实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠脑组织中NF-κB p65,TNF-α表达及雷公藤多甙的干预研究

目的 观察Wistar大鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)脑组织中核转录因子-κBp65(NF-κB p65)、肿瘤坏死因子-α(TNF-a)的表达情况,用雷公藤多甙(TWP)进行干预,探讨TWP对EAE的防治效果及作用机制.方法 建立Wistar大鼠EAE模型,并选用TWP、泼尼松(PRD)干预治疗.65只Wistar大鼠随机分成5组:对照组5只,EAE组、TWPⅠ组(EAE+TWP 10 mg·kg-1·d-1)、TWPⅡ组(EAE+TWP 30mg·kg-1·d-1)和PRD组(EAE+PRD 5 mg·kg-1·d-1)各15只.观察各组大鼠发病情况并进行神经功能评分.大鼠脑和脊髓腰膨大段组织切片:苏木素-伊红(HE)染色+罗克沙尔坚牢蓝(LFB)髓鞘染色,光镜下进行炎性病灶计数,并免疫组化方法检测大鼠脑组织内NF-κB p65、TNF-α的表达.结果 EAE组及干预组大鼠脑组织内NF-κB p65、TNF-α表达水平随病情加重而升高,随病情缓解而降低.与EAE组比较,干预组大鼠发病率减低,潜伏期延长,神经功能评分及体重损失明显降低,脑组织炎性病灶数明显减少;同时脑组织NF-κB p65和TNF-α阳性细胞数量明显减少.TWP大剂量组与PRD治疗效果相当,且优于TWP小剂量组.结论 NF-κB p65、TNF-α过表达可能参与EAE发生及进展;TWP有明显防治大鼠EAE作用,在一定程度上呈剂量相关性,其机制可能与下调NF-κB p65、TNF-α表达有关.     

雷公藤多甙对豚鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎的干预研究

实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)是由CD4 T淋巴细胞所介导的自身免疫性疾病,因其发生于动物中枢神经系统内,在临床表现、病理特征及免疫学特性等方面与人类多发性硬化(multiple sclerosis,MS)极为相似,因而已被当作经典实验动物模型而     

实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠中1,25二羟基维生素D3的免疫调节作用

目的探讨1,25二羟基维生素D3[1,25(OH)2D3]对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)的免疫调节作用。方法建立Lewis大鼠主动免疫EAE实验动物模型,分别于致敏当天(预防组)及EAE症状出现当天给药(治疗组),并设立相应对照组。动态观察各组大鼠的临床评分,于致敏第13天处死,测定其引流淋巴结中细胞总数,单个核细胞(MNC)中CD 4CD 25T细胞含量、CD 86干细胞含量及MNC培养上清中干扰素(IFN)γ和白细胞介素(IL)4含量。结果预防组1,25(OH)2D3使EAE发病高峰延迟,治疗组显示1,25(OH)2D3能减轻EAE的病情,使高峰期评分[(3.3±0.6)分]比对照组[(4.0±0.3)分]降低(P<0.05);1,25(OH)2D3干预后EAE大鼠高峰期发现淋巴结中CD 4CD 25T细胞、引流淋巴结的细胞总数与对照组差异无统计学意义;而预防组CD 4CD 25/CD 4T细胞比值(15.1±3.3)高于其对照组(12.3±2.6,P<0.05);预防组、治疗组CD 86细胞明显降低(P<0.05)。1,25(OH)2D3干预后预防组及治疗组中淋巴结MNC培养上清中IFNγ无明显改变,而IL4显著增多(P<0.01)。结论应用1,25(OH)2D3治疗EAE大鼠,可通过改变共刺激分子表达、调节性T细胞比例以及不同细胞因子的分泌能力使EAE症状缓解。     

实验性自身免疫性脑脊髓炎对大脑神经干细胞增殖的影响

目的探讨实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)埘大脑神经干细胞(NSC)增殖能力的影响。方法将C57BL/6小鼠随机分为模型组、佐剂组和对照组,采用少突胶质细胞糖蛋白(MOG)抗原联合完全福氏佐剂(CFA)免疫模型组小鼠,佐剂组小鼠仅接受CFA免疫注射,对照组小鼠仅接受生理盐水注射。观察各组小鼠EAE症状评分,采用HE染色以及劳克坚牢蓝(LFB)髓鞘染色观察其脑和脊髓病理学改变,采用免疫荧光染色检测小鼠海马齿状回(DG)和侧脑室下区(SVZ)BrdU阳性细胞数量,以评价NSC增殖情况。结果模型组有14只(14/15)小鼠被成功诱导EAE,其症状达到高峰后短暂缓解,随后进入慢性持续期;而佐剂组和对照组小鼠均未出现任何EAE症状。模型组中枢神经系统存在大量炎性反应细胞浸润,在白质区可见多处LFB未着色的髓鞘脱失区;而佐剂组和对照组无明显病理学改变。佐剂组与对照组小鼠DG区和SVZ区BrdU阳性细胞数比较差异均无统计学意义。与佐剂组和对照组比较,模型组小鼠大脑SVZ区和DG颗粒下区BrdU阳性细胞均显著降低(均P0.05)。结论慢性持续型EAE可导致小鼠大脑NSC增殖能力下降。     

雷公藤总萜等药物对实验性过敏性脑脊髓炎动物发病的影响

采用雷公藤总萜，转化生长因子β，肿瘤坏死因子及地塞米松对实验性对过敏性脑脊髓炎豚鼠发病情况的影响进行了观察。结果发现，ＴＮＦ使动物发病的潜伏期缩短，使临床病情加重，使发病动物的体重损失更明显，而且使发病动物的死亡率增加。     

实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠模型脑组织硫化氢的变化

目的 观察实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)模型大鼠脑组织中硫化氢(H2S)动态变化,探讨H2S与多发性硬化(MS)的关系. 方法 按随机区组设计方法将SD大鼠分成对照组及模型组,每组78只.模型组制备EAE模型,对照组用生理盐水代替诱导乳剂,余措施相同.采用HE染色、尼氏染色观察2组大鼠脑组织病理变化;比较不同时间点(建模后5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60 d和65 d)2组大鼠平均临床评分;采用比色法检测各时间点H2S和丙二醛(MDA)水平. 结果 (1)HE和尼氏染色显示模型组中可见明显的炎性细胞浸润现象及血管袖套形成,对照组未发现明显改变.(2)模型组于建模后第20天及第50天出现2次发病高峰,临床评分分别为(4.0±0.55)分和(3.5±0.25)分;对照组的评分为0分.(3)模型组大鼠各时间点脑组织中H2S表达量随着发病呈逐渐下降趋势,从第10天开始低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).相反,模型组大鼠各时间点脑组织中MDA呈逐渐增加趋势,从第10天开始高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).对照组大鼠H2S和MDA水平无明显变化.(4)模型组大鼠脑组织中H2S水平的变化与临床评分、MDA水平呈负相关(r=0.960,P=0.000;r=-0.920,P=0.000);临床症状评分和MDA水平呈正相关(r=0.910,P=0.000). 结论 H2S在EAE模型中表达明显降低,在MS中的作用机制有待进一步研究.     

IFN-γ和caspase-3在实验性自身免疫性脑脊髓炎病程中动态表达及雷公藤多甙保护作用的探讨

目的观察EAE大鼠模型脊髓caspase-3和IFN-γ的表达,探讨雷公藤多甙对EAE大鼠的保护作用。方法将60只Wistar大鼠随机分成CON组、EAE组、TWP1组、TWP2组,建模后各组又分为第7天、第14天、第21天3个亚组,分别行神经功能评分,大鼠脊髓组织行HE染色,免疫组化检测脊髓中caspase-3和IFN-γ的表达情况。结果 (1)行为学观察:在第14天、第21天TWP1、TWP2组神经功能评分均小于EAE组(P<0.05);第14天TWP2组神经功能评分小于TWP1组(P<0.05)。(2)组织病理学观察:CON组大鼠脊髓无炎性细胞浸润;第14天、第21天,TWP1组和TWP2组血管袖套数目少于同期的EAE组(P<0.05)。(3)caspase-3和IFN-γ表达:TWP1组、TWP2组低于同期EAE组(P<0.05);EAE组中21d组、7d组分别与14d组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论 EAE大鼠脊髓caspase-3和IFN-γ阳性表达的细胞数量与病情变化一致,雷公藤多甙干预能减轻EAE大鼠发病,减少大鼠脊髓内caspase-3和IFN-γ的表达。     

Wistar大鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎模型的建立

目的:建立Wistar大鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalo-myelitis,EAE)模型,并检测可溶性血管细胞黏附分子-1(soluble vascular cell adhesion molecule-l,sVCAM-1)在EAE大鼠中的动态表达。方法:将豚鼠麻醉后,不用磷酸盐缓冲液(PBS)灌注,直接取新鲜豚鼠全脊髓制备匀浆(Guinea Pig Spinal Cord Homoge-nate,GPSCH)为抗原,免疫Wistar大鼠建立EAE的动物模型。观察其体重及神经功能评分的变化;取脑、脊髓组织石腊包埋,病理切片,光镜观察;采用双抗体夹心法酶联免疫吸附实验(ELISA)检测血清中sVCAM-1的表达。结果:Wist-ar大鼠在免疫后10天出现明显的神经系统体征,发病率达100%;脑脊髓组织可见血管周围炎细胞呈袖套样浸润;sV-CAM-1的表达与对照组比较有显著性升高(P<0.01)。结论:采用非灌注法制备的豚鼠全脊髓匀浆作为抗原,能够成功诱发Wistar大鼠的EAE模型,为研究多发性硬化(multiple sclerosis,MS)的发病机制及治疗奠定了一定的基础。     

雷公藤多甙对实验性自身免疫性神经炎免疫状态的影响

目的 探讨雷公藤多甙(tripterygium polyglucoside,TPG)对实验性自身免疫性神经炎(experimental allergic neuritis,EAN)免疫状态的影响.方法 建立EAN大鼠模型,在其出现临床症状后连续给予TPG灌胃14 d,观察大鼠淋巴细胞增殖水平以及淋巴细胞钾通道mRNA和血清抗体表达水平的变化并分析其与临床症状的关联.结果 免疫后第23天,与对照组比较,EAN模型组的基础淋巴细胞增殖水平以及脂多糖和牛周围神经髓鞘(bovine peripheral myelin,BPM)诱导的细胞增殖水平显著增高[分别为(8.77±0.56)%比(4.67±0.39)%,(8.07±0.74)%比(7.24±0.30)%,(9.24±0.72)%比(7.22±0.67)%],淋巴细胞n型电压门控钾通道(voltage-gated K+ channel,Kv1.3)和中间电导钙激活钾通道(intermediate-conductance calcium-activated K+ channel,IKCa1)mRNA表达明显增高(分别为0.56±0.03比0.35±0.02,0.71±0.05比0.44±0.04),血清抗-BPM抗体水平亦显著升高(1 489.67±153.08比15.00±2.85);与EAN模型组比较,TPG治疗组的基础淋巴细胞增殖和BPM诱导的细胞增殖水平均明显降低[(7.96±0.45)%比(8.77±0.56)%,(8.09±0.52)%比(9.24±0.72)%],Kv1.3和IKCa1 mRNA表达降低(0.51±0.04 比0.56±0.03,0.64±0.04比0.71±0.05),抗-BPM抗体水平则无显著变化(1 341.08±346.42比1 489.67±153.08).结论 TPG通过抑制抗原特异性淋巴细胞增殖干预EAN的细胞免疫,该过程涉及淋巴细胞钾通道表达减少.TPG有可能成为吉兰-巴雷综合征的潜在治疗药物.     

雷公藤内酯醇对实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠脑和脊髓ICAM-1表达的影响

目的探讨雷公藤内酯醇(Triptolide,Tri)对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)大鼠脑和脊髓细胞间黏附分子-1(ICAM-1)表达的影响。方法模型组采用豚鼠髓鞘蛋白匀浆和福(氏)完全佐剂诱发大鼠急性EAE,治疗组在此基础上给予不同剂量Tri[0.2 mg/(kg.d),0.4 mg/(kg.d)],观察其临床表现并进行评分。采用Loyez(氏)髓鞘染色法观察髓鞘病理改变,免疫组化法检测脑和脊髓ICAM-1表达。结果高剂量Tri治疗组大鼠未出现临床症状,其髓鞘结构完整;低剂量Tri治疗组临床症状较模型组轻且发病时间延迟,其髓鞘部分脱失。高剂量Tri治疗组ICAM-1阳性血管数为2.31±1.23,与模型组和低剂量Tri治疗组比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论Tri对EAE的治疗作用与其抑制ICAM-1表达有关。     

阿托伐他汀对实验性自身免疫性脑脊髓炎的治疗作用

目的 观察不同剂量阿托伐他汀对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)的治疗效果,探讨其作用机制.方法 采用Wistar大鼠建立EAE模型,分别应用每日每千克体重2、8 mg的阿托伐他汀进行治疗,观察其对大鼠发病率、复发率、神经功能评分和组织病理改变的影响及程度,并测定基质金属蛋白酶-9(MMP-9)和IL-4在体内的表达及含量变化.结果 EAE模型组与大剂量治疗组相比较,神经功能评分有显著改善,发病率由76.67%下降至33.33%(P=O.008),脊髓组织中血管袖套数目由3.2±1.1减少为1.3±0.4(P=0.01),血清中IL-4的含量由(0.35±0.12)ng/ml显著提高至(0.68±0.23)ng/ml(P=0.05),MMP-9在组织中的表达由37±7减少至26±5(P=0.001).结论 阿托伐他汀能改善EAE的临床表现,减轻组织损伤,其作用可能与减少MMP-9和提高IL-4含量有关.     

乌司他丁对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠神经的保护作用

目的 研究乌司他丁(UTI)对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)髓鞘再生及脑源性神经营养因子(BDNF)表达的影响.方法 24只C57BIZ6雌性小鼠随机分成UTI组(U组)、对照组(S组)和正常组(N组),每组8只,以髓鞘染色观察腰髓髓鞘脱失情况,采用Western blot技术检测并比较各组脑组织BDNF、髓鞘碱性蛋白(MBP)、2',3'-环核甘酸-3'-磷酸水解酶(CNPase)表达浓度.结果 U组小鼠神经功能评分(第12、13、14、22、23、31、33、34、35天时分别为0、0.25、0.38、0.63、0.63、0.40、0.40、0.40和0.40分)明显低于S组(相同时点分别为0.55、0.88、1.00、1.75、2.25、1.00、1.00、1.00和1.00,U=16.00、15.00、14.50、7.50、0.00、14.0、14.50、12.00和14.50,均P＜0.05).U组小鼠髓鞘脱失程度较S组轻.Western blot结果显示U组脑组织BDNF、MBP、CNP(1.96±0.29、2.67±0.48和1.75±0.20)较S组(0.80±0.15、1.36±0.38和1.06±0.18)表达增高,差异具有统计学意义(LSD法,P＜0.05).结论 UTI对EAE具有神经保护作用,其机制可能是通过促进脑组织BDNF表达,保护少突胶质细胞、神经元及促进髓鞘再生.

Abstract：

Objective To investigate the effect of ulinastatin (UTI) on the expression of brainderived neurotrophic factor ( BDNF ) and remyelination in mice with experimental autoimmune encephalomyelitis ( EAE).Methods Twenty-four C57BL/6 mice were randomly divided into UTI group (U),normal saline treated group (S) and normal control group (N,n = 8,respectively).Demyelinations in the spinal cord were observed by solochrome cyanin staining.The expression of BDNF,myelin basic protein (MBP),and 2',3 '-cyclic nucleotide 3'-phosphodiesterase (CNP) in brain tissue of each group were evaluated by Western blot.Results Average clinical scores in group U at the 12,13,14,22,23,31,33,34 and 35 days were 0,0.25,0.38,0.63,0.63,0.40,0.40,0.40 and 0.40 respectively.They were significantly lower than group S at the same time ( U= 16.00,15.00,14.50,7.50,0.00,14.50,14.50,12.00 and 14.50,all P ＜0.05).Solochrome cyanin staining showed that demyelination of spinal cord in group U was also significantly improved than group S.Expressions of BDNF ( 1.96 ± 0.29),MBP (2.67 ± 0.48 ) and CNP ( 1.75 ± 0.20) in group U were all significantly higher than group S ( There were 0.80 ± 0.15,1.36 ± 0.38 and 1.06 ± 0.18 respectively,all P ＜ 0.05).Conclusions UTI has protective effect on EAE.The possible mechanism is that it could promote remyelination,and protect oligodendrocytes and neurons in EAE model by increasing BDNF expression in brain.     

热休克预处理对实验性自身免疫性脑脊髓炎神经细胞凋亡的影响及其机制研究

目的观察热休克预处理（HSP）后实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）大鼠热休克蛋白70（HSP70）和核因子-KB（NF-KB）的表达及对神经细胞凋亡的影响，探讨其对EAE模型的神经保护作用。方法36只Wistar大鼠随机分为对照组（CON），EAE组和HSP组。EAE组制作成EAE模型；HSP组先给予HSP，24h后再制作成EAE模型；CON组不行特殊处理。观察大鼠神经症状．进行神经功能评分。于免疫后14-17d处死动物，取脊髓行HE染色，检测HSP70、NFKB免疫组化表达及神经细胞的凋亡。结果CON组大鼠没有发病。与EAE组大鼠比较，HSP组大鼠发病率显著降低，起病时间显著延迟，神经功能评分显著降低（均P〈0．05）。EAE组体重增加值较CON组明显减低，HSP后大鼠体重增加值较EAE组显著增加（p〈0．05）。脊髓病理显示HSP组炎性病灶数较EAE组显著减少（p〈0．05）。HSP组与EAE组相比，脊髓内HSP70阳性细胞数显著增加，NF-KB阳性细胞数显著减少，神经细胞凋亡显著抑制（均P〈0．01）。结论HSP对EAE大鼠具有一定的神经保护作用，其机理可能与HSP70表达增加，NF—KB表达受抑制从而导致神经细胞凋亡减少有关。     

嗅鞘细胞移植治疗自身免疫性脑脊髓炎的实验研究

目的研究嗅鞘细胞(OECs)的培养及其对自身免疫性脑脊髓炎(EAE)的治疗作用。方法取36只EAE模型大鼠,将其随机分为移植组18只,假手术组18只。用新生Wistar大鼠嗅球培养出OECs,移植组将OECs悬液注入EAE大鼠的侧脑室;假手术组按以上方法注入等量生理盐水。观察2组大鼠运动功能评分、组织病理学变化以及血管内皮生长因子(VEGF)表达情况。结果(1)OECs移植组运动功能评分从第1天的(6.8±0.7)分降至第20天的(1.1±0.3)分,显著优于假手术组,差异有统计学意义(P<0.05);(2)组织病理切片可见OECs移植组髓鞘修复明显优于假手术组;(3)OECs移植组VEGF的表达从第1天的(22.1±2.8)个/mm2增至第10天的(300.6±5.1)个/mm2,后逐渐降至第21天的(99.0±3.5)个/mm2,在各时间点的表达均明显高于假手术组,差异有统计学意义(P<0.01)。结论OECs移植可以促进EAE的髓鞘修复,改善运动功能,同时可使VEGF大量表达,诱导病灶周围新生血管的生成。     

逆转录病毒介导神经营养因子-3基因转染嗅鞘细胞移植对自身免疫性脑脊髓炎的治疗作用

目的 研究逆转录病毒介导神经营养因子-3(neurotrophin-3,NT-3)基因转染的嗅鞘细胞(olfactory ensheathing cells,OECs),即OECs-NT-3基因工程细胞对自身免疫性脑脊髓炎(experimental allergic encephalomyelitis,EAE)的髓鞘及轴突的修复作用并探讨其机制.方法 构建OECs-NT-3基因工程细胞,将其移植入EAE大鼠的侧脑室,观察其在体内的迁徙、分布特点、NT-3mRNA转录水平,从组织病理变化、神经突触素灰度值、功能学评分等方而对髓鞘及轴突修复进行评价.结果 (1)OECs-NT-3细胞在EAE体内存活,可广泛迁徙至病灶远端且至少可以持续存活4周;(2)转基因组NT-3 mRNA转录水平为(212.3±16.1)×10-2,明显高于OECs组[(1.23±0.13)×10-2]及对照组[(1.98±0.19)×10-2],差异有统计学意义(t=-31.161、-31.928,P<0.01);(3)转基因组髓鞘完整,炎性病灶数少于OECs移植组及对照组,差异有统计学意义(t=11.388～22.728,P<0.01);(4)转基因组突触素灰度值(80.02±7.10)明显高于OECs移植组(53.65±8.90)及对照组(39.08±7.30),差异有统计学意义(P<0.01).结论 OECs-NT-3细胞在EAE大鼠体内稳定、高效表达NT-3,可促进EAE的髓鞘修复及轴突再生.     

黄芩苷对实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠髓鞘的保护作用

目的观察黄芩苷(BAC)对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)大鼠髓鞘的保护作用。方法将大鼠随机分为正常对照(NC)组、EAE组、地塞米松(DXM)组和BAC组。抗原免疫1周后分别予以DXM组和BAC组大鼠DXM和BAC治疗7d;观察免疫后14d各组动物发病情况、脊髓病理变化及髓鞘碱性蛋白(MBP)的表达。结果(1)EAE组、DXM组和BAC组大鼠于抗原免疫后8～10d发病,发病潜伏期分别为9.62d、11.0d、9.85d,DXM组较EAE组潜伏期显著延长(P<0.05),BAC组与EAE组间差异无统计学意义;各组发病率分别为75.0%、66.7%、80%,各组间差异无统计学意义。(2)病程中EAE组和DXM组质量较BAC组明显下降(均P<0.05);DXM组和BAC组神经功能评分明显优于EAE组(均P<0.05)。(3)与EAE组比较,DXM组脊髓病灶数明显减少(P<0.05),BAC组病灶数有所减少,但差异无统计学意义。(4)与EAE组比较,DXM组和BAC组脊髓MBP阳性数显著增多(均P<0.05)。结论BAC对缓解EAE大鼠的临床症状、减轻髓鞘脱失的作用与DXM相似,而没有质量降低的不良反应。     

实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠模型的基因芯片研究

目的 用4096点基因芯片筛选实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠模型有表达差异的基因。方法 将4096条基因cDNA产物按微矩阵排列点样在玻片上。以髓鞘蛋白脂质蛋白多肽139-151及福氏佐剂为抗原免疫SJL小鼠，取免疫后3-4周急性发病的小鼠及同代正常小鼠各6只，每一只急性发病的小鼠及其对照为一组，分别取全脑组织，于-80℃冰箱保存。提取小鼠全脑组织总RNA，RT-PCR逆转录成cDNA。标记cDNA探针，分别用cy3-dUTP、cy5一dUTP标记正常小鼠和实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠的cDNA。将基因芯片和杂交探针变性后杂交，洗干。用Scan Array 4000扫描芯片，GenePix Pro3．0软件分析cy3、cy5两种荧光信号的强度和比值。结果1-6组中筛选出差异表达的数据分别为43、30、176、76、294和129项。这些基因在与两种探针杂交时表现出一定的差异。6个组中一致发现表达异常的基因涉及了免疫相关基因、细胞骨架蛋白基因、细胞周期相关基因、能量代谢相关基因、蛋白质合成相关基因、信号转导及离子通道相关基因等广泛的基因变化。结论 除免疫相关基因外，细胞骨架蛋白相关基因、能量代谢相关基因、蛋白质合成相关基因、细胞周期相关基因、离子通道相关基因等可能参与了自身免疫性脑脊髓膜炎的发病。     

骨髓间充质干细胞干预治疗实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠的研究

目的探讨骨髓间充质干细胞(BMSCs)干预治疗实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)大鼠的效果及其机制,以及最佳的治疗时机。方法 36只健康雌性SD大鼠随机分为正常对照组、EAE模型组和免疫后当天、第5 d、第10 d、第15 d注入BMSCs干预治疗组(d0、d5、d10、d15 BMSCs组)。用MBP68-86作免疫原制作EAE大鼠模型,分别在免疫后相应时间点静脉注入Wistar大鼠的BMSCs或生理盐水。观察大鼠的发病状况、神经功能缺损评分(NDS)和脑、脊髓组织病理改变。用流式细胞仪检测周围血T细胞亚群,ELISA法检测血干扰素-γ(IFN-γ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、转化生长因子-β1(TGF-β1)、白介素(IL)-4和IL-10水平。结果正常对照组大鼠均正常。与EAE模型组比较,d0 BMSCs组和d5 BMSCs组大鼠的发病数减少,发病时间延迟,高峰期和平均NDS降低,外周血CD4+T细胞明显降低,Treg细胞明显升高,IFN-γ和TNF-α水平明显降低,IL-10水平明显升高(P0.05~0.01),脑、脊髓组织的病变明显减轻;d10 BMSCs组CD4+/CD8+比值明显降低(P0.05)。结论预先用BMSCs干预治疗EAE大鼠有显著的效果,其机制可能为BMSCs通过上调IL-10表达来调节T细胞的增殖活化及功能,抑制异常免疫反应。而在发病后给予BMSCs则无明显效果。     

Nogo-A and Nogo-A receptor expression in periventricular white matter of experimental autoimmune encephalomyelitis rats

BACKGROUND:Previous studies have focused on the correlation between Nogo-A expression and multiple sclerosis or between Nogo-A receptor (NgR) expression and multiple sclerosis in the central nervous system. Expression patterns of Nogo-A and NgR remain poorly understood in rat models of experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE).OBJECTIVE:To observe dynamic changes in Nogo-A and NgR protein expression, and to verify the correlation between Nogo-A and NgR protein, as well as expression patterns at various time points, in periventricular tissue of EAE rats.DESIGN, TIME AND SETrlNG:A neuroimmunological, randomized, controlled experiment was performed at the Clinical Institute of Hunan People's Hospital of China from September to November 2008.MATERIALS:Immunohistochemistry (streptavidin-biotin-peroxidase complex method) kit was purchased from Boster, China.METHODS:A total of 60 female, Wistar rats, aged 6-8 weeks, ware randomly assigned to EAE and control groups (n = 30, respectively). Guinea pig spinal cord homogenate, self-made complete Freund's adjuvant (0.2 mL/100 g), and pertussis vaccine (0.2 mL) were subcutaneously injected into the hindlimb foot pad of rats from the EAE group to create rat models of EAE. Complete Freund's adjuvant (0.2 mL) was infused into rats from the control group.MAIN OUTCOME MEASURES:Nogo-A and NgR protein expression was determined in periventricular white matter using immunohistochemical methods. Neurological scores ware determined in all rats.RESULTS:Rats from the EAE group developed acute-onset EAE following immunization. The pathogenetic symptoms reached a peak on day 15, and neurological scores ware also greatest at this time point. Neurological scores decreased with recovery of the illness. Nogo-A was shown to be expressed in neuronal cells and oligodendrocytes, and expression increased 11 days after immunization (P < 0.01), decreased by day 13 (P < 0.01), and then increased again by day 15. Nogo-A expression remained greater in the EAE group compared with the control group at day 30 (P < 0.01). In the EAE group, NgR protein was primarily expressed on the surface of neuronal bodies and axons. NgR expression increased 13-18 days after immunization (P < 0.01 or P < 0.05).CONCLUSION:Nogo-A and NgR protein expression altered with disease course in periventdcular white matter of EAE rats. Results suggested that Nogo-A and NgR were involved in EAE occurrence.