IL-1、TNF-α和IFN-γ对Grave''''s眼病患者与正常人眼眶成纤维细胞的作用

目的观察细胞因子对Graves眼病(GO)患者与正常人眼眶成纤维细胞(OFs)的作用，探讨GO的发病机制。方法取5例GO患者与4例正常对照者眼眶结缔组织与眼外肌进行OFs的培养，分别在其中加入不同浓度的白介素1(IL-1)、肿瘤坏死因子α(TNF—α)、干扰素α(IFN-α)，干扰素γ(IFN-γ)，用四甲基偶氮唑盐(MTT)法与放射免疫法检测GO患者与正常人OFs的增殖及分泌透明质酸(HA)的情况。结果IL-1与IFN-γ为5、50、500U／mL时，均能刺激OFs的增殖和HA的分泌，为500U／mL时，对GO患者OFs的刺激作用强于对正常人OFs的作用；TNF-α在50U／mL和500U／mL时能刺激OFs的增殖和HA的分泌，IFN-α在3种浓度均不能刺激OFs的增殖和HA的分泌。结论细胞因子(IL-1、TNF-α、IFN-γ)能刺激OFs的增殖和HA的分泌。细胞因子的紊乱可能参与了GO的发病。     

白细胞介素-1及其抑制剂对眼眶成纤维细胞增殖和合成透明质酸作用的研究

目的：观察白细胞介素1(IL-1)及白细胞介素1受体拮抗剂(IL-1Ra)对甲状腺相关眼病(TAO)病人及正常人眼眶成纤维细胞(OFs)增殖及合成透明质酸(HA)的作用。方法：取5例TAO病人眼眶组织与眼外肌进行OFs培养，另取4例无眼部病变的意外死亡者眼眶组织与眼外肌进行OFs培养作为对照。分别在其中加人不同浓度的IL-1、IL-1Ra，用MTT法及放射免疫法观察它们对OFs增殖及分泌HA的作用；然后用不同浓度的IL-1Ra与IL-1共同孵育，观察OFs的增殖及HA合成的变化。结果：IL-1在5U／ml浓度以上时均能明显刺激OFs的增殖和HA的合成，当IL-1浓度为500U／ml时对TAO病人OFs的刺激作用强于对正常人OFs.IL-1Ra单独使用时对OFs的增殖及HA合成均没有显著性影响。当IL-1Ra(5、50ng／m1)与IL-1(500U／m1)联合孵育时，能阻断IL-1对OFs的刺激作用。结论：IL-1能刺激TAO病人与正常人OFs的增殖和HA的合成，而IL-1Ra能阻断其刺激作用，因此IL-lRa可能是TAO治疗中的一个新途径。     

IFN-γ、IL-6对眼眶成纤维细胞ICAM-1表达的影响

目的探讨IFN-γ和IL-6对甲状腺相关眼病（TAO）眼眶成纤维细胞ICAM-1表达的影响。方法体外培养TAO患者和正常人眼眶成纤维细胞，在培养基中分别加入不同浓度的IFN-γ和IL-6，用流式细胞仪检测眼眶成纤维细胞ICAM-1的表达水平。结果培养的TAO患者和正常对照眼眶成纤维细胞均表达ICAM-1，患者的表达量高于正常对照者，具有显著统计学差异（P〈0．05）。IFN-γ以剂量依赖方式上调ICAM-1的表达水平，对患者的上调作用更强；IL-6对眼眶成纤维细胞表达ICAM-1没有明显影响。结论IFN-γ通过诱导眼眶成纤维细胞ICAM-1的表达在TAO的病理发生中起重要作用。     

植物凝集素诱导甲状腺相关眼病患者外周单核细胞与眼眶成纤维细胞共培养体系分泌IL-6、IL-17A的研究

背景 甲状腺相关眼病(TAO)的致病机制尚未明确,目前认为其是一种自身免疫性疾病,研究证实白细胞介素-17A(IL-17A)在多种自身免疫性疾病的发生和发展中起着重要作用,但其是否参与TAO的发病过程目前尚不明确. 目的 探讨培养外周血单个核细胞(PBMCs)与眼眶成纤维细胞(OFs)共培养体系中分泌的IL-17A是否参与TAO的发病过程及其可能的作用机制. 方法 采集2014年4-12月在中南大学湘雅医院确诊的12例TAO患者的外周血及眼眶结缔组织作为TAO组,并采集同期因先天性眼球萎缩行义眼台植入术的8例患者外周血及眼眶结缔组织作为对照组,采用密度梯度离心法提取所有受试者血中PBMCs,采用组织块培养法培养OFs.采用流式细胞仪检测PBMCs中T淋巴细胞纯度,分别用Giemsa染色法和免疫组织化学法鉴定培养的OFs.以1∶20的比例将OFs与PMBCs在U型96孔板中共培养以建立共培养体系,分别在各组共培养体系中加入0、1.0、2.5、5.0、10.0 μg/ml植物凝集素(PHA)刺激72 h,用ELISA法检测共培养体系上清液中IL-6、IL-17A质量浓度以及共培养体系细胞膜中总IL-17A受体(IL-17RA)的质量浓度.比较不同质量浓度PHA作用后各组共培养体系上清液中IL-6、IL-17A、IL-17RA质量浓度的差异. 结果 TAO组和对照组PBMCs中T淋巴细胞的纯度分别为(81.10±0.21)％和(80.05 ±0.38)％,组间差异无统计学意义(t=0.923,P＞0.05).体外培养的OFs对Vimentin呈阳性反应,Giemsa染色阳性,证实为成纤维细胞.1.0 μg/ml PHA作用后共培养体系中PBMCs和OFs增生能力最强,PHA质量浓度＞1.0μg/ml时,PBMCs出现凋亡,OFs增生明显减弱,相同质量浓度PHA作用下,TAO组的PBMCs和OFs增生均较对照组快.不同质量浓度PHA作用下TAO组与对照组共培养体系IL-6、IL-17A和IL-17RA质量浓度总体比较,差异均有统计学意义(IL-6:F分组=12.561,P=0.000;F质量浓度=23.356,P=0.001.IL-17A:F分组=12.037,P=0.000;F质量浓度=19.206,P=0.000.IL-17RA:F分组=16.216,P=0.000;F质量浓度=4.627,P=0.018).1.0μg/ml PHA作用后各组共培养体系上清液中IL-6、IL-17A和IL-17RA质量浓度均达峰值,随着PHA质量浓度的增加,IL-6、IL-17A和IL-17RA质量浓度均逐渐下降,差异均有统计学意义(均P＜0.05);相同质量浓度PHA作用下TAO组共培养体系上清液中IL-6、IL-17A、IL-17RA质量浓度明显高于对照组,差异均有统计学意义(均P＜0.05). 结论 1.0 μg/ml PHA刺激可增强共培养体系中PBMCs和OFs的增生及免疫炎性因子的分泌,IL-17A能够放大细胞免疫反应和炎症反应,从而参与TAO的发病过程.     

Behcet病患者血清TNF-α和IFN-γ及MCP-1水平的研究

目的：探讨Behcet病(Behcet's disease,BD)患者血清TNF-α、IFN-γ、MCP-1的水平。

方法：BD患者25例,对照组为健康志愿献血员30例,抽取血清检测TNF-α、IFN-γ、MCP-1等指标。

结果：BD活动期患者TNF-α、IFN-γ、MCP-1均高于健康对照组,差异有统计学意义。

结论：BD活动期患者TNF-α、IFN-γ、MCP-1异常升高,可能与BD的发病机制有关。     

根皮素对白细胞介素-1β诱导Graves眼病眼眶成纤维细胞中炎症反应和氧化应激的抑制作用及其机制

目的观察根皮素对白细胞介素(IL)-1β诱导的Graves眼病(GO)患者眼眶成纤维细胞(OFs)中炎症反应和氧化应激的抑制作用及其机制。方法收集2019年1月至2020年12月于河南省立眼科医院确诊为非活动期GO并行眼眶减压术的患者6例6眼的眼眶脂肪及结缔组织。采用组织块培养法分离原代OFs并传代, 细胞免疫荧光法鉴定OFs。将细胞分为对照组、IL-1β诱导组以及不同浓度根皮素处理组。采用细胞计数试剂盒8(CCK-8)法检测25、50、75、100和200 μmol/L根皮素处理24和48 h后OFs的活性。采用IL-1β诱导OFs模拟GO体外炎症环境。采用荧光探针H2DCF-DA法检测正常对照组、IL-1β诱导组、50 μmol/L根皮素组和100 μmol/L根皮素组细胞内活性氧簇(ROS)水平。采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测正常对照组、IL-1β诱导组以及25、50、75、100 μmol/L根皮素组细胞培养上清液中促炎细胞因子IL-6、IL-8和MCP-1质量浓度。采用Western blot法检测正常对照组、IL-1β诱导组及100 μmol/L根皮素组细胞内血红素加...     

Behcet 病患者血清 TNF-α和 IFN-γ及 MCP-1水平的研究

目的：探讨Behcet病（Behcet＇s disease,BD）患者血清TNF-α、IFN-γ、MCP-1的水平。 方法：BD患者25例,对照组为健康志愿献血员30例,抽取血清检测TNF-α、IFN-γ、MCP-1等指标。 结果：BD活动期患者TNF-α、IFN-γ、MCP-1均高于健康对照组,差异有统计学意义。 结论：BD活动期患者TNF-α、IFN-γ、MCP-1异常升高,可能与BD的发病机制有关。     

胰岛素样生长因子-1对甲状腺相关眼病眼眶成纤维细胞的促生长作用

背景 甲状腺相关眼病(TAO)是一种自身免疫性疾病,目前对其发病机制的研究主要集中在共同抗原上.胰岛素样生长因子-1(IGF-1)功能的发挥需要IGF-1受体(IGF-1R)的参与,IGF-1在促甲状腺激素受体(TSHR)的信号传导通路中也起着重要作用. 目的 探讨IGF-1对TAO患者眼眶成纤维细胞(OFs)增生及IGF-1R、TSHR表达的影响,探讨IGF-1在TAO发病机制中的作用. 方法 收集2016年3-6月于四川大学华西医院行TAO眼眶脂肪切除术取得的眶组织标本17例17份及正常人美容手术取得的眼眶组织4人4份,采用含体积分数5％胎牛血清的DMEM/F12培养液培养OFs.分别于培养液中加入不同质量浓度(0、50、100、125 μg/L)的IGF-1,采用MTS比色法绘制OFs生长曲线,评估IGF-1对TAO和正常来源OFs增生的影响;采用流式细胞术测定不同质量浓度IGF-1对TAO和正常来源OFs中IGF-1R、TSHR表达水平的影响.结果 TAO患者与正常人来源的OFs均生长良好,呈梭形,细胞质丰富,TAO患者与正常人来源的OFs形态学特点一致.培养的OFs波形蛋白呈阳性反应,结蛋白、S-100、肌红蛋白和角蛋白均呈阴性反应.不同质量浓度IGF-1作用后TAO组和正常组OFs增生均呈逐渐上升趋势,总体比较差异有统计学意义(F分组=219.639,P＜0.001;F质量浓度=17.752,P＜0.001),以100 μg/L IGF-1的促进作用最强.0、50、100、125 μg/L IGF-1作用后TAO组OFs中IGF-1R表达量分别为(0.009 1 ±0.008 7)％、(0.095 3±0.023 3)％、(0.083 7±0.0227)％和(0.070 9±0.024 1)％,正常组OFs中IGF-1R表达量分别为(0.002 3±0.000 6)％、(0.009 3±0.001 2)％、(0.0073±0.001 5)％和(0.008 3±0.001 2)％,其中50、100和125 μg/L IGF-1作用后各组OFs中IGF-1R表达量均高于无添加IGF-1者,TAO组OFs细胞中IGF-1R的表达量均明显高于正常组,差异均有统计学意义(均P＜0.05);0、50、100和125 μg/L IGF-1作用后TAO组和正常组OFs中TSHR表达量的总体比较差异均无统计学意义(F分组=0.133,P＞0.05;F质量浓度=0.004,P＞0.05). 结论 IGF-1对TAO患者和正常人OFs的生长均有促进作用并能上调OFs中IGF-1R的表达,但其对OFs中TSHR的表达变化无明显影响.     

葡萄膜炎患者血清干扰素-γ、肿瘤坏死因子-α和白细胞介素-6水平的检测及意义

目的 观察急性葡萄膜炎患者治疗前后血清干扰素-γ（IFN-γ）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和白细胞介素-6（IL-6）水平变化，探讨其在急性葡萄膜炎发生发展过程中的作用。方法 连续收集各类急性葡萄膜炎患者75例，用酶联免疫吸附试验测定其急性期和治疗后恢复期血清IFN-γ、TNF-α和IL-6水平，并与同期收集的30例健康人血清IFN-γ、TNF-α和IL-6检测结果进行比较。结果 葡萄膜炎患者急性期血清IFN-γ、 TNF-α和IL-6水平明显高于治疗恢复期和对照者（F=65.805、50.418、155.381，P=0.000），并且与其初诊时视力呈明显负相关（r=-0.656、-0.592、-0.653，P=0.000），3种细胞因子之间呈正相关（r=0.340、0.467、0.338，P＜0.05）。结论 INF-γ、TNF-α和IL-6在急性葡萄膜炎患者血清中明显升高，治疗后均下降，表明这些细胞因子参与了葡萄膜炎的发生和发展过程。     

甲状腺相关眼病患者血清中Th1 Th2型细胞因子平衡偏离的研究

目的 探讨血清中Th1、Th2型细胞因子平衡偏离与甲状腺相关眼病(thyroid-associated ophthalmopathy,TAO)发病、活动性及大剂量糖皮质激素治疗反应的关系.方法 选取TAO患者52例,按CAS评分标准将其分为活动期29例(CAS≥4)和非活动期23例(CAS＜4).其中活动期患者中有22例给予大剂量糖皮质激素治疗;另外选取初诊Graves病患者15例及正常对照15例,收集上述人静脉血,行激素冲击治疗的患者于冲击前后各抽血1次.采用放射免疫法检测血清中IL-4浓度,ELISA法检测IFN γ浓度.比较活动期与非活动期TAO组、GD组以及正常对照组血清上述指标的变化;评价糖皮质激素治疗对上述指标的影响.结果 ①TAO及GD患者血清中IL-4、IFNγ浓度均较对照组明显增高.②活动期TAO与非活动期TAO相比血清中IL-4、IFN7浓度无明显统计学差异,但活动期IL-4/IFN γ比值较非活动期降低,有统计学差异.③22例激素冲击治疗患者中15例有效(CAS减少≥2),7例无效(CAS减少＜2),有效组治疗后血清中IFN γ浓度明显较治疗前降低,IL-4/IFNγ比值增高,而无效组未见明显变化.结论 Th1/Th2在一定程度可以作为TAO活动性判断指标之一,活动期TAO Th2/Th1比值下降,非活动期无明显变化.在一定程度还可以作为大剂量糖皮质激素治疗疗效的判断指标之一,有效者Th2/Th1比值上升,向Th2偏移,无效者治疗前后无明显改变.     

甲状腺相关眼病患者血清中抵抗素水平的测定

目的检测甲状腺相关眼病（TAO）患者血清中抵抗素的表达水平。方法 TAO患者血清样本来自有典型临床症状且近3个月内未服用糖皮质激素和免疫抑制剂的TAO患者35例,按CAS临床活动度评分标准将其分为2组：非活动期（CAS〈4）18例和活动期（CAS≥4）17例,另外选取正常对照组15例。使用ELISA法检测血清中抵抗素蛋白的表达情况。结果活动期与非活动期TAO患者血清中抵抗素水平分别为（12.103±5.042）mg/L和（13.470±3.749）mg/L,差异无统计学意义（t=0.906,P=0.371）;正常对照组血清抵抗素水平为（21.894±10.589）mg/L,非活动期、活动期TAO组血清抵抗素水平分别为（12.103±5.042）mg/L和（13.470±3.749）mg/L,均较正常对照组明显下降（t=3.074,P=0.004;t=3.485,P=0.001）。男女患者血清中抵抗素水平分别为（13.175±4.483）mg/L和（12.335±4.511）mg/L,差异无统计学意义（t=0.552,P=0.585）。随着年龄的增加,血清中抵抗素水平逐渐升高,各年龄组间比较差异有统计学意义（F=24.978,P=0.000）。结论 TAO患者血清中抵抗素水平低于正常人,说明影响血清中抵抗素水平的仍是甲状腺激素,并且血清中抵抗素水平随年龄的增加而升高。     

Expression of human beta-defensins in conjunctival epithelium: relevance to dry eye disease

PURPOSE: The goals of this study were to investigate whether beta-defensins are differentially expressed in the conjunctival epithelium of patients with moderate dry eye when compared with normal subjects and whether proinflammatory cytokines or bacteria can modulate the expression of human beta-defensins (hBDs)-1, -2, and -3 by conjunctival epithelial cells. METHODS: RNA extracted from conjunctival impression cytology specimens of eight normal subjects and nine patients with moderate dry eye was used in RT-PCR to detect mRNA for hBDs-1, -2, and -3. Two conjunctival epithelial cell lines and primary cultured conjunctival epithelial cells were treated with proinflammatory cytokines or heat-killed Pseudomonas aeruginosa. RT-PCR and immunoblot analysis were used to detect mRNA for hBD-1, -2, and -3 and protein secretion of hBD-2, respectively. RESULTS: hBD-2 message was detected in RNA samples of eight of nine patients with dry eye, but not in any of the normal subjects' samples, whereas hBD-1 and -3 were detected in all subjects tested. RT-PCR revealed an upregulation of hBD-2 but no difference in expression of hBD-1 and -3 in cultured conjunctival cells after a 24-hour treatment with 10 ng/mL interleukin (IL)-1beta, IL-1beta and tumor necrosis factor-alpha (10 ng/mL) or heat-killed Pseudomonas aeruginosa (1 million colony-forming units; n = 3). hBD-2 expression was upregulated from 4 hours of treatment with IL-1beta (at 10 ng/mL; (n = 2-3) and at a concentration of 0.1 ng/mL IL-1beta (24-hour treatment; n = 2-3). Immunoblots demonstrated protein secretion results corresponding to the RT-PCR data. CONCLUSIONS: hBD-2 was expressed only in the conjunctival epithelium of patients with moderate dry eye. Because cytokines such as IL-1beta and TNF-alpha induced the expression of hBD-2 by conjunctival epithelial cells and because increased proinflammatory cytokine activity is a feature of dry eye disease, it can be speculated that the hBD-2 upregulation observed in subjects with moderate dry eye is mediated by proinflammatory cytokine activity.     

夏枯草、浙贝提取物对体外培养TAO眼眶成纤维细胞的影响

目的探讨夏枯草、浙贝治疗甲状腺相关眼病（TAO）的机制。方法采用体外培养的正常人和TAO患者的眼眶成纤维细胞,将夏枯草、浙贝提取物、刺激药物干扰素-γ和阳性对照药物地塞米松分成不同质量浓度组,以MTT法、磁性均相化学发光免疫分析法、流式细胞仪检测其对细胞的增生、透明质酸（HA）的分泌以及黏附分子（ICAM-1）表达的影响。结果夏枯草、浙贝提取物具有与地塞米松相似的抑制作用,对于TAO患者HA的分泌,133mg／mL的夏枯草质量浓度组与10ug／mL地塞米松组比较差异无统计学意义（P〉0．05）,但浙贝各质量浓度组较夏枯草和地塞米松弱（P〈0．01）;对于ICAM—1的表达,夏枯草组的抑制作用较地塞米松组弱（P〈0．01）,但较浙贝组强（P〈0．01）。结论夏枯草、浙贝对TAO的治疗作用可能是通过抑制眼眶成纤维细胞的增生、在IFN-γ刺激下HA的分泌和ICAM-1的表达而实现的,且夏枯草作用强于浙贝。     

Significance of serum antibodies reactive with flavoprotein subunit of succinate dehydrogenase in thyroid associated orbitopathy

AIMS: Thyroid associated orbitopathy (TAO) is an autoimmune disorder of extraocular muscles and orbital connective tissue. Identification of the principal target antigens would help the understanding of the pathogenesis of the disease and possibly lead to the development of specific therapies in the future. The purpose of this study was to measure serum antibodies against the flavoprotein subunit of succinate dehydrogenase in patients with TAO and correlate their presence with factors of TAO. METHODS: Sera of patients with active TAO of 6 months' duration or less were tested for antibodies against the flavoprotein subunit of succinate dehydrogenase. Clinical data were obtained by retrospective review of patients' charts. Enzyme linked immunosorbent assay was used to test sera for serum antibodies against purified succinate dehydrogenase. RESULTS: 38 patients with TAO and 32 healthy age and sex matched controls were included in the study. Anti-flavoprotein antibodies were detected in 24 out of 38 patients with TAO (63.16%) and in five out of 32 healthy controls (15.63%) (p<0.01). Neither age, sex, duration of thyroid disease, thyroid status, treatment of thyroid disease, smoking history, duration of orbitopathy, activity of orbitopathy, nor the presence of lid retraction were significantly associated with the presence of serum anti-flavoprotein antibodies (p>0.05). However, the total number of rectus muscles affected in both eyes of the patients was significantly correlated with the finding of a positive antibody test (p<0.05). CONCLUSIONS: Serum antibodies reactive with the flavoprotein subunit of succinate dehydrogenase are associated with extraocular muscle involvement in active TAO of recent onset.