慢性胰腺炎大鼠胃平滑肌运动功能的变化及机制研究

目的探讨慢性胰腺炎(CP)大鼠胃运动功能的变化及可能机制。方法选择健康Wistar大鼠30只,随机分为对照组、假手术组和模型组,每组10只。模型组应用油酸经胰胆管灌注的方法制作CP模型,假手术组大鼠开腹后仅翻动十二指肠并触摸胰腺数次,对照组大鼠不进行任何手术。造模时间为6周。然后分别检测3组大鼠粪脂肪滴计数、粪弹力蛋白酶1(FE-1)、胰腺病理以及血清胆囊收缩素(CCK)的水平;同时观测胃窦环行平滑肌肌条及细胞收缩变化;反转录-聚合酶链式反应法测定胃肌层诱导型一氧化氮合酶(iNOS)mRNA的表达量和平滑肌细胞培养基中一氧化氮(NO)含量的变化。结果与假手术组比较,模型组大鼠粪脂肪滴个数显著增加,粪FE-1水平显著降低,胰腺呈典型CP改变。模型组大鼠胃窦环行平滑肌条收缩能力和细胞收缩反应较假手术组和对照组显著下降,血清CCK水平、胃肌层iNOSmRNA表达量及平滑肌细胞培养基中NO水平均较假手术组和对照组显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论CP大鼠胰腺外分泌功能不全可导致CCK分泌增加,引起胃窦肌层iNOSmRNA的表达上调并产生过量的NO,从而抑制胃窦环行平滑肌的收缩能力,这可能是CP胃运动功能障碍的机制之一。     

水菖蒲和石菖蒲对大鼠离体胃平滑肌条作用的比较

目的：观察水菖蒲和石菖蒲对大鼠离体胃平滑肌条运动的影响，并比较二 异同。方法：将大鼠胃不同部位的肌条放置在灌流肌槽中，用生理记录仪记录肌条的收缩活动。结果：（1）水菖蒲增高胃底和胃体纵、环行肌的张力，但减小胃窦环行肌收缩波平均振幅和幽门环行肌运动指数；（2）石菖蒲增大胃窦环行肌收缩波平均振幅和幽门环行肌运动指数。结论：水菖蒲对大鼠离体胃底和胃体纵、环行肌有兴奋作用，但对胃窦和幽门环行肌有抑制作用；石菖蒲对大鼠离体胃窦、幽门环行肌有兴奋作用。     

胃动素对Cajal间质细胞引起的大鼠胃平滑肌收缩的作用

目的 观察Cajal间质细胞（ICC）在胃平滑肌收缩的关键作用,以及胃动素及ICC引起胃平滑肌细胞收缩的影响。方法：（1）采用大鼠胃体上1/3起博区及胃窦环行肌条在恒温灌流Kreb液中,通过张力换能器输入生理记录仪记录胃肌条的机械运动。（2）用美蓝 光照选择性损伤ICC对胃平滑肌收缩的影响 。（3）损伤ICC后胃动素对胃肌收缩的影响。结果：（1）带有ICC的胃体起搏区和胃窦肌条记录到稳定的收缩活动,胃窦收缩频率和振幅较胃体起搏区高。（2）损伤胃环肌层ICC后,导致胃体起搏区和胃窦平滑肌收缩频率与振幅下降80%-90%,运动几乎消失。（3）胃动素0.03-0.25μg/ml明显增加胃体起搏区和胃窦的收缩频率和振幅,呈剂量依赖性增加。损伤ICC后几乎完全取消胃动素对胃肌的收缩作用。抗胃动素血清和阿托品可阻断胃动素的作用。结论 ICC是胃平滑肌运动的起搏细胞。胃动素通过ICC对胃肌收缩进行调节。     

腹部手术影响小肠平滑肌细胞收缩的细胞内信号转导机制研究

目的:探讨腹部手术操作对小肠平滑肌细胞收缩功能的影响及细胞内信号转导途径。方法:采用Wistar大鼠制作腹部手术动物模型,酶解法获取小肠游离环行平滑肌细胞,检测平滑肌细胞在乙酰胆碱作用下的收缩反应和胞浆游离钙离子浓度([Ca2 ]i)的变化,然后将细胞分别与一氧化氮合酶抑制剂L-NNA、钙活化的K 通道阻滞剂A-pamin、蛋白激酶A抑制剂H89和蛋白激酶G抑制剂KT5823等一同孵育,重复以上实验过程。测定小肠环行平滑肌细胞培养24 h后培养基中一氧化氮(NO)的含量。结果:培养24 h后,实验组小肠环行平滑肌细胞产生的NO量明显高于对照组(P<0.05),L-NNA可明显降低实验组NO的产量,而对照组NO产量没有明显影响;L-NNA和KT5823可明显提高实验组小肠环行平滑肌细胞的收缩能力及乙酰胆碱刺激的[Ca2 ]i升高的水平(P<0.05),而Apamin和H89没有明显的影响。结论:腹部手术操作导致小肠肌层大量生成NO,激活鸟苷酸环化酶产生cGMP,通过PKG途径降低细胞内[Ca2 ]i的水平,抑制小肠平滑肌细胞的收缩能力。     

雌二醇对大鼠离体胃平滑肌收缩活动的影响

目的 观察雌二醇对大鼠离体胃平滑肌收缩活动的影响，并探讨其可能的作用机制。方法 取大鼠离体平滑肌条，将其置于灌流肌槽中，经张力换能器将信号输入生理记录仪，记录股条的等长收缩活动。结果 雌二醇显著地降低胃底纵行肌及胃体纵行肌和环行肌张力，减少胃体、胃窦纵行肌和环行肌收缩波平均振幅及幽门环行肌运动指数，其作用不被六烃季胺、消炎痛、心得安、酚妥拉明及L-NNA所阻断。结论 雌二醇可抑制大鼠离体胃平滑肌收缩活动，可能是直接作用于胃平滑肌细胞或通过其他受体起作用。     

肾上腺素能受体在四磨汤对胃窦平滑肌影响中的作用

目的研究四磨汤对SD大鼠离体胃窦平滑肌条收缩活动的影响及肾上腺素能受体在其中的作用。方法离体胃窦平滑肌条置于盛有Krebs液的组织浴槽中,记录其等长收缩活动,观察不同剂量（1、5、25、50、100、150、200μl）四磨汤对大鼠胃窦平滑肌条收缩活动的影响,以及肾上腺素能受体兴奋剂肾上腺素（10～7mol／L）对四磨汤引起的平滑肌条收缩活动的影响。结果①四磨汤剂量依赖性引起大鼠胃窦纵、环行平滑肌收缩活动增加,肾上腺素可部分抑制四磨汤对胃窦纵、环行平滑肌的兴奋作用;②低剂量时纵行肌活性增加更多地依赖于对。肾上腺素能受体的阻断,高剂量时环行肌活性增加更多地依赖于肾上腺素能受体的阻断。结论①四磨汤对大鼠胃窦平滑肌的收缩活动具有明显的兴奋作用,这一兴奋作用部分通过肾上腺素能受体介导;②肾上腺素能受体对于四磨汤作用于胃窦纵、环行肌具有不同的调节模式。     

生长抑素对大鼠胃窦肌条的兴奋作用

三种形式的生长抑素均兴奋大鼠胃窦环行肌条的活动,使其收缩波平均振幅增大,而对胃底、胃体和幽门等部位肌条的活动均无明显的影响。结果表明:生长抑素对大鼠离体胃平滑肌条的兴奋作用局限在胃窦环行肌区域带。     

芳香化湿类中药对大鼠离体胃平滑肌运动的影响

目的：观察藿香、佩兰、苍术、砂仁、厚朴和草蔻对不同部位离体胃平滑肌条运动的影响。方法：用生理记录仪同时记录安置在各恒温灌流肌槽中的胃各部位平滑肌条的收缩活动。结果：１藿香、佩兰和苍术可增加大鼠胃底纵、环行肌条的张力；２藿香和佩兰可增加胃体纵行肌条的张力，砂仁减小胃体纵、环行肌收缩波平均振幅；３砂仁减小胃窦纵、环行肌条收缩波平均振幅；４藿香增加幽门环行肌条的运动指数，而砂仁则减小该部位的运动指数。结论：芳香化湿类中药对胃各部位肌条的收缩活动即有兴奋作用又有抑制作用。     

Ghrelin对大鼠胃肠动力的影响

目的:从器官、组织的不同水平测定大鼠Ghrelin作用下胃肠动力的变化。方法:运用BD2000作为胃肠标记物,同时测定胃残留率和小肠推进比;多导生理仪记录大鼠胃窦肌电活动;多导生理仪记录离体大鼠胃体上1/3起搏区[带有ICC(interstitial cells of Caja)的胃肌]和胃窦环行肌肌条收缩波改变。结果:给药组大鼠胃残留量较对照组明显减少,给药组胃电慢波振幅及频率显著高于对照组,快波频率也增多。在组织水平,在Ghrelin作用下给药组离体的动物胃体起搏区及胃窦环行平滑肌肌条收缩幅度明显高于对照组;给药组胃体起搏区肌条的收缩频率与对照组无明显差别;给药组胃窦环行平滑肌条的收缩频率明显高于对照组,与其在体实验中胃排空明显增强,动力升高相吻合。结论:Ghrelin能增强胃肠动力,促进胃排空。     

大承气汤诱导实验性急性胰腺炎大鼠胰腺细胞凋亡的研究

目的：观察大承气汤对实验性急性胰腺炎大鼠胰腺腺泡细胞凋亡的影响。方法：36只雄性SD大鼠随机分入12h和24h时间点假手术组、模型组和治疗组,每组6只;其中24只逆行胰胆管注射3.5%牛磺胆酸钠建立急性胰腺炎模型,12只为假手术组。治疗组予大承气汤喷雾干燥颗粒20g/kg灌胃治疗一次,模型组和假手术组给予等量的生理盐水。给药后12h和24h,断头处死取血及胰腺组织,检测胰腺组织中一氧化氮（nitric oxide,NO）含量和诱生型一氧化氮合成酶（inducible NOsynthetase,i NOS）的活性,原位缺口末端标记法检测胰腺组织细胞凋亡率,并观察胰腺组织病理积分。结果：与模型组比较,治疗组两个时间点的血清淀粉酶活性显著降低（P〈0.05）,胰腺组织内NO含量和i NOS活性明显升高（P〈0.05）;治疗组大鼠的胰腺腺泡细胞凋亡指数增加,伴随胰腺组织病理学积分的降低（P〈0.05）。结论：大承气汤可诱导急性胰腺炎大鼠胰腺腺泡细胞凋亡而改善胰腺病理改变,其机制可能与增加胰腺组织NO含量有关。     

姜黄素对小鼠离体空肠平滑肌舒缩活动的影响

目的探讨姜黄素对胃肠道蠕动是否有直接影响。方法取小鼠离体空肠平滑肌,放入37℃ Krebs液浴槽中,通入95％氧气和5％二氧化碳混合气体,进行如下实验：第一组小鼠空肠平滑肌,加入不同浓度的姜黄素,测量记录空肠平滑肌的自主收缩变化;第二组给予乙酰胆碱收缩平滑肌,然后加入姜黄素,观察姜黄素对平滑肌收缩的影响;第三组给予阿托品舒张平滑肌,然后加入姜黄素,观察姜黄素对平滑肌舒张的影响;第四组给予肾上腺素舒张平滑肌,然后加入姜黄素,观察姜黄素对平滑肌舒张的影响。统计学处理经SPSS19．0软件,所获数据用方差分析t检验。结果小鼠空肠平滑肌加入姜黄素后,平滑肌自主收缩明显下降（P〈0．01）,降低的幅度与姜黄素剂量呈现相关性;应用乙酰胆碱导致空肠收缩后,再加姜黄素,空肠平滑肌的收缩幅度也有明显的下降（P〈0．01）;给予阿托品导致小鼠平滑肌舒张后,再给予姜黄素,平滑肌收缩幅度进一步降低;给予肾上腺素引起小鼠平滑肌舒张后,再给予姜黄素孵育,平滑肌收缩幅度进一步降低。结论姜黄素对小鼠离体空肠平滑肌具有直接舒张作用。     

P 物质/NK1 受体对实验性胃溃疡大鼠胃肠动力的调节

目的：通过检测大鼠实验性胃溃疡愈合过程中胃肠功能及P 物质（substance P,SP）表达改变,探讨SP/NK1 受体（neurokinin 1,NK1）通路对胃溃疡离体幽门平滑肌条收缩功能的影响及机制。方法：62 只SD 大鼠分为正常组（6 只）、盐水对照组（24 只）和溃疡组（32 只）。采用常规冰乙酸腐蚀法制备大鼠乙酸性胃溃疡模型并测量溃疡面积;免疫组化染色观察SP 的表达。甲基纤维素酚红溶液灌胃观察胃排空率和肠推进功能;张力换能器及多通道生理信号采集处理系统观察SP 及NK1 受体拮抗剂对离体胃幽门环形平滑肌条收缩反应性的影响。结果：溃疡组术后4 d 形成呈典型的“环堤征”,10~14 d 溃疡逐渐愈合,28 d 溃疡处形成瘢痕组织。免疫组化结果显示：SP 阳性细胞主要分布于黏膜胃底腺细胞、黏膜下层和肌层,溃疡4、10 和14 d SP 积分光密度值明显低于正常组和对照组（P<0.05,P<0.01）。溃疡组的胃排空率明显低于正常组和盐水组（P<0.05）,盐水组胃排空率与正常组相比无统计学意义。幽门环形肌条收缩功能显示：溃疡组不同时相的肌肉收缩幅度与正常组相比均有不同程度降低（P<0.01）;加入SP 后,胃幽门环形肌收缩幅度增加,在加入NK1 受体拮抗剂后,收缩幅度、收缩频率大幅度下降（P<0.05,P<0.01）。结论：胃溃疡时胃肠运动功能显著降低,其机制与SP/NK1 受体信号通路受损有关。     

氧化苦参碱对脂多糖诱导的RAW264.7细胞一氧化氮及其诱导型合酶表达的影响

目的：观察氧化苦参碱（OMT））对脂多糖（LPS）诱导的RAW 264.7细胞一氧化氮（NO）释放量及诱导型一氧化氮合酶（iNOS）表达的影响。方法：采用LPS诱导RAW 264.7细胞建立细胞炎症反应模型。实验分组：空白对照组、LPS组（1μg/mL）、OMT组（100μmol/L）、LPS＋OMT小剂量组（20μmol/L）、LPS＋OMT中剂量组（50μmol/L）、LPS＋OMT大剂量组（100μmol/L）。采用Griess试剂法测定细胞培养液中NO释放量。采用逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）方法测定RAW 264.7细胞iNOS mRNA的表达。结果：OMT显著减少LPS诱导的RAW 264.7细胞NO的释放（P〈0.05,P〈0.01）;同时减少LPS诱导的RAW 264.7细胞iNOS mRNA的表达（P〈0.05,P〈0.01）。结论：OMT可能通过抑制LPS诱导的巨噬细胞iNOS mRNA表达,减少NO的释放量而发挥抗炎作用。     

硫酸镁预处理对小鼠全脑缺血再灌注损伤后一氧化氮及一氧化氮合酶的影响

目的:探讨硫酸镁(MgSO₄)预处理对全脑缺血再灌注小鼠一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)活性的影响。方法:小鼠50只随机均分为假手术组、再灌组和硫酸镁预处理低、中、高剂量组,制作全脑缺血再灌注损伤模型。动态监测脑电图变化,观察病理形态学变化,检测脑组织NO含量和NOS、诱导型NOS(iNOS)活性。结果:硫酸镁预处理各组脑组织缺血损伤病理学改变轻于再灌组。假手术组及硫酸镁预处理各组脑组织NO含量和NOS、iNOS活性均低于缺血再灌组(P<0.05~P<0.01)。结论:硫酸镁预处理可减轻神经元损伤程度,对缺血再灌注脑损伤具有保护作用,其机制可能与降低NOS及iNOS活性、减少NO含量有关。     

槟榔提取物F57对大鼠结肠平滑肌运动的影响

目的:观察从中药槟榔中分离出的F57对离体大鼠结肠平滑肌运动的影响。方法:制备大鼠结肠平滑肌肌条,以0.9%氯化钠溶液(NS)和乙酰胆碱(Ach)作对照,观察不同浓度的F57对离体大鼠平滑肌肌条的收缩效应。结果:与NS组比较,不同浓度的F57对离体大鼠结肠平滑肌均有不同程度的促进作用,差异具有统计学意义(P﹤0.05)。以Ach标化实验数据,0.1 g/L的F57组与1×10-4 mol/L的Ach对离体大鼠结肠平滑肌的收缩效应无明显差异;当F57的浓度增大到1 g/L时候,肌条收缩效应基本达到峰值,收缩不再随着浓度的增大而增加。结论:从槟榔中分离出的F57对大鼠结肠平滑肌有明显促进收缩的作用,且收缩的效应与剂量呈正相关,可以进一步对F57进行分离单体的研究。     

大承气汤对不完全性肠梗阻大鼠血清中乙酰胆碱和一氧化氮及回盲部形态学的影响

目的研究大承气汤对不完全性肠梗阻大鼠血清中乙酰胆碱（Ach）和一氧化氮（NO）含量及大鼠回盲部形态学变化的影响。方法将60只SD大鼠随机分为正常组,模型组,假手术组,大承气汤高、中、低剂量组（以下简称高、中、低剂量组）,每组10只。除正常组外,假手术组用针线穿透肠系膜而不结扎,其余各组均造成不完全性肠梗阻模型。各组大鼠在手术造模前0．5h及造模后连续给药3d。正常组、假手术组、模型组给予生理盐水,高、中、低剂量组分别给予相应剂量的大承气汤灌胃。运用酶联免疫法（ELISA）检测大鼠血清中Ach、NO含量;对大鼠回盲部进行切片、HE染色并观察其形态学变化。结果（1）高、中、低剂量组与模型组大鼠回盲部黏膜损伤评分比较,差异有统计学意义（P〈0．011;高剂量组与中、低剂量组大鼠损伤评分比较,差异有统计学意义（P〈0．01）。（2）高、中、低剂量组与模型组血清中Ach、NO含量比较,差异有统计学意义（P〈O．01）;高剂量组与中、低剂量组Ach、NO含量比较,差异有统计学意义（P〈0．01,P〈0．05）。结论大承气汤不同剂量对不完全性肠梗阻大鼠肠道可不同程度地减轻黏膜损伤,降低有害物质的产生。     

黄连提取物及其化学成分对豚鼠胃窦环行肌收缩功能的影响

目的：明确黄连提取物及其化学成分对豚鼠胃平滑肌收缩运动的影响,探讨与黄连“健胃”和“败胃”作用相关的药效物质基础。 方法：采用张力测定法,观察黄连水提物、黄连总生物碱（0.3-1 000 μg/mL）及其化学成分小檗碱、巴马丁碱和药根碱（0.3-1 000 μmol/L）对豚鼠离体胃窦环行肌自发收缩和电场刺激（electrical field stimulation,EFS）诱发收缩的影响。 结果：小剂量黄连水提物和黄连总生物碱均能促进胃窦环行肌的自发收缩,而大剂量则抑制。小檗碱、巴马丁碱和药根碱具有相似效应,其中在发挥促收缩作用时药根碱作用最强,在发挥抑制作用时小檗碱作用最强。另外,黄连水提物、黄连总生物碱、小檗碱、巴马丁碱和药根碱均能增加EFS诱发的平滑肌收缩幅度,其中药根碱的作用最强。 结论：小剂量黄连“健胃”与大剂量“败胃”作用可能与其影响胃平滑肌收缩有关。小檗碱、巴马丁碱和药根碱都是黄连影响胃平滑肌收缩的有效成分,药根碱促平滑肌收缩的作用最强,而小檗碱抑制平滑肌收缩的作用最强。     

银杏叶提取物GBE50对慢性间歇性缺氧大鼠肺动脉高压的保护作用及其对iNOS mRNA表达的影响

目的:观察GBE50对缺氧大鼠肺动脉高压的保护作用。方法:复制常压低氧肺动脉高压大鼠模型。30只健康SD大鼠随机分为正常对照组(N)、模型组(M)和GBE50组。GBE50组于每天缺氧后按照80 mg.kg-1口服GBE50,21天后观察管腔面积/管总面积(LA%)、RT-PCR测肺组织中的iNOS(诱导性NO合酶)活性的变化、用放免法测血浆中cGMP、NO含量。结果:与正常对照组比较,模型组cGMP、LA%明显降低(P0.01),iNOS mRNA表达明显升高(P0.01)和NO的含量明显增加(P0.05)。与模型组比较,GBE50组LA%、iNOS mRNA明显下降(P0.05)和NO的含量明显增加(P0.05),cGMP含量差异无统计学意义(P0.05)。结论:GBE50对慢性间歇性缺氧大鼠肺动脉高压有一定的保护作用。     

17β-雌二醇对新生牛血清诱导的血管平滑肌细胞增殖反应的影响及其机制

目的：探讨雌甾-1,3,5（10）-三烯-3,17β-二醇（17β-雌二醇）对新生牛血清诱导血管平滑肌细胞（VSMCs）增殖反应的影响及其机制。方法：用新生牛血清刺激培养的VSMCs增殖,MTT法检测17β-雌二醇对新生牛血清诱导的VSMCs增殖的影响,并用Western blot检测caveolin-1蛋白,诱导型一氧化氮合酶（iNOS）及NO在此过程中的变化。结果：与对照组比,新生牛血清可促进VSMCs增殖（P〈0.05）,17β-雌二醇作用24 h后能明显抑制上述作用（P〈0.05）;17β-雌二醇预处理可抑制新生牛血清诱导的VSMCs中caveolin-1,iNOS蛋白表达下降及NO释放（P〈0.05）;17β-雌二醇受体阻断剂1-{4-[2-（n,n-二甲氨基）乙氧基]苯}-1,2-二苯-1-丁烯（他莫昔芬）预处理可部分逆转17β-雌二醇的抑制作用（P〈0.05）。结论：17β-雌二醇通过其受体可抑制新生牛血清诱导的VSMCs增殖,此过程与上调caveolin-1蛋白表达,激活iNOS,增加NO释放有关。