羧甲基壳聚糖与阿霉素联合用药的体外抗肿瘤作用

目的：探讨羧甲基壳聚糖与阿霉素联合应用对人宫颈癌Hela细胞及人结肠腺瘤LS174-T细胞增殖的影响。方法：采用MTT比色法测定单独和合用羧甲基壳聚糖与阿霉素对癌细胞的生长抑制作用。应用金氏公式进行联合用药分析。结果：羧甲基壳聚糖和阿霉素均可有效地抑制癌细胞生长,且同时给药对癌细胞可产生单纯相加至增强的协同杀伤效果。序贯给药法中先给阿霉素后给羧甲基壳聚糖结果为协同作用,先给羧甲基壳聚糖后给阿霉素为拮抗作用。结论：羧甲基壳聚糖与阿霉素同时联合用药可产生协同作用,序贯联合用药产生单向协同作用。     

姜黄素与阿霉素联合用药的体外抗肿瘤作用

目的　了解姜黄素与阿霉素联合应用对人白血病K5 6 2细胞及人肝癌Bel 740 2细胞的杀伤作用。方法　采用MTT法测定药物的体外杀伤作用 ,应用金氏公式进行联合用药分析。结果　姜黄素 2 0 4μmol·L-1～ 16 2 9μmol·L-1,阿霉素 0 70 μmol·L-1～ 5 5 2 μmol·L-1同时给药对K5 6 2细胞及Bel740 2细胞可产生单纯相加至增强的协同杀伤效果。序贯给药法中先给姜黄素后给阿霉素结果为协同作用 ,先给阿霉素后给姜黄素为拮抗作用。结论　姜黄素与阿霉素同时联合用药可产生协同作用 ,序贯联合用药产生单向协同作用。     

姜黄素逆转人白血病多药耐药细胞株HL—60／ADR的多药耐药性

目的 研究姜黄素与阿霉素联合应用对人白血病多药耐药细胞系HL-60／ADR耐药性的逆转作用。方法 采用MTT法测定药物的体外杀伤作用，应用金氏公式进行联合用药效果分析。应用流式细胞术分析细胞周期和测定细胞内药物浓度。结果 姜黄素2．00μmol／L～16．001μmol／L，阿霉素0．801μmol／L～6．401μmol／L同时给药对HL-60／ADR细胞可产生单纯相加至增强的协同杀伤效果，对HL-60／ADR细胞周期的影响也有协同作用，HL-60／ADR细胞内ADR积聚增加是其原因之一。序贯给药法中先给姜黄素后给阿霉素结果为协同作用，先给阿霉素后给姜黄素为拮抗作用。结论 姜黄素与阿霉素同时联合用药可产生协同作用，有效逆转多药耐药。序贯联合用药仅产生单向协同作用。     

环丙沙星增强抗体偶联药物(RC48)对HER2阳性肿瘤细胞增殖的抑制作用

目的探讨环丙沙星与抗HER2抗体药物偶联物RC48联合用药时的抑瘤活性及机制。方法CCK-8法分别检测环丙沙星单药、RC48单药及两者联合用药(在不同配比条件下同时或序贯用药)对HER2阳性肿瘤细胞增殖的抑制作用。联合指数法评价2种药物联用的效果。结果RC48单药对SK-BR-3及NCI-N87细胞增殖有显著的抑制作用,IC₅₀分别为(4.91±1.15)ng·mL^–1及(14.54±0.85)ng·mL^–1,最大抑制率分别为87.2%及82.3%。环丙沙星单药剂量在234.38～7 500 ng·mL^–1内无显著的抗肿瘤作用。当环丙沙星与RC48同时给药时,显著降低了RC48的抗肿瘤活性(P<0.05),两者表现为拮抗作用;但当其与RC48序贯给药(先给RC48后给环丙沙星,用药间隔为6～48 h)时,抗肿瘤活性显著升高(P<0.05),2种药物表现为协同作用,且在联合药效高达95.3%时,依然保持协同作用。结论RC48与环丙沙星序贯给药(间隔6～48 h,6 h最佳)可增强抗肿瘤效果...     

吉非替尼与5－氟尿嘧啶、紫杉醇联合对胃癌细胞MKN－45的抑制作用

目的：探讨吉非替尼与5－氟尿嘧啶（5－FU）、紫杉醇（ Paclitaxel）联合序贯对人胃癌细胞MKN－45的抑制作用,筛选出体外对胃癌有效的联合用药方案。方法采用免疫组化法鉴定MKN－45细胞内EGFR相关抗原,采用MTT法测定5－FU、紫杉醇与吉非替尼联合对 MKN－45细胞的抑制作用。利用combidrug软件分析联合用药的作用效果。结果表明MKN－45细胞内 EGFR相关抗原表达阳性。先用化疗药物24h序贯吉非替尼48h方式给药时,5－氟尿嘧啶,紫杉醇与吉非替尼均有协同作用,CI值＜1;先用吉非替尼48h序贯化疗药物24h方式给药时,5－氟尿嘧啶,与吉非替尼有协同作用,CI值＜1,紫杉醇与吉非替尼在fa＞0．85时,CI值＞1,呈拮抗作用。结论5－氟尿嘧啶与吉非替尼具有协同作用,联合效果不受序贯给药顺序的影响。先用紫杉醇24h序贯吉非替尼48h具有协同作用,联合效果优于其余两种给药方案。     

蛋白激酶C抑制药enzastaurin对吉非替尼耐药的人非小细胞肺癌细胞株生长的影响

目的：观察新型靶向制剂enzastaurin单独或联合吉非替尼对耐药人非小细胞肺癌细胞株的影响,设计合理的治疗药物组合。方法：CCK8法检测细胞增殖,Chou-Talalay联用指数法判定联合用药效果,流式细胞仪检测细胞周期变化。结果：单药吉非替尼及enzastaurin作用NCI-H460耐药肺癌细胞72 h的半数抑制浓度（IC50）分别为6.99μmol·L-1（95%CI 3.55~13.79μmol·L-1）,7.25μmol·L-1（95%CI 4.77~1.02μmol·L-1）。两药联合应用对肺癌细胞的抑制作用增强（P 〈0.05）,同时给药组抑制效果更显著（P〈0.01）。同时给药组、序贯给药组（先用吉非替尼）和序贯给药组（先用enzastaurin）吉非替尼对H460细胞的IC50值分别为0.006μmol·L-1（95%CI 0.002~0.020μmol·L-1）,0.02μmol·L-1（95%CI 0.011~0.037μmol·L-1）,0.085μmol·L-1（95%CI 0.042~0.170μmol·L-1）。联合指数法显示在吉非替尼浓度0.05μmol·L-1以上时,同时给药组联合指数均〈1。细胞周期分布实验结果显示同时给药组可显著提高G0/G1期细胞比例（P〈0.05）,阻滞细胞于G1期。结论：蛋白激酶C抑制药enzastaurin与EGFR抑制药吉非替尼联用具有较好的协同作用,两药联合应用可能是出现吉非替尼耐药的非小细胞肺癌后续治疗的一个新选择。     

赫赛汀与健择以序贯方式联合应用对乳腺癌细胞抑制作用的研究

目的:探讨赫赛汀与化疗药物健择联合作用于乳腺癌细胞时,在进行化疗的同时何时应用赫赛汀疗效最好及赫赛汀对于化疗药物作用的影响,从而为临床治疗提供实验依据。方法:利用MTT法测定单纯赫赛汀组、单纯化疗组以及不同时间点的赫赛汀结合化疗组对人乳腺癌细胞(MDA-MB543)的抑制率。结果:赫赛汀与健择联合作用时,各序贯方式与单药健择相比无明显差别(P=0.447),健择作用6h后应用赫赛汀的序贯方式有拮抗作用的趋向,其抑制率(40.18%)低于单药(42.91%),其他序贯方式略高于单药,以两药同时使用时抑制率最高(48.78%)。赫赛汀对于健择的抑制率的影响,各种序贯方式均使健择对于细胞的抑制作用减弱,即发挥拮抗作用,尤其健择作用6h后应用赫赛汀的序贯方式抑制率为26.40%,明显低于单药健择的42.91%(P<0.01);先赫赛汀后健择的序贯方式拮抗作用略弱于先健择后赫赛汀的序贯方式。结论:赫赛汀与健择联合没有明显提高健择对乳腺癌细胞的毒性作用,两药同时使用的序贯方式略优于其他序贯方式及单药健择;在各种序贯方式中,赫赛汀对健择起拮抗作用,健择使用后6h应用赫赛汀此拮抗作用最强,先健择后赫赛汀及同时使用的序贯方式的拮抗作用较弱。     

姜黄素与阿霉素合用对KB及KB_(v200)细胞的杀伤作用

目的　了解姜黄素与阿霉素联合应用对人口腔上皮癌KB细胞及其多药耐药KBv2 0 0 细胞的杀伤作用及其作用机制。方法　采用MTT法测定药物的体外杀伤作用 ,应用金氏公式进行联合用药分析 ;采用荧光分光光度法进行细胞内阿霉素蓄积测定 ,以荧光探针DPH标记 ,用荧光偏振法测定细胞膜流动性。结果　姜黄素 4 2 5～ 17 0 0 μmol·L-1与阿霉素合用 ,对KB及KBv2 0 0 细胞可产生单纯相加至增强的协同杀伤效果。姜黄素对阿霉素蓄积的影响 ,在KBv2 0 0 细胞显示增加 ,而在KB细胞则显示降低 ;膜流动性实验表明 ,姜黄素对KB及KBv2 0 0 细胞膜流动性均无影响。结论　姜黄素与阿霉素同时联合用药可产生协同作用。其机制在KBv2 0 0 细胞与增加细胞内阿霉素蓄积有关 ;在KB细胞可能与药效协同作用有关 ;但姜黄素对两种细胞的作用均与细胞膜流动性改变无关     

曲妥珠单抗与依托泊苷序贯联合应用对乳腺癌细胞抑制作用的研究

目的：探讨体外试验中曲妥珠单抗（HER）与依托泊苷（VP16）联合的最佳序贯方式、HER对VP16作用的影响及机制。方法：利用MTT法及流式细胞技术分别测定HER、VP16及不同序贯方式联合应用对人乳腺癌细胞的抑制率及细胞周期的影响。结果：VP16化疗前应用HER组及两药同时应用组对乳腺癌细胞抑制率均明显高于单药VP16组（P〈0.01）,为相加作用,其中以HER作用6h后应用VP16组效果最好。细胞周期检测提示：VP16化疗前应用HER组及两药同时应用组对细胞S期的阻滞增强。结论：VP16化疗前6h应用HER对乳腺癌细胞的抑制率最高,为最佳序贯联合方式,其内在机制可能与细胞周期的变化有关。     

组蛋白去乙酰酶抑制剂MS-275联合化疗药物体外抑制膀胱癌

目的：观察组蛋白去乙酰酶抑制剂MS-275联合DNA化疗药物对膀胱癌T24细胞的抑制作用。方法：用MTT法测定MS-275单用及分别与阿霉素、丝裂霉素C和顺铂联用对T24细胞的抑制率，用金氏公式法判断联合用药的效果。结果：MS-275分别与阿霉素、丝裂霉素C、顺铂联合用药对T24细胞的抑制率均随着浓度的增加而明显增加，MS-275与丝裂霉素C联用的协同作用最明显，而MS-275与阿霉素和顺铂在中低剂量下联用亦表现为协同作用。结论：组蛋白去乙酰酶抑制剂可明显增强DNA化疗药物对膀胱癌细胞的细胞毒作用，为应用于晚期膀胱癌的化疗方案中提供可能。     

胎盘免疫调节肽联合化疗药物抗肿瘤作用的研究

探讨胎盘免疫调节肽（ＰＩＰ）联合化疗药物对肿瘤细胞的影响。方法：ＰＩＰ联合化疗药物一方面在体外与Ｓ_（１８０）和Ｋ５６２细胞接触;另一方面作用于接种Ｓ_（１８０）和ＦＣ瘤细胞的小鼠,同时观察对肿瘤细胞增殖的影响及小鼠肿瘤重量和转移结节数。结果：ＰＩＰ与化疗药物联合作用明显抑制Ｓ_（１８０）和Ｋ５６２细胞的增殖。体内实验结果显示;环磷酰胺单独使用的抑瘤率和转移率为２３．７％和２０％,与ＰＩＰ联合作用为５８％和６,７％。结论：ＰＩＰ与化疗药物有明显的协同作用,对肿瘤细胞有明显抑制效应。     

姜黄素与紫杉醇联用对人子宫内膜癌细胞增殖的影响及其机制研究

目的探讨姜黄素（CCM）与紫杉醇（PIX）联用对人子宫内膜癌细胞（Ishikawa）增殖的影响及其机制。方法（1）设置对照组（不加药物）、CCM组（不同浓度的CCM）、PIX组、联合组（PIX联合不同浓度的CCM）;（2）采用MTT法检测不同浓度的CCM联合PIX对细胞活力的影响;（3）流式细胞术检测细胞凋亡率;（4）免疫组化法检测Caspase-3蛋白表达情况。结果CCM联用PIX能抑制人子宫内膜癌细胞的增殖（P〈0．05）,且随CCM浓度的增加,抑瘤作用增加;两种药物均可诱导细胞凋亡,且各组凋亡率与药物浓度呈正相关（P〈0．05）;免疫组化结果显示随着染毒浓度的增加和联合作用,Caspase-3蛋白的表达升高（P〈0．05）。两药联用抗瘤作用增强。结论CCM、PIX均可抑制人子宫内膜癌细胞的增殖、诱导细胞凋亡、上调细胞Caspase-3表达,呈剂量依赖性,且两者联用具有协同作用。     

尼美舒利与阿霉素联合应用对肝癌HepG_2细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨尼美舒利(n im esu lide,NIM)联合阿霉素(adriamyc in,ADM)对人肝癌细胞株HepG2的增殖抑制及诱导凋亡作用。方法采用MTT比色法检测药物的生长抑制作用,应用金正均法判断两药的相互作用,吖啶橙荧光染色观察细胞的形态学改变,流式细胞仪(flow cytom etry,FCM)检测细胞凋亡率。结果MTT结果显示NIM(25、50、100μmol.L-1)与ADM(0.156,0.313,0.625 mg.L-1)联合应用对人肝癌细胞株HepG2的增殖抑制均有不同程度的协同作用(q>1.15),联合用药组与ADM各单药组相比差异有显著性(P<0.01)。吖啶橙荧光染色可见典型的凋亡形态学特征。FCM检测凋亡显示NIM 100μmol.L-1和ADM2.5 mg.L-1单独及联合应用48 h后DNA直方图上均出现典型的亚二倍体“凋亡峰”,联合用药组凋亡率(19.6%)明显高于各单独用药组(2.48%和10.6%)。结论NIM与ADM联合应用具有协同抑制人肝癌细胞株HepG2细胞增殖与诱导其凋亡作用。     

Evaluation of combinations of antineoplastic ether phospholipids and chemotherapeutic drugs.

Combinations of drugs are used clinically for the therapeutic advantages they may provide over single agents. We have studied the cytotoxic interaction between four either phospholipids ET-18-OCH3, BM 41.440, BN 52205 and BN 52211, and several chemotherapeutic drugs (ADM, CDDP, VLB, VP-16, MMC, BLM and MTX) on two human tumor cell lines, A427 (lung) and HT29 (colon). We have used the MTT colorimetric assay to evaluate growth inhibition and performed isobologram analysis on the IC50 data. For both cell lines a synergistic effect has been found between each of the four ether phospholipids in association with CDDP and ADM. In both cell lines only BM 41.440 and BN 52211 act synergistically with VLB while, in A427 cells, only BN 52205 behaves similarly with MMC. These results show that a positive interaction exists between ether phospholipids, spindle poisons and DNA-interactive drugs.     

Anti-hepatoma human single-chain Fv antibody and adriamycin conjugates with potent antitumor activity

To construct an improved biological missile, an immunoconjugate ADM–Dex–ScFv-SA3 was synthesized, which was composed of a hepatocellular carcinoma-specific, single-chain Fv antibody (ScFv-SA3) and a highly potent cytotoxic drug, adriamycin (ADM), as the warhead. Oxidized Dextran T10 (Dex-T10) was used as a linker to connect these two moieties. The 40 KD soluble anti-hepatoma human Trx-ScFv-SA3 protein was expressed in E. coli BL21 (DE3), using a prokaryotic expression vector, pET21a (+)-Trx-ScFv-SA3-His. It was purified using a His-Tag Ni-Agarose column and identified by western blot. The activity of Trx-ScFv-SA3 was verified by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) and immunocytochemistry to confirm that it specifically binds to the hepatocellular carcinoma cell line HepG2. To prepare ADM–Dex–ScFv-SA3, ADM was conjugated to the antibody at a molar ratio of 14.21:1. The antitumor effect of the conjugate was tested by MTT assay, plate colony formation assay and xenografts in a nude mice experimental model. In vitro experiments revealed that ADM–Dex–ScFv-SA3 could bind to tumor cells selectively and inhibit the proliferation and the colony formation ability of HepG2 cells. In vivo experiments showed that ADM–Dex–ScFv-SA3 suppressed the tumor growth and prolonged the median survival time in tumor-bearing mice. Tumor histology slides indicated a significantly slower tumor tissue proliferation in the ADM–Dex–ScFv-SA3 group. These data indicate that the targeted drug, ADM–Dex–ScFv-SA3, may be a highly potent and selective therapy for the treatment of hepatoma.     

黄癸素联合5氟尿嘧啶对腺样囊性癌细胞的影响

观察黄癸素联合5-氟尿嘧啶对肿瘤细胞的协同抑制作用,并初步探讨其与P53蛋白表达的关系.采用MTT法检测黄癸素联合应用5-氟尿嘧啶对体外培养人涎腺腺样囊性癌细胞Acc-3细胞增殖的抑制作用,计算IC50和联合指数(CI值)判断药物协同作用效果;应用westem印迹法分析P53蛋白的表达.结果显示,与二药单用比较,黄癸素联用5氟尿嘧啶对Acc-3细胞的抑制作用更显著,IC50显著降低,二药联用对癌细胞株的CI值均小于1,表现为较显著的协同效果.同时可观察到细胞核P53表达显著下降,该结果可能与二药在作用机制方面的协同有关.     

小剂量紫杉醇对乏氧Hela细胞放射敏感性影响的研究

目的探讨紫杉醇对正常和乏氧状态下人宫颈癌细胞Hela的放射增敏作用。方法细胞乏氧模型、细胞放疗、采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）快速比色法检测细胞增殖率;结果不同浓度的紫杉醇作用于乏氧和正常状态下的Hela细胞,均表现出增殖抑制作用,且呈浓度依赖性,乏氧状态下的Hela细胞增殖率明显大于正常状态下的细胞,两者相比差异有统计学意义（P〈0.05）,说明乏氧细胞可对对化疗药物表现出一定的抵抗作用。小剂量的紫杉醇（1×10-3mg/L）可增加正常和乏氧状态下的He-la细胞对放射线的敏感性,其增殖率分别为（19.67±5.06）%、（12.38±3.55）%,且两者相比差异无统计学意义（P〉0.05）。结论乏氧细胞对化疗药物有一定的抵抗作用;紫杉醇对乏氧及正常状态下的Hela细胞均有抑制作用,且呈现浓度依赖性;小剂量的紫杉醇对乏氧状态下的Hela细胞具有放射增敏作用。