脉冲场电泳进行E.coliO_(157)的分型

Ｅ .ｃｏｌｉＯ157是一种新型的致病性大肠杆菌 ,其感染已成为世界性卫生问题。药敏、质粒图谱分析、多位点酶电泳和噬菌体分型[1] 等被用于Ｅ .ｃｏｌｉＯ157的分型 ,以确定不同菌株之间的关联性 ,用于传染源的追踪和传播途径的探讨。但这些方法在一定情况下使用 ,尚不能有效地用于所有暴发流行事件的调查。脉冲场冲泳 ( ｐｕｌｓｅｆｉｅｌｄｇｅｌｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ ,ＰＦＧＥ)是 80年代初建立的一种基因分析技术 ,已成功地用于一些病原体的分子流行病学调查[2 ] 。我们对药敏、质粒图谱、ＰＦＧＥ用于Ｅ .ｃｏｌｉＯ157分…     

商丘市、济源市腹泻患者、家禽、家畜粪便中E.coli O157:H7的鉴定

目的：对商丘市、济源市腹泻患者、家禽、家畜粪便中首次分离的E.coliO157:H7进行生物学特性等方面的研究。方法：采集疫区患者，外环境，家畜和家禽粪便标本1895份，采用mEC肉汤增菌，胶体金免疫卡快速测定法，免疫磁珠集菌法，CHROMAGAR-O157：H7菌株，在CHROMAGAR-O157：H7显色培养基生长形态，颜色，生化反应出现多样化，rfbO157,stx2,hlyA,eaeA基因检测均阳性的有58株，stx2阳性1株，eaeA阳性4株，72株无毒力基因。结论：为本省实验室诊断E.coliO157:H7提供了理论依据；不同种类的家禽，家畜分离的产毒菌株比例差别显著，以波尔山羊最为突出；为今后在制定对该菌的诊断标准，传染源的追踪和控制及细菌毒力学等方面的研究提供了重要线索。     

产超广谱β内酰胺酶大肠杆菌的脉冲场凝胶电泳分型研究

目的 改进并运用基因分型方法,研究临床所分离到的产超广谱β内酰胺酶(EsBLs)大肠杆菌的分子流行病学。方法 应用EsBLs表型确证试验检测产EsBLs的大肠杆菌,分析病历资料以确定医院感染,采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析电泳图谱经数据转化后进行聚类分析,以确定菌株间的亲缘关系。结果 在重症监护病房分离到的3株产EsBLs的医院感染大肠杆菌,其PFGE条带相似性达95％以上,提示为流行相关克隆。其他相似性系数在50％上的菌株由于不同条带均超过6条,因而,被认为无流行相关性。结论 PFGE是一种用于产EsBLs的医院感染大肠杆菌分子流行病学研究的准确、可靠、重复性好的基因分型方法。     

应用插入序列PCR进行大肠杆菌O157:H7基因分型的研究

目的对不同地区、不同宿主大肠杆菌O157：H7分离株进行基因分型。方法应用插入序列PCR方法，对反应体系中dNTPs、引物以及镁离子浓度等反应条件进行优化。扩增产物通过琼脂糖凝胶电泳检测和分析。结果14株不同来源O157：H7分离株根据插入序列PCR图谱可分为A、B、C、D四个基因型。不同地区O157：H7菌株存在不同的基因型；同一地区、毒力基因谱相同的O157：H7菌株基因型也不相同；不同宿主O157：H7菌株也存在相同的基因型。结论插入序列PCR技术用于大肠杆菌O157：H7的基因分型，简便、快速、敏感，对大肠杆菌O157：H7的分子流行病学研究具有重要价值。     

江苏省113株大肠杆菌O157:H7的扩增片段长度多态性分析

目的:分析江苏省不同地区和年代分离的Escherichia coli O157:H7(E. coli O157:H7)之间的同源性?方法:用扩增片段长度多态性(amplified fragment length polymorphism,AFLP)分析法对113株 E. coli O157:H7菌株进行分子分型,采用软件BioNumerics Version 4.0对分型数据进行处理和分析?结果:113株E. coli O157:H7共分37个型别,不同来源的菌株存在相同的基因型别,不同的地区和物种之间存在着相互传播?结论:AFLP可以用于对不同来源的E. coli O157:H7进行分子分型?     

大、小鼠绿脓杆菌脉冲场凝胶电泳分型研究

目的 对近年来上海及江苏地区部分单位大、小鼠绿脓杆菌进行分离鉴定,采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)分子分型技术作基因型分析,以了解绿脓杆菌流行菌株与宿主之间的相关性.方法 无菌采集上海及江苏地区部分单位实验大、小鼠回盲部内容物进行绿脓杆菌分离培养,采用形态学观察、生化试验对分离菌进行鉴定.提取绿脓杆菌分离株基因组DNA,经XbaI酶切后进行脉冲场凝胶电泳.结果 共分离到67株绿脓杆菌,PFGE图谱可分为39种不同带型,14个基因簇(A-N),优势簇分别为I、H、B和G,分别占17.9％(12/67)、14.9％(10/67)、13.4％(9/67)和11.9％(8/67).同一来源地的分离株大多呈现不同的基因簇. 结论 67株细菌具有很大的基因多态性,呈散在分布,未见明显的流行特征.     

腹泻患者沙门菌脉冲场凝胶电泳分型及分布特征

目的了解2014年乌鲁木齐该市引起腹泻患者腹泻的沙门菌的分子流行病学特征,为追踪传染来源,查找传播途径提供线索。方法将分离获得的76株沙门氏菌进行血清型鉴定,采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)对不同时间,不同地区的76株肠道沙门分离菌进行电泳分型,所得结果运用Bio Numerics 6.6软件进行聚类分析。结果 76株沙门菌血清分型检出最多的是肠炎沙门菌,占39.5%。所有76株沙门菌株酶切图谱分为41个PFGE型,分别命名为S-1~S-41,菌株间条带相似度为46.5%~100.0%。从时间分布上看,全年5~10月均能分离到沙门菌株,感染的高发季节为6月(27.6%,21/76)、7月(23.7%,18/76)和9月(23.7%,18/76)。结论 2014年乌鲁木齐市引起腹泻的沙门菌血清型以肠炎为主,PFGE分型较为分散;不同PFGE型别在时间及地区分布上均提示了一定的流行规律,应当引起重视。     

无锡市2009年副溶血性弧菌脉冲场凝胶电泳分型研究

目的 分析无锡市2009年副溶血性弧菌分子特征,以及细菌性食物中毒分离的菌株与菌株之间、食源性疾病监测分离的副溶血性弧菌之间的遗传相关性,建立无锡地区副溶血性弧菌分子分型数据库,为无锡市进行食源性疾病的快速反应和预警、监测和控制提供科学依据.方法 脉冲场凝胶电泳(PFGE)对菌株进行分子分型,所得结果以BioNumer...     

肠出血性大肠杆菌O157的流行病学研究进展

肠出血性大肠杆菌（enterohemorrhagic Escherichiacoli，EHEC）感染性腹泻是目前世界范围内重要的公共卫生问题之一。其主要菌型EHECO157能导致严重并发症和后遗症，如出血性肠炎和溶血性尿毒症（HUS），临床表现为三联征：急性肾损伤、血小板减少症和微血管溶血性贫血。重症者病死率高，可达到5％-10％。继1982年美国第一次暴发该病以来，     

广东省伤寒沙门菌株的脉冲场凝胶电泳分型研究

目的 运用脉冲场凝肢（PFGE）电泳研究广东省伤寒沙门菌的分子流行病学。方法用PFGE对菌株进行分子分型，所得结果用BionumefiscV4．0软件进行聚类分析。结果 来自广东省6个地区的51株伤寒沙门菌，根据电泳图谱分析，可分为45个PFGE型别，菌株间的相似值在38．27％-100．00％，6个地区间没有同源的菌株，同一个地区不同年份也没有同源的菌株，而同一地区同一年份可出现同源的菌株。结论 PFGE是一种敏感的研究伤寒沙门菌分子流行病学的基因分型方法。     

Optimization of Pulse-Field Gel Electrophoresis for Borrelia burgdorferi Subtyping

Objective To optimize the performance of Pulsed-Field Gel Electrophoresis (PFGE) for the comparison of inter-laboratory results and information exchange of Borrelia burgdorferi subtyping. Methods A panel of 34 strains of B. burgdorferi were used to optimize PFGE for subtyping. In order to optimize the electrophoretic parameters (EPs), all 34 strains of B. burgdorferi were analyzed using four EPs, yielding different Simpson diversity index (D) values and the epidemiological concordance was also evaluated. Results The EP of a switch time of 1 s to 25 s for 13 h and 1 s to 10 s for 6 h produced the highest D value and was declared to be optimal for MluI and SmaI PFGE of B. burgdorferi. MluI and SmaI were selected as the first and second restriction enzymes for PFGE subtyping of B. burgdorferi according to discrimination and consistency with epidemiological data. Conclusion PFGE can be used as a valuable test for routine genospecies identification of B. burgdorferi.     

O3/UV和O3/H2O2氧化法处理聚丙烯酰胺采油废水

为降低油田采油废水的化学需氧量（COD）负荷,提高其可生化性,采用O₃/UV和O₃/H₂O₂氧化法对聚丙烯酰胺采油废水进行处理,分别考察了氧化时间、H₂O₂与O₃物质的量之比、pH以及紫外灯功率对采油废水处理效果的影响。结果表明,与采用单独臭氧氧化相比,O₃/UV以及O₃/H₂O₂联用技术对采油废水中的COD及聚丙烯酰胺（PAM）的去除效果更为显著,废水可生化性均有所提高,且O₃/H₂O₂氧化法对采油废水的可生化性提高程度更大。O₃/UV氧化法对于聚丙烯酰胺采油废水可生化性影响的最佳条件为：pH=8.0,O₃质量浓度为19.7 mg/L,紫外灯功率为18 W,氧化时间为30 min,可生化性（B/C）提高至0.092;O₃/H₂O₂氧化法对于聚丙烯酰胺采油废水可生化性影响的最佳条件为：pH=8.0,O₃质量浓度为19.7 mg/L,H₂O₂与O₃物质的量之比为0.3,氧化时间为30 min,B/C提高至0.175。氧化预处理提高了废水的可生化性,减轻了后续生化处理压力。     

血清双向凝胶电泳体系的建立

目的:建立血清双向凝胶电泳(two-dimensional polyacrylamide gel electrophoresis,2-DE)技术体系.方法:用Proteoprep blue albumin depletion kit将血清中高峰度蛋白去除.预冷丙酮沉淀蛋白质后,加入样品溶解液充分溶解,进行等电聚焦电泳(isoelectric focusing,IEF)和十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel elecrophoresis,SDS-PAGE),行硝酸银染色后,运用ImageMaster软件行初步分析.结果:通过调整,优化2-DE技术条件,建立了稳定的2-DE技术.结论:建立了相对稳定的人血清蛋白质2-DE技术,其稳定性、重复性好,为开展疾病蛋白质组学的研究奠定了基础.     

大鼠胰腺蛋白质组研究中双向电泳技术的初步建立

目的：初步建立大鼠胰腺蛋白质组研究中双向电泳技术，提高其分辨率及重复性。方法：应用大鼠成年和胚胎18天胰腺组织提取的总蛋白，对以载体两性电解质pH梯度为第一向的双向电泳关键因素与环节，如样品处理、凝胶制备、电泳参数等进行一系列的优化。结果：获得了分辨率及重复性均很好的双向电泳图谱。结论：通过对各种条件的优化，初步建立了双向电泳技术，为研究胚胎胰腺不同时期特异性蛋白的表达及分子标志打下基础。     

UV/O3处理酒石酸-铜络合体系废水的研究

为解决含铜电镀废水中酒石酸等络合剂存在时普通氢氧化物沉淀法难以满足达标排放要求的问题,本文采用UV/O3法处理酒石酸 铜络合体系废水,考察了光照时间、反应初始pH两种因素对处理过程的影响。结果表明,对于酒石酸 铜体系废水（酒石酸质量浓度418 mg/L,五水硫酸铜质量浓度196 mg/L）,得出最佳处理条件为：t=120 min,ρO3=19.2 mg/L,QO3=1 L/min,初始pH=3.0,最终沉淀pH=9.5,此条件下出水中总铜质量浓度可以低于0.3 mg/L,达到了太湖流域的排放标准。     

琼脂糖凝胶电泳法快速筛选轮状病毒

本文用琼脂糖凝胶电泳检测轮状病毒RNA,并与聚丙烯酰胺凝胶电泳的结果相比较,结果43份聚丙烯酰胺凝胶电泳阳性的标本,琼脂糖凝胶电泳亦均为阳性。两种方法检测轮状病毒RNA的敏感度一致,而琼脂糖电泳省时、简便、经济。可作为一种快速方法用于轮状病毒感染的筛选和快速诊断。     

加压三相淤浆床环氧乙烷合成过程研究VI. O2、CO2、C2H4和N2在二号液相热载体中的溶解度测定

在高压搅拌釜中,利用气体的等容吸收原理测定了60～230°C、0.05～1.2MPa(表压)条件下三相淤浆床环氧乙烷合成过程中的反应及惰性气体组分O2、C2H4、CO2和N2在实验所用的二号液相热载体中的溶解度.实验结果表明,O2、C2H4、CO2和N2的平衡溶解度都随压力增加而增大,随温度升高而降低.同时回归出各气体的溶解度系数Hi与温度T的关联方程.     

Optimization of Pulsed-field Gel Electrophoresis Procedure for Bacillus cereus

正In order to develop a rapid and reliable method for B.cereus genotyping,factors influencing PFGE results,including preparation of bacterial cells embedded in agarose,lysis of embedded cells,enzymatic digestion of intact genomic DNA,and electrophoresis parameters allowing for reproducible and meaningful DNA fragment separation,were controlled.Optimal cellular growth(Luria-Bertani agar plates for 12-18 h)and     

Polyacrylamide Gel Affinity Electrophoresis for Separation of Enzyme Isoforms

Affinity electrophoresis of differently glycosylated isoforms of enzymes using lectin as affinity ligand has been reported on support media such as cellulose acetate membrane (CAM) or agarose gel. We report a method for affinity electrophoresis in polyacrylamide gel (PAG) using wheat germ agglutinin (WGA). WGA is added to acrylamide-Bis mixture and incubated for 10 minutes at room temperature. This causes WGA to react covalently with acrylamide and Bis. Polymerization is initiated with addition of N,N,N,N-tetramethylethylene diamine (TEMED) and ammonium persulphate to give polyacrylamide gel with immobilized lectin. This gel has been found to effectively separate differently glycosylated isoforms of alkaline phosphatase (ALP). Concanavalin – A, similarly immobilized, did not give effective separation of ALP isoforms. The immobilization of lectin on polyacrylamide as support media requires less amount of lectin in comparison to CAM and agarose. Additional advantage of affinity electrophoresis on PAG is separation of biomolecules according to size.Key Words: Affinity electrophoresis, Alkaline phosphatase, Isoforms separation, Lectin, Polyacrylamide gel