伊马替尼联合高三尖杉酯碱或阿糖胞苷对K562细胞作用的研究

伊马替尼是一种ber／abl酪氨酸激酶活性抑制剂^[1]。近年来研究表明，伊马替尼能够选择性地抑制K562细胞的增殖、诱导K652细胞凋亡。临床和实验研究揭示高三尖杉酯碱治疗慢性粒细胞白血病（CML）有确切的疗效，可以明显地抑制K562细胞增殖、诱导K562细胞凋亡。阿糖胞苷是治疗CML的常用药物，对K562细胞的增殖有一定的抑制作用，亦可诱导K562细胞的凋亡。我们在本研究中探索伊马替尼与高三尖杉酯碱或阿糖胞苷联合应用是否有协同和增强抑制K562细胞增殖、影响K562细胞凋亡的作用，以及对ber／ablmRNA水平的作用。     

高三尖杉酯碱联合伊马替尼对K562/G01细胞的作用及机制研究

目的:探索高三尖杉酯碱(Homoharringtonine,HHT)联合伊马替尼(Imatinib,IM)对K562/G01细胞增殖、凋亡的影响及其可能的作用机制。方法:应用CCK-8法检测HHT联合IM对K562/G01细胞增殖的影响,流式细胞术检测细胞的凋亡率及磷酸化酪氨酸水平,Western blot检测P210及PI3K/Akt信号通路相关蛋白的表达水平。结果:HHT联合IM与单药相比,对K562/G01细胞的增殖活性具有明显抑制作用(P0.05),细胞的凋亡率显著增加(P0.05);HHT与IM联合可显著抑制K562/G01细胞内的p-Tyr及p-Crkl的表达水平,并能使p210蛋白及其下游通路蛋白P13K和p-Akt的表达水平明显降低。结论:HHT联合IM可协同抑制K562/G01细胞增殖并诱导其凋亡,其机制可能与抑制p210蛋白表达及其激酶活性有关。     

高三尖杉酯碱诱导K562细胞凋亡的实验研究

高三尖杉酯碱（ＨＨＴ）是从三尖杉属植物中分离出来的一种生物碱，临床上广泛地用于急性粒细胞白血病、急性单核细胞白血病等的治疗。我们以Ｋ５６２细胞为材料，观察ＨＨＴ对白血病细胞的杀伤模式及其引发的细胞死亡形式，以进一步研究ＨＨＴ对白血病细胞损伤的机制。材...     

三尖杉酯碱诱导K562细胞凋亡的蛋白质组研究

目的　应用比较蛋白质组技术 ,寻找并鉴定与细胞凋亡相关的蛋白质 ,探讨三尖杉酯碱(HT)促进白血病细胞凋亡的分子机制。方法　应用AnnexinⅤ和PI双染法 ,通过流式细胞术区分HT诱导K5 6 2细胞凋亡早期和凋亡晚期阶段。并进一步运用比较蛋白质组的研究方法 ,对HT诱导K5 6 2细胞凋亡的相关蛋白进行“蛋白差异显示”、质谱鉴定和数据库查询。结果　 10 μg/mlHT作用K5 6 2细胞 5h和 2 4h ,凋亡细胞主群处于凋亡早期和凋亡晚期阶段 ;配比分析对照细胞和凋亡早期及晚期的蛋白图谱 ,统计学分析表明 ,在凋亡晚期组中 3个斑点消失 ,7个斑点表达量显著降低 ,10个斑点表达量显著升高 ;选择 10个表达量改变并且蛋白表达量较大的斑点进行肽指纹谱鉴定 ,其中 5个蛋白斑点鉴定结果比较肯定 ,分别为角蛋白 9、BTF3、色氨酰tRNA合成酶 (tryptophany1 tRNAsyn thetase,TrpRS)、RS和 prohibitin。 结论　在凋亡细胞中TrpRS、RS和 prohibitin表达上调以及BTF3表达下调 ,主要影响核酸转录和蛋白合成。角蛋白 9表达增加是一种凋亡抵抗反应。     

纤维连接蛋白黏附共培养对伊马替尼诱导K562细胞凋亡影响的研究

多药耐药仍是目前治疗白血病的巨大障碍和亟待解决的难题.传统的多药耐药研究多采用单细胞培养模型,不能很好地模拟肿瘤的生长状态及肿瘤微环境.因此,有必要从微环境介导耐药的角度进一步深入研究白血病细胞多药耐药的生物学背景.     

高三尖杉酯碱诱导K562细胞凋亡的时间节律性及其机制研究

本研究旨在观察高三尖杉酯碱（HHT）作用于K562细胞后不同时间点凋亡率的变化及其机制。HHT10ng／ml作用K562细胞后,用MTT法检测不同时间点的细胞增殖活力,Westernblot法检测caspase-3凋亡蛋白表达;流式细胞术检测BCL-2蛋白表达;应用透射电子显微镜观测细胞自噬。结果表明,HHT10ng／ml处理后的前5d,K562细胞增殖活性逐渐下降,但在第6天以后增殖活性又逐渐上升;同时激活型caspase-3蛋白从第1天至第7天逐渐增高,而在第8天明显降低（P〈0．05）;BCL-2蛋白表达水平则呈现先降低后升高（P〈0．05）的特点。细胞自噬体在HHT作用第8天明显增多。结论：HHT作用后,K562细胞凋亡水平变化呈现先升高后下降的特点,其机制与HHT作用后期K562细胞自噬水平升高有关。     

细胞自噬对高三尖杉酯碱作用K562细胞的影响

目的:探讨高三尖杉酯碱(HHT)单用或与自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)联用对K562细胞凋亡及自噬的影响。方法:K562细胞在HHT(10 ng/ml)作用下1-8 d,采用流式细胞术检测细胞凋亡;采用RT-PCR法、Western blot法和透射电子显微镜检测细胞自噬。结果:在HHT作用前期K562细胞凋亡率逐渐升高,而在后期则下降。HHT作用后,K562细胞的Beclin1表达及LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白比值先下降后升高。HHT单用时,激活型caspase-3蛋白表达前期逐渐上升,而在后期下降。与自噬抑制剂3-MA联用组的K562细胞的Beclin1表达和LC3Ⅱ/Ⅰ的比值持续下降,而激活型caspase-3蛋白表达则逐渐升高。结论:HHT可诱导K562细胞凋亡,但HHT持续作用可诱导K562细胞发生自噬,与3-MA联用则增强HHT的细胞毒作用。     

高三尖杉酯碱通过抑制P210^bcr／abl诱导K562细胞凋亡

为探讨高三尖杉酯碱（ｈｏｍｏｈａｒｒｉｎｇｔｏｎｉｎｅ,ＨＨＴ）抗慢性髓细胞白血病（ＣＭＬ）的机制,以ＣＭＬ细胞系Ｋ５６２细胞为对象,应用ＡｎｎｅｘｉｎＶ－ＰＩ双标志和Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹杂交技术,观察ＨＨＴ对细胞凋亡和Ｐ２１０＾ｂｃｒ／ａｂｌ癌蛋白的影响。结果表明,５－２０ｎｇ／ｍｌ浓度的ＨＨＴ可诱导Ｋ５６２细胞凋亡,但随着药物浓度的增加细胞出现坏死性死亡,ＨＨＴ可使细胞内融合蛋白Ｐ２１０＾ｂｃｒ／ａｂｌ的含量约减少７０％,而对正常存在于细胞内的Ｐ１４５＾ｃ－ａｂｌ无影响,上述结果证实,ＨＨＴ通过对Ｐ２１０＾ｂｃｒ／ａｂｌ的定向抑制作用促进ＣＭＬ细胞凋亡,这可能是其抗ＣＭＬ的分子机制。本研究为ＨＨＴ在临床上的进一步应用提供了实验基础。     

高三尖杉酯碱通过mTOR通路诱导慢性髓系白血病K562细胞凋亡

目的:观察高三尖杉酯碱(Homoharringtonine,HHT)对人CML细胞株K562的增殖及凋亡的影响,并从mTOR通路探索HHT抗CM L效应的作用机制。方法:采用不同浓度HHT或联合mTOR抑制剂雷帕霉素(RAPA)处理K562细胞,用CCK-8法检测细胞增殖抑制活力,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot检测BCL-6、Caspase-3及mTOR通路相关蛋白的表达水平,RT-PCR法检测BCL-6 mRNA表达水平。结果:HHT可抑制K562细胞的增殖并促进其凋亡,且呈浓度依赖性(r=0.970)。随着HHT作用浓度的增加,mTOR通路相关蛋白表达水平升高(r=0.908),而BCL-6 mRNA及蛋白的表达水平下降(r_(mRNA)=-0.961,r_(protein)=-0.981)。与HHT单用组相比,联用RAPA可显著下调mTOR及Caspase-3的表达,并上调BCL-6表达。结论:HHT可通过激活mTOR通路抑制抗凋亡BCL-6蛋白的表达,进而诱导CML细胞凋亡。     

伊马替尼联合槲皮素对K562细胞增殖、凋亡的影响及其机制研究

目的:探讨酪氨酸激酶抑制剂伊马替尼联合槲皮素诱导K562细胞凋亡的机制。方法:将250 nmol/L的伊马替尼、25μmol/L的槲皮素单药及联合作用于K562细胞,通过细胞计数检测细胞增殖,流式细胞仪分析细胞凋亡,蛋白印迹法检测相关蛋白的表达。结果:250 nmol/L伊马替尼联合25μmol/L槲皮素对K562细胞有明显的协同诱导凋亡作用,两药联合较单药处理能明显协同下调p-BCR/ABL、p-Crkl蛋白的表达。结论:伊马替尼和槲皮素协同诱导K562细胞凋亡,其机制可能是主要通过协同抑制BCR/ABL蛋白磷酸化水平,从而抑制下游信号通路的激活,导致细胞凋亡。     

高三尖杉酯碱对慢性粒细胞白血病细胞及K562细胞端粒酶活性的影响

我们观察了高三尖杉酯碱(HHT)对慢性粒细胞白血病(CML)患白血病细胞及K562细胞端粒酶活性的影响，对HHT治疗CML的作用机制进行初步探讨。     

小剂量高三尖杉酯碱对K562细胞端粒酶活性及其分化的影响

以往的研究认为高三尖杉酯碱(HHT)主要通过抑制蛋白质合成或诱导白血病细胞凋亡发挥抗肿瘤作用.我们以K562细胞为对象,研究小剂量HHT对白血病细胞端粒酶活性的影响及作用机制.     

过表达SHP-1增强K562细胞对伊马替尼的敏感性

目的:探讨SHP-1对K562细胞(人慢性髓系白血病急变细胞系)对伊马替尼(IM)敏感性的影响及其相关机制。方法:将携带SHP-1基因和绿色荧光蛋白(EGFP)空载体的慢病毒表达载体感染K562细胞系。0.2μmol/L IM处理K562细胞72 h后,Western blot检测SHP-1表达的变化。0.08μmol/L的IM处理转染后的K562~(EGFP)和K562~(SHP-1)细胞72 h后,应用CCK-8法检测细胞增殖抑制情况;经不同浓度IM作用72 h后,采用CCK-8法测定细胞增殖活性,计算半数抑制浓度(IC_(50))。流式细胞术检测pCrkL水平;Western blot检测各转染组SHP-1、磷酸化MAPK、AKT、STAT5、JAK2及MAPK、AKT、JAK2水平。结果:0.2μmol/L的IM作用于K562细胞72 h,不影响SHP-1的表达。0.08μmol/L的IM处理K562~(EGFP)和K562~(SHP-1)细胞72 h,K562~(SHP-1)细胞的增殖抑制率明显高于K562~(EGFP)细胞(P0.05),提示过表达SHP-1可明显增强IM对K562细胞的增殖抑制作用。不同浓度IM作用于K562~(EGFP)和K562~(SHP-1)细胞,K562~(SHP-1)组的IC_(50)值较K562~(EEF)组明显降低(P0.05)在0.02-0.16μmol/L的IM浓度范围内,SHP-1和IM的协同作用最强。SHP-1与IM均可抑制BCR-ABL1及MAPK、AKT、STAT5、JAK2信号通路分子活性,并具有协同作用。结论:SHP-1抑制K562细胞中BCR-ABL1及MAPK、AKT、STAT5和JAK2信号通路,过表达SHP-1能增强K562细胞对IM的敏感性。     

硼替佐米与高三尖杉酯碱在K562细胞中的联合作用及机制研究

目的:探讨硼替佐米(bortezomib,BTZ)与高三尖杉酯碱(homoharringonine,HHT)两药联合对K562细胞增殖和凋亡的影响及其联合作用机制与BCL-2、BAX、MCL-1蛋白的关系。方法:通过将K562细胞株按不同处理分为对照、BTZ 20 nmol/L、HHT 40 ng/ml、BTZ 20 nmol/L+HHT 40 ng/ml共4组。采用MTT方法检测各处理组细胞增殖抑制率。采用Annexin V-FITC/PI双染色法流式细胞术检测各处理组细胞早期凋亡率,采用Western blot法测定各处理组中BCL-2、BAX、MCL-1蛋白相对表达量。结果:BTZ+HHT联合组作用于K562细胞24、48和72h后的增殖抑制率(%)高于BTZ及HHT单药组(P0.01)。联合组K562细胞的早期凋亡率(%)高于BTZ及HHT 2个单药组(P0.05)。联合组K562细胞的BCL-2蛋白相对表达量明显低于BTZ及HHT单药组(P0.05)。联合组BAX蛋白相对表达量明显高于BTZ及HHT单药组(P0.05)。M CL-1蛋白相对表达量高低:BTZ组对照组BTZ+HHT联合组HHT组(组间比较P0.05)。结论:BTZ与HHT联合可起协同抑制细胞增殖、诱导凋亡效应,其机制与明显下调BCL-2蛋白、上调BAX蛋白有关。此外,HHT可通过下调MCL-1蛋白表达增加K562细胞对BTZ作用的敏感性。     

高三尖杉酯碱与伊马替尼联合及单用治疗慢性期慢性粒细胞白血病的疗效

目的：以小剂量高三尖杉酯碱（HHT）与伊马替尼联合及单用治疗慢性期慢性粒细胞白血病（CML-CP）．观察血液学缓解率及慢性期变化。为不能全量接受伊马替尼治疗的CML—CP患者探索新的治疗途径。方法：联合治疗组服用伊马替尼100mg／d，HHT2mg／d，连续用药3～4周，间歇4～5周重复。单药组服用HHT2 mg／d，4～8周为1个疗程。结果：2002年2月至2007年2月间可供评估病例45例，超过5年无疾病进展率联合治疗组为94％．单药组为93％。仍保持完全血液学缓解者联合治疗组76％，单药组57％。结论：改变HHT用量及用法，与伊马替尼联合或单用．均能明显提高CML—CP患者的完全血液学缓解率。联合用药疗效优于单药治疗。[著者文摘]     

高三尖杉酯碱对K562细胞NF-κB和BCL-2蛋白表达的影响

本研究旨在探讨高三尖杉酯碱（HHT）对K562细胞增殖、凋亡及BCL-2和NF-κB蛋白表达的影响。不同浓度HHT作用K562细胞后用MTT法、流式细胞仪、Western blot等方法分别检测细胞增殖、凋亡、BCL-2及NF-κB蛋白表达水平。结果表明,HHT作用48h,浓度依赖性抑制K562细胞增殖,Ic50为43．89rig／ml。HHT10ng／ml作用48h,K562细胞凋亡率明显增高;细胞周期阻滞于G0／G1期;BCL-2和NF-κB蛋白表达水平明显低于对照组（P〈0．05）。结论：HHT对K562细胞有显著的增殖抑制、细胞周期阻滞和凋亡诱导作用,抑制NF-κB和BCL-2表达可能是其抗CML的机制之一。     

伊马替尼、高三尖杉酯碱联合治疗慢性粒细胞白血病24例疗效分析

目的探讨慢性粒细胞白血病(CML)应用伊马替尼、高三尖杉酯碱联合治疗的疗效与安全性。方法随机将我院2010年3月—2011年3月收治的初次诊断为慢性粒细胞白血病病例50例分为联合治疗组24例、对照组26例,两组均应用伊马替尼治疗,联合治疗组在该基础上加用高三尖杉酯碱。结果用药3个月后两组血液学缓解率比较无显著差异(P>0.05);用药1年后两组遗传学缓解率有显著差异(P<0.05);两组不良反应比较无明显差异(P>0.05)。结论伊马替尼、高三尖杉酯碱联合治疗CML疗效显著,安全可靠。     

汉防己甲素联合伊马替尼对K562／G01细胞诱导凋亡作用及其相关机制

本研究探讨伊马替尼（imatinib,IM）和汉防己甲素（tetrandrine,Tet）单用和联合应用对K562／G01细胞的凋亡诱导作用及其可能机制。应用M1fr法检测IM和Tet单用及联合用药对细胞增殖抑制的作用,用流式细胞术（FCM）检测细胞周期和凋亡率,用实时荧光定量PCR检测caspase-3、BCL-2mRNA的表达,应用Westernblot分析caspase-3、BCL-2蛋白的表达情况。结果表明,1．0μmol／LIM和／或1．5μmol／L Tet单用及联合作用于K562／G01细胞48h后,对细胞增殖的抑制率分别是（22．74±0．05）％、（20．34±0．57）％、（44．28±0．60）％,两药联合应用较单药抑制作用明显。流式细胞术检测显示,Tet作用后细胞向G,／s期转化;Tet1．5μmol／L、3μmol／L与1．0μmol／LIM联合应用48h的早期凋亡率分别为（7．81±0．16）％、（14．10±0．28）％,诱导凋亡作用比单药组明显增加。FQ—PCR和Westernblot检测均显示单独应用Tet和IM后caspase-3表达上调,BCL-2表达下调,联合用药组作用更显著。结论：单独应用Tet对K562／G01细胞有诱导凋亡的作用,两药联合应用具有明显的协同效应,且具有时间和剂量依赖性,其机制可能与上调caspase-3mRNA及其蛋白表达和下调BCL-2mRNA及其蛋白的表达有关。     

高三尖杉酯碱对伊马替尼耐药的慢性髓系白血病疗效的研究进展

高三尖杉酯碱(HHT)是一种具有抗肿瘤活性的生物碱,对慢性髓系白血病(CML)有较好的疗效,而且其不良反应较其他抗恶性肿瘤药物低。然而,伊马替尼(IM)治疗CML的显著疗效让HHT逐渐被遗忘。如今,学者们发现,HHT对于伊马替尼耐药的CML患者有临床疗效,从而使HHT再次受到了重视。本文对HHT治疗IM耐药的CML患者的临床疗效及其作用机制作一综述。     

抑制NAMPT表达增强K562细胞对伊马替尼的敏感性及相关机制研究

本研究探讨烟酰胺磷酸核糖转移酶(NAMPT)对K562细胞(人慢性髓系白血病细胞株)对伊马替尼敏感性的影响及其相关机制。在体外合成针对NAMPT基因的小干扰RNA(siRNA),转染K562细胞株。将转染后的K562细胞经1μmol/L伊马替尼作用48 h后,采用PI/Calcein染色方法测定细胞存活率;经不同浓度伊马替尼作用48 h后,采用MTS法测定细胞增殖活性,计算半数抑制浓度(IC50)。未经转染的K562细胞经1μmol/L伊马替尼作用3-48 h后,采用Western blot方法检测NAMPT表达的变化。通过对NCBI GEO中基因表达数据的挖掘分析及Western blot方法检测,探讨NAMPT-siRNA和伊马替尼对凋亡相关基因表达的影响。采用荧光素酶报告基因技术,研究NAMPT-siRNA、伊马替尼对NF-κB转录活性的影响。结果表明,1μmol/L伊马替尼作用于K562细胞48 h对NAMPT表达无明显影响。NAMPT-siRNA能够明显抑制K562细胞NAMPT的表达,再经1μmol/L伊马替尼作用后,NAMPT-siRNA干扰组细胞存活率明显降低(P<0.05),提示抑制NAMPT表达能增强K562细胞对伊马替尼的敏感性。不同浓度伊马替尼作用后,干扰组IC50值明显降低(P<0.05);拟合增殖曲线在0.01-0.1μmol/L伊马替尼浓度范围内斜率增大,提示在此范围内NAMPT-siRNA与伊马替尼的协同作用最强。基因表达谱分析及Western blot验证结果都显示,NAMPT-siRNA和伊马替尼处理均可下调NF-κB下游因子抗凋亡基因Bcl-2表达水平,两者同时作用时效果更明显。NAMPT-siRNA及伊马替尼均能降低NF-κB转录活性,两者同时作用效果更显著。结论:伊马替尼可能并非通过调节NAMPT表达影响细胞存活;抑制NAMPT表达能增强K562细胞对伊马替尼的敏感性,可能与抑制NF-κB及其下游因子Bcl-2有关。