电压门控钠通道Nav1.6在骨癌痛模型大鼠背根神经节中的表达

目的建立大鼠胫骨癌痛模型,并观察电压门控钠通道亚型Nav1.6在其背根神经节(DRG)中的表达。方法雌性Wistar大鼠随机分为3组:癌痛组(n=15)大鼠左胫骨骨髓腔内注射Walker256乳腺癌细胞,假手术组(n=10)注射生理盐水,以正常大鼠作为空白对照组(n=10)。于造模后第4、8、12、16、20日,观察大鼠体质量变化,评估机械性痛觉过敏以及热痛觉过敏。造模后20 d,取接种侧胫骨做病理切片,观察肿瘤生长情况,real-time PCR检测大鼠L5~L6DRG中Nav1.6 mRNA的表达。结果癌痛组大鼠出现进行性加重的疼痛行为学改变,癌痛组大鼠DRG中Nav1.6 mRNA的表达量明显高于假手术组和空白对照组(P<0.05)。结论 Walker256乳腺癌细胞制备的大鼠胫骨癌痛模型是骨转移瘤相关疼痛较可靠的模型。Nav1.6mRNA在骨癌痛模型大鼠DRG中的表达上调,提示该通道可能参与骨癌痛的发生过程。     

Nav1.7、Nav1.8和交感芽生在大鼠SNI模型神经病理性疼痛形成过程中的作用

目的 探讨部分神经损伤(spared nerve injury,SNI)致神经病理性疼痛过程中背根神经节(dorsal root ganglion,DRG)内Nav1.7、Nav1.8以及交感神经芽生之间的关系。方法 将实验大鼠随机分为对照组(Control组,n=18)和手术组(SNI组,n=18),于术后第3、7、14、21天测机械痛阈(mechanical withdrawal threshold,MWT),于术后7天和21天取术侧腰段DRG,分别检测Nav1.7、Nav1.8、生长相关蛋白43(growth-associated protein 43,GAP43)、酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)的mRNA表达及蛋白含量,并且进行荧光染色。结果 与对照组相比,SNI组MWT降低,且呈时间依赖性。SNI术后7天DRG中Nav1.7、Nav1.8、GAP43和TH的mRNA表达和蛋白含量同步增加。免疫荧光半定量发现Nav1.7、Nav1.8、GAP43在SNI术后21天中大直径神经元异常表达增多。TH与Nav1.7、Nav1.8阳性神经元周围形成篮状结构。结论 坐骨神经损伤后DRG内中、大型神经元的交感神经芽生及篮状结构与其Nav1.7、Nav1.8同步增加有关。这一现象可能是神经病理性疼痛异常形成的因素之一。     

手术创伤对大鼠海马中β淀粉样前体蛋白和β淀粉样蛋白表达的影响

目的 探讨手术创伤对大鼠海马中β淀粉样前体蛋白(App)、β淀粉样蛋白(Aβ)表达的影响.方法 49只SD大鼠随机分成对照组(A组,n=7)、假手术组(B组,n=21)、肝部分切除术组(C组,n=21),B、C组大鼠分别在术后24 h、3 d、7 d三个时间点取左侧海马(n=7),放射免疫法测Aβ,取右侧海马热启动荧光定量PCR测AppmRNA.结果 (1)肝部分切除术后24h大鼠海马中App770(Ct)/GAPDH(Ct)为(1.39±0.05),低于对照组和假手术组(P＜0.05),说明此时App770mRNA的表达增加.但是手术对于App695mRNA、App751mRNA以及App770mRNA在其他时间的表达没有影响.假手术组App695mRNA、App751mRNA、App770mRNA的表达与对照组差异无显著性(P＞0.05).(2)肝部分切除术组大鼠海马中Aβ的表达在术后24h、3d、7d分别为(58.3±2.6)pg/ml、(48.0±3.7)pg/ml、(27.2±3.6)pg/ml,明显高于对照组和假手术组,(P＜0.05).在相应的时间点中,假手术组与对照组没有差异(P＞0.05).结论 肝部分切除术后大鼠海马中App770mRNA的表达增加,Aβ表达水平上调.     

大鼠炎症牙髓中钠离子通道Nav1.7的表达

目的：探讨大鼠炎症牙髓中钠离子通道Nav1.7的表达。方法60只SD大鼠分为正常组( A组)和炎症组,炎症组中,封脂多糖(LPS)1 d为B组、3 d为C组、5 d为D组。炎症组通过置入LPS诱导产生牙髓炎。通过HE染色观察各组大鼠牙髓组织病理学改变,通过免疫组化和ELISA检测各组大鼠牙髓中Nav1．7的表达。结果各组牙髓组织病理学发生改变,各组牙髓切片中均有Nav1．7的表达。 ELISA结果显示,4组牙髓中Nav1．7的表达量分别为(3．38±0．10)、(3．67±0．15)、(4．04±0．14)和(4．25±0．11)μg/L,各组间差异有统计学意义(P<0．05)。结论 Nav1．7的表达增高可能与牙髓炎症具有潜在关联性。     

诱发癫痫持续状态后基质金属蛋白酶-2在小鼠海马与皮层中的表达

目的：观察氯化锂-匹罗卡品所致癫痫持续状态（status epilepticus,SE）小鼠皮层和海马基质金属蛋白酶-2（matrix met－alloproteinases-2,MMP-2）的表达变化,探讨 MMP-2在癫痫发病机制中的作用。方法：选用成年雄性C57/BL6小鼠 48只,并随机分成实验组和对照组。实验组小鼠腹腔注射氯化锂-皮罗卡品制备SE模型,在确定模型成功后8 h采取动物标本进行检测。使用 RT-PCR测定 MMP-2 mRNA含量变化,Western blot检测 MMP-2蛋白表达变化,免疫组化观察 MMP-2分别在海马与皮层的分布规律与特点。结果：（1）海马组织中,对照组与实验组MMP-2 mRNA的表达分别为 0.155 5±0.018 1和 0.743 1±0.014 4,皮层组织中的表达分别为0.204 9±0.018 5和0.871 6±0.037 0,实验组MMP-2 mRNA的表达均比对照组高,差异有统计学意义（t=-45.60,P=0.000;t=-71.83,P=0.000）。（2）MMP-2蛋白水平的表达,在海马组织中分别为 0.084 5±0.009 6和 0.728 4±0.245 1,在皮层组织中对照组与实验组分别为 0.155 6±0.003 9和0.912 5±0.027 7,实验组MMP-2蛋白的表达均明显高于对照组,差异有统计学意义（t=-76.52,P=0.000;t=-6.99,P=0.000）。（3）免疫组化结果显示,实验组MMP-2在皮层广泛表达,在海马的表达增加主要以 CA1、齿状回、CA3区为主。结论：SE后小鼠海马及皮层内MMP-2在mRNA和蛋白水平的表达均明显升高,表达增加的区域以海马CA1、齿状回及CA3区为主,提示 MMP-2与癫痫的发生、发展可能有着密切的关系。     

丙戊酸镁干预对癫痫幼鼠海马区B1及B2激肽受体表达的影响

目的 观察丙戊酸镁对氯化锂-匹罗卡品癫痫幼鼠模型海马区B1及B2激肽受体表达的影响并探讨其作用机理.方法 健康幼鼠35只,采用氯化锂-匹罗卡品腹腔注射法制作癫痫模型,癫痫模型干预组15只,分为急性期丙戊酸镁干预组(12h,Ⅰ组)、静止期丙戊酸镁干预组(5d,Ⅱ组)、慢性期丙戊酸镁干预组(60d,Ⅲ组),每组5只；癫痫模型无干预组15只,分为急性期无干预组(6h,Ⅰa组),静止期无干预组(5d,Ⅱa组),慢性期无干预组(60d,Ⅲa组),每组5只；设置空白对照组5只(Ⅳ组).丙戊酸镁均经鼻饲管给药,在干预后的相应时间点处死动物取海马标本,应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)及western blot方法分别检测各组动物不同时间点海马区的B1及B2激肽受体的表达变化,并相互进行比较.结果 给予丙戊酸镁干预后,与Ⅰ a组(0.76±0.068、0.89 ±0.034;0.28 ±0.034、0.32 ±0.039)比较,Ⅰ组B1激肽受体mRNA(0.38 ±0.051)及蛋白质表达(0.58 ±0.057)均显著下调,差异有统计学意义(P＜005),Ⅰ组B2激肽受体mRNA(0.48±0.056)及蛋白质表达(0.48±0.044)均显著上调,差异有统计学意义(P＜0.05)；与Ⅱa组(0.58±0.059、0.69±0.046;0.47±0.046、0.58 ±0.052)比较,Ⅱ组B1激肽受体mRNA(0.23±0.044)及蛋白质表达(0.39±0.034)显著下调,差异有统计学意义(P＜0.05),B2激肽受体mRNA(0.69 ±0.063)及蛋白质表达(0.79 ±0.063)显著上测,差异有统计学意义(P＜0.05)；与Ⅲa组(0.70±0.052、0.80±0.048)比较,Ⅲ组B2激肽受体mRNA(0.89 ±0.031)及蛋白质表达(0.91±0.031)显著上调,差异有统计学意义(P＜0.05)；与对照组比较,B1及B2激肽受体蛋白质表达Ⅰ a组、Ⅱa组均显著增高,差异有统计学意义(P＜0.05),Ⅲa组B2激肽蛋白质表达(0.80±0.048)亦显著上调,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 丙戊酸镁能降低海马区B1激肽受体表达,上调B2激肽受体表达,其保护机制与B激肽受体表达有关.     

同种异体骨髓间充质干细胞在大鼠体内心肌缺血微环境中Nav1.5的表达

目的 观察大鼠同种异体骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)在体内心肌缺血微环境中向心肌细胞分化过程中Nav1.5的分化表达. 方法 采用左冠状动脉前降支(left anterior descending coronary artery,LAD)结扎术建立大鼠急性心肌梗死(myocardial infarction,MI)模型(n=50),将绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)转染标记MSCs,并贴壁培养,用心外膜下注射的方法将GFP标记的MSCs移植到心肌梗死周边区;通过免疫荧光染色观察移植后3,5,7d移植的MSCs上Nav1.5蛋白的表达;应用激光捕获显微切割技术分离移植后3,5,7d心肌组织中GFP标记的MSCs群,应用realtime PCR测定移植后3,5,7 d Nav1.5及未移植MSCs mRNA的相对表达量;对移植后9d的移植区域行TUNEL凋亡染色.结果 免疫荧光染色观察移植的MSCs于移植后3,5,7d均不表达Nav1.5;real-time PCR测定显示Nav1.5相对表达量在移植后3,5,7d之间比较及分别与未移植的MSCs相比均无明显变化(P＞0.05);移植的MSCs于移植后9d在心肌组织中几乎观察不到,TUNEL凋亡染色显示移植的MSCs发生了凋亡. 结论 在大鼠体内心肌缺血微环境中移植的同种异体MSCs不表达Nav1.5且不能长期存活.     

电压门控钠通道Nav1.6表达与结直肠癌异时性肝转移的关系

目的 探讨电压门控钠通道Nav1.6表达与结直肠癌(CRC)异时性肝转移的关系。方法 选取衢州市人民医院2016年6月至2018年12月收治的CRC患者88例,收集术中切除的CRC组织样本,采用组织芯片技术和免疫荧光法检测Nav1.6表达情况,比较有、无异时性肝转移患者临床病理特征,采用多因素logistic回归分析CRC患者合并异时性肝转移的影响因素,采用Spearman秩相关分析CRC患者Nav1.6阳性表达率与N分期的相关性。结果 随访2年出现异时性肝转移13例,无肝转移75例。有、无异时性肝转移患者在N分期、脉管浸润、Nav1.6阳性表达率等方面比较,差异均有统计学意义(均P<0.05);在性别、年龄、BMI、肿瘤位置、术后病理分期、神经累犯等方面比较,差异均无统计学意义(均P>0.05)。N分期(OR=3.807,95%CI:1.387～10.451,P<0.05)、Nav1.6阳性表达率(OR=1.075,95%CI:1.016～1.137,P<0.05)是CRC患者合并异时性肝转移的独立影响因素。CRC患者Nav1.6阳性表达率与N分期呈正相关(r...     

颞叶癫痫大鼠海马Akt蛋白表达变化的研究

目的动态观察颞叶癫痫大鼠神经元磷酸化Akt(phospho-Akt)蛋白的表达变化,探讨其在癫痫发生发展中的作用。方法清洁级SD雄性成年大鼠36只,随机分为正常对照组、诱发大鼠癫痫持续状态(statusepilepticus,SE)后3h、6h、12h、24h、3d组。用氯化锂LiCl和匹罗卡品(PILO)制备癫痫动物模型,应用免疫组织化学染色技术检测致痫后各时间点磷酸化Akt蛋白表达情况。结果免疫组织化学法显示正常组与假手术组大鼠海马CA1、CA3区可见少量磷酸化Akt阳性细胞,两组间差异无统计学意义(P>0.05);模型组可见CA1、CA3区Akt阳性细胞增加(P<0.01),6h达到高峰,3d回到对照组水平。结论上调磷酸化Akt蛋白表达有利于减少海马神经元凋亡,可能是保护神经损伤的机制之一。     

Nav1.6-RNAi通过AKT通路抑制口腔鳞癌细胞增殖作用研究

目的 探讨Nav1.6-RNAi对口腔鳞状细胞癌细胞增殖作用的影响,并分析其可能相关机制.方法 使用免疫组化、Western blot和qRT-PCR法检测电压门控钠通道Nav1.6在口腔鳞状细胞癌组织中的表达情况;将Nav1.6-RNAi转染到人舌鳞癌细胞株(CAL-27细胞)中,使用Western blot法检测Nav1.6、CyclinD1、C-myc、AKT及p-AKT的表达,并通过流式细胞仪检测细胞周期.结果 免疫组化、Western blot和qRT-PCR结果证实Nav1.6在口腔鳞状细胞癌组织中表达高于口腔正常组织(P＜0.05);Nay1.6-RNAi转染到CAL-27细胞中后,CyclinD1、C-myc、p-AKT蛋白表达降低(P＜0.05),且S期细胞明显减少.结论 电压门控钠通道Nav1.6可能通过AKT通路参与口腔鳞状细胞癌的增殖.     

鞘内注射芬太尼对急性炎性内脏痛大鼠背根神经节Nav1.8表达的影响

目的 探讨鞘内注射芬太尼对急性炎性内脏痛大鼠背根神经节(DRG)电压门控Nav1.8的影响.方法 将24只SD大鼠,用随机数字表法分为3组,每组8只,腹腔注射乙酸建立急性炎性内脏痛模型,实验中经L3、L4的留置管给药.对大鼠进行行为学评分,灌注取材L5或L6DRG,用免疫荧光染色方法观察Nav1.8表达的变化.结果 单...     

阻断Nav1.8通道对右侧星状神经节的影响

目的 研究利用电压门控钠离子通道1.8(Nav1.8)特异性阻断剂A-803467局部阻断Nav1.8对右侧星状神经节(RSG)的影响.方法 24只成年家犬随机分为对照组(DMSO)、低浓度组、中浓度组和高浓度组,每组6只,向RSG内局部分别注射0.1 mL DMSO和低(10 mmol/L)、中(15 mmol/L)、高浓度(20 mmol/L)的A-803467,并在注射前和注射后30 min测定由高频刺激RSG引起的最大心率的变化情况和RSG的神经活性频率和振幅变化情况.以刺激电压为横坐标,心率变化的最大百分比为纵坐标绘制出的电压-心率反应曲线以反映RSG的功能情况.结果 在基础状态时,对照组和低、中、高浓度组的RSG功能和神经活性比较,差异均无统计学意义(P>0.05);在注射A-803467后30 min,可观察到电压-心率反应曲线明显钝化,RSG功能显著降低,RSG神经活性频率和振幅明显减小,差异均有统计学意义(P<0.05).且A-803467的浓度越高,电压-心率反应曲线钝化程度越大,RSG功能降低越显著,频率和振幅越小.结论 阻断Nav1.8通道可以抑制RSG功能和神经活性,且阻断剂浓度越大,抑制效应越强.     

不同培养条件下大鼠背根神经节细胞Nav1.8基因的表达

目的:观察体外培养大鼠背根神经节在不同培养条件下的生长情况及Nav1.8 mRNA表达水平,为进一步研究Nav1.8基因的功能提供基础。方法:取新生SD大鼠背根神经节细胞体外培养,观察胎牛血清(FBS)和马血清(HS),以及外源性神经生长因子(NGF)添加于培养基12 h,24 h,48和72 h突触神经元生长情况,并利用RT-PCR方法观察不同培养条件下Nav1.8mRNA表达水平的变化。结果:FBS NGF组及HS NGF组Nav1.8的表达水平明显都高于未添加NGF的FBS组和HS组,FBS组和HS组间比较无明显差异。结论:培养基中血清成分为FBS或FBS HS不影响细胞生长及Nav1.8的表达,而NGF可显著促进细胞突触的生长,并上调Nav1.8的表达。     

Nav1．7在福尔马林足底炎性疼痛大鼠模型背根神经节中表达的研究

目的观察电压门控钠离子通道1．7（Nav1．7）在福尔马林足底炎性疼痛大鼠模型背根神经节中的表达。方法SD大鼠24只,随机分为2组,空白对照组（n=12）及福尔马林模型组（n=12）。空白对照组左后足底注射0．1mL生理盐水,模型组于左后足底注射5％福尔马林0．1mL,各组大鼠在指定时间点取出L3-L6节段背根神经节,运用实时荧光定量（RT—PCR）、蛋白质印迹（Westernblot）检测Nay1．7在大鼠背根神经节中的表达水平。结果各时相点中模型组大鼠背根神经节Nav1．7mRNA及蛋白表达显著增加,与空白组比较有显著统计学意义（P〈0．01）。结论福尔马林致炎性疼痛大鼠模型背根神经节中Nav1．7表达增强,与炎性疼痛相关。     

Nav1.6在口腔颌面部鳞状细胞癌组织中的表达

目的：探讨 Nav1.6在口腔鳞状细胞癌组织中的表达,以及 Nav1.6在口腔鳞状细胞癌发生中的相关性。方法采用免疫组化 SP 法、荧光定量 PCR 法,对50例口腔鳞癌组织及16例非癌症组织中 Nav1.6表达进行检测,利用仪器对结果进行分析。结果口腔鳞癌组织中 Nav1.6的表达量高于非癌症组织。随着分化程度的增高,Nav1.6的表达量逐渐减少。其表达量与患者年龄、性别、肿瘤部位、有无淋巴结转移无关。结论 Nav1.6的上调可能与口腔鳞癌的生物学行为有关,其作用机制有待进一步研究。     

Functional expression of voltage-gated sodium channels Nav1.5 in human breast caner cell line MDA-MB-231

Voltage-gated sodium channels （VGSCs） are known to be involved in the initiation and progression of many malignancies, and the different subtypes of VGSCs play important roles in the metastasis cascade of many tumors. This study investigated the functional expression of Nav1.5 and its effect on invasion behavior of human breast cancer cell line MDA-MB-231. The mRNA and protein expression of Nav1.5 was detected by real time PCR, Western Blot and immunofluorescence. The effects of Nav1.5 on cell proliferation, migration and invasion were respectively assessed by MTT and Transwell. The effects of Nav1.5 on the secretion of matrix metalloproteases （MMPs） by MDA-MB-231 were analyzed by RT-PCR. The over-expressed Nav 1.5 was present on the membrane of MDA-MB-231 cells. The invasion ability in vitro and the MMP-9 mRNA expression were respectively decreased to （47.82±0.53）% and （43.97±0.64）% （P〈0.05） respectively in MDA-MB-23 t cells treated with VGSCs specific inhibitor tetrodotoxin （TTX） by blocking Navl.5 activity. It was concluded that Navl.5 functional expression potentiated the invasive behavior of human breast cancer cell line MDA-MB-231 by increasing the secretion of MMP-9.     

SiRNA抑制大鼠背根神经节神经元电压依赖型钠通道Nav1.8表达的实验研究

目的 应用小片段干扰RNA(SiRNA)转染原代培养背根神经节(DRG)神经元,观察SiRNA干扰DRG神经元基因Nav1.8表达的有效性.方法 根据RNA干扰的原理及SiRNA的设计原则,设计2个长度为21 bp的以Nav1.8基因为靶点的SiRNA(SiRNAa和SiRNAb),另选择相同长度的无义双链RNA作为阴性对照RNA.T7 RNA聚合酶的作用下体外转录合成SiRNA,阳离子脂质体转染试剂将SiRNA导人体外培养DRG神经元,于转染后48 h提取RNA,采用RT-PCR和荧光定量PCR检测Nav1.8基因的表达情况.结果 在靶向Nav 1.8的两个SiRNA序列中,SiRNAa转染神经元后导致Nav1.8基因表达显著降低(48.32±6.84)％,SiRNAb使Nav1.8表达降低(23.32±3.19)％,P均＜0.01,阴性对照SiRNA对Nav1.8的表达不产生影响.结论 利用体外转录合成的SiRNA成功转染原代培养的DRG神经元,并诱导产生内源性Nav1.8基因的特异性表达抑制.具有较高干扰效应的SiRNA片段可应用于抑制Nav1.8基因表达,进而研究Nav1.8的功能及在疼痛治疗中的作用.     

A型肉毒毒素调控钠离子通道Nav1.8缓解神经病理性疼痛的作用

摘 要: 【目的】 研究A 型肉毒毒素(BoNT/A)对腰5脊神经前根切断(L5 VRT)介导的神经病理性疼痛的影响,并进一步探讨其可能的内在作用机制?【方法】 利用行为学测试方法观察BoNT/A足底注射后对L5 VRT大鼠机械刺激撤足阈值的影响,采用Western blot方法分析BoNT/A对L5 VRT术后背根神经节(DRG)神经元中钠离子通道(Nav1.8)蛋白表达的影响,并进一步应用全细胞膜片钳技术观察BoNT/A对DRG神经元中功能性Nav1.8电流密度的影响?【结果】 一侧足底注射7?15 U/kg的BoNT/A 1 d后可显著缓解L5 VRT介导的机械触诱发痛症状,且作用时间至少持续至给药后14 d;BoNT/A可显著下调 L5 VRT术后 DRG神经元中Nav1.8蛋白表达水平,并可明显降低功能性Nav1.8电流密度? 【结论】 BoNT/A可能通过下调DRG神经元中Nav1.8蛋白表达,降低功能性Nav1.8电流,发挥缓解神经病理性疼痛的作用?