TCRαβ基因结构与重排

ＴＣＲαβ基因是由Ｖ，（Ｄ），Ｊ，Ｃ等不同基因片段组成的，α和β链编码基因在结构上各有其特点，ＴＣＲαβ基因的重排与分子表达是在胸腺内完成的，这一过程受等位基排斥等机制的严格调控，从而确保了Ｔ细胞只能产生来自一个等位基因重排编码的克隆特异的αβＴＣＲ分子。     

利用Fine-tiling aCGH分析TCR基因重排鉴定T细胞白血病克隆

目的:建立基于分析T细胞受体(TCR)基因重排而确定T细胞-急性淋巴细胞白血病(T-ALL)克隆的新方法,为研究T-ALL中涉及TCR基因位点的染色体易位提供基础。方法:提取1例T-ALL患者外周血单个核细胞(PBMC)的总DNA,利用精细定位的寡核苷酸阵列比较基因组杂交(fine-tiling aCGH)分析样本与对照组基因组DNA的差异,了解不同染色体上可能的断裂点和具体的位点,根据所提供的初步结果,从断裂点涉及的基因序列设计特异引物,采用连接介导PCR(LM-PCR)和序列分析等方法去找出与之发生重排的基因序列。并进一步通过RT-PCR检测TCR基因表达。结果:该例T-ALL患者fine-tiling aCGH结果显示14染色体TCRα/δ基因座出现4个断裂点,分别对应TCR Vδ1、Vδ2、Jδ1和Jδ2基因位点。通过LM-PCR、测序及序列分析,该例T-ALL患者的PBMC中TCR基因涉及Vδ1Dδ2Dδ3 Jδ1、Vδ2Dδ3 Jδ2重排。RT-PCR的结果也验证T-ALL表达该TCR基因重排。结论:结果表明,利用fine-tiling aCGH及LM-PCR技术可以找出TCR基因重排,并且该方法是可靠的,也是发现一些涉及TCR位点的融合基因的一条途径。     

基于TCR基因位点的FT-aCGH分析鉴定T-ALL中异常TCR Vβ-IgH重排

目的:鉴定T细胞-急性淋巴母细胞白血病(T-ALL)异常基因重排。方法:利用基于T细胞受体(TCR)基因位点的精细定位的寡核苷酸阵列比较基因组杂交(FT-aCGH)技术分析1例T-ALL样本与对照组基因组DNA的差异,了解7号和14号染色体TCRβ、TCRγ和TCRαδ位点上可能的断裂点位置,根据所提供的初步结果,根据断裂点涉及的基因序列设计特异引物,采用连接介导PCR(LM-PCR)和序列分析等方法分析与之发生重排的基因序列。结果:FT-aCGH结果显示所检测T-ALL样本中,各TCR基因位点都存在断裂点,经过LM-PCR和序列分析,以及利用PCR和特异引物检测基因组DNA结果确定了T-ALL克隆为Vα8-Jα22基因重排,并发现了7号染色体在TCRβ基因位点,Vβ20-1基因片段与14号染色体位于免疫球蛋白重链区基因位点的IgHVII-26-2基因片段发生异常重排,形成t(7;14)(q34;q32)染色体易位。结论:利用FT-aCGH和LM-PCR技术在1例T-ALL中发现了一种新的Vβ20-1-IgHVII-26-2异常重排,这种异常重排有可能可以作为该肿瘤克隆的生物标记物。     

血液系统肿瘤患者外周血细胞IgH基因和TCRγ基因的检测及意义

检测各种血液系统肿瘤患者外周血细胞免疫球蛋白重链基因 (IgH )和T细胞受体γ基因 (TCRγ )克隆性重排并探讨其意义。通过多聚酶链式反应 (PCR )方法检测 32例非霍奇金淋巴瘤 (NHL )、 18例急性髓性白血病 (AML )、 2 4例多发性骨髓瘤 (MM )、 8例急性淋巴细胞白血病 (ALL )及 6例慢性淋巴细胞白血病 (CLL )患者外周血细胞IgH及TCRγ克隆性基因重排。结果表明 ,NHL、AML、MM、ALL及CLL患者中IgH克隆性重排率分别为 37 5 0 %、 2 2 2 2 %、 83 33%、 12 5 0 %和 16 6 7% ;TCRγ基因克隆性重排率分别为 6 2 5 0 %、 5 0 0 0 %、 5 4 17%、 5 0 0 0 %及 5 0 0 0 %。在B型、T型NHL中 ,IgH克隆性重排率分别为 31 5 8%及 6 6 6 7% ;TCRγ克隆性重排率分别为 47 37%及 6 6 6 7%。AML中IgH克隆性重排阳性者的初治完全缓解率(CR ) (5 0 0 0 % )与IgH重排阴性的初治CR率 (5 0 0 0 % )无显著差异 (P >0 0 5 )。TCRγ克隆性重排阳性者与阴性者的初治CR率 (均为 44 44 % )亦无显著差异 (P >0 0 5 )。IgH及TCRγ基因克隆性重排不具有细胞谱系的特异性 ,但通过检测外周血IgH、TCRγ克隆性基因重排对NHL有辅助诊断意义 ,并且可作为监测微小残留病壮 (MRD )的手段。     

活动性肺结核患者α/β TCR基因重排及CDR3谱型分析

目的:建立多重PCR方法扩增α/β TCR全长序列,分析活动性肺结核患者病变局部T淋巴细胞α/β TCR基因重排特点及CDR3谱型.方法:分离结核患者肺泡灌洗液中的淋巴细胞,提取RNA后用SMART方法逆转录,运用根据现有文献设计的α和β TCR扩增引物,进行多重PCR扩增以获得其全长序列,构建重组质粒并测序,利用DNAstar及网上TCR资源分析序列.结果:3例患者共获得24个α链序列,13个β链序列.α链以AV1S2(54%)、AV12S3(41%)、AV12S2(5%)为主;β链以BV2(38%)、BV29S1(46%)、BV14(3%)、BV4S2(3%)为主.同一病例及不同病例之间CDR3区呈现多样性,但是标本1、标本3各有一条β链的CDR3氨基酸序列相同:SVGTGTLHQETQY;标本2和标本3的各有2条α链CDR3序列相同:AVRDWAGNMLT;标本2的一个α链和标本3的一个α链的CDR3均有:AV…DNN…RLM序列.结论:建立了TCRα和β链全长序列的多重PCR扩增方法.结核患者病变局部克隆性增殖的TCR α和β链谱型呈限制性取用,克隆增生的T淋巴细胞来自不同的亚群,但是相同的CDR3序列对于识别MTB多肽可能具有特异性.     

基因重排检测技术操作体会及注意事项

临床表现、形态学、免疫表型以及分子遗传学特征对淋巴组织增生性病变的诊断均具有重要的意义,尤其是分子遗传学特征是确定淋巴组织增生性病变的克隆性及其细胞来源的可靠依据。近年来开展的PCR法基因重排检测技术,能从DNA水平更早期、敏感、精确地在亚病理与亚临床阶段检测出肿瘤性克隆,对淋巴造血组织疾病的良恶性判断具有重要意义。该技术目前已用于淋巴造血组织疾病良恶性诊断、肿瘤性病变的追踪及复发预测等方面。本文就基因重排检测技术和在日常工作中的操作体会、改进意见、注意事项以及与病理形态学诊断有关的一些问题做一简单总结。[第一段]     

多重PCR检测急性非淋巴细胞白血病IgH及TCRVγI—Jγ基因重排

目的：为进一步了解急性非淋巴细胞白血病病人基因重排情况。方法：应用多重ＰＣＲ技术检测４１例ＡＮＬＬ病人ＩｇＨ及ＴＣＲＶγＩ－Ｊγ基因重排。结果：２６．８％（１１／４１）ＡＮＬＬ病人存在ＩｇＨ或／和ＴＣＲＶγＩ－Ｊγ基因重排,３例病人同时存在ＩｇＨ和ＴＣＲＶγＩ－Ｊγ基因重排;基因重排阳性ＡＮＬＬ治疗缓解率低于重排阴性ＡＮＬＬ病人。     

T细胞性淋巴瘤诊断中TCR基因重排检测的应用

目的：探讨T细胞受体( T cell receptors, TCR)基因重排检测对T细胞性淋巴瘤诊断的价值。方法收集T细胞性淋巴瘤30例和淋巴反应性增生组织30例,提取DNA,应用BIOMED-2引物系统中的56条引物进行PCR扩增,核酸分子异源双链凝胶电泳分析结果。结果30例T细胞性淋巴瘤标本中TCRβ、TCRγ、TCRδ的检出率分别为83．3%(25/30)、93．3%(28/30)、13．3%(4/30),三者联合检测的检出率为96．7%(29/30),30例淋巴反应性增生组织中均未检测出TCR基因重排。结论利用BIOMED-2引物系统检测TCR 基因重排可作为T细胞性淋巴瘤的辅助诊断工具。     

霍奇金病单个H／R—S细胞TCR—γ基因重排的研究

目的 从单个细胞水平检测Ｈ／Ｒ－Ｓ细胞是否存在Ｔ细胞受体（ＴＣＲ）－γ链基因重排,以研究其是否来源于分化早期的Ｔ淋巴细胞。方法 用显微操作仪从冷冻的新鲜活检组织切片中挑取ＣＤ３０阳性的Ｈ／Ｒ－Ｓ细胞,提取其ＤＮＡ并行聚合酶链反应（ＰＣＲ）。ＴＣＲ－γ基因重排的ＰＣＲ采用半巢式扩增法,首轮用与ＴＣＲ－γ基因Ｖγ和Ｊγ区（包括Ｎ区）互补的引物对加入β－珠蛋白引物行混合扩增,对其中β－珠蛋白扩增阳性的Ｐ     

免疫球蛋白及T淋巴细胞受体基因重排的调控

免疫系统通过基因重排产生多种特异性抗原受体。其基因重排是一个有序的过程 ,受到多种因素的调控。这对产生免疫应答的多样性及特异性具有重要意义     

多重PCR检测急性非淋巴细胞白血病IgH及TCRVγΙ-Jγ基因重排

目的:为进一步了解急性非淋巴细胞白血病(ANLL)病人基因重排情况。方法:应用多重PCR技术检测41例ANLL病人IgH及TCRVγIJγ基因重排。结果:26.8%(11/41)ANLL病人存在IgH或/和TCRVγIJγ基因重排,3例病人同时存在IgH和TCRVγIJγ基因重排;基因重排阳性ANLL治疗缓解率低于重排阴性ANLL病人(P<0.05)。结论:①IgH或TCR基因重排并非局限于淋巴细胞白血病,也可发生于部分ANLL病人;②多重PCR技术可以一次PCR扩增同时检测两种重排基因,更适于临床推广应用。     

非霍奇金淋巴瘤的IgH和TCRδ基因重排

目的：探讨非霍奇金淋巴瘤（NHL）免疫球蛋白重链（IgH）和T细胞受体δ链（TCRδ）基因重排情况。方法：用半重叠式聚合酶链反应（PCR）方法检测IgH及TCRδ基因重排。结果：57例NHL中41例（72％）发生IgH基因重排，30例（53％）出现TCRδ基因重排。结论：检测克隆性基因重排可以作为诊断NHL有效基因标志，NHL中存在系列不忠实现象。     

用TCRβ可变区基因阵列反映疾病的淋巴细胞克隆变化

将正常脐带血TCRβ（T细胞受体β）重排基因制备成因阵列,观察能否反映肿瘤或自身免疫疾患者的淋巴细胞克隆的变化。方法：采用RT－PCR扩增混合10例脐带血的cDNA不同家族的TCRβ可变区基因全部序列,经测序胶或SSCP电泳后,电转移到尼龙膜上,制成TCRβ可变区基因阵列。用同位素α－^32P dCTP标记正常成人、脐带血、待检患者的TCRβ基因,与基因阵列杂交。结果;从测序胶排列的基基阵列发现,正常成人及脐带血呈正常高斯分布,即呈多克隆性;一些肿瘤患者T淋巴细胞克隆有少数几个克隆的异常增生,即呈寡克隆性;1例急性T淋巴细胞白血病患者仅在Vβ16见单一的条带扩增,呈单克隆性。结论：该基因阵列可以反映正常人淋巴细胞的克隆分布和疾病时出现的淋巴细胞变化。     

PCR技术检测IgH和TCRγ基因重排及其在淋巴瘤诊断中的初步应用

应用半重叠ＰＣＲ扩增ＩｇＨ、混合引物ＰＣＲ增ＴＣＲγ基因重排片段，并初步用于淋巴瘤的诊断，发现７７％的Ｂ细胞性非何杰金淋巴瘤出现ＩｇＨ基因重排的单克隆条带，９１％的Ｔ细胞性非何杰金淋巴瘤出现ＴＣＲγ基因重排条带。提示ＰＲＣ对鉴定淋巴细胞增生的克隆性和细胞源性具有重要价值。与Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交相比，ＰＣＲ具有简便，快速等特点，更具有临床实用性。     

中线T细胞淋巴瘤的TCR—γ基因重排研究

目的对中线Ｔ细胞淋巴瘤的克隆性进行研究。方法用一组针对Ｔ细胞受体γ链基因Ｖ区片段的家族特异性引物和ＰＣＲ方法,对１１例（２２个标本）中线Ｔ细胞淋巴瘤病例进行了Ｔ细胞受体γ基因重排的检测。结果２２个标本中２１个有Ｔ细胞受体γ链基因的克隆性重排（９４４５％）。在９例原发灶的连续活检和１例原发灶及其转移灶的标本中均未发现增生的克隆家族的改变。结论中线Ｔ细胞淋巴瘤的病变组织中存在Ｔ细胞的单克隆性增生,为该肿瘤的Ｔ细胞起源提供了分子生物学的证据。在中线Ｔ细胞淋巴瘤的疾病过程中（包括转移灶）增生Ｔ细胞的家族未发生变化,支持肿瘤的单克隆起源学说     

Jurkat(E6-1)细胞TCR alpha和beta链重排基因家族取用分析

目的 探讨人T淋巴细胞白血病细胞株Jurkat(E6-1)TCR alpha和beta链的重排基因家族的取用及基因、氨基酸序列与结构,为Jurkat细胞做为单克隆T细胞研究的模型提供基础.方法 采用T细胞TCR的免疫扫描谱型分析技术(im-munoscope spectratyping),监测Jurkat细胞的alpha和beta链各基因家族的取用,ABI测序仪测序出各取用家族基因的序列,并分析其氨基酸组成(DNA tools软件),模拟H{TCR的结构(CPH modle 2.0 Server和Informax 9.0).结果 Jurkat细胞TCR alpha链的基因家族取用为:可变区为TRAV1,连接区为TRAJ3;beta链的基因家族取用为:可变区为TRBV8S1,连接区为TRBJIS2.结论 Jurkat(F6-1)细胞的TCR alpha和beta链基因、氨基酸序列和结构的确定,将为Jurkat做为效应T细胞、TCR重排模型等方面的研究提供基础.     

IgH、TCR-γ基因重排与免疫组化诊断非霍奇金淋巴瘤的价值

目的　探讨基因重排与免疫组化在诊断非霍奇金淋巴瘤(non Hodgkin’slymphoma,NHL)中的价值。方法　对131 例NHL的石蜡包埋组织进行免疫组化和基因重排检测。结果　60例B细胞NHL中51例IgH基因重排检测为阳性,阳性率 85%;50例T细胞NHL中38例TCR -γ基因重排检测为阳性,阳性率76%;HE形态学和免疫组化分型诊断率为84%(110 例),加用IgH和TCR -γ基因重排,分型诊断率达94.6%(124例),两分型诊断率差异有显著性(P<0.05)。6例巨大淋巴结 增生和3例血管免疫母细胞性淋巴结病IgH和TCR -γ基因重排检测均为阴性。基因重排与形态学和免疫组化结果不相符的 病例有7例。结论　联合运用免疫组化和基因重排技术,可提高NHL的分型诊断率。     

BIOMED-2引物系统检测急性淋巴细胞白血病患者免疫球蛋白基因重排

目的 探讨BIOMED-2引物系统检测成人急性淋巴细胞白血病(ALL)患者Ig基因重排的敏感性,分析Ig基因重排方式、各胚系基因的利用频率等.方法 采用BIOMED-2引物系统扩增29例成人ALL患者Ig重链(IgH)和Ig轻链(IgL)重排基因.将PCR产物直接测序,使用IMGT/V-QUEST等生物信息资源分析B细胞-ALL(B-ALL)患者IgH和IgL基因重排类型、胚系基因片段利用及体细胞突变情况.结果 24例B-ALL患者中IgH完全重排阳性率为70.8%,不完全重排为12.5%,IgK VH-JH重排为29.2%,IgK删失元件(IgK-Kde)重排为25.0%,未检测出IgL阳性重排.所有B-ALL患者Ig基因重排检出率可达100%.5例T细胞-ALL(T-ALL)患者1例检测到IgH不完全重排阳性,2例IgK VH-JH重排阳性,2例未检测出Ig基因重排.B-ALL中IgH重排优先利用的V、D、J家族分别为VH3和VH4、DH3和JH6.5例IgK重排中4例利用了 Vκ1家族.重排基因中发生替代突变的基因占23.5%.替代突变零星散布于Ig基因全长,互补决定区中替代突变与静寂突变的比例<1.结论 BIOMED-2引物系统可以检测出绝大多数B-ALL患者的Ig基因重排,国内的临床检测资料亦然.这是一种有效的检测工具,为定量分析微小残留病(MRD)水平提供了基础资料.     

TCR基因重排检测在T细胞淋巴瘤病理诊断中的作用

基因重排现象是每个淋巴细胞在早期经历的一个正常的过程,由于机体每个淋巴细胞的重排基因都是特有的,使每个淋巴细胞都有独特的重排形式。如若机体在某些致瘤因素的作用下失去对某个基因重排细胞的控制,则该细胞就会出现无控制的、单克隆性增生,最终导致淋巴瘤的形成。所以淋巴瘤所具有的是单克隆性重排。因此通过聚合酶链反应（polymerase chain reaction,PCR）技术进行T细胞抗原受体（T cell receptor,TCR）基因克隆性重排分析,尤其在常规HE形态学与免疫组化结果都不能确诊时,显得尤为重要。该文对其在T细胞淋巴瘤病理诊断中的作用作一综述。     

检测人TCR BD基因重排时RSS断裂末端的LM-PCR方法的建立

目的：建立检测人T细胞TCR BD基因（Diversity Gene）经历重排的连接介导PCR方法（Ligation．MediatedPCR，LM-PCR），为T细胞重排和疾病的关系研究提供基础。方法：在人TCRβ链BD1与BD25′端重组信号序列（RSS）前，BD1与BD23′端RSS后各设计两套用于巢式PCR引物；设计并合成和双链RSS平断裂末端相接的特殊接头（BW Linker），提取胸腺组织、正常人和急性T淋巴细胞白血病（T-ALL）外周血单个核细胞（PBMC）样本总DNA，和BW-linker连接，进行巢式PCR，PCR产物琼脂糖电泳分析，阳性产物做胶回收，并克隆测序鉴定。结果：在1例胸腺组织提取的总DNA中证实存在BD1和BD25′和3′的RSS断裂末端，在2例T-ALLs的PBMC中检测到BD25′和3′的RSS断裂末端，2例正常人PBMC中未能检测到RSS断裂末端，阳性的LM-PCR产物通过测序鉴定，和基因组中序列完全相符合。结论：1例胸腺组织和2例T-ALL的PBMC中检测到RSS断裂末端，提示TCRBD基因正经历重排，测序结果表明建立的监测TCR重排的LM-PCR方法可靠，可用于T细胞重排模型和相关疾病的机制研究。