Caco-2细胞单层模型的建立与验证

 目的研究建立Caco-2细胞模型的方法,并确认Caco-2细胞模型的正常生长特性,以在日常培养中进行监控。方法常规培养条件下,Caco-2细胞以每1 mL含8×10⁴个的接种密度接种于Millicell插入式培养皿中,培养21 d后用光镜、电镜、细胞密度测定等方法检查细胞的形态学及生长特点,测定碱性磷酸酶活性、跨膜电阻、荧光素钠透过量以检验细胞单层的极化现象和致密程度。结果Caco-2细胞单层在生长10 d以后均匀、致密,21 d后微绒毛、碱性磷酸酶、紧密连接等呈不对称分布,跨膜电阻达到600Ω·cm²,荧光素钠透过量为4.16μg·h^-1·cm^-2,而同样条件下空白膜的透过量大于240μg·h^-1·cm^-2。结论本培养条件下,Caco-2细胞单层形态与小肠上皮细胞类似,跨膜电阻、标志物透过量均达到要求,可以作为研究小肠药物转运过程的体外模型。     

Caco-2细胞体外吸收模型的建立及评估

目的:建立Caco-2细胞体外吸收模型并对其进行评估。方法:将细胞接种在Transwel转运培养槽的微孔滤膜上,进行体外培养。采用细胞形态学、跨膜电阻值(TEER)和表观渗透系数(Papp)及碱性磷酸酶活性等指标对细胞模型进行检测。结果:培养21d后,细胞间形成紧密连接,跨膜电阻值达到恒定值,为500Ω/cm2,表观渗透系数低于0.5×10-6cm/s;肠腔侧碱性磷酸酶活性显著高于基底侧酶活性。结论:在本实验室条件下构建的Caco-2细胞模型在形态上与小肠上皮细胞相似,细胞已产生极性,可作为小肠吸收的体外模型。     

葛根素在Caco-2细胞模型中的吸收特性

目的研究葛根素在Caco-2细胞中的吸收特性。方法改变药物浓度、实验温度和使用合适的抑制剂,测定葛根素在Caco-2细胞中的跨膜转运特性。结果葛根素在Caco-2细胞的转运呈现较强的方向性,随着葛根素质量浓度的增加,其表观渗透率(PDR)降低(2.1~1.4)。随着温度升高PDR增大。当加入代谢抑制剂KCN和2,4-二硝基苯酚时,葛根素的PDR降低(由1.7分别降至1.0和1.2)。当加入100mg/L维拉帕米时,A面到B面的表观渗透系数Papp(A→B)从(0.84±0.18)×10-7cm/s增加到(1.01±0.17)×10-7cm/s,而B面到A面的Papp(B→A)从(1.43±0.18)×10-7cm/s降低到(1.11±0.24)×10-7cm/s。结论葛根素在Caco-2细胞模型中的转运受到P-糖蛋白的外排作用。     

药理实验中Caco-2细胞模型建立的评价指标

目的:建立Caco-2细胞模型并对该模型进行评价。方法:通过显微镜观察细胞形态学特点,测定跨上皮细胞膜电阻,碱性磷酸酶活性和标志物普萘洛尔的转运特性等指标对Caco-2细胞模型进行评价。结果:各项指标的测定值与文献相符。本实验建立的Caco-2细胞模型的完整性、紧密性、通透性以及碱性磷酸酶活性较好。结论:建立的Caco-2细胞模型符合各项指标的要求,可用于研究口服药物转运的吸收机制。     

Caco-2细胞模型的建立及其在中药吸收研究中的应用探讨

目的建立Caco-2细胞模型并探讨其在中药吸收研究中的应用。方法通过显微镜观察细胞形态学特点、测定跨细胞膜电阻和荧光黄通透量等指标,对Caco-2细胞模型进行评价。结果各项指标的测定值符合要求,本实验建立的Caco-2细胞模型的完整性、紧密性和通透性良好。结论建立的Caco-2细胞模型可用于研究中药化学成分转运的吸收机制;高灵敏度分析仪器可以促进Caco-2细胞模型在中药化学成分吸收研究中最大限度的应用;通过两个或多个中药化学成分相互作用的研究,可以阐明中药配伍和中药复方应用的科学性。     

肠上皮细胞模型不同培养条件的优化及适应性研究

目的:建立肠上皮(Caco-2)细胞单层模型,探讨不同培养条件对细胞单层模型的影响,优化适宜的条件,提供稳定、重复性好的Caco-2细胞模型。方法:将细胞接种Transwell培养板上进行体外培养,并比较3种Transwell培养板及包被鼠尾胶原蛋白对细胞单层的影响,通过透射电镜和倒置显微镜观察细胞单层的形态学特征,通过测定细胞单层的电阻值、细胞两侧碱性磷酸酶含量、荧光素钠的透过量验证细胞单层的完整性、极性、通透性。结果:经过21 d培养,24孔Transwell培养的细胞单层的完整性、极性高于12孔Transwell培养的细胞单层,而透过性低于12孔Transwell培养的细胞单层;包被鼠尾胶原蛋白的Transwell于细胞单层生长前期跨上皮细胞电阻值(transepithelium electrical resistance,TEER)迅速升高,对细胞单层生长的中后期无显著性影响。结论:3种Transwell均可成功培养Caco-2细胞单层,24孔站立式Transwell适用于样品需求量少、检测灵敏度高的物质,可应用于大量样品的高通量筛选;12孔悬挂式Transwell提供检测的样品量和透过率较大,适于实验室的常规操作和常用仪器的样品需求。     

Caco-2 细胞模型在口服药物转运机制研究中应用的进展

 目的 介绍近年来 Caco-2 细胞模型在口服药物吸收机制的研究进展。 方法 通过对国内外文献的分析与总结,较为全面地介绍了基于 Caco-2 模型进行的口服药物转运机制研究现状及发展趋势。 结果与结论 以研究药物被动转运机制为主的 Caco-2 细胞模型,近年在主动转运机制的研究上有迅猛发展,尤其在双向主动转运研究上越来越受到重视与推崇,这些发展动态值得重视。     

芒果苷在Caco-2细胞模型中转运机制的研究

目的 采用人结肠癌上皮细胞单层模型(Caco-2 细胞模型)研究芒果苷在小肠吸收转运的特性,探讨芒果苷的口服吸收机制。方法 采用 Caco-2 细胞模型进行芒果苷的跨膜转运实验,探讨时间、pH 值、浓度、外排转运蛋白 P-糖蛋白(P-gp)抑制剂、多药耐药相关蛋白 2(MRP2)抑制剂、乳腺癌耐药蛋白(BCRP)抑制剂对芒果苷转运的影响。结果 芒果苷在 Caco-2 细胞模型上的转运具有时间依赖性,不同浓度芒果苷在 Caco-2 细胞的表观渗透系数(P_app)无显著性差异,微绒毛面顶侧(AP)到底侧(BL)的 P₍app(AP→BL))为(8.33±1.99)×10^-6～(8.48±1.15)×10^-6cm·s^-1,BL 侧到 AP 侧的 P₍app(BL→AP))为(29.19±3.64)×10^-6～(33.20±5.72)×10^-6cm·s^-1,P₍app(BL→A...     

厚朴水提物在Caco-2细胞模型中的转运特征研究

目的研究厚朴水提物经Caco-2单层细胞模型双向转运的特征及对细胞膜上P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)活性的影响。方法在经验证的Caco-2细胞单层模型中进行厚朴水提物双向转运实验,根据水提物总抗氧化能力标准曲线计算其转运量,并计算表观渗透系数(P’app)及溢流率(ER)。以P-gp底物罗丹明123(Rh123)在细胞内的蓄积与外排实验来判断厚朴水提物对Caco-2细胞膜上P-gp活性的影响。结果厚朴水提物P’app(AP→BL)值在1×10-5 cm/s左右,与质量浓度呈正相关,ER值远小于2,对Rh123的蓄积和外排均没有影响。结论厚朴水提物中与抗氧化作用有关的活性成分群可被较好地吸收,以被动扩散形式转运,不是P-gp底物,也不影响P-gp活性。建立了一种考察厚朴水提物转运特征的新方法,为临床安全合理使用厚朴提供了药动学研究基础。     

香附醋制前后对Caco-2细胞P-糖蛋白功能和表达的影响

目的:通过研究香附醋制前后对Caco-2细胞P-糖蛋白(P-gp)功能和表达的影响,初步阐明“香附醋制增效”理论的机制.方法:采用Caco-2细胞模型,细胞以2×105/mL的密度接种于Trenswell 6孔板,加入体积分数分别为5％,10％,20％的香附生品及醋制品含药血清培养24 h,流式细胞仪检测香附醋制前后对Caco-2细胞Pgp功能的影响;免疫组化法检测P-糖蛋白的表达.结果:香附生品低、中、高浓度可使细胞内地高辛累积增加8.25％,9.57％,16.84％,醋制品低、中、高浓度可使细胞内地高辛累积增加22.44％,29.12％,33.09％.二者均可使细胞内地高辛累积增加,并使P-gp表达的阳性率降低,对P-gp功能和表达均呈现出抑制作用,且醋制品作用更加明显.结论:香附醋制后可增加其抑制Caco-2细胞P-gp功能和表达的作用,从而促进P-gp底物的吸收.     

替米沙坦在Caco-2细胞模型中的体外转运研究

 目的研究替米沙坦(telmisartan,TMS)在Caco-2细胞中的跨膜转运特征。方法采用体外培养的人小肠上皮细胞Caco-2模型对TMS的跨膜转运进行研究。考察了浓度、pH、P-糖蛋白(P-glyprotein,P-gp)抑制剂对TMS跨膜转运的影响。结果TMS在Caco-2细胞中的转运存在外排作用,并且外排作用随着浓度的增加趋于饱和;另外TMS的吸收转运随pH值的增加而减少。加入P-糖蛋白抑制剂环孢素A和胺碘酮后,P_ratio从3.5分别下降到1.2和0.9,加入前后有极显著性差异(P<0.01)。结论P-gp参与了TMS的跨膜转运,从而从吸收机制上初步解释了P-gp的外排作用可能是TMS生物利用度低,个体差异大的原因。     

应用Caco-2细胞模型进行毒性中药研究的思路

本文概述了Caco-2细胞模型的基本特点、培养方法及其在中药研究方面的应用, 提出了应用Caco-2细胞模型对毒性中药进行研究的新思路。     

香附烯酮在Caco-2细胞模型中的转运机制分析

目的:考察香附烯酮在Caco-2细胞模型中的转运机制,为香附的临床应用提供实验依据。方法:通过噻唑蓝(MTT)比色法考察不同质量浓度香附烯酮对Caco-2细胞的毒性,以确定转运试验的给药浓度。以香附烯酮表观渗透系数(P_(app))和累积转运量为评价指标,采用液相色谱-质谱联用技术(LC-MS)测定香附烯酮的含量,色谱条件为流动相乙腈(A)-水(B)梯度洗脱(0～1.5 min,35%A;1.5～2 min,35%～90%A;2～4 min,90%A;4～4.1 min,90%～35%A;4.1～8 min,35%A),流速0.3 m L·min~(-1),进样量1μL,柱温30℃;质谱条件为电喷雾离子源(ESI),正离子模式,香附烯酮及内标物蛇床子素的检测离子分别为m/z 219.2～110.9,m/z 245.0～189.0。探讨了香附烯酮质量浓度、给药时间、乙二胺四乙酸(EDTA)及P-糖蛋白(P-gp)抑制剂对香附烯酮在体外细胞模型上跨膜转运的影响。结果:香附烯酮质量浓度处于3～90 mg·L~(-1)时,孵育4 h内对Caco-2细胞没有明显毒性。香附烯酮在Caco-2细胞模型中的转运存在一定的浓度及时间依赖性,其P_(app)1×10~(-6)cm·s~(-1),说明药物吸收良好,外排率处于0.5～1.5;加入细胞旁路转运抑制剂EDTA及P-gp转运体抑制剂维拉帕米后,双向P_(app)没有显著性差异。结论:香附烯酮在Caco-2细胞模型转运机制主要是被动扩散,细胞旁路转运及P-gp不参与其转运。     

葛根素口服微乳在Caco-2细胞模型中摄取特性研究

 目的 研究葛根素口服微乳在Caco-2细胞模型中的吸收特性,为进一步探讨葛根素微乳的吸收机制提供依据。方法 利用MTT实验筛选出葛根素在Caco-2细胞中的安全浓度,考察时间、pH值及药物浓度对葛根素微乳吸收的影响。结果 葛根素微乳在Caco-2细胞模型的摄取实验中,随着葛根素微乳浓度的增加,葛根素吸收增加。结论 葛根素微乳在Caco-2细胞模型中的主要吸收机制可能是被动转运。     

紫草素在Caco-2细胞的摄取特性

目的:研究紫草素(SKN)在Caco-2细胞的摄取特性.方法:以Caco-2细胞单层模型研究紫草素的细胞摄取规律.采用高效液相色谱法测定细胞中SKN浓度,考察时间、pH、药物浓度及抑制剂对Caco-2细胞摄取SKN的影响.结果:SKN在Caco-2细胞中的摄取呈时间依赖性;SKN在0.2 ～3.2 mg·L-1内的摄取呈线性增加,符合被动扩散过程;pH 8.0条件下药物的细胞摄取量(0.350±0.004) mg·g-1显著低于pH 5.0[(0.450±0.008) mg·g-1,P＜0.01];加入维拉帕米,叠氮化钠及2,4-二硝基酚后,与对照组相比,SKN的细胞摄取量显著低,分别为(0.320±0.007),(0.340±0.003),(0.260±0.007) mg·g-1(P ＜0.01).结论:SKN的细胞摄取机制主要是被动转运;P-糖蛋白未参与SKN的转运过程.     

异甘草素在Caco-2细胞的摄取特性

目的:研究异甘草素(ISL)在Caco-2细胞的摄取特性。方法:以Caco-2细胞单层模型研究异甘草素的细胞摄取规律。采用高效液相色谱法测定细胞中ISL浓度,考察时间、pH值、药物浓度及抑制剂对Caco-2细胞摄取ISL的影响。结果:ISL在Caco-2细胞中的摄取呈时间依赖性;ISL在4～15 mg.L-1浓度范围内的摄取呈线性增加,符合被动扩散过程;pH 8.0条件下药物的细胞摄取量(0.48±0.006)μg.mg-1显著低于pH 5.0药物的细胞摄取量(0.98±0.03)μg.mg-1(P<0.01);加入维拉帕米,叠氮化钠及2,4-二硝基酚后,与对照组相比,ISL的细胞摄取量显著高,分别为(1.19±0.030)μg.mg-1(P<0.01),(1.10±0.004)μg.mg-1(P<0.05),(1.17±0.020)μg.mg-1(P<0.01)。结论:ISL的细胞摄取机制主要是被动转运;P-糖蛋白参与了ISL的转运过程。     

溃结灵含药血清对Caco-2细胞损伤模型ITF基因和MUC2蛋白表达的影响

目的:观察溃结灵含药血清对人克隆结肠腺癌(Caco-2)细胞损伤模型肠三叶因子(ITF)基因和MUC2蛋白表达的影响.方法:三硝基苯磺酸(TNBS)灌肠法复制溃疡性结肠炎(UC)大鼠模型,采用UC模型大鼠血清刺激Caco-2细胞,造成细胞损伤模型,分别用荧光实时定量-PCR (RT-PCR)法及免疫组化法检测溃结灵含药血清对Caco-2细胞损伤模型ITF mRNA及MUC2蛋白表达的影响.结果:与正常血清组ITF mRNA MUC2蛋白相对表达量(1.00±0.11),(8.62±3.16)比较,模型血清组(1.20±0.16,11.22±2.37),均明显增高(P ＜0.05,P＜0.01);与模型血清组比较,溃结灵含药血清组ITF mRNA(1.76±0.37)及MUC2蛋白表达量(13.94±2.59)均明显增高(P ＜0.05,P ＜0.05).结论:溃结灵含药血清可上调Caco-2细胞损伤模型ITF基因和MUC2蛋白表达.