DDPH对缺氧内皮细胞条件培养液致肺动脉平滑肌细胞PGDF…

利用地高辛标记的ｃＤＮＡ探针，原位检测ＤＤＰＨ〔１０（２，６－二甲基苯氧基）－２－（３，４－二甲氧基苯乙胺基）丙烷酸盐〕对缺氧内皮细胞条件培养液致猪ＰＡＳＭＣ ＰＤＧＦ基因表达的影响。实验分６组：常氧、低氧无血清培养液组（Ｎ、Ｈ组），常氧、低氧内皮细胞条件培养液组（ＮＥＣＣＭ、ＨＥＣＣＭ组），ＮＥＣＣＭ＋ＤＤＰＨ、ＨＥＣＣＭ＋ＤＤＰＨ组。用自动图像分析仪检测各组细胞ＰＤＧＦ－Ａ和－Ｂ链杂交产物的平     

猪肺动脉缺氧内皮细胞条件培养液和DDPH对肺动脉平滑肌细…

用＾３Ｈ－胸腺嘧啶核苷和＾３Ｈ－尿嘧啶核苷掺入法及流式细胞术。观察猪肺动脉缺氧仙皮细胞条件培养液（ＨＥＣＣＭ）和１－（２，６－二甲基苯氧基）－２－（３，４－二氧基苯乙氨基）丙烷盐酸盐（ＤＤＰＨ）对猪肺动脉平滑肌细胞（ＰＡＳＭＣｓ）ＤＮＡ、蛋白合成及细胞周期的影响。     

DDPH和生长因子对肺动脉平滑肌细胞凋亡的作用

运用原位末端转移酶标记技术（TUNEL）和流式细胞分析术（FCM）检测经1－（2，6－二甲基苯氧基）－2－（3，4－二甲氧基苯乙胺基）丙烯盐酸盐（DDPH）、血小板源性生长因子（PDGF）、碱性皮纤维细胞生长因子（b-FGF)、低氧内皮细胞条件培养液（HECCM）作用后，肺动脉平滑肌细胞（PASMC）凋亡的变化；结合FCM对各组PASMC生长周期的分析，比较不同因素对PASMC的影响差异。结果发现：DDPH组平滑肌细胞（SMC）凋亡指数显著高于对照组，PDGF、b-FGF、HECCM各组SMC凋亡指数显著低于对照组；PDGF、b-FGF、HECCM3组通过生长限制点G1／S（S＋G2／M期）细胞的比率均显著高于对照组，尤以PDGF组最高，而DDPH组低于对照组。提示：DDPH能够抑制PASMC增殖并诱导其凋亡，而PDGF、b-FGF等生长因子则起相反作用。     

缺氧致大鼠肺动脉平滑肌细胞Akt mRNA表达的变化

目的通过观察缺氧致大鼠肺动脉平滑肌细胞（pulmonary arterial smooth muscle cell,PASMC）3种丝氨酸／苏氨酸蛋白激酶（Akt1、Akt2、AkG）mRNA的表达水平变化,初步探讨Akt信号途径在缺氧肺动脉高压（hypoxia pulmonary hypertension,HPH）血管重建中的作用。方法组织贴片法建立纯PASMC细胞系。采用半定量RT-PCR技术检测常氧组（N组）、低氧2、8、12、24组的Akt1、Akt2和AkG基因mRNA的表达水平。结果建立了纯PASMC细胞系。各组均检测出Akt1、Akt2和AkG基因的mRNA,图像定量分析光值显示各组表达的mRNA含量与缺氧时限存在一定的关系。结论Akt信号通路可能是大鼠缺氧肺动脉高压中PASMC增殖和分化的重要传导途径,其中Akt1可能起主要作用。     

肝素对内皮细胞缺氧的条件培养基致肺动脉平滑肌细胞增生 …

本研究用细胞培养，结晶紫染色方法，观察肝素对内皮细胞缺氧的条件培养基致肺动脉平滑肌细胞增生的影响，发现肺动脉内皮细胞缺氧２４小时后收集的培养基可刺激平滑肌细胞，使结晶紫染色的ＯＤ增加，而在其中加入肝素可抑制这种促增生作用，其ＯＤ值明显降低，并且随肝浓度升高，这种抑制增生作用亦加强。     

RG50864对PDGF诱导的肺动脉平滑肌细胞增殖的影响

目的：研究酪氨酸蛋白激酶抑制荆RG50864对PDGF诱导的肺动脉平滑肌细胞增殖的影响。方法：用原代培养的小牛肺动脉平滑肌细胞，采用细胞计数法、MTT比色法及Giemsa染色法对PDGF诱导的肺动脉平滑肌细胞进行分析。结果：与对照组相比，RG50864处理组能在24h、48h、72h显著抑制PDGF诱导的肺动脉平滑肌细胞增殖，且呈剂量依赖性。结论：RG50864可显著抑制PDGF诱导的肺动脉平滑肌细胞增殖。     

RG50864对PDGF诱导的肺动脉平滑肌细胞酪氨酸磷酸化蛋白表达的影响

目的 :研究酪氨酸蛋白激酶抑制剂 RG5 0 86 4对 PDGF诱导的肺动脉平滑肌细胞 (PASMC)酪氨酸磷酸化蛋白表达的影响。方法 :用原代培养的小牛肺动脉平滑肌细胞 ,采用 Western Blot方法分析 RG5 0 86 4对 PDGF诱导的PASMC酪氨酸磷酸化蛋白的定性表达。结果 :RG5 0 86 4 (0 .1 μmol/ L)能显著抑制 PDGF诱导的 PASMC酪氨酸磷酸化蛋白的表达 ,尤以 85～ 1 80 KDa明显 ,当 RG5 0 86 4浓度达 1 0 0 μmol/ L 时 ,则能完全抑制磷酸化蛋白的产生 ,其作用呈明显的剂量效应关系。结论 :RG5 0 86 4能显著地抑制 PDGF诱导的 PASMC酪氨酸磷酸化蛋白的表达     

PDGF诱导大鼠主动脉平滑肌细胞迁移模型的建立

[目的]建立PDGF诱导的大鼠主动脉平滑肌细胞(A7r5)迁移的模型。[方法]采用改良的Boyden小室法,以不同浓度(1、5、10、20、50和100 ng/mL)PDGF-BB为诱导剂,将不同浓度(1×105/mL、2×105/mL、4×105/mL)的A7r5细胞置入Boyden小室,分别培养5、7、9 h。迁移膜经Giemsa染色后,显微镜下观察迁移到下室的细胞,进行细胞计数。[结果]在无PDGF诱导时,迁移细胞数为每视野10个左右;而以10 ng/mL PDGF-BB诱导时,迁移细胞数每视野可达70个左右;当PDGF浓度达到100 ng/mL时,细胞迁移数降至每视野10个左右。随细胞浓度的增高,迁移细胞数目增加,细胞浓度为1×105/mL时,7 h迁移细胞数目为(48±8.944)个;2×105/mL细胞在5 h左右发生迁移的数目为(55±12.864)个,随时间延长而增多,在7 h前后增幅最明显,达(78±15.828)个(P<0.05);但细胞浓度为4×105/mL时,7 h迁移细胞数为(84±12.213)个(P>0.05)。[结论]以10 ng/mL PDGF-BB为诱导剂,以2×105/mL浓度接种,培养7 h建立的迁移模型为最佳。     

PDGF在低氧内皮细胞条件培养基促猪肺动脉平滑肌细胞增殖中的作用

为了探索低氧条件下猪肺动脉内皮细胞 (PAEC)对猪肺动脉平滑肌细胞 (PASMC)增殖调控关系 ,应用MTT比色法 ,DNA荧光测定法观察了外源性 PDGF促 PASMC增殖作用 ,以及 Suram in抑制 PDGF促增殖作用的效应 ,并在此基础上研究了猪肺动脉内皮细胞条件培养基 (HECCM)中 PDGF促 PASMC增殖的作用。结果表明 ,HECCM促 PASMC增殖作用的效应可被 Suramin部分抑制 ,由此证明 ,PDGF是低氧刺激 PAEC产生的一种促 PASMC增殖的重要因子。     

Kawasaki Disease on PDGF Expression and VSMC Proliferation

The effect of serum of patients with Kawasaki disease (KD) on expression of platelet-derived growth factor (PDGF) B chain protein in vascular endothelial cells (VEC) was studied by immunocytochemical method. Meanwhile,the effects of the endothelial cell conditioned media (ECM) on expression of PDGF receptor mRNA in vascular smooth muscle cells (VSMC) and on cell cycle of VSMC were investigated by the methods of nucleic acid hybridization and flow cytometry (FCM). The results showed that the serum of patients with KD induced the expression of PDGF-B chain protein significantly. ECM significantly promoted the expression of PDGF receptor mRNA and induced the proliferation of VSMC. These data suggest that the activation of PDGF-PDGF receptor may play a role in the pathogenesis of coronary complication of KD.     

自由基促进猪内皮细胞c－sis mRNA／PDGF－B链蛋白表达的实验研究

采用免疫组织化学和原位杂交方法，研究自由基（ＦＲ）对猪主动脉内皮细胞（ＥＣ）的ｃ－ｓｉｓｍＲＮＡ及血小板源生长因子（ＰＤＧＦ）Ｂ链蛋白表达的影响。结果显示，ＦＲ促进ｃ－ｓｉｓｍＲＮＡ和ＰＤＧＦ－Ｂ链蛋白的表达。ＥＣ暴露于ＦＲ２０ｍｉｎ，ｃ－ｓｉｓｍＲＮＡ和ＰＤＧＦ－Ｂ链蛋白的表达较对照组分别增加１．０和２．２倍。提示，ＦＲ损伤ＥＣ所诱导的ＰＤＧＦ合成增多在动脉粥样硬化的发病过程中可能起重要作用。     

蛋白激酶及DDPH对HECCM促PASMC增殖的影响

应用猪肺血管的内皮细胞进行常氧/低氧培养，制备常氧/低氧内皮细胞条件培养基（Normoxic/Hypoxial en-dothelia cell conditional medium，NECCM/HECCM），分别观察蛋白激酶A(protein kinase A，PKA)、蛋白激酶C(protein kinase C，PKC)和受体酪氨酸蛋白激酶/胞浆酪氨酸蛋白激酶(recepror tyrosine protein kinase/plasma tyrosine protein ki-nase，RTK/PTK)ey DDPH对HECCM促肺动脉平滑肌细胞（pulmonary arterial smooth muscle cell，PASMC）增殖的影响。探讨这些蛋白激酶在促PASMC增殖中的作用，以及DDPH抑制这种促增殖的机理。结果提示：PKC是HECCM促PASMC增殖的关键性效应分子，但其被激活的上游信号转导分子除了RTK/PTK外，还有其它非RTK/PTK介导的信号转导方式：DDPH对HECCM促PASMC增殖的抑制点在PKC上游 ，可能直接作用于RTK/PTK，或者阻断Ca^2 通道。     

IGF-1R mRNA在低氧性肺动脉高压大鼠肺组织中的表达

目的 :探讨胰岛素样生长因子 -1受体 (IGF 1R)mRNA在低氧大鼠肺小动脉壁的变化。方法 :采用原位杂交方法检测低氧性肺动脉高压大鼠和正常大鼠肺小动脉壁IGF 1RmRNA的表达 ,用图像分析技术检测肺小动脉的形态改变和半定量技术检测IGF 1RmRNA的表达强度。结果 :低氧性肺动脉高压大鼠肺小动脉管壁增厚、管腔狭窄 ,反映管壁增厚的两个指标MT %和MA %均显著高于正常对照组 (P <0 .0 5 )。正常对照组大鼠肺小动脉壁IGF 1RmRNA有微弱表达 ,低氧组肺小动脉壁IGF 1RmRNA表达呈强阳性 ,低氧组表达强度显著大于正常对照组 (P <0 .0 0 1)。结论 :低氧情况下 ,肺小动脉壁IGF 1RmRNA表达水平与低氧性肺血管重建密切相关     

异搏定对缺氧和缩血管物质促肺动脉平滑肌细胞增生的影响

采用~３Ｈ－ＴｄＲ掺入、结晶紫染色以及ＰＣＮＡ免疫细胞化学方法观察异搏定对缺氧和４种缩血管物质促肺动脉平滑肌细胞增生的影响。结果发现：①４种缩血管物质（ＥＴ－１、ＡＴⅡ、Ａ_（２３１７８）、ＫＣｌ）均有不同程度的促肺动脉平滑肌细胞（ＰＡＳＭＣ）ＤＮＡ合成的作用,其作用可被Ｃａ~（２＋）通道阻滞剂异搏定阻断;②缺氧所致ＰＡＳＭＣ增殖的３项指标变化同样可被异搏定阻断。表明［Ｃａ~（２＋）］ｉ升高可能为缺氧和缩血管物质引起肺血管ＳＭＣ收缩和增生的信息传递的共同途径。     

粉防己碱抑制大鼠肺动脉高压过程中PDGF-A、B表达的研究

目的：探讨血小板源生长因子（ＰＤＧＦ）在粉防己碱（Ｔｅｔ）抑制野百合碱（ＭＣＴ）诱导的大鼠肺动脉高压肺血管构形重建中的作用。方法：建立（ＭＣＴ）诱导的大鼠肺动脉高压模型,同进以两个实验组加不同剂量的Ｔｅｔ抑制肺动脉高压,用免疫组化方法检测Ｔｅｔ对ＭＣＴ致肺动脉高压在 肺小动脉中膜平滑肌细胞ＰＤＧＦ－Ａ、Ｂ表达的影响。结果：Ｔｅｔ能抑制肺小动脉中膜平滑肌细胞增殖时的ＰＤＧＦ－Ｂ的表达增强（Ｐ〈０．０