微小按蚊种群成员分子变异与系统发育的关系

目的：研究微小按蚊与种群之间（乌头按蚊、吉甫按蚊、微小按蚊A／C型）线粒体DNA的分子变异及系统发育关系。方法：PCR扩增和mtDNA测序。结果：在云南发现两个微小按蚊隐形种,即微小按蚊A／D型;证实了微小按蚊种团之间遗传差异,微小按蚊A／C分歧时间稍晚于乌头按蚊,吉甫按蚊分歧时间远早于前2种。结论：地理环境对mtDNA遗传差异有一定影响,但不同地理的群体之间微小按蚊的遗传没有明显变化。     

基于微卫星标记的中国南方沿海地区白纹伊蚊种群遗传多样性研究

目的 应用微卫星标记分析中国南方沿海地区白纹伊蚊种群的遗传多样性，为媒介生物控制提供依据。方法 利用微卫星位点对浙江省杭州市、义乌市和宁波市、福建省龙岩市、广东省广州市、广西壮族自治区南宁市、海南省海口市7个采样点的白纹伊蚊种群进行了遗传多样性检测和聚类分析。结果 共检测微卫星位点7个，各个群体的等位基因数（N_A）为5.429~7.571，有效等位基因数（N_E）为2.897~3.632，等位基因丰度（R_S）为5.236~7.170，期望杂合度（H_E）为0.538~0.637。各个群体近交系数（F_IS）为0.008~0.332，表现为群体内杂合子不足，群体间分化系数（F_ST）为0.058，表明7个白纹伊蚊种群间的遗传变异为5.8%。邻接法聚类分析表明，浙江省杭州市和义乌市的白纹伊蚊种群构建成为1个分支，福建省和广东省的白纹伊蚊种群构成1个分支，广西壮族自治区和海南省的白纹伊蚊种群构成1个分支，且海南种群显示出较大的遗传变异。白纹伊蚊种群贝叶斯分支分析表明，可能的分支数为3个。结论 中国南方沿海7个不同地理区域的白纹伊蚊种群在7个微卫星位点呈现较丰富的遗传多样性和中低水平的遗传分化，种群间遗传差异随着地理距离的增加而增大。     

基于rDNA-ITS2序列的中国按蚊属按蚊亚属部分种类的系统发育关系研究（双翅目：蚊科）

目的阐明中国按蚊属按蚊亚属蚊种的亲缘关系。方法根据核糖体DNA第2内转录间隔区（rDNA-ITS2）序列,采用邻接法（NJ）、最大简约法（MP）、最小进化法（ME）和最大似然法（ML）,对采自中国的按蚊亚属22种（分子型）蚊虫进行系统发育关系重建。结果rDNA-ITS2序列的长度范围为340~1754 bp,种内的p遗传距离均小于0.004,种间为0.009~0.420,平均值为0.224。各种方法重建的系统发育树均显示分为3大支,分别对应赫坎按蚊种团和须喙按蚊种团各一支,以及林氏按蚊与五斑按蚊种团聚为的一支,三者为并系关系;赫坎按蚊种团成员种分为主要的4支,其种间关系与形态分类结果一致,但分子型spLL1和spLL2的聚类位置不稳定。结论重建的分子系统发育树客观地阐明了中国按蚊属按蚊亚属各种团及蚊种之间的亲缘关系,序列具有足够的信息贡献量。     

按蚊rDNA ITS 2区段基因序列检测

目的 鉴定浙江传疟媒介种类，为制定浙江省疟疾防治策略提供依据。方法 利用媒介按蚊核糖体核酸内转录问隔2（rDNAITS2）区段基因特征，应用PCR基因鉴别技术。对浙江省现场捕捉的按蚊与嗜人按蚊、八代按蚊、中华按蚊、雷氏按蚊实验室标本进行基因鉴别和比较。结果 浙江省现场捕捉的按蚊DNA样本的PCR扩增产物均为250bp，与实验室中华按蚊标本一致。结论 浙江省的传疟媒介是中华按蚊，现场调查未发现嗜人按蚊。     

褐家鼠携带汉坦病毒特性与其遗传因素关系的分析

目的了解褐家鼠携带汉坦病毒与其遗传因素间的关系。方法采用微卫星PCR技术对携带和未携带汉坦病毒的褐家鼠基因组DNA进行PCR扩增,根据所选的10个微卫星位点比较同一地区阴性、阳性标本间的差异。结果复核肾综合征出血热疫源地所捕获的褐家鼠鼠肺标本48份,挑选8份阳性标本及对应地区的阴性标本16份。通过对同一地区携带与未携带汉坦病毒的褐家鼠问微卫星扩增结果比较得出,8个所选微卫星位点未显现出明显差别,其余2个位点不稳定。结论经过对褐家鼠在10个微卫星位点的比较,未发现携带和未携带汉坦病毒的褐家鼠之间存在明显差别。     

不同地区嗜人按蚊基因组DNA差异分析

目的：为进一步确定我国嗜人按蚊是否存在不同的种型提供依据。方法;通过随机引物多态性DNA（RAPD）技术获取四川、云南、江苏3个不同地区嗜人按蚊的DNA指纹图谱,比较嗜人按蚊不同地区基因组DNA的多态性,从分子水平上对不同分布区嗜人按蚊进行差异分析。结果：不同地区嗜人按蚊之间的DNA片段在绝大部分相同的情况下存在差异,3个不同地区基本上具有共同的扩增片段,反映了各地理区域基因组DNA的同源性;同时各个地区所特有的片段及条带亮度（扩增片段强度）又有差别。结论：不同地区嗜人按蚊在DNA水平绝大部分相同的前提下存在差异,这种差异的发现将为鉴定形态学上无法区分的嗜人按蚊地理种型提供水平的分类依据。     

致倦库蚊及大劣按蚊对拟除虫菊酯类杀虫剂的抗药性测定

目的掌握海南省致倦库蚊和大劣按蚊对拟除虫菊酯类杀虫剂的抗药性发生及发展趋势。方法采用幼虫浸渍法，测定其对拟除虫菊酯类杀虫剂的抗性倍数。结果五指山市、澄迈县和海口市的致倦库蚊对溴氰菊酯抗性倍数分别为7．50、6．67、8．00倍，对氟氯氰菊酯的抗性倍数分别为5．31、6．00、6．23倍；琼中县大劣按蚊对溴氰菊酯和氟氯氰菊酯的抗性倍数分别为1．12和1．31倍。结论海南省致倦库蚊对这2种拟除虫菊酯类杀虫剂均产生了低抗药性；而大劣按蚊尚未产生。     

用PCR技术测定按蚊人血指数的研究

目的建立一种能替代传统免疫学方法用于按蚊人血指数测定的分子生物学检测技术。方法根据人核糖体DNA序列设计1对特异性引物,建立聚合酶链反应（PCR）鉴定按蚊胃内人血的方法。同时,对猪血、牛血、羊血、小鼠血以及未吸血按蚊中提取的DNA进行检测,验证该检测方法的特异性,并对吸饲人血后不同时间（1、6、12、18、24、27、30、33、36、40、4J4、48h）的按蚊进行检测,测试该方法的检测敏感性。结果该方法可从人血提取的DNA中扩增得到519bp大小的特异性条带,对其他动物血样及未吸血按蚊中所提取的DNA均未能扩增出特异性条带;所有吸人血24h内的中华按蚊均能扩增出特异性条带,在吸人血后27、30、33、36h的各5只中华按蚊中,分别有4、4、2、1只能扩出特异性条带,吸血40h后的中华按蚊均不能扩增出特异性条带。Logistic回归分析表明,吸血后24-40h,PCR检测阳性按蚊数与吸血后的时间呈负相关关系（P〈0．01）。结论本研究所建立的PCR方法可准确鉴定吸血24h内的中华按蚊胃内的人血液来源,可替代传统免疫学方法用于按蚊人血指数的测定。     

应用形态和分子特征对我国海南省按蚊的鉴定研究

目的利用形态特征与分子特征相结合对我国海南省按蚊进行种类鉴定。方法研究样本为海南省4个不同地理环境所采集的按蚊成虫和幼虫,依据形态特征鉴定成虫后,测定和分析部分成虫和幼虫的rDNA？ITS2和28S？D3序列以进行分子鉴定。结果对采集的336只按蚊成虫进行形态鉴定,结果显示总共分为9种,其中迷走按蚊所占比例最高,为81.55%。测序获得成虫和幼虫的ITS2序列37条,D3序列41条,Blast对比的结果显示,形态鉴定的成虫中,1只乌头按蚊错定为微小按蚊;分子鉴定的幼虫包括中华按蚊、迷走按蚊、腹簇按蚊和未定名种（与圣代克按蚊和浅色按蚊同源性高）;序列分析发现在ITS2序列中迷走按蚊和微小按蚊分别存在1处（G/A）和2处（A/T）单碱基双峰,D3序列中迷走按蚊和腹簇按蚊存在3处（G/A）和1处（G/A）单碱基双峰。结论应用形态特征结合分子特征鉴定按蚊的可靠性和实用性强;分子特征提示迷走按蚊、微小按蚊和腹簇按蚊等处于隐种的分化中。     

DNA条形码识别Ⅲ．媒介蚊类DNA条形码芯片的初步研究

目的利用DNA条形码信息研制DNA芯片，建立快速高效的医学媒介蚊类鉴定方法。方法以蚊科5属15种，共30个样本为研究材料，获取其DNA条形码信息（CO I基因片段序列），采用基因块motif技术，搜索15个样本的同源保守基因序列，制作虚拟DNA条形码芯片。虚拟电子杂交30个样本，应用软件Bio-Edit计算属、种及种内个体间的同一性，应用phylip3．66软件以最大简约法分别对杂交结果和原序列进行聚类分析比较。结果选择78个DNA片段制作一张虚拟DNA条形码芯片，计算属间的平均同一性为0．75，同一属内种间的平均同一性为0．84，种内个体间的平均同一性为0．98，聚类分析结果一致。结论研制的虚拟DNA芯片能够鉴定本研究中的15种蚊虫，利用DNA条形码信息，设计DNA芯片在理论上可行。     

A diagnostic polymerase chain reaction assay for species A and D of the Anopheles Dirus (Diptera: Culicidae) species complex based on ribosomal DNA second internal transcribed spacer sequence

A polymerase chain reaction assay based on differences in the internal transcribed spacer regions of ribosomal DNA was developed for distinguishing 2 members of the Anopheles dirus sibling species complex. This assay distinguished An. dirus species A from species D by producing diagnostic bands, 374 base pairs (bp) in length for species A and 663 bp in length for species D. Both laboratory colonies and field collections from Hainan and Yunnan provinces of China were identified with 100% accuracy.     

Comparative susceptibility of Southeast Asian Anopheles mosquitoes to the simian malaria parasite Plasmodium cynomolgi.

Seven Anopheles species/isolates were compared with Anopheles dirus (control) for susceptibility to Plasmodium cynomolgi B strain. The mean numbers of oocysts in paired replicates of An. dirus and An. takasagoensis were not significantly different. The remaining test species had significantly fewer mean numbers of oocysts than Anopheles dirus (P less than 0.01). Anopheles dirus had the highest percentage of mosquitoes infected with P. cynomolgi sporozoites (82%). Of the test groups, Anopheles dirus B and An. takasagoensis had the highest percentage of mosquitoes with sporozoites, 77 and 78%, respectively. Fewer than 50% of Anopheles maculatus E and An. maculatus B (NN isolate) had sporozoites in the salivary glands. Anopheles maculatus B (HK isolate) and Anopheles philippinensis were the least susceptible, with fewer than 30% having sporozoites in the salivary glands.     

湖北省汉族女性亚甲基四氢叶酸还原酶和甲硫氨酸合成酶还原酶基因多态性分布研究

目的:分析湖北省汉族女性亚甲基四氢叶酸还原酶(methylenetetrahydrofolate reductase,MTHFR)C677T、A1298C及甲硫氨酸合成酶还原酶(methionine synthase reductase,MTRR)A66G基因多态性的分布特征。方法:采用横断面调查研究方法,以湖北省2 899例汉族女性为对象,采集口腔黏膜上皮细胞提取基因组DNA,采用Taqman-MGB技术进行MTHFR和MTRR基因多态性检测,统计分析基因多态性的分布特征并与已报道的其他地区的数据进行比较。结果:湖北省汉族女性的MTHFR 677TT纯合突变基因型频率为16.0%,高于海南省,低于山东省和河南省(P<0.01),与四川省的差异无统计学意义(P>0.05)。MTHFR 1298CC纯合突变基因型频率为4.5%,高于河南省,低于四川省和海南省(P<0.05),与山东省的差异无统计学意义(P>0.05)。MTRR 66GG纯合突变基因型频率为6.2%,低于海南省(P<0.01),与山东、河南和四川省的差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:湖北省汉族女性有不同于其他地区的MTHFR和MTRR基因多态性分布特征。     

Epidemiology of malaria in Attapeu Province, Lao PDR in relation to entomological parameters

Surveys were conducted in malaria-endemic villages in the southern province of Attapeu, Lao PDR during various seasons over a 3-year period. All-night mosquito landing collections, blood surveys and a case-control study were conducted. Plasmodium falciparum was the predominant species, and slide positivity rates were higher during the transition/dry season compared with the wet season. Anopheles dirus A was found to be the primary vector, and sporozoite rates were highest during the transition/dry season. Anopheles dirus was found to be endophagic and endophilic. Not using insecticide-treated bed nets, houses close to breeding sites and sleeping away from home were risk factors associated with malaria.     

运用空间局部内插研究海南省疟疾空间分布特征

目的：研究海南省疟 疾空间分布特征。方法：收集1995－1999年海南省各市（县）疟疾发病率资料，在AcrGIS8.1软件支持下，建立海南省疟疾发病的地理信息系统，并以此为基础利用空间局部内插分析建立海南省疟疾空间分布图，以交叉评价指标为依据选择无偏最优的空间分布图。结果：1995－1999年海南省疟疾空间分布图显示，南部疟疾发病率显著高于北部；南部地区发病主要集中于五指山、鹦哥岭山脉为中心的地区，且东部沿海的发病率普遍高于西部沿海。交叉评价指标显示，建立的海南省疟疾空间分布图是对海南省疟疾分布的无偏最优估计。结论：空间局部内插法能很好估计海南省疟疾的空间分布特征，可指导相应防制措施的实施。     

Anopheles dirus species E: chromosomal and crossing evidence for another member of the dirus complex

Cytogenetic and crossing data provide strong evidence for the existence of another species, dirus E in southwestern India, within the Dirus Complex of Anopheles. These findings are in accord with unpublished morphological observations. Our data suggest a significant genetic divergence between species E and its close relatives, An. dirus A, B and C in Thailand. These data also suggest that dirus E is an incipient sibling species of its geographically nearest relative, dirus D, and that it seemingly co-evolved through the process of allopatric speciation.     

云南西南部大劣按蚊染色体及其种内多态性研究

目的：对云南省西南部的大劣按蚊进行有丝分裂核型和多态性观察。方法：用１０％姬姆萨染色,观察染色体核型和异染色质区。结果：发现我省西南部大劣按蚊属于Ｄ型。结论：无论是常染色体,还是性染色体,其长度变化不一,且Ｘ染色体明显存在端着丝粒和亚端着丝粒情况。     

Excito-repellency of deltamethrin on the malaria vectors, Anopheles minimus, Anopheles dirus, Anopheles swadiwongporni, and Anopheles maculatus, in Thailand

This study compared the behavioral avoidance responses of 4 mosquito malaria vectors, Anopheles minimus, Anopheles dirus, Anopheles maculatus form B, and Anopheles swadiwongporni, to deltamethrin, the primary insecticide used for indoor residual spraying for malaria vector control in Thailand. Six test populations. representing 4 laboratory colonies and 2 wild-caught populations, were observed during and after exposure to deltamethrin at the operational dose (0.02 g active ingredient/m2) in excito-repellency escape chambers. The laboratory colonies included a deltamethrin-susceptible colony and a deltamethrin-resistant colony of An. minimus species A, 1 colony of An. dirus species B, and 1 colony of An. maculatus form B. The 2 wild-caught populations included An. swadiwongporni and members of the An. dirus complex. Times to escape by female mosquitoes during 30 min of exposure to deltamethrin-treated papers were observed in all populations and compared to nontreated paired controls in contact and noncontact test configurations. Strong behavioral avoidance was observed in the deltamethrin-resistant colony of An. minimus, followed by An. swadiwongporni and An. maculatus. The slowest escape response was observed in the colony of An. dirus species B. All 6 populations of Anopheles showed marked contact irritancy to deltamethrin compared to paired controls and noncontact repellency trials, in both controlled laboratory colonies and field-caught populations. The degree of repellency was less profound than irritancy but, in most cases, produced a significant escape response compared to paired controls. Avoidance behavior appears to be an innate behavior of mosquitoes, as indicated by the general avoidance response detected in all 4 species, regardless of deltamethrin susceptibility status, age, or nutritional and physiological status. Excito-repellency assays of the type described in this study should become an integral part of the overall assessment of an insecticide's ability to control disease transmission in any given area.     

海南省0～6岁智力低下儿童的流行病学调查

目的了解海南省儿童智力低下的患病率及分布情况,为政府更好地开展儿童康复救助和康复机构建设提供科学依据。方法抽查海南省18个不同市县0~6岁儿童37 862人,采用《儿童发育问题预警征象》调查表筛查,对筛查阳性儿童采用《盖塞尔发育诊断量表》及《婴儿-初中学生社会生活能力量表》经专科医师进行临床诊断。结果海南省智力低下总体患病率为6.1‰,智力低下儿童的患病率在性别(χ~2=4.57,P=0.032)和区域上(χ~2=8.46,P=0.037)差异无统计学意义;智力低下儿童的患病率在年龄差异有统计学意义(χ~2=211.81,P=0.000);海南省智力低下儿童轻度患病率高于中度和重度。结论海南省智力低下的患病率低于全国平均水平,严重程度仍以轻度智力低下为主。