进行菌落PCR分析，均得到200～1000bp插入片段。挑取含有插入片段的36个克隆进行测序，通过生物信息学分析发现铁蛋白重链和轻链在三氧化二砷诱导的肝HepG2细胞正向消减cDNA文库中显著上调，共有8个阳性克隆子。结论 低剂量三氧化二砷刺激细胞后可诱导铁蛋白的表达上调，暗示铁蛋白在砷诱导的肝细胞损伤中起作用。     

携带Bcl-2基因的慢病毒对原代培养的人卵巢颗粒细胞的影响

目的探讨携带Bcl-2基因的慢病毒对体外培养的原代人卵巢颗粒细胞感染效率及对细胞凋亡的影响。方法构建携带Bcl-2基因的慢病毒载体,包装成高滴度慢病毒,将重组慢病毒在体外分别以不同感染复数(MOI)值(10、50、100、200、400)感染人卵巢原代颗粒细胞,观察感染24、48、72、96h后的感染效率及细胞增殖情况;将人卵巢颗粒培养24h后,分为3组。实验组:加MOI值为100的重组慢病毒GC-FU-Bcl-2;空白对照组:不加病毒;空载体对照组:加空载病毒GC-FU-EGFP。转染后第3、7天,采用Western blotting及反转录聚合酶链反应(RT-PCR)分别检测目的基因Bcl-2在人卵巢原代颗粒细胞中的蛋白及mRNA的表达水平。同时转染后第3天采用流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果原代培养的人卵巢颗粒细胞24h即贴壁,集落样生长,呈多角形或梭形;当MOI为100时,细胞的形态和生长不受影响,且感染效率较高,感染后72h达高峰,感染率达60%。携带Bcl-2基因的慢病毒感染靶细胞后,实验组中检测到Bcl-2基因及蛋白的表达,且卵巢颗粒细胞的凋亡率明显低于空载体对照组。结论携带Bcl-2基因的慢病毒感染原代培养的人卵巢颗粒细胞后可过度分泌Bcl-2蛋白,抑制细胞凋亡。     

HP培养滤液诱导下抑制bcl-2基因表达对SGC7901细胞端粒酶活性的影响

目的:探讨bcl-2表达与hTERT、端粒酶活性之间的调控关系,了解HP的致癌机制。方法:在HP培养滤液诱导前后,采用流式细胞仪检测bcl-2AODN抑制bcl-2基因之后人SGC7901细胞hTERT蛋白的表达。结果:对照组人SGC7901细胞24h、36h和48h表达hTERT蛋白的阳性细胞数和荧光指数显著低于经HP培养滤液诱导的SGC7901胃癌细胞组(P<0.05)。在HP滤液诱导下,抑制bcl-2基因的SGC7901胃癌细胞24h、36h和48h表达hTERT蛋白的阳性细胞数和荧光指数显著低于与SGC7901胃癌细胞(P<0.05),同时显著高于对照组(P<0.05)。结论:bcl-2基因正向调控hTERT蛋白表达,bcl-2表达上调可能是端粒酶活化的主要途径之一。端粒酶的激活不完全依赖于bcl-2途径,还存在其他的调控因素。HP感染不仅通过上调bcl-2的表达,还可以通过其他途径激活端粒酶,这可能是HP感染致癌的一条重要途径。     

siRNA共转染沉默bcl-2和XIAP基因对UMSCC12细胞放射增敏作用的实验研究

目的 探讨同时沉默bcl-2和XIAP基因对头颈部鳞癌UMSCC12细胞放射敏感性的影响.方法 实验分为4组:对照siRNA转染组、siRNA-bcl-2转染组、siRNA-XIAP转染组和siRNA-bcl-2与siRNA-XIAP共转染组.采用siRNA bcl-2和siRNA-XIAP共转染头颈鳞癌细胞株UMSCC12,Western blot检测蛋白水平基因沉默的效果.以caspase-3和caspase-9活性检测自发和放疗诱导的凋亡,最后以克隆形成实验评价放射增敏效果.结果 共转染siRNA-bcl-2和siRNA-XIAP有效沉默了UMSCC12细胞bcl-2和XIAP的蛋白表达.caspase-3和caspase-9活性检测提示,单独沉默XIAP未增加细胞自发和放射诱导的凋亡.单独沉默bcl-2使放射诱导的凋亡增加,与对照siRNA转染组照射后相比,caspase-3和caspase-9的活性差异有统计学意义(t=5.32、6.27,P＜0.05),但未增加细胞自发的凋亡.共转染后的caspase-3和caspase-9活性在未照射时比对照siRNA转染组分别提高至1.36和1.34倍(t=11.47、6.22,P＜0.05),照射后分别提高至1.72和1.98倍(f=12.02、20.14,P＜0.05).克隆形成实验显示,与对照siRNA转染组比较,siRNA-XIAP的放射增敏比(SER)为1.06,siRNA-bcl-2的放射增敏比为1.15,siRNA-bcl-2与siRNA-XIAP共转染组的放射增敏比为1.41,比其他组显著升高.结论 与单独沉默bcl-2和XIAP相比,同时沉默bcl-2和XIAP增加了UMSCC12细胞的放射敏感性,其机制可能与增加了UNSCC12细胞自发和放射诱导的凋亡有关.     

CDC28蛋白激酶调节亚基2对卵巢癌A2780细胞丝足形成的影响及其机制研究

目的 探讨CDC28蛋白激酶调节亚基2(CKS2)对A2780细胞丝足形成的影响及其可能机制.方法 采用慢病毒介导的shRNA敲除A2780细胞的CKS2基因,显微镜下观察细胞丝足的变化;采用细胞划痕实验检测A2780细胞迁移能力的变化;采用real time PCR检测CKS2敲除对CDC42两种剪接变异体(CDC42-V1和CDC42-V2)表达的影响,以及不同卵巢癌标本中CKS2、CDC42-V1和CDC42-V2剪接变异体的表达情况.结果 CKS2表达抑制后,A2780细胞丝足明显减少,细胞迁移能力明显减弱(P＜0.05),CDC42-V1mRNA表达降低,而CDC42-V2 mRNA表达升高(P＜0.05).Real time PCR结果显示,卵巢癌组织标本中CKS2及CDC42-V1的表达高于对应的正常卵巢组织,而CDC42-V2的表达低于对应的正常卵巢组织(p＜0.05).结论 CKS2通过调控CDC42的选择性剪接而影响细胞丝足的形成,进而影响卵巢癌细胞A2780的迁移能力.     

Hp培养滤液诱导下抑制hTERT基因对SGC27901细胞bcl-2蛋白表达的影响

目的：探讨bcl-2表达与端粒酶活性二者之间的调控关系，了解Hp的致癌机制。方法：在Hp培养滤液诱导前后，采用流式细胞仪检测抑制hTERT基因之后SGC7901胃癌细胞bcl-2蛋白的表达。结果：对照组SGC7901胃癌细胞24h、36h和48h表达bcl-2蛋白的阳性细胞率和荧光指数显著低于经Hp培养滤液诱导的SGC7901胃癌细胞组（P〈0．05）。在Hp滤液诱导下，抑制hTERT基因的SGC791胃癌细胞24h、36h和48h表达bcl-2蛋白的阳性细胞率和荧光指数与SGC7901胃癌细胞无显著差异（P〉0．05）。结论：Hp感染可以促进bcl-2蛋白表达，这可能是Hp感染致胃癌的重要机制之一。端粒酶活化不参与调控bcl-2蛋白表达。     

膀胱癌中Fas、FasL、Bcl-2及Bax的表达及意义

目的 探讨凋亡调节基因Fas、FasL、Bcl-2及Bax在膀胱移行细胞癌中的表达及其与膀胱癌发生、发展和预后之间的关系。方法 采用免疫组化染色法检测40例膀胱移行细胞癌、24例正常膀胱组织中Fas、FasL、Bcl-2及Bax的表达。结果 Fas表达于正常组织和膀胱癌组织中,FasL、Bcl-2及Bax仅表达于膀胱癌组织中;Fas的表达与膀胱癌病理分级负相关,FasL、Bcl-2的表达与膀胱癌病理分级正相关;Fas、Bax在初发膀胱癌组织中的表达大于复发膀胱癌。结论 Fas、FasL、Bcl-2及Bax的表达,可能与膀胱癌细胞的凋亡及免疫逃避等密切相关,影响膀胱癌的发生、发展和预后。     

The effect of hyperbaric oxygen on human oral cancer cells.

Discoveries of the beneficial cellular and biochemical effects have strengthened the rationale for the administration of hyperbaric oxygen therapy (HBO2) as an adjunctive therapy for the treatment of osteoradionecrosis (ORN). Malignancies, however, are considered a contraindication for HBO2 because of the possible tumor-promoting effects. The aim of this study was to examine the effects of HBO2 therapy on tumor weight, and to measure the progression of apoptosis and tumor cell proliferating activity in a cultured human oral cancer cell line. Twenty 5-week-old male NODscid mice underwent daily HBO2 of 2.5 atm abs, 90 minutes for 20 treatments. The control group, n = 20, did not undergo HBO2 and tumor weight, apoptosis index, and proliferating activity parameters were compared between the two groups. The results showed no significant differences (p < 0.05) in the whole-body weights, tumor weights, apoptotic index or proliferating activity index between the two groups. By using the apoptosis and proliferating activity assays which were better indicators of tumor cell growth than tumor weight alone, our results suggest that the clinical application of HBO2 does not promote the growth or proliferation of human oral cancer cells.     

低温等离子体联合辐射对三种癌细胞系放射增敏效应的研究

目的 探讨低温等离子体对人肝癌细胞系HepG2、非小细胞肺癌细胞系A549及人宫颈癌细胞系HeLa的放射增敏作用及其机制。方法 应用克隆形成实验观察低温等离子体对3种细胞的放射增敏作用;流式细胞仪分析3种细胞周期分布、凋亡率及活性氧含量;Western blot法检测单纯照射(R组)、单纯等离子体作用(P组)及其联合辐射(P+R组)对3种细胞中Bcl-2、Caspase-3蛋白表达的影响。结果 低温等离子体对HepG2、A549及HeLa细胞均有放射增敏作用,放射增敏比(SER_D0)分别为1.28、1.32、1.29。HepG2、A549及HeLa细胞P+R组G₂/M期比例、凋亡率及活性氧含量与R组比较均明显增高(t_G2/M期=9.52、8.24、9.53,P<0.05;t_凋亡率=10.67、38.56、6.74,P<0.05;t_{活性氧含量}=9.41、15.42、13.53,P<0.05)。HepG2和A549细胞P+R组G₂/M期比例、凋亡率及活性氧含量与P组比较均明显升高(t_G2/M期=8.75、20.37,P<0.05;t_凋亡率=8.43、9.99,P<0.05;t_{活性氧含量}=4.82、5.27,P<0.05)。3种癌细胞中P+R组Bcl-2蛋白表达较R组降低,而Caspase-3蛋白表达升高。结论 低温等离子体可提高HepG2、A549及HeLa细胞系的放射敏感性,其对HepG2及A549细胞系的放射增敏机制可能与抑制亚致死损伤修复,使细胞周期阻滞在G₂/M期,以及提高细胞内ROS水平诱导细胞凋亡有关。