罗浮粗叶木醇提物治疗鸭乙型肝炎的实验研究

[目的]观察罗浮粗叶木醇提物体内抗鸭乙型肝炎病毒(duck hepatitis Bvirus,D-HBV)的作用。[方法]采用RT-PCR技术筛选DHBV阳性3日龄广西麻鸭60只。将麻鸭随机分为空白对照组,模型组,罗浮粗叶木醇提物高、中、低剂量组和阿昔洛韦组。用药前、用药d7、d14、d21及停药d5,取各组麻鸭静脉血,采用实时定量荧光PCR技术检测血清DHBV-DNA含量,并检测血清中AST、ALT含量和DHBsAgOD值;停药5d后取肝脏组织进行病理组织学观察。[结果]观察期内,罗浮粗叶木醇提物高、中、低剂量组与模型组病毒载量随时间的变化趋势都比较接近,差异无统计学意义(P﹥0.05);罗浮粗叶木醇提物高、中、低剂量组与模型组比较,DHBsAg差异无统计学意义(P﹥0.05);罗浮粗叶木醇提物高、中、低剂量组ALT、AST值与模型组比较,差异无统计学意义(P﹥0.05);肝脏病理检查显示各组动物肝脏病变严重程度的差异无统计学意义(P﹥0.05)。[结论]罗浮粗叶木醇提物高、中、低3个剂量组均未见明显抑制DHBV复制的作用和对DHBV引起的肝损伤具有保护作用。     

地石榴全草水提物抗鸭乙肝病毒及护肝作用的实验研究

目的 探究地石榴全草水提物的抗鸭乙型肝炎病毒(Duck Hepatitis B Virus,DHBV)效果及护肝作用.方法 建立鸭乙型肝炎动物模型,将其分为6组:模型组、拉米夫定组、地石榴全草水提物高、中、低剂量组、空白组,每组10只,持续给药28 d.采用实时荧光定量PCR法测定给药前(T0)、给药后d7(T7)、d...     

鸭乙型肝炎病毒垂直传播的研究

本研究将鸭群分为雌雄鸭 DHBV DNA 均阳性和雌鸭阴性、雄鸭阳性两组,观察其子代鸭DHBV 感染情况。结果表明,前组子代鸭血清 DHBV DNA 阳性率(46.7％)显著高于后组(8.5%),提示 DHBV 可经卵细胞及精子细胞垂直传播。     

灵芝多糖治疗鸭乙型肝炎的实验研究

目的研究泰山赤灵芝提取物灵芝多糖抗鸭乙型肝炎病毒(duck hepatitis Bvirus,DHBV)的作用。方法采用实时定量荧光PCR技术筛选DHBV阳性麻鸭雏鸭60只。将实验动物随机分为模型组,灵芝多糖高、中、低剂量组和阿昔洛韦组。取用药前、用药第7、14天及停药第5天各组麻鸭静脉血,以RT-PCR检测血清DHBV DNA含量,并检测血清中AST、ALT含量。结果灵芝多糖高、中、低剂量组的病毒载量与模型组比较差异均无统计学意义(均P>0.05);灵芝多糖各剂量组AST和ALT含量与模型组比较,差异有统计学意义(P﹤0.05)。结论灵芝多糖高、中、低3个剂量组未见明显抑制DHBV复制的作用,但对肝细胞具有一定的保护作用。     

青蒿琥酯对鸭乙型肝炎病毒抑制作用的实验研究

目的用原代鸭肝细胞的培养模型,研究青蒿琥酯(ART)对鸭乙型肝炎病毒(DHBV)的抑制作用。方法制取雏鸭原代肝细胞(500000个/ml)于37℃、5%CO2培养24h存活后,除对照组外,给药组每48h换药1次,连续加药6d,收集细胞并测定DHBV DNA的含量。结果①在肝细胞毒性实验中,ART对鸭肝细胞无毒性,各药物组细胞存活率均在95%以上。②15、30、60μg/mlART对DHBV DNA均有明显的抑制作用,且浓度越大抑制作用越明显。结论实验结果提示,ART对DHBV有一定的抑制作用,且存在量效关系。     

感染鸭乙型肝炎病毒动物模型的应用研究

鸭乙型肝炎病毒(DHBV)与人HBV同属嗜肝DNA病毒科。通过对DHBV感染鸭模型的实验,可使我们进一步了解病毒生命周期中各种病毒基因的作用。因此,DHBV感染鸭模型是研究HBV合适的动物模型。文中就近年来利用该模型所开展的相关研究作一简要综述。     

天津口岸出入境人员乙型肝炎病毒基因分型研究

[目的]探讨天津口岸出人境人员乙型肝炎病毒（HBV）的基因类型分布特征。[方法]调查天津口岸出入境人员HBV血清学指标，采用实时荧光定量PCR结合Taqman探针技术对180份乙型肝炎表面抗原（HBsAg）阳性血清标本中的HBVDNA进行定量检测和基因分型；对非B非C型HBsAg阳性血清标本采用通用引物PCR方法结合序列分析进行基因分型。[结果]180份HBsAg阳性血清标本中，B型23份（40．35％）；C型30份（52．63％）；D型4份（7．02％），其余123份血清HBVDNA浓度均低于定量检测试剂盒的下限（500IU／ml）。[结论]天津口岸出入境人员中HBV基因型以C型为主，B型次之，D型极少。     

南平地区2006--2007年乙型肝炎病毒分子流行病学研究

目的了解南平地区2006-2007年乙型肝炎病毒的分子流行病学方法。方法对8县区综合医院210份乙型肝炎感染者,采用荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）检测HBV-DNA含量,ELlSA方法检测血清标志物（HBV-M）,PCR-RFLP方法对基因分型。结果HBsAg＋／HBeAb＋／HBeAg＋组HBV-DNA的阳性率为94．9％,HBV-DNA含量也最高。HBsAg阳性组-9HBsAg阴性组的HBV-DNA含量差异有统计学意义,HBeAg阳性组与阴性组的HBV-DNA含量差异有统计学意义。结论HBV-DNA含量与HBsAg、HBeAg的存在明显关联。HBV-DNA含量可真实反应HBV的感染和复制情况,对临床诊断、药物治疗及疗效观察有重要的指导意义。     

乙型肝炎病毒血清标志物与HBV DNA定量结果分析

目的探讨乙型肝炎病毒(HBV)血清学检测出现的组合模式与HBVDNA定量之间的关系,正确评价其临床意义。方法用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清标志物,用荧光定量PCR检测HBVDNA含量,依据乙肝病毒标志物阳性出现的模式分为7组A组191例,为HBsAg、HBeAg、HBcAb阳性(俗称大三阳);B组328例,为HBsAg、HBe-Ab、HBcAb阳性(俗称小三阳);C组26例,为HBsAg、HBeAg阳性;D组54例,为HBsAg、HBcAb阳性;E组35例,HBsAb、HBeAb、HBcAb阳性;F组11例,为HBsAb、HBcAb阳性;G组10例,为HBcAb阳性。结果各组HBVDNA>1.00ⅹ103拷贝/ml的阳性增高百分率分别为A组98.95%(189/191);B组46.34%(152/328);C组100%(26/26);D组57.41%(31/54);E组20.00%(7/35);F组18.18%(2/11);G组20.00%(2/10)。A组、C组与B、D、E、F、G组间HBVDNA阳性增高率有显著性差异(P<0.01),其他各组间比较有些差异有显著性,有些差异无显著性(P<0.01或P>0.05)。结论正确合理地分析HBV血清学指标出现的类型,与HBVDNA的联合动态检测有助于临床诊断、疗效观察及预后判断。     

荧光定量PCR技术用于乙型肝炎病毒宫内感染监测的临床观察

目的:探讨应用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸(HBV-DNA)在宫内感染监测中的意义。方法:应用FQ-PCR检测142例HBsAg阳性孕妇血清及其新生儿脐带血的HBV-DNA,应用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测孕妇血清及其新生儿脐带血的乙肝血清学标志物,并对其结果进行分析。结果:新生儿脐带血HBV-DNA阳性率(16.2)高于HBsAg的阳性率(9.85),P<0.01;血清HBeAg阳性孕妇,其新生儿脐带血HBV-DNA阳性率为41.0(16/39),高于HBeAg阴性孕妇组的阳性率6.80(7/103),P<0.01;新生儿脐带血的HBV-DNA阳性率随孕妇HBV-DNA含量增加而增加(P<0.01)。结论:孕妇血清HBV-DNA高含量是乙型肝炎宫内感染的高危因素,应用FQ-PCR检测新生儿脐带血HBV-DNA是监测乙型肝炎发生宫内感染的较敏感指标。     

鸭乙型肝炎病毒全基因重组质粒构建及表达

目的构建鸭乙型肝炎病毒（DHBV）感染性克隆,通过体外细胞转染获得单一来源、基因序列清楚的体内实验的感染毒种。方法以湖北麻鸭DHBV分离株（DQ276978）为模板,用PCR法从该DHBV全基因组克隆质粒（pMD-DHBV）和DHBV阳性血清中获取3部分基因片段,总长4.4kb,克隆至载体PCR2.1的SacI和NotI酶切位点,构建含1.5倍鸭乙型肝炎病毒全基因的重组质粒,并酶切鉴定其插入方向。将构建的重组质粒经脂质体Lipo-fectineTM 2000导入鸡肝癌细胞系（LMH）细胞中转染表达,收集纯化后的转染细胞培养上清液作为体内实验感染的标准毒种。结果PCR鉴定、酶切鉴定及序列测定,证实成功获得正向插入的1.5倍鸭乙型肝炎病毒全基因重组质粒PCR2.1-DHBV1.5。Southernblot检测表明,该重组质粒在LMH细胞内存在各种病毒复制中间体;通过电镜观察,转染细胞上清液中存在DHBV完整病毒颗粒。结论经体外重组,构建出携带1.5倍加长DHBV基因组片段的重组质粒PCR2.1-DHBV1.5,并可在鸡肝癌细胞LMH中介导高水平病毒复制,从而获得含可自我复制病毒颗粒的转染细胞上清液作为动物体内感染接种物。     

Validation of biocides against duck hepatitis B virus as a surrogate virus for human hepatitis B virus

The use of a surrogate virus, namely duck hepatitis B virus (DHBV), has been recommended for testing the virucidal activity of chemical biocides against hepatitis B virus. To date, however, this model has not been recognized as a standard test in European countries, as its laboratory use is associated with considerable difficulties. As previous studies have demonstrated, several alternative procedures may improve the validation of DHBV infection in a cell culture system. Using indirect immunofluorescent antigen staining and the light cycler real-time polymerase chain reaction (PCR) technique, the virucidal activity of peracetic acid (PAA), povidone-iodine (PVP-I) and formaldehyde was tested against DHBV obtained from congenitally infected ducks or prepared from the transfected hepatoma D2 cell line. The results demonstrated that inactivation of DHBV from the D2 cell line was achieved with lower concentrations of the biocides and within shorter exposure time intervals. These lower concentration-exposure time values for DHBV from D2 cells in comparison with DHBV from infected ducks indicated a higher sensitivity of the virus derived from D2 cells. In addition, concentrations of PAA and PVP-I that significantly inactivated DHBV in suspension tests were not able to destroy the viral genome. In conclusion, DHBV from congenitally infected ducks should be used for virucidal testing of chemical biocides against DHBV; DHBV prepared from D2 cells is unsuitable due to its higher sensitivity to biocides. Indirect immunofluorescent staining allows reliable detection of DHBV infectivity, whereas the hepadnavirucidal effect can be evaluated by quantitative PCR.     

青蒿琥酯抗鸭乙型肝炎病毒的体内实验

目的观察青蒿琥酯体内抗鸭乙型肝炎病毒(duck hepatitis B virus,DHBV)的作用。方法将DHBV DNA阳性麻鸭随机分为青蒿琥酯大、中、小剂量组、拉米夫定组和空白对照组,分别给予相应药物进行干预。用药前、用药第71、4、21、28天,及停药第7天,取静脉血用实时荧光定量PCR法检测血清DHBVDNA含量。治疗前后取肝脏组织作病理学检查。结果拉米夫定组于用药后,血清DHBV DNA水平迅速降低,停药后立即反跳。青蒿琥酯大剂量组第21、28天DHBV DNA抑制率与拉米夫定组相似,停药后仍有一定的抑制作用。中、小剂量组与空白对照组比较有一定的病毒抑制作用。病理改变各组在统计学上无明显差异。结论大剂量青蒿琥酯对DHBV DNA的抑制率与拉米夫定相似,维持时间长,安全,但其抗HBV作用尚需进一步研究。     

王不留行醇提物和水提物对离体蛙心的影响

目的 王不留行不同提取液对离体蛙心的影响及其作用机制初探。 方法 采用斯氏蛙心灌流法制备离体蛙心标本,然后在灌流液中分别加入不同质量浓度的王不留行提取液、阿托品、盐酸异丙肾上腺素,观察药物对离体蛙心的作用。 结果 王不留行醇提液对心肌收缩力和心率的抑制作用整体上较水提液对心肌收缩力和心率的抑制作用高。随着王不留行水提液质量浓度增大,对离体蛙心的心肌收缩力和心率的抑制率逐渐增大,除25 mg·ml-1质量浓度组外,50 mg·ml-1、75 mg·ml-1、100 mg·ml-1 3个剂量组给药后与给药前相比较差异有统计学意义（P＜0.05或P＜0.01）。王不留行醇提液组,除75 mg·ml-1质量浓度组对心率影响差异无统计学意义外,25 mg·ml-1、50 mg·ml-1、100 mg·ml-1 ?3个质量浓度组给药后的心肌收缩力和心率与给药前相比较差异有统计学意义（P＜0.05或P＜0.01）。随着细胞外钙离子浓度的增大,提取液对蛙心心肌收缩力的抑制率逐渐增强（P＜0.05或P＜0.01）,加入阿托品和盐酸异丙肾上腺素后提取液对离体蛙心的抑制作用有所降低。 结论 王不留行醇和水提取液对离体蛙心活动有一定的抑制作用,作用机制可能与钙离子通道有关。     

慢性乙型肝炎抗病毒治疗规范进展

有关慢性HBV感染的抗病毒治疗,近10余年来取得了显著进展。此文结合美国肝病协会最新的治疗规范就抗病毒治疗进展作相应介绍,包括HBeAg阳性及阴性的慢性乙型肝炎、代偿及失代偿肝硬化及其合并感染的患者、化疗患者、妊娠患者、耐药患者以及联合治疗等。     

六月青乙醇提取物对鸭乙型肝炎病毒抑制作用

目的观察六月青乙醇提取物(EELYQ)对鸭乙型肝炎病毒乙型肝炎表面抗原(DHBsAg)和乙型肝炎E抗原(DHBeAg)的抑制作用。方法采用1日龄雏鸭接种广西麻鸭乙型肝炎病毒(DHBV)强阳性血清,13 d后用PCR法筛选出DHBV强阳性鸭。随机分成5组:EELYQ高剂量组、中剂量组、低剂量组、模型组和阳性对照组,每组10只,各组雏鸭均灌胃给药14 d。于用药前(T₀)、用药7 d(T7)、14 d(T₁₄)及停药后3 d(P₃)分别采血,采用ELISA法测定上清液DHBsAg和DHBeAg的滴度。结果EELYQ中、高剂量组给药后血清DHBsAg和DHBeAg的滴度显著降低(P<0.01),停药3 d后,EELYO高剂量组血清DHBsAg和DHBeAg滴度无反跳现象。EELYQ高剂量组给药14 d(T₁₄)和停药3 d(P₃)后,DHBsAg抑制率分别达到51.85%和59.04%。EELYQ高剂量组给药14 d(T₁₄)和停药3 d(P₃)后,DH-BeAg抑制率分别达到34.27%和39.96%。EELYQ抑制DHBsAg和DHBeAg作用有明显的量效和时效反应关系。结论EELYQ可有效抑制DHBsAg和DHBeAg的表达。     

满天星积雪草苷抗鸭乙肝病毒作用

目的研究满天星积雪草苷抗鸭乙肝病毒的作用。方法将鸭乙型肝炎病毒DNA(DHBV-DNA) 阳性麻鸭随机分为5组:模型组, 阳性对照组(拉米夫定, 3TC), 满天星积雪草苷高、中、低剂量组, 每组10只, 各组麻鸭灌胃给药14 d, 于用药前、用药7、14 d及停药后3 d采血, 检测血清鸭乙肝病毒表面抗原/e抗原(DHBsAg/DHBeAg)、DHBV-DNA和谷丙转氨酶/谷草转氨酶(ALT/AST)给药前后的变化, 并观察肝组织病理改变。结果与模型组比较, 满天星积雪草皂苷高、中剂量组, 阳性对照组用药后血清中DHBV-DNA、HBsAg、HBeAg、ALT、AST水平均明显降低(均P<0.05);停药后3 d, 满天星积雪草皂苷高剂量组的DHBV DNA、HBsAg、HBeAg、ALT、AST水平为(1.21±0.11)、(0.12±0.01)、(0.11±0.01)、(122.4±15.5)、(85.2±9.4), 模型组为(3.05±0.15)、(0.22±0.01)、(0.17±0.02)、(270.4±16.4)、(141.9±9.8), 均低于模型组(均P<0.05), 阳性对照组为(2.36±0.13)、(0.18±0.01)、(0.15±0.01)、(233.5±13.8)、(121.3±10.2), 出现明显反跳现象;病理分析表明, 满天星积雪草苷对肝损伤有明显改善作用。结论积雪草苷能有效抑制HBV在体内复制, 可能是满天星中一个主要的生物活性成分。     

The effect of alcohol on serum lipid composition in hepatitis B virus carriers

The study was undertaken to examine adaptive reactions in alcoholics who were HBsAg carriers by using the values of the serum lipid spectrum. Under influence of an alcoholic factor, the alcoholic HBsAg carriers were shown to have higher levels of lipids and phospholipids and the absolute content of their fraction in the serum; the relative levels of free cholesterol, lysophosphatidylcholine, lysophosphatidylethanolamine, sphyngomyelin, and phosphatidylcholine were lower and those of cholesterol esters were higher than those in patients with acute hepatitis B. Thus, no normal adaptive reactions due to a long alcohol abuse might be a cause of ABsAg carriage in patients with alcoholism.     

壁虎粉提取物作用于乙型肝炎病毒侵袭的HepG2和HL-7702细胞的实验研究

目的探讨壁虎粉提取物对乙型肝炎病毒侵袭过的人肝癌细胞(HepG2)和人肝细胞(HL-7702)中乙型肝炎病毒的复制能力和细胞生长状况的影响。方法实验分壁虎粉干预组、干扰素干预组、乙肝对照组和正常对照组四组,除正常对照组,其他三组以终浓度为1×107IU/mL含HBV-DNA的患者血清侵袭2小时后,再以一定浓度壁虎粉提取物或干扰素分别作用于上述两种细胞,收集各时段的培养液上清和(或)细胞,检测培养液上清AST、ALT、r-GT和LDH含量;采用荧光定量PCR法检测HBV-DNA;AO/EB进行细胞凋亡染色。结果两种细胞不同组别(除正常对照组外)培养6天、9天较培养3天AST显著增高(P<0.01),以两个干预组增高更为明显;HepG2干预组各时间段LDH含量高于HL-7702干预组(P<0.01),以壁虎粉干预HepG2组增高最为明显,同时凋亡细胞增多也较明显;两干预组细胞HBV-DNA含量较乙肝对照组低约1个数量级。结论壁虎粉提取物和干扰素对HBV复制具有抑制作用,对HL-7702细胞作用更为明显;壁虎粉提取物可诱导肝癌HepG2细胞早期凋亡、坏死。