PCR检测甲型肝炎病毒研究进展

甲型肝炎病毒 (ｈｅｐａｔｉｔｉｓＡｖｉｒｕｓ ,ＨＡＶ )是一种单股正链ＲＮＡ病毒 ,是全球急性传染性肝炎的主要病因 ,因为很容易引起甲型肝炎 (以下简称甲肝 )暴发流行 ,日益引起众多卫生工作者的普遍关注。目前评价饮水卫生的微生物指标并不能揭示感染性病毒的存在 ,因此如何建立一套有效的ＨＡＶ检测方法在控制甲肝发病、流行过程中显得尤为重要。通过细胞培养检测ＨＡＶ不仅灵敏度差、操作复杂 ,而且病毒的培养周期长 ,不易获得高滴度病毒 ,因此限制了它的应用。ＰＣＲ以其更高的灵敏度和特异性 ,广泛应用到微生物检测领域 ,目前已建…     

从污染的淤积海水及贝类中检出甲型肝炎病毒RNA

目的 了解辽宁省近海海水及贝类甲型肝炎病毒的污染状况。方法 应用聚合酶链反应技术检测辽宁省近海海域淤积海水样品及贝类中的甲型肝炎病毒（HAV）RNA。结果 月牙湾淤积海水样检出HAVRAN,25份贝类样品中检出HAVRNA阳性5份。结论 辽宁省近海海水及贝类已受到HAV的污染,应加强卫生监督。     

应用PCR技术检测污水、海水及贝壳类中甲型肝炎病毒RNA

水样及海产贝壳类等环境样品中污染病毒的量往往很低,必须应用特异性的浓缩方法并结合灵敏度较高的检测技术,才能检出,本文在这些方面进行了有益的探索,现将结果报告如下.     

应用聚合酶链反应（PCR）检测血清HBV—DNA

用ＰＣＲ技术检测２１３分血清中ＨＢＶ－ＤＮＡ，ＥＬＩＳＡ法检测其血清五项标志（ＨＢＶＭ）。结果表明，在不同类型的ＨＢＶ感染标志物中其血清ＰＣＲ结果有所不同。１０例健康正常人血清无１例检出ＨＢＶ－ＤＮＡ，２０３例免疫标志各异的血清共检出５４例存在ＨＢＶ－ＤＮＡ。     

PCR技术及其在传染性疾病中的应用

多聚酶链反应是在体外应用DNA多聚酶催化扩增核酸分子的新技术,具有敏感、特异、简便和快速等优点,堪称现代分子生物学技术的又一重大进展,已在基因遗传性疾病、传染病、肿瘤等许多方面得到推广应用。本文仅就多聚酶链反应的原理及其在传染性疾病中的应用作一简介。     

双重套式PCR方法在霍乱弧菌外环境监测中的应用

目的 建立一种能够检测O1群和O139群霍乱弧菌的套式聚合酶链反应方法,并应用于外环境水体标本的监测.方法 根据GenBank发表的O1群和O139群霍乱弧菌O抗原编码基因rfb的序列,运用DNAStar Primer Select软件各自设计6条引物,检测不同引物组合的特异性,建立双重套式PCR方法同时检测O1群和O139群霍乱弧菌;并对该方法进行敏感度、特异度、重复性及现场评价.通过比较套式PCR与常规PCR的DNA检出下限分析该方法的敏感度;对32份套式PCR阳性的水体样本(O1群11份,O139群21份)进行重复性评价,挑选部分阳性扩增产物进行测序,分析其与相应基因序列的一致性.结果 建立的检测O1群和O139群霍乱弧菌的双重套式PCR体系,根据其扩增的片段大小能够区分O1群和O139群霍乱弧菌,而对其他弧菌DNA样品都未见特异性扩增;敏感度比常规PCR高15 000倍,且在多引物或者多模板共存于一个反应管的试验条件下,不会对敏感度产生干扰;32份套式PCR阳性的水样标本,经2次或3次套式PCR试验,结果显示该体系具有较好的重复性和一致性,阴性水样均无任何扩增产物,说明所用引物的特异性较好;序列分析表明扩增产物仅同霍乱弧菌相应的基因序列有100%的一致性.结论 本检测相应霍乱弧菌的双重套式PCR方法,具有灵敏、特异、快速、适合基层实验室的特点,可用于监测外环境水体中霍乱弧菌的存在及消长情况.     

应用PCR技术检测小型兽类肾组织中钩端螺旋体DNA的研究

目的 :应用PCR技术对安徽省 7个不同地区所获的小型兽类肾组织中携带的钩端螺旋体DNA进行检测。结果 :安徽省的小型兽类携带钩体DNA检出率为 9.41% (16 / 170 ) ,不同地区间检出率有所不同 ,个别地区啮齿类动物携带钩体DNA检出率高达 19.0 5 % (12 / 6 3) ,而有的地区则未检出 ;不同的小兽之间携带钩体DNA的检出率也有所不同 ,黑线姬鼠为 12 .96 % (14/ 10 8) ,褐家鼠为 5 .88% (2 / 34 ) ,其余 4种啮齿类动物则未检出。结论 :应用PCR技术能准确及时地从宿主动物的肾脏组织中检测出钩体DNA的存在 ,其高度特异性、敏感性是鼠肾培养及鼠血MAT的检测不可比拟的 ,用其来分析钩体病的流行因素、流行特征和地理分布以及为今后扩大钩体病调查 ,提供了新的手段     

应用AC／PCR检测粪便中HAV RNA

应用ＡＣ／ＰＣＲ检测粪便中ＨＡＶＲＮＡ钱浩，吴少慧，王玉珍辽宁省卫生防疫站甲型肝炎传染性强，发病率高，严重危害人类健康。为满足临床和流行病学研究的需要，我们建立了应用抗原捕捉多聚酶链反应（ＡＣ／ＰＣＲ）检测粪便中ＨＡＶＲＮＡ的方法。并对甲型肝炎病人粪...     

应用随意引物PCR技术克隆猪带绦虫特异的基因探针

筛选和克隆猪带绦虫基因组特异的ＤＮＡ片段作为探针，建立脑囊虫病的基因诊断方法。以一１９ｎｔ的寡核苷酸为探针，通过随意引物ＰＣＲ反应扩增猪带绦虫基因组ＤＮＡ，分离出数个不同大小的扩增片段。分别以其中０．７，０．８ｋｂ片段为探针作ＤＮＡ斑点杂交分析，证实此２片段为猪带绦虫基因组所共有，在人和猪基因组中未发现有同源序列存在。猪带绦虫基因组特异ＤＮＡ探针的分离和克隆将使猪带绦虫所致寄生虫病的基因诊断成为可能。     

戊型肝炎病毒核酸逆转录－套式聚合酶链反应法的建立及应用

应用戊型肝炎病毒（ＨＥＶ）开放读框１（ＯＲＦ１）和开放读框２（ＯＲＦ２）区的两对寡核苷酸作为内外引物，建立了逆转录－套式聚合酶链反应（ＲＴ－ｎＰＣＲ）检测ＨＥＶＲＮＡ的方法。用本法检测２只人工感染ＨＥＶ猕猴的１１份系列血清，发现该２只猕猴分别于感染后第六天和第九天ＨＥＶＲＮＡ阳转，并持续至感染后第十七天和第二十二天。检测４１份急性散发性戊型肝炎病人血清，ＨＥＶＲＮＡ阳性率为６８．３％（２８／４１），发病后１～１０天、１１～２０天和２１～３４天的血清ＨＥＶＲＮＡ阳性率分别为７２．７％（１６／２２）、７０．０％（７／１０）和５５．５％（５／９）。提示ＨＥＶ血症持续时间较短，随病程延长而下降     

用PCR技术研究HBsAg阳性者血清HBV—DNA与e系统的关系

作者应用聚合酶链反应(PCR)对经酶联免疫法检出的211份HBsAg阳性者进行HBV-DNA检测。同时与e系统检测结果比较,发现HBeAg阳性组HBV-DNA阳性率为97.8％,而抗-HBe阳性组HBV-DNA阳性率为39.7％(P<0.01);应用聚合酶链反应检测HBV-DNA对于确切了解HBsAg阳性者HBV感染状况和传染性有一定意义。     

在食品检验中应用聚合酶链反应（PCR）技术

PCR技术,即聚合酶链反应(Polymer-ase Chain Reaction,PCR),自 1985年问世以来,已在医学工程、疾病诊断、遗传工程,考古学及法医学等领域得到了广泛应用,1989年被称为“分子年”,PCR技术被列为十项重大科学发明之首。 这种PCR技术也称体外基因复制过程,     

FQ—PCR技术在儿童尿液巨细胞病毒检测的临床应用

目的探讨实时荧光定量聚合酶链式反应（FQ—PCR）方法检测尿液巨细胞病毒在儿童CMV感染诊断中的意义。方法分别应用FQ—PCR和ELISA法检测75例确诊或高度怀疑为CMV感染和25例对照儿童尿CMV—DNA和血清CMV—IgM,比较病毒DNA与血清抗体的平行性和敏感性。结果75例确诊或疑诊CMV活动性感染患儿中,检测到CMV—DNA65例;检测到CMV—IgM54例。两种方法阳性符合率为77％,FQ—PCR和ELISA法阳性检出率分别为88％和72％,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论FQ～PCR法检测尿CMV—DNA对诊断活动性CMV感染具有良好的应用价值。     

套式逆转录PCR检测戊型肝炎病毒RNA的临床应用

目的 评价套式逆转录PCR检测血清戊肝病毒(HEV) RNA的临床意义.方法 对GenBank数据库中的戊型肝炎病毒全基因组序列进行分析比对,并针对国内流行的HEV株序列,选择位于ORF2的保守区域设计引物,建立套式逆转录聚合酶链式反应(nRT-PCR)方法,并检测126例急性戊型肝炎患者,并与检测抗-HEV IgM的方法进行比较.结果 126例急性戊型肝炎患者血清中有67例HEV-RNA阳性,对照组血清HEV-RNA检测均为阴性;与血清抗HEV IgM检测结果比较,HEV RNA检测的总符合率为80.91％,两种方法的检测结果具有良好的一致性;nRT-PCR方法检测HEV-RNA与血清抗-HEV IgM检测方法存在明显的差异,不能相互替代,而有一定的互补性;3例患者的首份血清检测为HEV-RNA阳性,但抗-HEV IgM为阴性,系列追踪检测,均相继出现抗HEV IgM,急性戊型肝炎患者血清HEV-RNA的检出多在发病的1～12 d.结论 应用nRT-PCR方法能对急性散发戊型肝炎患者血清中的HEV RNA进行定性检测,且有较高的特异性和敏感性,临床使用可以提高对HEV早期诊断的水平,具有一定的临床应用价值.     

应用逆转录聚合酶链反应直接从患者粪便中分离戊型肝炎病毒基因

1990年8月新疆东部发生一起戊型肝炎(HE)流行。我们应用逆转录聚合酶链反应(RT—PCR)从3例HE病人的粪标本中分离到含665个核苷酸硷基对的戊型肝炎病毒(HEV)基因组。核酸序列分析结果与缅甸HEV株(ET1.1)相比,核苷酸序列同源性为91.5％,氨基酸序列同源性为98.0％,证实了本次分离到的HEV毒株是导致这起HE流行的病原体。     

戊型肝炎病毒核酸逆转录—套式聚合酶链反应法的建立及应用

应用戊型肝炎病毒（ＨＥＶ）开放读框１（ＯＲＦ１）和开放读框２（ＯＲＦ２）区的两对寡核苷酸作为内外引物，建立了逆转录－套式聚合酶链反应（ＲＴ－ｎＰＣＲ）检测ＨＥＶＲＮＡ的方法，用本法检测２只人工感染ＨＥＶ猕猴的１１份系列血清，发现该２只猕猴地感染后第六天和第九天ＨＥＶＲＮＡ阳转，并持续至感染后第十七和第二十二天，检测４１例急性散发性戊型肝炎病人血清，ＨＥＶＲＮＡ阳性率为６８．３％（２８／４１），发病     

聚合酶链反应技术快速检验饮用水及医院污水中结核杆菌的研究

聚合酶链反应技术快速检验饮用水及医院污水中结核杆菌的研究武建军周秀梅刘保勤牛宏志医院污水中结核杆菌的测定，通常采用罗氏培养基培养后鉴定的方法，时间长达８周，不能及时了解医院污水污染的状况。笔者采用了先集菌，后使用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术扩增测定的方...     

套式聚合酶链反应法检测外周血单个核细胞中HBcVccDNA

目的:建立套式聚合酶链反应法(nPCR)检测慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞(PBMC)中乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA(HBV cccDNA)。方法:根据HBV基因组DNA正负链上下游缺口序列,设计两套相对保守的引物,建立HBV cccDNA套式PCR,并用该法检测200例慢性乙型肝炎患者PBMC中HBV cccDNA。结果:该法检测200例慢性乙型肝炎患者,HBV cccDNA阳性率为60%。结论:套式PCR法简便、灵敏,可用于测定PBMC中HBV cccDNA。     

3组套式PCR用于检测及区分霍乱弧菌O1群古典型,埃尔托型和O139群

针对霍乱弧菌肠毒素Ａ亚单位（ｃｔｘＡ）基因设计两对引物,建立套式ＰＣＲ,可特异扩增霍乱弧菌Ｏ１群古典型、埃尔托型和Ｏ１３９群;针对霍乱弧菌毒力协调菌毛Ａ亚单位（ＴｃｐＡ）基因设计两对引物,外引物可特异扩增霍乱弧菌Ｏ１群古典型、埃尔托型和Ｏ１３９群,内引物只能特异扩增霍乱弧菌Ｏ１群埃尔托型和Ｏ１３９群;针对Ｏ１３９群特异基因设计两对引物,建立套式ＰＣＲ,可特异扩增Ｏ１３９群。先利用针对ｃｔｘＡ基因设计的套式ＰＣＲ进行初筛,再进一步用另外两组套式ＰＣＲ,可检测及区分霍乱弧菌Ｏ１群古典型、埃尔托型和Ｏ１３９群。对４８株ＥＶＣ,２株ＣＶＣ,６株Ｏ１３９群和３３株非Ｏ１非Ｏ１３９群进行检测,扩增结果与设计均一致。套式ＰＣＲ检测的敏感性可达到１～１０ＣＦＵ。本文建立的方法简单、快速、特异和敏感,有较大的应用价值。     

套式聚合酶链反应技术检测孕妇外周血中胎儿细胞

目的探讨利用孕妇外周血中胎儿细胞进行产前诊断的可行性。方法采用套式聚合酶链反应(polymerase chain reaction，PCR)技术扩增孕妇外周血中男性胎儿性别决定基因(sexdetermining region Y，SRY)，并与胎儿实际性别相对照。结果74例孕7～40周的孕妇中38例怀男胎，其中23例扩增出Y特异带；另外36例怀女胎孕妇中，仅1例出现Y特异带。SRY套式PCR扩增系统在孕中期，孕晚期检查孕妇外周血中男胎灵敏度(72．7％、71．4％)、特异度(100．0％)和符合率(87．0％、90．5％)高，误诊率为0，而在孕早期灵敏度(50．0％)、特异度(90．0％)及符合率(63．3％)较低，误诊率(10．0％)、漏诊率(50．0％)较高。结论胎儿细胞在孕早期即存在于孕妇外周血中，但直接利用孕妇外周血中胎儿细咆检查SRY基因的检出率较低。