风疹病毒R16株体外感染人胚晶状体上皮细胞的初步研究

目的观察风疹病毒R16株体外感染人胚晶状体上皮细胞的生物学特性。方法利用相差显微镜、透射电子显微镜、免疫细胞化学技术观察风疹病毒R16株在人胚晶状体上皮细胞中的形态学及生长特性。结果风疹病毒R16株体外感染人胚晶状体上皮细胞后，细胞不产生明显的病变效应。受病毒感染的人胚晶状体上皮细胞生长速度较慢，10d后可在细胞质内观察到呈不规则球形、由单层脂质膜包绕、直径60～80nm的病毒颗粒，包括致密核心和无致密核心两种颗粒。而在胞核中未发现病毒颗粒。结论风疹病毒R16株能在人胚晶状体上皮细胞中增殖，为进一步研究风疹病毒感染后先天性白内障的发生机制打下基础。     

体外培养人胚晶状体上皮细胞生长特性的研究

目的观察体外培养人胚晶状体上皮细胞的生物学特性。方法组织块贴壁法培养人胚晶状体上皮细胞,通过倒置相差显微镜、透射电子显微镜,采用免疫细胞化学法分析人胚晶状体上皮细胞的生长特性。结果体外培养的原代人胚晶状体上皮细胞在组织块贴壁48～72 h后从组织块边缘长出,具有上皮细胞的形态特点,第10天达到融合。第二代人胚晶状体上皮生长曲线近＂S＂形,经过1～2 d的潜伏期后进入对数生长期,需10 d左右达到融合,细胞形态呈六角形或椭圆形、超微结构保持正常,免疫细胞化学SABC法染色结果显示细胞浆内α-晶状体蛋白染色阳性。结论人胚晶状体上皮细胞具有增殖能力,第二代人胚晶状体上皮细胞是进行白内障相关研究的合适实验对象。     

Epstein-Barr virus induces human nasopharyngeal epithelial cells to escape fr om the replicative senescence

目的：我们利用与鼻咽癌密切相关的EB病毒和TPA的协同作用,观察原代人胚鼻咽上皮细胞逃避老化期后其生物学特性的变化。方法：应用相差显微镜观察人鼻咽上皮细胞在EB病毒和TPA感染后形态上的变化,同时通过检测群体倍增检测细胞体外培养寿命的变化。我们应用老化相关半乳糖苷酶（SA-β-Gal）染色检测SA-β-Gal活性的表达情况,并利用免疫组化测定p16^INK4a蛋白的表达。此外,我们用免疫荧光染色法检测EB病毒LMP1是否在EB病毒和TPA感染的细胞中有所表达。结果：EB病毒感染的人胚鼻咽上皮细胞在原代培养后期SA-β-Gal活性表达降低（4.8％）,形态上发生了改变,出现转化灶样集落,其体外培养寿命延长,并且不表达抑瘤基因产物p16^INK4a。结论：EB病毒和TPA的协同作用能促使部分原代人胚鼻咽上皮细胞逃避老化期,进入永生化早期阶段。这些研究资料为进一步阐明上皮细胞永生化的分子机制、建立人鼻咽上皮细胞永生化模型提供实验依据。     

风疹病毒分离株在人脑神经细胞中的形态与形态发生

观察风疹病毒(RV)分离株在人的神经细胞中形态和形态发生过程。方法利用超薄切片电子显微镜技术对自行分离的RV JR 23株在人脑神经细胞中的形态与形态发生过程进行了研究。 结果RV JR23袜感染人脑神经细胞24h后,可在细胞浆的核周围观察到病毒相关结构,包括电子致密颗粒,10nm,核衣壳样结构,15～25nm,“包涵体”样结构,“条纹”样结构伴随核衣壳样颗粒,并逐渐增多。96h可见完整病毒颗粒,192h达到高峰。病毒颗粒呈圆形,由单层脂质膜包绕,直径60～80nm。病毒在双层核膜中间装配,然后披上单层核膜而成熟,核膜破碎后释放入细胞浆。病毒颗粒多见于核周围。结论RV JR23株能在人神经细胞中广泛增殖,其形态发生有独特的方式。     

风疹病毒分离株在人脑神经细胞中的形态与形态发生

观察风疹病毒分离株在人的神经细胞中形态和形态发生过程。方法利用超薄切片电子显微镜技术对自行分离的ＲＶ ＪＲ２３株在人脑神经细胞中的形态与形态发生过程进行了研究。结果：ＲＶ ＪＲ２３株感染人脑神经细胞２４ｈ，可在细胞浆的核周围观察到病毒相关结构，包括电子致密颗粒，１０ｎｍ，核农壳样结构，１５－２５ｎｍ，“包涵体”样结构，“条纹”样半随核衣壳样颗粒，并逐渐增多。９６ｈ可见完整病毒颗粒，１９２ｈ，达到     

人晶状体上皮细胞BHMT基因过表达慢病毒载体的构建及鉴定

目的:构建甜菜碱高半胱氨酸甲基转移酶(BHMT)基因过表达慢病毒载体,并检测其在人晶状体上皮细胞中的表达效果。方法:采用聚合酶链反应(PCR)扩增制备目的基因片段,构建BHMT慢病毒过表达载体,转染至293T细胞。运用免疫荧光法行病毒滴度检测,并利用荧光显微镜观察细胞中绿色荧光蛋白的表达,运用RT-PCR、Western blot检测鉴定BHMT mRNA蛋白的表达水平。将构建成功的慢病毒载体BHMT-GV358感染人晶状体上皮细胞,观察目的基因表达。结果:重组慢病毒转染293T细胞后可观察到荧光,在稳定转染的细胞中BHMT及蛋白的表达水平较未转染细胞显著增高(P<0.05),体外转染人晶状体上皮细胞,荧光显微镜下可见BHMT表达。结论:成功构建过表达BHMT的慢病毒载体,并有效感染人晶状体上皮细胞,为进一步研究BHMT在白内障发生发展中的作用提供生物学基础。     

人乳头瘤病毒16型体外感染HaCaT细胞的研究

目的研究人乳头瘤病毒(HPV)16型病毒颗粒体外感染HaCaT细胞后感染标志的表达。方法从临床CIN或宫颈癌中提取HPV16病毒颗粒,用于感染单层培养的HaCaT细胞,用PCR检测感染后HaCaT细胞中HPV DNA的存在。结果 PCR方法可检测到被HPV16型病毒颗粒感染的HaCaT内有HPV DNA的存在,而用保护性抗体中和后的病毒颗粒再感染的HaCaT细胞内则没有HPV DNA的存在。结论 HPV16可以在体外培养系统中感染HaCaT细胞。     

人晶状体上皮细胞体外培养

目的 建立一种简单有效的人晶状体上皮细胞体外培养的方法. 方法 用组织块培养法,对不同年龄组(儿童组16例,中青年组18例,老年组14例)的人晶状体前囊膜进行培养.对培养的细胞进行形态学和增殖活动观察. 结果 组织块培养法较易在体外培养人类晶状体上皮细胞并传代,其增殖能力与供体年龄有关,但是老年人晶状体上皮细胞无法传代. 结论 成功地建立起人晶状体上皮细胞体外培养模型,可用于白内障及后发性白内障时后囊膜混浊发病机制和药物试验研究.     

雷公藤甲素对人晶状体上皮细胞生长影响的实验研究

目的 研究雷公藤甲素（Triptolide,Tri）对人晶状体上皮细胞（Human Lens Epithelial Cells,HLEC）增殖抑制作用。方法 原代培养人晶状体上皮细胞,Tri不同浓度、不同作用时间后吖啶橙试剂（AO）染色,荧光显微镜下观察细胞核的形态变化;MTr法测定人晶状体上皮细胞增殖抑制率。结果 雷公藤甲素对细胞的生长有明显的抑制作用,且呈浓度时间依赖性。结论 一定剂量的Tri可抑制体外培养的人晶状体上皮细胞的增殖,为预防后囊混浊提供了新途径。     

小鼠腹部心脏移植模型的显微外科技巧及并发症的预防

 目的 探讨小鼠腹部心脏移植术的手术技巧及并发症的预防和处理。 方法 雄性昆明（KM）小鼠60只，随机分供、受体2组，采用大鼠Ono术式进行小鼠腹部异位心脏移植，小鼠供体升主动脉与受体腹主动脉端侧吻合，供体肺动脉与受体下腔静脉吻合，实验30例。 结果 实验成功率86.7％(26/30)。取供心时间(9.4±1.2)min，供心修取时间(14.8±1.2)min，受体手术时间(60.4±2.4)min，其中吻合时间(29.8±2.5)min。结论 掌握小鼠心脏移植的显微外科技巧和正确的处理手术并发症，可以成功建立小鼠腹部心脏移植模型。     

Preliminary study on Herpes simplex virus type 1 infection of human oral epithelial cell in vitro

Objective： To explore the functions and mechanisms of herpes simplex virus type I（HSV-1） while infecting human oral epithelial cells in vitro（being similar to the infection in vivo）. Methods：An abundance of HSV-1 strains amplified in Vero cells were used to infect human oral epithelial cells. The culture supernatant was collected to infect Vero cells again. Morphology of HSV-1 was identified by inverted microscope and transmission electron microscope. Nucleic acid of the virus was detected by PCR. Results：The infected human oral epithelial cells didn＇ t display an obvious cytopathic effect（CPE） under inverted microscope（while Vero cells which were infected by the culture supernatant showed typical（CPE）. The virus particles were not observed in the cytoplasm nor in nucleus of human oral epithelial cells, however under transmission electron microscope in the cytoplasm of Vero cells, the nucleic acid of HSV-1 could be detected in infected human oral epithelial cells, by PCR. Conclusion-HSV-1 can successfully infect human oral epithelial cells. This model may provide a useful approach for studying the pathogenesis of herpes virus-associated periodontal disease.     

人巨细胞病毒负荷量对细胞病变的影响

目的探讨感染后人巨细胞病毒负荷量与细胞病变的关系。方法采用不同滴定度的人巨细胞病毒感染传代培养的人胚肺成纤维细胞,建立人巨细胞病毒梯度感染细胞模型,荧光定量PCR法测定感染细胞内及其维持液病毒DNA量,光镜观察致细胞病变作用,电镜检查其超微结构的改变。结果人巨细胞病毒感染后,细胞内与其维持液病毒DNA量成正相关(r=0.83,P<0.01)。当细胞内病毒DNA量>105GE/106HEL时,病毒开始自细胞内释放;当维持液病毒DNA量>103GE/ml时,细胞出现病变。结论人巨细胞病毒感染后,受染细胞排放病毒致细胞外,且细胞内外病毒负荷量成正相关。细胞病变的发生情况与细胞内及其周围环境的病毒负荷量均密切相关。     

EB病毒对体外培养的人鼻咽上皮细胞感染途经的研究

用异硫氰酸荧光素(FITC)标记EB病毒(EBV)感染体外培养的人胚鼻咽上皮和鼻咽癌细胞株(CNE-1和CNE-2),对照为EBV受体阳性的Raji和Ramos细胞。在荧光显微镜下发现FITC-EBV 可与Raji和Ramos细胞结合,如事先经未标记的EBV处理则与 FITC-EBV 结合的阳性细胞数明显下降。贴壁生长的鼻咽上皮细胞不能与FITC-EBV 结合,而刮落的鼻咽上皮细胞则能与FITC-EBV 结合,结果提示鼻咽上皮细胞质膜微细损伤可能成为EBV 直接进入细胞的门户,受损的鼻咽癌细胞更易为EBV 侵入。     

Detection and localization of aleutian disease virus and its antigens in vivo by immunoferritin technique.

Tissues from mink infected with aleutian disease virus were examined by the electron microscope for the presence of virus particles. Virus-like particles, measuring 22 nm in diameter, were observed in macrophages of spleen, mesenteric lymph node and in Kupffer cells in liver of mink ten to 13 days after infection. The virus-like particles were usually present in vacuoles inside the cytoplasm of macrophages and Kupffer cells and, occasionally, similar particles were observed inside the nucleus. Cells from uninfected mink did not contain such patricles. To correlate the existence of these virus-like particles with the presence of aleutian disease virus antigen in infected cells, tissues were processed for immunoferritin technique. It was found that aleutian disease virus antigen was present in vacuoles inside the cytoplasm of cells from the infected spleen, lymph node and liver, and that the location was similar to that of the 22 nm virus-like particles. In addition, some viral antigen was also detected as cytoplasmic granular material. The nuclei of some cells also contained aleutian disease virus antigen. The pattern of aleutian disease virus antigen was similar to the distribution of virus-like particles in cells of infected tissue. It is suggested that virus replication occurs inside the nucleus with subsequent accumulation of virus in the vacuoles of the cytoplasm.     

Ultrastructural study of hepatitis B virus in biliary epithelial cells of duck liver.

Liver specimens from the Shanghai Ma ducks congenitally infected with duck hepatitis B virus (DHBV) were examined by immunohistochemical technique and electron microscopy. All the 12 serum DHBV positive ducks showed varying degrees of positive straining in hepatocytes. In 8 of the 12 ducks, DHBV antigen was discovered in the cytoplasm of biliary epithelial cells. Conventional electron microscopy revealed two kinds of virus particles in the biliary epithelial cells: 1. the incomplete virus, 40-50 nm in diameter and spherical in shape with an outer membrane, located mainly in the dilated cisternae of rough endoplasmic reticulum of the cells in large amounts; 2. the complete virions, 55-60 nm in diameter, were spherical with an outer membrane and located mainly in the cytoplasmic vesicles in small amount. We believe the particles found in the biliary epithelial cells in this study were DHBV particles. It is most likely that the infection and replication of DHBV not only take place in the liver cells but also in the biliary epithelial cells.

     

单纯疱疹病毒Ⅱ型定量紫外线照射后某些生物学特性的改变

<正> 近些年来,关于单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-2)与宫颈癌的病因学关系,已受到国内外的相当重视,并有许多关于 HSV-2引起体外培养细胞恶性转化和动物体内诱癌的报道。为了减少该病毒增殖性感染所致的细胞死亡,有利于感染细胞转化研究的进行,Duff 和 Rapp 以及 Rapp 和Turner 曾试用了各种方法来灭话