二烯丙基二硫增强胃癌细胞对5-Fu敏感性的研究

目的探讨二烯丙基二硫(DADS)对5-Fu诱导胃癌MGC803细胞增殖与凋亡的作用及机制。方法采用四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT),测定DADS对5-Fu诱导MGC803细胞增殖活性的作用;应用流式细胞仪检测细胞凋亡率;Westernblot检测MGC803细胞Bcl-2,Bax,Mcl-1蛋白的表达情况。结果1mg/L、3mg/L的DADS分别与5-Fu联合应用,可增强5-Fu对MGC803细胞增殖抑制作用。DADS(1mg/L)能促进5-Fu诱导MGC803细胞的凋亡。DADS作用于MGC803细胞后,Bcl-2、Mcl-1蛋白表达水平下调,Bax蛋白表达水平上调呈浓度依赖方式。结论ADS能增强5-Fu对MGC803细胞增殖抑制和诱导凋亡,起化疗增敏作用,可能与其下调Bcl-2、Mcl-1蛋白表达水平,上调Bax蛋白表达水平有关。     

绿原酸对人胶质瘤细胞U251的抗肿瘤活性及其促凋亡机制

 目的 研究绿原酸对人胶质瘤细胞U251细胞株增殖、凋亡的作用及其机制。方法 培养人胶质瘤U251细胞，不同浓度绿原酸处理细胞48 h后，CCK-8法检测细胞生长抑制率，观察细胞形态学变化；Annexin V-FITC/PI染色法检测细胞凋亡，RT-PCR及Western blot检测p53、Livin、Bcl-2、Bax mRNA和蛋白的表达，Western blot检测Caspase-3蛋白的表达。结果 不同浓度绿原酸干预U251细胞48 h后显著抑制细胞的增殖活性，促进细胞凋亡，并且能够上调p53和Bax基因，下调Livin、Bcl-2 mRNA和蛋白的表达，促进Caspase-3蛋白的表达。结论 绿原酸可能是通过上调p53和Bax的表达，下调Livin和Bcl-2的表达，激活Caspase-3蛋白，最终诱导U251细胞凋亡。     

槐耳清膏体外诱导人肝癌细胞MHCC97H凋亡

[目的]研究槐耳清膏对人肝癌细胞MHCC97H凋亡的作用及其机制。[方法]不同浓度槐耳清膏及5-Fu分别与人肝癌细胞MHCC97H共同培养,采用CCK-8法、FCM及荧光显微镜检测细胞增殖与凋亡变化,细胞免疫组化检测Bax、Bcl-2及p53基因的表达。[结果]槐耳清膏在体外可抑制MHCC97H细胞的增殖,诱导MHCC97H细胞产生早期凋亡,且作用具有剂量和时间依赖性。荧光显微镜下细胞呈典型的早期凋亡形态学改变。细胞免疫组化可见Bax及p53蛋白表达增强,而Bcl-2蛋白表达减少。[结论]槐耳清膏能明显诱导人肝癌细胞MHCC97H凋亡,其机制可能与改变凋亡相关基因Bax、Bcl-2、p53的表达有关。     

白屈菜碱对KB细胞株的抗肿瘤作用机制探讨

目的:探讨白屈菜碱(chelidonine)对人口腔上皮样癌细胞KB细胞株的抗肿瘤作用机制。方法:以不同浓度的白屈菜碱作用于体外培养的KB细胞株24、48、72 h,应用MTT检测细胞生长抑制率;Transwell小室检测肿瘤细胞的侵袭作用;流式细胞仪检测细胞凋亡率;免疫印迹实验分析Caspase-3、Bax、Bcl-2、MMP-2、MMP-9信号通路相关蛋白的表达水平。结果:MTT结果显示白屈菜碱对KB细胞株的增殖具有明显的抑制作用,且呈时间剂量依赖性;侵袭试验结果表明,白屈菜碱能够抑制KB细胞侵袭作用,且随着浓度的增大,抑制侵袭作用增强;流式双染检测白屈菜碱作用KB细胞24 h后细胞的凋亡率,与对照组相比差异有统计学意义;蛋白免疫印迹试验显示白屈菜碱组的Caspase-3、Bax表达明显上调,Bcl-2、MMP-2、MMP-9表达下调,与对照组相比差异有统计学意义。结论:白屈菜碱对KB细胞具有明显的抑制增殖、侵袭和促进凋亡的作用;其抗肿瘤机制可能与下调Bcl-2、MMP-2、MMP-9,上调Caspase-3、Bax的表达有关。     

苦参碱促进三苯氧胺诱导乳腺癌Bcap-37细胞凋亡的机制研究

[目的]研究三苯氧胺(TAM)联合低剂量苦参碱对人乳腺癌Bcap-37细胞的增殖抑制及作用机制.[方法]用MTT法检测各组细胞的抑制率,克隆形成实验检测对细胞增殖的影响,流式细胞仪检测细胞凋亡率,Western blot法检测p53、Bax、Bcl-2蛋白表达.[结果]TAM对Bcap-37细胞增殖具有明显抑制作用,且具有剂量和时间依赖性,与低剂量苦参碱联合,其抑制作用明显增强.药物作用24、48、72h后,与对照组相比,TAM组的凋亡率均明显增高(P＜0.01);与TAM组相比,联合组的凋亡率均明显增高(P＜0.01).Western blot检测发现,与对照组相比,TAM组p53、Bax蛋白表达增加,Bcl-2蛋白表达降低;与TAM组相比,联合组p53、Bax蛋白表达增加,Bcl-2蛋白表达降低.[结论]低剂量苦参碱能促进TAM对Bcap-37细胞增殖抑制作用,其作用机制与增加p53、Bax蛋白表达,降低Bcl-2蛋白表达,促进细胞凋亡有关.     

白杨素对人胃癌SGC-7901细胞增殖与凋亡的影响

 目的 探讨白杨素（Chrysin,ChR）诱导人胃癌SGC-7901细胞株凋亡的作用及机制。方法 分别用10、20、40、80μM的ChR处理人胃癌细胞株SGC-790148h,采用MTT比色法检测ChR对SGC-7901细胞的增殖抑制效应;采用丫啶橙（AO）染色、流式细胞术检测ChR诱导SGC-7901细胞凋亡的发生;应用Western-blot法检测凋亡相关基因NF-κB、Bcl-2、Bax的蛋白表达,并用计算机图像分析软件进行半定量分析。结果 MTT比色法显示的10～80μM的ChR在体外对人胃癌SGC-7901细胞有增殖抑制率为：9.71%～53.64%,该作用呈浓度依赖性;AO染色荧光显微镜观察ChR在体外能诱导人胃癌SGC-7901细胞发生凋亡,出现早期凋亡细胞及凋亡小体;流式细胞术检测结果显示：ChR呈浓度依赖性地诱导SGC-7901细胞凋亡,凋亡率为2.35%-20.8%;Western-blot检测结果显示：凋亡相关基因Bcl-2、NF-κB蛋白表达下调,Bax蛋白表达上调。结论 ChR对体外培养人胃癌细胞具有增殖抑制和诱导凋亡作用,呈浓度依赖性。ChR对人胃癌细胞增殖抑制和诱导凋亡作用机制可能与其抑制NF-κB活化、下调Bcl-2蛋白表达和上调Bax蛋白表达相关。     

索拉非尼对宫颈癌细胞的增殖抑制作用及对PCNA、Survivin表达的影响

目的 探讨索拉非尼对宫颈癌细胞株增殖和凋亡的影响。方法体外培养宫颈癌HeLa、SiHa细胞株,实验分为空白对照组、阴性对照组（DMSO）和索拉非尼（0、25、5、10、20 μmol／L）处理组。光学显微镜观察各组细胞形态学改变;Hoechst荧光染色观察凋亡细胞核的形态学变化;采用MTS法检测索拉非尼对HeLa和SiHa细胞的增殖抑制作用;免疫细胞化学法检测索拉非尼（10 μmol／L）处理HeLa、SiHa细胞48 h后Survivin蛋白的表达;Western blotting检测索拉非尼对宫颈癌HeLa、SiHa细胞PCNA、Survivin蛋白表达的影响。结果不同浓度索拉非尼作用48 h后,HeLa、SiHa细胞出现了凋亡形态学改变;Hoechst染色显示,HeLa、SiHa细胞的胞核变小、固缩,荧光明显增强。MTS检测显示,索拉非尼可抑制宫颈癌HeLa、SiHa细胞增殖,并呈浓度依赖性（P＜0.05）。免疫细胞化学法检测显示,阴性对照组Survivin在HeLa和SiHa细胞中的平均光密度值分别为0.19±0.05和0.17±0.07,与索拉非尼处理组的0.13±0.01和0.13±0.03比较,差异均有统计学意义（P＜0.05）。Western blotting检测显示,索拉非尼在蛋白水平上能够降低PCNA、Survivin表达,且这种下调作用具有浓度依赖性。结论索拉非尼能诱导HeLa、SiHa细胞凋亡,抑制其增殖且呈浓度依赖性,其机制可能与下调癌基因 PCNA、Survivin表达有关。     

细胞周期蛋白激酶抑制剂flavopiridol对尤文肉瘤耐药细胞增殖抑制的实验研究

目的:探讨细胞周期蛋白激酶抑制剂(flavopiridol)在体内外抑制尤文肉瘤阿霉素耐药细胞株WE-68/ADR增殖的作用及其机制。方法:四甲基偶氮唑蓝法(MTT法)测定细胞增殖抑制率。流式细胞计数法测量flavopiridol给药后WE-68/ADR细胞周期的变化及凋亡率。免疫印迹法(Western-blot)检测细胞中Bax、Bcl-2、p53及活化型多聚ADP核糖多聚酶(PARP-85)蛋白的表达。皮下注射WE-68/ADR细胞建立荷瘤裸鼠模型,17flavopiridol腹腔内给药,测量肿瘤体积及裸鼠体重变化,计算肿瘤抑制率。结果:Flavopiridol可抑制尤文肉瘤阿霉素耐药细胞株WE-68/ADR的细胞增殖,其效果呈时间及浓度相关性(P<0.05)。Flavopiridol给药后,耐药细胞株WE-68/ADR的细胞凋亡比明显高于对照组(P<0.05)。同时,耐药细胞株中的Bax、p53及PARP-85的表达增加,而Bcl-2的表达被下调。Flavopiridol可有效抑制荷瘤小鼠体内耐药细胞株的生长。结论:细胞周期蛋白激酶抑制剂flavopiridol可在体内外有效抑制尤文肉瘤阿霉素耐药细胞株的增殖,其机制可能与p53介导的线粒体凋亡信号传导途径有关。     

p53和Bcl-2 mRNA表达在三七皂苷R1诱导HL-60细胞凋亡中的作用

目的：探讨三七皂苷R1诱导HL-60细胞凋亡的作用机制.方法：采用MTT比色法观察三七皂苷R1对人白血病细胞株HL-60细胞增殖的抑制作用.采用流式细胞术检测细胞凋亡改变,并以RT-PCR检测凋亡调节基因p53、Bcl-2的表达.结果：三七皂苷R1能明显抑制人白血病细胞株HL-60细胞的生长,且呈时间和浓度依赖性.三七皂苷R1作用后人白血病细胞株HL-60细胞呈现凋亡特征,流式细胞术显示凋亡细胞比例升高.RT-PCR检测可见p53 mRNA表达显著增加,而Bcl-2 mRNA表达减少.结论：三七皂苷R1能诱导人白血病细胞株HL-60细胞凋亡,其作用可能与凋亡调节基因p53的上调和Bcl-2的下调有关.     

Vandetanib对人卵巢癌细胞抑制作用机制探讨

目的探讨Vandetanib对人卵巢浆液性乳头状腺癌细胞株SKOV3和卵巢癌顺铂耐药细胞株SKOV3/DDP的增殖抑制作用及其机制。方法采用MTT法检测体外不同时间不同浓度的Vandetanib对SKOV3及SKOV3/DDP细胞的杀伤作用,计算半数抑制浓度（IC50）;流式细胞术检测药物对细胞凋亡及其周期分布变化;采用蛋白质印迹法分析凋亡基因Bcl-2、Bax及反映肿瘤细胞侵袭力的基因MMP-2的蛋白表达变化。结果与对照组相比,Vandetanib能明显抑制SKOV3和SKOV3/DDP生长,呈时间-剂量依赖性,IC50值均呈明显减小趋势。32μmol/L的Vandetanib作用SKOV3和SKOV3/DDP 72h后,抑制率分别为（43.21±0.92）%和（56.74±1.09）%,64μmol/L的Vandetanib作用SKOV3和SKOV3/DDP72h后,抑制率分别为（55.37±1.21）%和（79.20±0.39）%,耐药株SKOV3/DDP的抑制率明显高于敏感株SKOV3,差异有统计学意义,P〈0.05。流式细胞术结果显示,随时间浓度的增加,两种细胞凋亡明显增加,G1期细胞增加,S期和G2期细胞减少,差异有统计学意义,P〈0.05。蛋白印迹法结果显示,药物作用于SKOV3细胞株Bcl-2、MMP-2表达减少,Bax表达无明显变化;药物作用于SKOV3/DDP细胞株Bcl-2表达减少,Bax表达增加,耐药株不表达MMP-2。结论 Vandetanib对两种细胞株生长有明显的呈时间及浓度依赖性的抑制作用,可以诱导细胞凋亡并将细胞阻滞于G1期,其机制与下调Bcl-2/Bax、MMP-2表达有关,有利于降低卵巢癌细胞的侵袭力。     

MIF重组质粒转染人宫颈癌SiHa细胞及其对CyclinD1表达的影响

目的 探讨巨噬细胞移动抑制因子（Macrophage migration inhibitory factor, MIF）重组质粒转染人宫颈癌SiHa细胞后MIF的表达及其对CyclinD1表达的影响。方法 构建并鉴定重组真核表达质粒pEGFP-N1-MIF,转染人宫颈癌SiHa细胞;ELISA法检测细胞上清液中MIF的表达;real-time PCR及免疫细胞化学法检测细胞中MIF、CyclinD1 mRNA及蛋白的表达水平;MTT法及Boyden小室法分别检测细胞增殖和体外迁移能力。结果 重组质粒pEGFP-N1-MIF成功构建并转染至SiHa细胞;ELISA证实转染pEGFP-N1-MIF的实验组细胞上清液中MIF表达均高于各对照组（P<0.01）;real-time PCR及免疫细胞化学法证实实验组细胞中MIF、CyclinD1 mRNA和蛋白的表达水平均高于各对照组（P<0.01）;MTT法和Boyden小室法检测到转染pEGFP-N1-MIF后细胞体外增殖、迁移能力明显高于各对照组（P<0.01）。结论 转染重组质粒pEGFP-N1-MIF后SiHa细胞中MIF表达水平增高,MIF过表达可增强SiHa细胞体外增殖、迁移能力,并上调 CyclinD1的表达。     

Bcl-XL反义寡核苷酸增强食管癌细胞对5-氟尿嘧啶的敏感性

目的探讨Bcl -XL反义寡核苷酸(ASODN)在下调Bcl- XL表达、增加食管癌细胞株EC9706对5氟尿嘧啶(5Fu)敏感性中的作用。方法设细胞对照组、空白对照组、无关序列寡核苷酸(N ODN)组、ASODN组、5Fu组及ASODN联合5Fu组,应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测EC9706细胞的增殖抑制率;RT PCR和Westernblot检测Bcl- XLmRNA和蛋白表达水平的改变;吖啶橙荧光染色和流式细胞技术定量检测EC9706细胞的凋亡率。结果Bcl -XLASODN联合5Fu治疗组对食管癌细胞增殖的抑制率为71.58%,对Bcl XLmRNA表达抑制率为81.25%,并可显著下调Bcl XL的蛋白表达;凋亡指数为69.5%,凋亡率为(63.32±9.23)%,与细胞对照组、空白对照组、N -ODN组、ASODN组及5Fu组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论ASODN联合5Fu可有效抑制食管癌细胞EC9706的增殖,通过ASODN下调Bcl XL表达,可显著增强食管癌细胞对5Fu的敏感性。     

鸦胆子油乳对宫颈癌SiHa细胞的抑制

目的：探讨鸦胆子(Brucea javanica)油乳在体外对宫颈癌SiHa细胞的抑制作用及其作用机制。方法：以鸦胆子油乳（2.5、5.0、10、20、40、80 μg/ml）作用于SiHa细胞24、48、72 h,以MTT法检测鸦胆子油乳对SiHa细胞增殖的抑制作用;透射电镜观察细胞的超微结构;琼脂糖凝胶电泳观察SiHa细胞基因组DNA片段化改变;流式细胞术测定AnnexinV/PI双染色后SiHa细胞凋亡率。结果：MTT结果显示,鸦胆子油乳以剂量和时间依赖方式对SiHa细胞增殖有明显的抑制作用,其中80 μg/ml 药物作用72 h时的抑制率可达92.43%;20 μg/ml药物作用后,透射电镜下可观察到细胞出现凋亡小体,琼脂糖凝胶电泳显示细胞凋亡特征性的DNA片段化“梯状”条带;流式细胞仪检测显示,10、20、40 μg/ml药物组作用48 h后凋亡率分别为（8.02±241）%、（51.60±7.67）%、（77.22±5.80）%。结论：鸦胆子油乳能够抑制SiHa细胞增殖,其作用机制可能为诱导SiHa细胞发生凋亡。     

过表达巨噬细胞移动抑制因子对子宫颈癌SiHa细胞中白细胞介素8及基质金属蛋白酶9表达的影响

目的 研究过表达巨噬细胞移动抑制因子（MIF）对子宫颈癌SiHa细胞中白细胞介素8（IL-8）、基质金属蛋白酶9（MMP-9）表达及细胞侵袭迁移能力的影响.方法 化学合成MIF cDNA,设计含Xhol和BamHI酶切位点的引物序列,利用聚合酶链反应（PCR）方法 扩增MIF基因片段,构建人pEGFP-N1/MIF真核表达载体,采用脂质体转染法将载体转染到SiHa细胞中;酶联免疫吸附法（ELISA）检测各组上清液中MIF的表达,采用实时荧光定量PCR、免疫细胞化学法分别检测各组细胞中MIF、IL-8、MMP-9 mRNA和蛋白的表达,Boyden小室穿膜迁移实验检测过表达MIF对细胞迁移能力的影响.结果 转染pEGFP-N1/MIF组细胞上清液中MIF蛋白表达明显升高（F组别=8267.564,P＜ 0.01）;转染pEGFP-N1/MIF组细胞中MIF、IL-8、MMP-9 mRNA及蛋白也均过表达（F值分别为7019.619、2148.094、3303.540、1565.114、2807.300、523.466,均P＜0.01）;Pearson相关分析表明,MIF与IL-8、MMP-9之间mRNA和蛋白的表达均存在正相关（r值分别为0.865、0.895、0.934、0.908,均P＜0.01）,转染pEGFP-Nl/MIF组细胞的迁移能力明显增强（F=3430.898,P＜ 0.01）.结论 子宫颈癌SiHa细胞中过表达MIF能提高子宫颈癌细胞的侵袭、转移能力,其机制可能与IL-8、MMP-9表达上调相关.     

氧化赖氨酸的抗肿瘤作用及其免疫学活性

目的研究氧代赖氨酸（ＯＸＬ）抗肿瘤作用及其免疫学活性。方法用 用ＭＴＴ法体外观察小鼠腹水肝癌－２（Ｈ－２２）细胞的生长及其脾淋巴细胞增殖。结果ＯＬＸ９６．３－２００μｇ／ｍｌ）单用对比Ｈ－２２细胞生物抑制作用较小;但与４－氟脲嘧啶（５－Ｆｕ）合用,可协同抑制Ｈ－２２细胞生长、抑制率由单用ＯＸＬ（２５μｇ／ｍｌ）时的１３．８％或单用５－Ｆｕ（３．１μｇ／ｍｌ）时的１８．９％,提高到合用的４３．１％。     

HPV16-E6上调MIF对宫颈癌细胞增殖和凋亡的影响

目的 检测人乳头瘤病毒16型的致癌基因E6（HPV16-E6）通过巨噬细胞移动抑制因子（MIF）对宫颈癌细胞增殖和凋亡的影响。方法 用HPV16-E6过表达和干扰质粒转染能分泌MIF的人宫颈癌细胞C33A、SiHa和Caski。Western blot和荧光定量PCR法检测MIF蛋白和mRNA表达,并用ELISA法检测培养上清液中MIF蛋白量;将转染后的宫颈癌细胞与人巨噬细胞非接触性共培养,检测巨噬细胞中MIF表达;C33A转染HPV16-E6后加或不加MIF抑制剂,CCK-8法和流式细胞术检测细胞增殖、周期和凋亡情况;采用Pearson相关分析法分析HPV16-E6和MIF间的关系、Kaplan-Meier分析HPV16-E6对患者生存率的影响。结果 癌细胞、上清液和巨噬细胞中MIF表达随HPV16-E6表达而上调（P<0.05）;HPV16-E6过表达可诱导C33A细胞增殖、减少G0/G1期细胞和抑制细胞凋亡;抑制MIF后,细胞增殖率下降、 凋亡率增加（P<0.05）;HPV16-E6表达与MIF正相关（P<0.05）,Kaplan-Meier分析显示HPV16-E6表达与患者总生存率和无进展生存率有关（P<0.05）。结论 HPV16-E6可诱导宫颈癌细胞及其微环境中巨噬细胞MIF表达,并可通过MIF诱导宫颈癌细胞增殖和抑制细胞凋亡而影响宫颈癌的预后。     

异紫堇定碱对人宫颈癌Siha细胞增殖影响的实验研究

  目的   探讨异紫堇定碱（Isocorydione）对人宫颈癌Siha细胞增殖的影响。   方法   以100、200、400、800、1 200 μmol/L浓度的异紫堇定碱对人宫颈癌Siha细胞体外干预,分别作用24、48、72 h后,采用MTT法检测异紫堇定碱对人宫颈癌Siha细胞生长增殖的作用;流式细胞仪检测异紫堇定碱对人宫颈癌Siha细胞周期的影响;结合Hoechst染色观察处理后Siha细胞核微形态的变化;Western Blot法检测异紫堇定碱对人宫颈癌Siha细胞作用后凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、Caspase-3表达的影响。   结果   MTT结果显示不同浓度的异紫堇定碱作用于人宫颈癌Siha细胞后具有明显的抑制其增殖的作用,呈剂量-时间依赖关系（P < 0.05）;流式细胞仪检测结果显示400 μmol/L的异紫堇定碱作用于人宫颈癌Siha细胞后,细胞周期发生明显改变,其中G1和S期细胞比例变化不明显,但G2期细胞明显减少（P < 0.05）;Hoechst染色结果显示,与对照组比较,400 μmol/L的异紫堇定碱作用于Siha细胞48 h后形态缩小、细胞核固缩,出现核碎裂形成凋亡小体;Western Blot结果显示400 μmol/L的异紫堇定碱分别作用于人宫颈癌Siha细胞24、48、72 h后,其Bax蛋白表达增加,而Bcl-2蛋白表达逐渐减少,Bax/Bcl-2比值增加,Caspase-3蛋白表达逐渐增多。   结论   异紫堇定碱对人宫颈癌Siha细胞增殖具有明显的抑制作用,其促使细胞发生凋亡行为可能与线粒体凋亡途径的蛋白有关。      

RNA干扰沉默MIF基因对宫颈癌SiHa细胞上皮细胞间质变的影响

[目的]探讨巨噬细胞移动抑制因子（MIF）对人宫颈癌SiHa细胞上皮间质转化（EMT）的影响。[方法]构建并鉴定重组真核表达质粒Genesil-MIF siRNA,转染人宫颈癌细胞SiHa细胞。RT-PCR检测各组细胞中MIF、E-cadherin、Vimentin mRNA表达水平。免疫细胞化学法组检测E-cadherin、Vimentin蛋白表达水平。[结果]重组质粒Genesil-MIF siRNA成功构建并转染至人宫颈癌SiHa细胞。RT-PCR法证实实验组细胞中E-cadherin mRNA相对高表达（P〈0.05）,而Vimentin、MIF mRNA相对低表达（P〈0.05）。免疫细胞化学法证实实验组细胞中E-cadherin蛋白表达水平升高,Vimentin蛋白表达水平明显降低。[结论]MIF沉默通过促进SiHa细胞中E-cadherin表达,抑制Vimentin表达从而抑制EMT发生。     

miR-424靶向NRP2对宫颈癌细胞增殖、迁移及顺铂敏感性的影响

目的:探讨微小RNA（miR）-424靶向神经纤毛蛋白2（NRP2）对宫颈癌SiHa细胞增殖、迁移及顺铂敏感性的影响。方法:实时荧光定量PCR法和免疫印迹法检测宫颈癌组织和癌旁组织以及宫颈癌细胞SiHa和人宫颈上皮细胞HCerEpiC中miR-424和NRP2蛋白表达情况。将体外培养的SiHa细胞分为对照组、miR-ctrl组（转染miR-ctrl）、miR-424组（转染miR-424模拟物）、miR-424+pcDNA3.1组（共转染miR-424模拟物和pcDNA3.1空载体质粒）和miR-424+NRP2组（共转染miR-424模拟物和pcDNA3.1-NRP2过表达载体质粒）,采用实时荧光定量PCR法验证转染效率,免疫印迹法检测SiHa细胞中NRP2蛋白表达,双荧光素酶报告基因实验检测miR-424和NRP2靶向关系,MTT法检测细胞增殖和顺铂敏感性,Transwell小室检测细胞迁移。结果:双荧光素酶报告基因实验证实miR-424可与NRP2靶向结合;相较于癌旁组织,宫颈癌组织中miR-424表达明显降低,NRP2蛋白表达明显升高（P＜0.05）;相较于HCerEpiC细胞,SiHa细胞中miR-424表达明显降低,NRP2蛋白表达明显升高（P＜0.05）;与miR-ctrl组比较,miR-424组SiHa细胞中miR-424表达水平明显升高,而NRP2蛋白表达水平、细胞增殖活力、迁移能力和顺铂对细胞的半数抑制浓度（IC50）值均明显降低（P＜0.05）;与miR-424+pcDNA3.1组比较,miR-424+NRP2组细胞中NRP2蛋白表达水平、细胞增殖活力、迁移能力和顺铂对细胞的IC50值均明显升高（P＜0.05）;miR-ctrl组和对照组之间以及miR-424+pcDNA3.1组和miR-424组之间上述各指标差异均无统计学意义（P＞0.05）。结论:miR-424可通过靶向调控NRP2表达抑制SiHa细胞增殖、迁移并增强顺铂敏感性。     

过表达巨噬细胞移动抑制因子对子宫颈癌SiHa细胞上皮间质转化的影响

目的 探讨过表达巨噬细胞移动抑制因子（MIF）对子宫颈癌SiHa细胞发生上皮间质转化 （EMT）的影响.方法 应用基因转染方法将重组质粒pEGFP-N1-MIF转入SiHa细胞,构建过表达MIF的SiHa细胞;用实时荧光聚合酶链反应（RT-PCR）及免疫细胞化学方法分别检测各组细胞中E-cadherin、vimentin mRNA及蛋白的表达水平.结果 RT-PCR检测结果显示,转染pEGFP-N1-MIF的细胞中MIF mRNA相对表达量升高（F=2950.278,P＜ 0.01）;转染pEGFP-NI-MIF的细胞中vimentin的mRNA高于各对照组,而E-cadherin的mRNA低于各对照组（F值分别为2 135.048,1 893.563,均P＜0.01）;转染pEGFP-N 1-MIF的细胞中vimentin的蛋白表达水平高于各对照组,而E-cadherin的蛋白表达水平低于各对照组（F值分别为2 348.021,1 789.421,均P＜ 0.01）.结论 过表达MIF促进SiHa细胞中vimentin表达,抑制E-cadherin表达,说明过表达MIF促进子宫颈癌SiHa细胞发生上皮间质转化.