金龙蛇颗粒对裸鼠原位移植人胃癌MK-45细胞凋亡的影响

目的:评价金龙蛇颗粒对裸鼠原位移植人胃癌MKN-45细胞的抑制作用。方法:50只裸鼠建立原位移植人胃癌MKN-45细胞模型,随机分为模型组,金龙蛇颗粒高、中、低剂量组和5-FU干预组。各组裸鼠予以相应药物实施干预。观察各组荷瘤裸鼠一般情况,肿瘤生长情况及抑瘤率。流式细胞仪检测肿瘤细胞周期分布及细胞凋亡情况。采用膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶(Annexin V-fluoresceinisothiocyanate/propidium iodide,Annexin V-FITC/PI)双标记染色法鉴别早期凋亡细胞、晚期凋亡细胞和坏死细胞。电镜下观察肿瘤细胞的超微结构变化。结果:金龙蛇颗粒高、中、低剂量组的抑瘤率分别为68.13%、55.94%和50.31%,呈剂量依赖效应,与5-FU干预组抑瘤率比较,差异无统计学意义。金龙蛇颗粒各剂量组肿瘤细胞凋亡率为22.81%~38.54%,亦呈剂量依赖效应,且肿瘤细胞主要被阻滞于G0/G1期。AnnexinV-FITC/PI双标记染色结果显示,金龙蛇颗粒各剂量组以早期凋亡细胞居多,5-FU干预组则以晚期凋亡细胞和坏死细胞居多。结论:金龙蛇颗粒对裸鼠原位移植人胃癌MKN-45细胞具有较好的抑制作用,促进MKN-45细胞凋亡可能是其抗肿瘤治疗的主要作用机制之一。     

刺梨提取单体CL-1对胃癌细胞系增殖的抑制作用

目的观察刺梨提取物CL-1对抗胃癌细胞系SGC-7901和MKN-45体外增殖的抑制作用.方法采用MTT检测法和生长曲线的绘制,观察CL-1对胃癌SGC-7901和MKN-45细胞增殖的影响.结果MTT法检测显示,CL-1(10-8-10-4mol·L-1)对SGC-7901和MKN-45细胞生长的抑制作用均呈现剂量依赖性和时间依赖性.细胞生长曲线显示:随CL-1剂量的增加,SGC-7901和MKN-45细胞的生长曲线逐渐右移.结论CL-1具有体外抗肿瘤作用.     

基质细胞衍生因子-1对乳腺癌细胞体外增殖和侵袭的影响

目的 探讨SDF-1对乳腺癌细胞细胞体外生长和侵袭的影响.方法 分别用0.25、0.50、1.00、2.00和5.00μM的SDF-1处理人乳腺癌细胞株MCF-7,采用MTT比色法检测SDF-1对MCF-7细胞增殖的影响;采用软琼脂克隆法检测SDF-1对MCF-7细胞克隆形成的影响;采用侵袭小室法检测SDF-1对MCF-7细胞侵袭能力的影响.结果 MTT比色法显示0.25～5.00μM的SDF-1在体外对人乳腺癌MCF-7细胞有促进增殖的作用,与空白组比较差异有显著性(P<0.05),该作用呈浓度依赖性;软琼脂克隆实验显示0.25～5.00μM的SDF-1在体外对人乳腺癌MCF-7细胞有促进克隆形成的作用,与空白组比较差异有显著性(P<0.05),该作用呈浓度依赖性;侵袭小室实验发现:0.25～5.00μM的SDF-1在体外对人乳腺癌MCF-7细胞有促进侵袭转移作用,与空白组比较差异有显著性(P<0.05),该作用呈浓度依赖性.结论 SDF-1可以明显增强乳腺癌细胞体外增殖能力和侵袭转移能力.     

丹参酮ⅡA对人胃癌MKN-45细胞增殖及基质金属蛋白酶-2表达的影响

[目的]通过观察丹参酮ⅡA对人胃癌MKN-45细胞的抑制作用及对转移相关基因MMP-2表达的影响,探讨其抗肿瘤的机制.[方法]MTT法检测不同浓度丹参酮ⅡA作用下,体外培养的MKN-45细胞的增殖情况; RT-PCR法、酶谱分析法检测MKN-45细胞MMP-2 mRNA及蛋白的表达.[结果]丹参酮ⅡA各浓度组对肿瘤细胞增殖的抑制率与阴性对照组相比,有显著差异(P<0.05),相关回归分析表明24h、48h、72h的半数抑制浓度分别为42.5μg /ml、19.4μg /ml和7.4μg /ml.PCR半定量分析发现:丹参酮ⅡA各组的MMP-2 mRNA表达均受到抑制,抑制程度随着药物浓度的增加而增加,酶谱分析法显示:丹参酮ⅡA能降低胃癌MKN-45细胞的MMP-2蛋白表达,其作用呈剂量-效应正相关,与阴性对照组相比,差异有显著性(P<0.05).[结论]丹参酮ⅡA能有效抑制胃癌MKN-45细胞的生长,并具有明显的时间和剂量依赖性.丹参酮ⅡA可能通过抑制胃癌MKN-45细胞MMP-2 mRNA的转录下调MMP-2蛋白的表达,进而抑制肿瘤增殖.     

雷帕霉素、RAD001抑制胃癌细胞株MKN-28、MKN-45细胞生长的实验研究

目的探讨雷帕霉素（rapamycin）、RAD001（everolimus）对胃癌细胞株MKN-28、MKN-45细胞生长的影响,并对其机制进行初步探讨。方法体外培养人胃癌MKN-28、MKN-45细胞,给予雷帕霉素、RAD001干预后通过细胞计数、流式细胞术检测肿瘤细胞生长、细胞周期分布情况。结果雷帕霉素、RAD001均可抑制MKN-28、MKN-45细胞生长,抑制作用具有时间依赖性,雷帕霉素作用于MKN-28、MKN-45两种细胞株72 h抑制率分别为23.40%、36.26%;RAD001作用于MKN-28、MKN-45两种细胞株72 h抑制率分别为25.12%、40.11%。72 h时RAD001组与阴性对照组、DMSO对照组相比,MKN-28、MKN-45细胞计数差异有显著性（P〈0.05）。RAD001作用24 h后MKN-28、MKN-45细胞周期发生改变,停滞在G0-G1期细胞比例增加。RAD001组与阴性对照组、DMSO对照组相比,MKN-45细胞周期差异有显著性（P〈0.05）,MKN-28细胞周期差异无显著性（P〉0.05）。结论两种药物相比较,RAD001相对敏感;两株细胞相比较,MK...     

FHIT基因过表达对人胃癌细胞系MKN-45增殖和粘附的影响

目的探讨FHIT基因过表达对人胃癌细胞系MKN-45增殖和粘附能力的影响。方法将载有人外源性FHIT基因的真核表达质粒pcDNA3.1-FHIT转染FHIT基因mRNA阴性表达人胃癌细胞系MKN-45,分别用MTT法、平板克隆形成实验、黏附实验检测转染前后细胞增殖活性、克隆形成能力及粘附能力的变化。结果FHIT基因的过表达可降低MKN-45细胞的增殖和克隆形成能力(P<0.05),但是对MKN-45细胞与内皮细胞的粘附能力无明显影响。结论FHIT基因过表达可抑制人胃癌细胞系MKN-45的增殖和克隆形成,对于MKN-45细胞与内皮细胞的粘附能力无明显影响。     

蛇黄肝炎汤含药血清对人肝癌细胞HepG-2增殖的抑制作用

目的探讨蛇黄肝炎汤含药血清对人肝癌细胞HepG-2增殖的影响。方法 25只大鼠随机分为1倍、2倍、4倍浓度含药血清组,复方环磷酰胺含药血清组(阳性药物血清组),空白血清组5个实验药物组,分别将不同浓度的蛇黄肝炎汤含药血清、阳性药物含药血清、空白血清与HepG-2细胞共同培养,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法及细胞集落形成实验观察蛇黄肝炎汤含药血清体外对HepG-2细胞增殖、克隆形成能力的影响。结果与空白血清组相比较,2、4倍的蛇黄肝炎汤含药血清组吸光度值(OD值)均降低,差异均有统计学意义(P0.05)。4倍含药血清随作用时间的延长,对HepG-2细胞的抑制率逐渐增加(P0.05),当4倍浓度含药血清抑制时间为72 h时,抑制率达76.82%,与阳性药物血清组作用相当(抑制率达77.71%)。不同浓度的含药血清均能有效降低肿瘤细胞集落形成,与空白血清组相比差异均有统计学意义(P0.05),且随着含药血清浓度增大细胞集落形成数逐渐降低,集落形成抑制率随含药血清浓度的增加呈逐渐升高的趋势。结论蛇黄肝炎汤含药血清具有抑制人肝癌细胞HepG-2体外增殖、降低其克隆形成能力作用。     

蛋白激酶抑制剂PKC412对膀胱癌T24细胞生长增殖的影响

目的:观察蛋白激酶C(PKC)抑制剂N苯甲酰星孢菌素(PKC412)对膀胱癌T24细胞株生长、增殖、侵袭功能和细胞周期的影响.方法:用不同浓度PKC412(0.01,0.1,1.0,10 μmol/L)作用于对数生长期T24细胞24,48,72 h.采用软琼脂克隆形成试验测定T24细胞克隆形成抑制率,MTT法检测细胞生...     

全反式维甲酸对人胃癌细胞株MKN-28的抗增殖及诱导分化作用的实验研究

本文报道全反式维甲酸(ATRA)对高分化胃腺癌 MKN-28细胞似具有生长抑制及诱导分化作用,使胃癌细胞内 DNA 合成减少,并阻止 G1/0期细胞进入 S 期,同时降低 G2/M 期细胞的比例。对 MKN-28细胞恶性程度检查的结果表明,ATRA 可降低 MKN-28细胞在双层软琼脂中的克隆形成,其抑制率为60.3±6.4%;同时可以推迟 MKN-28细胞在裸鼠体内移植瘤倍增生长的时间及减慢其生长速度,但不能阻止移植瘤形成。形态学观察表明,ATRA 不能改变移植瘤HE 染色及 AB/PAS 染色的特性。     

AMH-T体外抗肿瘤作用的研究

目的探讨功效部位AMH-T对人Hela、Hep G2和U251体外抗肿瘤作用,了解其剂量-反应和时间-效应关系,发现对AMH-T敏感的肿瘤细胞株.方法采用体外抗肿瘤实验进行体外抗癌活性检测.实验设阴性对照组(DMSO)、阳性对照组(DDP,3μM)、AMH-T的5个剂量组(2、4、8、16和32μg/m L).采用MTT法检测药物处理24 h、48 h和72 h后的OD值,计算各组的增殖抑制率.结果 AMH-T作用72 h后,在AMH-T为8μg/m L时,显微镜下观察Hela细胞几乎死亡.AMH-T在剂量为2、4、8、16和32μg/m L时,对人宫颈癌细胞株Hela的抑制率分别为-5.54%、2.93%、72.14%、74.41%和73.86%,其IC50为11.66μg;对人肝癌细胞株Hep G2的抑制率分别为3.87%、12.50%、54.07%、55.27%和51.86%,其IC50为22.90μg;对人神经胶质瘤细胞株U251的抑制率分别为-5.47%、1.08%、54.83%、57.75%和71.78%,其IC50为16.85μg.结论 AMH-T对Hela、Hep G2和U251均具有显著性的体外抗肿瘤作用,存在明显的剂量-反应和时间-效应关系;Hela细胞株对AMH-T最为敏感.     

潜在抑癌基因TXNIP对胃癌MKN-45细胞生物学特性的影响

目的:探讨硫氧还蛋白相互作用蛋白(TXNIP)基因对胃癌MKN-45细胞生物学特性的影响,阐明TXNIP与胃癌发生发展的关系。方法:将TXNIP基因插入载体pcDNA3.1构建PC-TXNIP真核表达载体,并将其转染胃癌MKN-45细胞建立稳定转染细胞系(MKN-TXNIP),利用RT-RCR法、免疫细胞化学法检测转染细胞中的TXNIP基因及细胞原位蛋白表达。每种检测实验均分为MKN-TXNIP组、MKN-PC组和MKN-45组(空白对照组)。采用生长曲线法、平板克隆形成实验法、流式细胞术和Transwell小室实验法等检测稳定表达TXNIP胃癌细胞株生长、增殖状态、细胞周期和侵袭能力等生物学特性。结果:与MKN-PC组和MKN-45组比较,MKN-TXNIP组中TXNIP基因可稳定表达。与MKN-PC组和MKN-45组比较,MKN-TXNIP组稳定表达的细胞株生长速度明显减慢(P<0.05)。平板克隆形成实验,MKN-TXNIP组细胞平均克隆形成率明显低于其他2组(P<0.05)。细胞周期检测,与MKN-45组比较,MKN-TXNIP组处于G₀/G₁期的细胞百分比明显升高(P<0.05),而处于G₂/M期的细胞百分比明显降低(P<0.05)。流式细胞术,各组细胞的凋亡率均约为2.0%,各组间比较差异均无统计学意义(P>0.05)。Transwell小室实验,MKN-TXNIP组MKN-45细胞穿膜率低于其他2组(P<0.05)。结论:TXNIP基因对胃癌细胞增殖、分裂及侵袭转移能力可能具有抑制作用,并可同时影响胃癌细胞的细胞周期,但其对细胞凋亡的影响作用较小。     

反义hTERT体外抑制白血病细胞增殖的研究

目的研究反义hTERT基因对白血病细胞体外增殖的抑制作用。方法体外通过SuperFect将已构建好的正、反义hTERT真核表达载体转染HL60白血病细胞,再经过G418及PCR筛选鉴定分别转入了正、反义hTERT载体的抗性克隆细胞HL60-s和HL60-as。随后运用实时荧光定量RT-PCR技术及TRAP-银染法对各组细胞内源性hTERT mRNA的表达情况及端粒酶的活性进行检测。同时还采用MTT法、双层软琼脂克隆形成试验、流式细胞术观察和分析反义hTERT对白血病细胞体外生长增殖活力的影响及是否能诱导瘤细胞的凋亡。结果与空白对照、正义hTERT组相比,反义hTERT能显著地降低HL60细胞内源性hTERT mRNA的表达(P<0.01)和下调端粒酶活性。当各组细胞传至第25代后,与HL60、HL60-s比较,HL60-as细胞的生长速度和集落形成能力明显地减慢和降低,同时伴有凋亡率的显著增加。结论反义hTERT在体外能抑制白血病细胞的生长增殖能力,其潜在、广谱的抗肿瘤作用的分子生物学机制可能是首先通过抑制和下调hTERT表达(端粒酶活性)而最终引发瘤细胞衰亡的途径来实现的。     

5-烯丙基-7-二氟甲基白杨素诱导肺癌A549细胞生长抑制和凋亡

目的:研究5-烯丙基-7-二氟甲基白杨素(ADFMChR)诱导人肺癌细胞(A549)细胞生长抑制和凋亡的作用。方法:体外培养人肺癌A549细胞,平皿集落形成法测定细胞锚定依赖性生长能力,软琼脂集落形成法测定细胞非锚定依赖性生长能力,流式细胞术(FCM)分析细胞周期和细胞凋亡率;凝胶电泳观察凋亡细胞的基因DNA梯形条带。结果:平皿集落形成法和软琼脂集落形成法结果显示ADFMChR呈剂量依赖性抑制A549细胞生长,FCM分析发现ADFMChR呈剂量依赖性诱导A549细胞凋亡;ADFMChR(10μg/mL)孵育A549细胞48h后,DNA琼脂糖凝胶电泳呈现典型梯形条带。结论:ADFMChR具有抑制人肺癌A549细胞生长和诱导凋亡作用。     

人胃癌细胞株抗脱落凋亡特性的分析

目的：研究胃癌细胞HGC27，BGC823，MGC803，SGC7901抗脱落凋亡的特性，为研究肿瘤细胞抗脱落凋亡的机制奠定基础。方法：应用软琼脂集落形成实验，DNA ladder检测，流式细胞术等技术观察胃癌细胞脱落培养后细胞生长状况的改变。结果：对照组细胞MDCK（狗的正常肾脏上皮细胞系）在软琼脂中不生长，没有形成细胞集落；悬浮培养15h后，可见有细胞凋亡特征性的DNA ladder出现；流式细胞仪检测，悬浮培养24，48h可见有凋亡峰出现，而HGC27等4种胃癌细胞系在软琼脂中均形成大小不等的细胞集落，脱落培养15h后，没有细胞凋亡特征性的DNA ladder出现，流式细胞仪检测，与贴壁培养的对照组相比细胞周期没有显性差异。也没有凋亡峰的出现。结论：MDCK细胞属于锚着依赖性细胞，可出现脱落凋亡，胃癌细胞HGC27，BGC823，MGC803，SGC7901属于抗脱落凋亡细胞。     

蛞蝓有效提取物对人肺癌A549细胞增殖的影响

目的:筛选蛞蝓有效提取物,并观察蛞蝓有效提取物EL-3对人肺癌A549细胞增殖的抑制作用。方法:体外培养人肺癌A549细胞和中国仓鼠肺上皮CHL细胞;MTT比色法测定细胞活性;软琼脂集落形成法检测细胞锚定非依赖性生长能力。结果:以不同提取方式获得的6种蛞蝓提取物对人肺癌A549细胞增殖活性具有抑制作用,其中以EL-3抑制作用最强,其IC50值为9.4μg/mL,可作为蛞蝓有效提取物;EL-3选择性抑制A549细胞活性,其选择指数是43.6;EL-3能有效抑制A549细胞锚定非依赖性生长,呈浓度依赖性。结论:EL-3具有选择性抑制A549细胞增殖作用。     

γ-氨基丁酸对肝癌细胞株HepG-2恶性表型的影响

目的：研究γ-氨基丁酸（GABA）对肝癌细胞株HepG-2增殖能力及恶性表型的影响。方法：用不同浓度的GABA与人肝癌细胞HepG-2作用后,用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法测定细胞生长速度,并测定其倍增时间,流式细胞仪检测细胞周期的改变,软琼脂细胞集落形式实验和裸鼠成瘤实验检测细胞的恶性表型。结果：MTT实验结果表明实验组细胞的生长速度明显快于对照组细胞的生长速度,且呈剂量依赖性,其细胞周期分布也发生改变,G1期细胞减少,S期细胞增多;对照组细胞和各浓度组细胞的平均倍增时间分别为39.0,30.6,30.0,27.3,26.6和38.2 h,软琼脂细胞集落形成率依次为3.2%,4.2%,5.4%,6.6%,6.5%,3.5%,Balb/c裸鼠成瘤实验显示,对照组和实验组的肿瘤平均质量依次为0.285和1.382 g,其差异有统计学意义（P＜0.01）。结论：GABA能促进细胞增殖,并引起细胞恶化改变。     

健脾为基础中药方对人胃癌MKN-45裸小鼠皮下移植瘤生长及瘤组织内P-Stat3蛋白表达的影响

目的研究健脾为基础中药方对人胃癌MKN-45裸小鼠皮下移植瘤生长及瘤组织内P-Stat3蛋白表达的影响。方法将裸小鼠皮下移植瘤模型随机分为中药组及生理盐水组,比较第31天2组实验鼠皮下移植瘤生长及瘤组织内P-Stat3的蛋白表达情况。结果中药组的抑瘤率为23.68%,P-Stat3蛋白表达相对定量值为(0.33±0.52),与生理盐水组相比差异均有统计学意义(P<0.01)。结论健脾为基础的中药方可抑制人胃癌细胞MKN-45裸小鼠皮下移植瘤的生长,并能抑制P-Stat3的蛋白表达。     

siRNA抑制syk基因对外周T细胞淋巴瘤细胞增殖与凋亡的影响

目的 探讨siRNA抑制脾酪氨酸激酶(syk)基因后对外周T细胞淋巴瘤细胞株HUT-78细胞增殖与凋亡的影响.方法 针对syk基因特异靶点设计3条siRNA(siRNA-1、siRNA-2和siRNA-3),采用电穿孔法转染外周T细胞淋巴瘤细胞株HUT-78,同时设Mock组和siRNA-NC组,转染48 h后,分别用RT-PCR和Western blot技术检测syk mRNA和蛋白的表达水平,筛选出最有效的syk siRNA;syk siRNA转染HUT-78后分别用软琼脂克隆形成实验检测syk下调后HUT-78细胞的克隆形成能力,MTT法检测干扰24、48、72 h后细胞增殖情况,流式细胞术检测syk下调后HUT-78细胞的凋亡情况.结果 RT-PCR和Western blot结果显示,与Mock组和siRNA-NC组相比,3条siRNA均能有效降低HUT-78细胞中syk mRNA和蛋白的表达,其中syk siRNA-1抑制效果最明显.克隆形成实验显示,下调syk基因表达后HUT-78细胞的克隆形成能力与Mock组相比明显下降(P<0.05);MTT实验结果显示,下调syk基因表达后HUT-78细胞的增殖能力与Mock组相比显著下降(P<0.05);流式细胞术结果显示,下调syk基因表达后HUT-78细胞的凋亡比例明显高于Mock组(P<0.05).结论 siRNA下调syk基因表达后可抑制外周T细胞淋巴瘤细胞的增殖、克隆形成,促进凋亡,推测syk基因在外周T细胞淋巴瘤的发生发展中发挥重要作用,有可能成为外周T细胞淋巴瘤基因治疗的新靶点.     

microRNA-335对人非小细胞肺癌细胞迁移?侵袭及增殖能力的影响

目的:研究 microRNA-335(miR-335)在非小细胞肺癌中的表达及其对细胞迁移?侵袭能力与增殖能力的影响?方法:采用荧光实时定量PCR检测miR-335在12对非小细胞肺癌与癌旁正常组织中的表达差异,以及miR-335在非小细胞肺癌SPCA-1细胞与肺正常上皮细胞16HBE中的表达差异;应用Lipofectamine 2000瞬时转染anti-miR-335下调SPCA-1细胞中miR-335的表达,并通过荧光实时定量PCR验证;划痕实验检测 miR-335对SPCA-1细胞迁移能力的影响;Transwell侵袭实验检测miR-335对SPCA-1细胞侵袭能力的影响;MTT实验及克隆形成实验检测miR-335对SPCA-1细胞增殖能力的影响?结果:与癌旁正常组织比较,miR-335在非小细胞肺癌组织中显著高表达(P < 0.05);与16HBE细胞比较,miR-335在SPCA-1细胞中显著高表达(P < 0.05);利用Lipofectamine 2000瞬时转染anti-miR-335入SPCA-1细胞24 h时miR-335表达明显减弱(P < 0.01);抑制miR-335表达对SPCA-1细胞迁移和侵袭能力有显著的抑制作用,抑制率分别为(42.8 ± 2.7)%(P < 0.01)及(73.25 ± 4.4)%(P < 0.01);抑制miR-335表达对SPCA-1细胞的增殖能力无明显影响?结论:miR-335在非小细胞肺癌中呈高表达,miR-335低表达能显著抑制SPCA-1细胞的迁移和侵袭能力,但对SPCA-1细胞的增殖能力无明显影响?