定量检测婴儿尿液巨细胞病毒DNA的临床意义

目的 探讨荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测尿液巨细胞病毒(CMV)在儿科CMV感染诊断治疗中的意义.方法 应用FQ-PCR方法检测婴儿尿液CMV DNA量.结果 (1)280例疑似CMV感染儿有126例尿液中CMVDNA呈阳性,阳性率是45.0%,为症状性CMV感染儿;同年龄组的70例健康儿童尿液中CMV DNA阳性5例,阳性率是7.1%,为无症状性CMV感染儿.症状性感染儿尿液中CMVDNA拷贝数对数值(4.78±0.85)与无症状性感染儿(4.45±1.02)之间差异无显著性(P＞0.05).(2)90例症状性CMV感染儿应用更昔洛韦诱导治疗结束时尿液CMV DNA拷贝数对数值(3.74±0.58)较治疗前(4.64±0.90)明显减少(P＜0.01),临床症状改善.(3)45例症状性CMV感染儿在治疗后3个月CMVDNA拷贝数对数值(4.41±0.74)较治疗结束时(3.67±0.58)升高(P＜0.01).临床症状明显改善.结论 FQPCR方法检测婴儿尿液中CMVDNA量可以诊断CMV感染,但是不能区分CMV感染是症状性感染还是无症状性感染;应避免盲目反复应用更昔洛韦治疗CMV感染.     

荧光定量聚合酶链式反应法检测婴儿尿液人巨细胞病毒DNA对人巨细胞病毒感染的诊断意义

目的探讨荧光定量聚合酶链式反应（FQ-PCR）方法检测婴儿尿液人巨细胞病毒（HCMV）DNA水平对婴儿HCMV感染的诊断价值。方法采用FQ-PCR检测348例临床疑似HCMV感染婴儿尿液中HCMVDNA水平。同时采用化学发光免疫分析法（CLIA）检测婴儿血清HCMV-IgM抗体。在尿液HCMVDNA检测阳性患儿中比较血清HCMV-IgM抗体检测阳性与阴性患儿尿液中HCMVDNA拷贝数差异。结果FQ-PCR检测尿液HCMVDNA的阳性率为41.74%,CLIA检测婴儿血清HCMV-IgM抗体的阳性率为19.83%。2种方法对HCMV感染诊断的符合率为76.7%。前者诊断阳性率显著高于后者（χ^2=69.44P〈0.01）。在尿液HCMVDNA检测阳性患儿中,IgM抗体阳性组尿液HCMVDNA拷贝数显著高于阴性组（P〈0.01）。结论FQ-PCR检测尿液HCMVDNA是早期诊断婴儿HCMV感染的敏感有效的方法。HCMV感染婴儿尿液中高HCMVDNA拷贝数与活动性HCMV感染密切相关;FQ-PCR方法检测尿液HCMVDNA水平对于判断是否为HCMV活动性感染具有一定意义。     

荧光定量PCR在婴儿巨细胞病毒感染诊断和治疗监测中的价值

巨细胞病毒(CMV)感染在人群中广泛流行,免疫功能异常的个体易受到感染,在新生儿和小婴儿中发病率很高。小婴儿受到CMV感染后易引起神经系统异常,因此及时诊断和治疗尤为重要。目前用于诊断CMV感染以及治疗监测中最常用的方法为荧光定量PCR法,该法敏感性和特异性较高,且操作简便不易受其他物质污染,是目前临床应用的一线方法。     

实时定量PCR技术与短时培养法检测尿样本HCMV的比较

目的建立实时定量PCR系统定量检测尿样本中HCMV并与短时培养快速诊断半定量法比较。方法根据HCMVul123基因保守区设计特异性引物和taqman探针,以GAPDH为内参照校准所检测样本的细胞数,建立实时定量PCR检测系统,定量检测132份尿标本中HCMV拷贝数与短时培养结果比较,并同时分析19例接受更昔洛韦治疗前后尿排毒量的变化。结果132份尿标本实时定量PCR结果:短时培养(-)组HCMVDNA为(83±155)拷贝/5×105细胞(n=16例),( )组为(571±231)拷贝/5×105细胞(n=26例),( )组为(792±303)拷贝/5×105细胞(n=35例),( )组为(1126±416)拷贝/5×105细胞(n=16例),( )组为(2201±1043)拷贝/5×105细胞(n=9例);19例38份更昔洛韦治疗前后尿样本中3例治疗前后短时培养结果无改变,而实时定量结果明显改变。结论实时定量PCR法比短时培养法更适于评价抗病毒疗效,而短时培养法判断HCMV是否为活动感染优于实时定量PCR法。     

Quantitative detection of HCMV-DNA in saliva from infants and breast milk on real-time polymerase chain reaction

Background:  The role of breast milk in viral transmission has not been fully studied. To determine the effect of breast milk on the establishment of primary human cytomegalovirus (HCMV) infection in term infants, HCMV-DNA was measured in breast milk and infant saliva.
Methods:  The study population consisted of 48 healthy term infants and their mothers. The copy number of HCMV-DNA in the infants' saliva and mothers' milk was measured on quantitative real-time polymerase chain reaction (PCR).
Results:  HCMV-DNA was detected in both saliva and breast milk from 21 infant–mother pairs, in milk only from four pairs, in saliva only from 12 pairs, and in neither from 11 pairs. HCMV-DNA was first detected in the saliva of 10 infants at age 4 months, seven infants at 7 months, 13 infants at 10 months, and three infants at 12 months. The viral loads peaked 4–10 months after birth, and thereafter decreased or became negative. The peak copy number and rate of HCMV-DNA detection in saliva were significantly related to peak copy number and rate of detection in the corresponding breast milk.
Conclusion:  Thus, HCMV passed through breast milk 1–7 months after delivery affects the persistence and level of HCMV-DNA in infant saliva and is the most important route of primary infection.     

套式聚合酶链反应加限制酶分析检测母婴巨细胞病毒感染

为评价套式聚合酶链反应（套式ＰＣＲ）加限制酶分析在孕妇巨细胞病毒感染及其母婴宫内传播检测中的应用，采用套式ＰＣＲ加限制酶分析，病毒分离、电镜观察和特异性抗体测定，对各孕期孕妇外周血，脐血及死胎组织进行人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）检测。结果：３６７名孕妇ＨＣＭＶ阳性检出率为５．５％，其中，套式ＰＣＲ检出率（４．９％）高于病毒分离（３．０％，Ｐ＜０．０５）。６份ＨＣＭＶＤＮＡ阳性母血中，３份配对脐血ＨＣＭＶＤＮＡ也阳性，母－脐传播率为３／６。３对被证实为母－婴宫内传播ＨＣＭＶ的标本中，２对套式ＰＣＲ，病毒分离及特异性ＩｇＭ、ＩｇＡ均阳性，１对套式ＰＣＲ、病毒分离、特异性ＩｇＡ阳性，ＩｇＭ阴性。提示：套式ＰＣＲ能提高诊断ＨＣＭＶ的特异性与敏感性，对孕妇及胎儿／新生儿ＨＣＭＶ感染的研究有重要意义。     

血友病B的基因突变研究

为探讨血友病B基因突变，以指导产前诊断，应用聚合酶链反应（PCR）及基因扩增转录序列（GAWTS）检测了8例血友病B患儿及7例家系女性成员的因子Ⅸ基因突变，结果是4例为单碱基替换；3例为单碱基、双碱基或三碱基的丢失；1例为碱基插入。其中6例是文献上未曾报告过的新发现突变病例。5例患儿的母亲及1例患儿的姐和妹携带有与患儿相同的突变基因。提示此研究对本病的产前基因诊断具有重要意义。     

应用聚合酶链反应技术检测微量残留白血病

为早期诊断和检测白血病患儿体内微量残留白血病（MRD），应用聚合酶链反应（PCR）技术及生物素标记克隆特异性探针斑点杂交方法，检测45例初发或复发急性白血病患儿免疫球蛋白重链（IgH）基因重排产生的第3互补决定区（CDR-Ⅲ），并对6例完全缓解患儿进行随访。结果表明，28例B-系急性淋巴细胞白血病（ALL）中25例（89．3％），9例T-系ALL中2例（22．2％）及1例粒-淋双标记白血病检出克隆性CDR-Ⅲ重排片段，7例急性非淋巴细胞白血病（ANLL）未见有意义的扩增带。6例完全缓解中，1例PCR扩增产物电泳后检测为阳性，但斑点杂交6例均显示阳性结果，且彼此间无交叉反应，检测肿瘤细胞的敏感度达10－5。研究提示本方法对早期诊断和监测MRD有重要意义。     

粤东地区住院小儿急性下呼吸道感染病毒病原学研究

目的：了解2007年粤东地区住院小儿下呼吸道感染患儿的病毒病原现状并比较各个年龄组、不同季节、不同病种的病毒检出情况。方法：选择因急性下呼吸道感染住院治疗的小儿345例,取其鼻咽抽吸物采用多重PCR方法以筛查呼吸道合胞病毒,腺病毒,流感病毒A型、B型,副流感病毒1型、3型,鼻病毒,博卡病毒及人类偏肺病毒。结果：①病毒总检出率为51.6%(178/345),其中呼吸道合胞病毒占首位,病毒检出率为19.3%（66/345）,而人类偏肺病毒为3.2%(11/345),博卡病毒为3.2%(11/345)。②1～3月份(阳性率为61.9%)、毛细支气管炎患儿(阳性率为72.6%)、1～6个月婴幼儿(阳性率为71.3%)病毒检出率较高,4～6月份(阳性率为40.2%)、3岁以上儿童(阳性率为19.0%)病毒检出率较低,呼吸道感染病毒病原的总阳性率与性别无关。结论：粤东地区小儿下呼吸道感染的主要病毒病原为呼吸道合胞病毒等常见病毒,此外博卡病毒及人类偏肺病毒等也是重要的病原体;年龄越小,阳性率越高,不同季节的呼吸道病毒检出率不同,毛细支气管炎患儿的病毒总检出率最高。［中国当代儿科杂志,2009,11（3）：203-206］     

Perinatal or early-postnatal cytomegalovirus infection in preterm infants under 34 weeks gestation born to CMV-seropositive mothers within a high-seroprevalence population

In a prospective study, we evaluated the frequency, correlates, and clinical significance of perinatal or early-postnatal cytomegalovirus (CMV) infection in <34-week-gestation infants (n=95) born to CMV-seropositive mothers. None had congenital CMV infection. Overall, 21 (22.1%; 95% CI=14.2-31.8) infants were found to be infected; 10 excreted CMV at <60 days, and 11 had later excretion. Blood transfusion, birth weight, and vaginal delivery were not associated factors. Receiving natural breast milk within the first 30 days (OR=4.5, P=.02) or for >30 days (OR=7.9, P <.01) was associated with infection. Only one (4.8%) of the infected infants was symptomatic. For <34-week-gestation infants, frequency of perinatal and early-postnatal CMV infection is high. Early or prolonged exposure to breast milk is an associated factor. However, most infections are asymptomatic, indicating that CMV infection in preterm infants within such a population is a serious problem infrequently.     

肾病综合征患儿系膜增殖性肾炎人类白细胞抗原DR基因频率

利用寡核苷酸探针杂交技术及聚合酶链反应技术，检测了临床表现为肾病综合征的36例患儿人类白细胞抗原（HLA）－DR基因频率的分布；其中9例为IgA肾病，27例为非IgA系膜增殖性肾炎。分别与255例正常汉族人HLA－DR基因频率进行比较，发现IgA肾病患儿HLA－DR4基因频率明显高于正常人［DR4：19．4％vs9．0％，Pc＜0．05，相对危险系数（OR）=2．98］；而非IgA系膜增殖性肾炎HLA－DR12（5）基因频率明显高于正常人[DR12（5）：13．9％vs3．9％，Pc＜0．01，OR=4．52]。提示HLA－DR4、HLA－DR12（5）分别与临床表现为肾病综合征的儿童IgA肾病和非IgA系膜增殖性肾炎具有明显相关性。     

尿中乙型肝炎病毒DNA检测对小儿乙肝相关性肾炎诊断价值研究

目的　探讨尿中乙肝病毒DNA(HBV DNA)的检测对诊断小儿乙肝病毒相关性肾炎 (HBV GN)的意义。方法　应用聚合酶链式反应 (PCR)、免疫荧光 (IF)及原位杂交法 (ISH)检测患儿血清和尿中HBV DNA及肾活检石蜡包埋组织切片中HBV抗原与HBV DNA的存在状况。结果　 32例患儿经血清HBV DNA与肾组织中HBV抗原检测 ,符合HBV GN诊断的 19例 ,其中 11例经ISH检测发现肾活检石蜡包埋组织切片中HBV DNA阳性 ,13例尿HBV DNA阳性 ,阳性率分别为 5 7 9%、6 8 5 %。结论　检测肾小球疾病患儿尿中HBV DNA可协助HBV GN的临床诊断     

逆转录聚合酶链反应快速检测呼吸道合胞病毒

为探索一种快速、可靠的呼吸道合胞病毒（ＲＳＶ）的检测方法，对逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）技术检测ＲＳＶ进行研究。结果：ＲＴ－ＰＣＲ方法可检出病毒量为１０ＴＣＩＤ５０／ｍｌ（ＴＣＩＤ５０为半数组织培养感染量）；用于扩增Ｆ蛋白基因的引物经计算机基因库检测与其他病毒无同源性，实验同步扩增其他常见呼吸道感染病毒均无阳性扩增带；实验过程６小时内完成。在ＲＳＶ好发季节对５３例拟诊为病毒性急性下呼吸道感染婴儿咽拭子进行检测，ＲＳＶ阳性２８例（５２．８％）。提示ＲＴ－ＰＣＲ方法检测ＲＳＶ具有快速、敏感性高、特异性好等特点，适合于临床应用。