RASSF2A基因甲基化在喉癌组织中的表达及意义

目的 探讨抑癌基因RASSF2A表达水平及其基因异常甲基化与喉癌的关系及意义。 方法 采用RT-PCR及甲基化特异性PCR(MSP)检测50例喉癌组织(实验组)和10例癌旁正常黏膜组织(对照组)中RASSF2A基因mRNA的表达水平及其启动子甲基化状态。 结果 喉癌组织中有54%(27/50)存在RASSF2A基因启动子,而对照组正常黏膜组织中未发现RASSF2A基因甲基化现象,差异有统计学意义(χ2=9.818, P=0.002)。RASSF2A甲基化水平程度与喉癌患者临床病理特征无明显相关性。喉癌组织中RASSF2A基因mRNA的表达水平明显低于正常黏膜组织(χ2=9.818, P=0.002)。RASSF2A基因甲基化的喉癌组织中其mRNA的表达减少,反之亦然。 结论 喉癌组织中RASSF2A基因CpG岛甲基化与其基因表达缺失有关,可能参与了喉癌的发生发展过程。     

喉癌组织中IGFBP-rP1基因的甲基化及表达

目的：探讨喉癌中胰岛素样生长因子结合蛋白一相关蛋白1（IGFBP—rP1）基因启动子区甲基化与蛋白表达之间的关系。方法：采用甲基化特异性PCR方法和免疫组织化学的方法分别检测45例喉癌组织及18例癌旁组织中IGFBP-rP1基因的甲基化状态和蛋白表达情况。结果：喉癌组织IGFBP—rP1启动子区甲基化率为33．3％（15／45）,相应癌旁组织甲基化率为5．6％（1／18）,喉癌组织中IGFBP—rP1基因甲基化率明显高于癌旁组织（P〈0．05）。喉癌组织中IGFBP—rP1蛋白表达显著低于癌旁正常组织（P％0．05）,且与其启动子区甲基化状态呈负相关。结论：IGFBP—rP1基因启动子区甲基化导致基因沉默可能是喉癌发生的机制之一。     

声门上型喉癌组织中的BRMS1蛋白表达及甲基化的研究

目的:探讨声门上型喉鳞状细胞癌组织中乳腺癌转移抑制基因(BRMS1)的蛋白表达以及BRMS1基因启动子区域甲基化情况及其临床意义。方法:采用Western blotting法检测70例声门上型喉癌组织原发灶、60例癌旁正常喉黏膜组织和44例颈部淋巴结转移灶中BRMS1蛋白的表达情况;甲基化特异聚合酶链反应(MSP)法检测上述组织中的BRMS1基因启动子区域甲基化情况,探讨BRMS1基因启动子甲基化与其基因表达的相关性;分析BRMS1蛋白表达及BRMS1基因启动子甲基化情况与患者的临床分期、病理分级、颈部淋巴结转移等方面的相关分析。结果:Western blotting检测发现声门上型喉癌原发灶、癌旁正常喉黏膜组织和颈部淋巴结转移灶均有BRMS1蛋白表达,在癌组织及转移淋巴结中BRMS1蛋白表达下调(P<0.05)。MSP法检测发现BRMS1基因启动子区甲基化,在BRMS1蛋白低表达患者的原发灶中检测到34例BRMS1基因启动子区甲基化,44例BRMS1蛋白低表达的颈部淋巴结转移灶中检测到32例BRMS1基因启动子区甲基化,60例癌旁正常喉黏膜组织中均未检测到BRMS1基因启动子区甲基化,统计学分析结果表明在声门上型喉癌中BRMS1基因启动子甲基化与其基因表达下调密切相关(rs=0.66,P<0.05)。结论:声门上型喉癌组织中BRMS1蛋白表达下调。BRMS1蛋白表达下调与声门上型喉癌的P-TNM分期、病理分化程度和颈部淋巴结转移密切相关。BRMS1基因启动子甲基化与声门上型喉癌组织中BRMS1基因表达下调相关,也可能是声门上型喉癌组织中BRMS1基因表达下调的原因之一。     

喉癌组织RKIP基因甲基化表达调控研究

摘要：目的检测喉癌组织中Raf 1激酶抑制蛋白（ Raf 1 kinase inhibitor protein, RKIP ）基因启动子区域的甲基化状态及其蛋白表达情况,并探讨其临床意义。方法采用甲基化特异性PCR（methylation specific PCR,MSP ）技术及免疫组化方法检测53例喉癌组织及34例癌旁组织中RKIP基因启动子区域的甲基化状态及蛋白表达情况。结果喉癌及癌旁组织中RKIP基因启动子甲基化发生率分别为17%、3%,两者比较差异具有统计学意义（P=0.045）。结论RKIP基因启动子区高甲基化状态可能是造成喉癌组织中RKIP表达缺失的分子机制之一,RKIP蛋白表达缺失与喉癌的发生发展及转移有关。     

喉癌组织中微小RNA-129-2基因甲基化程度的研究

目的研究喉癌肿瘤组织中微小RNA-129-2基因(MiR-129-2)的甲基化程度及其与患者临床分级和癌组织病理分化程度的关系。方法应用Methyl-ProfilerTM DNA甲基化PCR系统对12例喉癌肿瘤组织和6例癌旁组织进行甲基化分析。结果喉癌组织中MiR-129-2高甲基化率为66.7%(8/12),癌旁组织中MiR-129-2高甲基化率为0(0/6),两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。喉癌患者临床分级与MiR-129-2高甲基化率差异无统计学意义(P>0.0 5)。病理分化程度与MiR-1 2 9-2高甲基化率差异无统计学意义(P>0.0 5)。结论 MiR-1 2 9-2基因在喉癌组织中甲基化水平升高,MiR-1 2 9-2高甲基化水平可能与喉癌发生的病理机制有关。     

抑癌基因Runx3启动子甲基化与喉癌发生和转移的关系

目的:探讨 Runx3基因启动子甲基化与喉癌发生发展过程的关系.方法:采用RT-PCR检测40例喉癌组织及肿瘤周围黏膜组织中Runx3 mRNA 的表达,同时采用甲基化特异性PCR(MSP)方法检测Runx3基因启动子甲基化情况.结果:40例喉癌组织标本中Runx3基因的表达(1.62±1.01)较肿瘤周围组织中表达(5.66±2.07)明显下调, 差异有统计学意义(P<0.01).正常黏膜组织中未发现有Runx3基因启动子的甲基化,40例喉癌组织中有38例检测到Runx3基因启动子的甲基化,喉癌组织Runx3基因启动子甲基化率显著增高(P<0.01).喉癌标本中Runx3 mRNA 的表达与其病理临床特征密切相关,在低分化和有淋巴结转移喉癌组织标本中Runx3 mRNA 的表达显著下调(P<0.01).结论:Runx3 基因启动子甲基化是导致Runx3基因失活的主要原因之一并且与喉癌的发生、发展密切相关.     

Ras 相关区域家族1A 基因在喉癌及喉角化症组织中的表达及临床意义

目的：探讨Ras相关区域家族1A基因（Ras association domain family 1A,RASSF1A）的表达与喉癌发生发展的关系。方法收集喉角化症组织43例、喉鳞癌组织31例作为实验组,取冷冻新鲜尸头正常声带黏膜8例作为正常对照组,用免疫组织化学方法检测各组组织的 RASSF1A 蛋白表达情况并进行分析比较。结果正常喉黏膜、喉角化症及喉鳞状细胞癌组织中 RASSF1A 阳性细胞表达率分别为58．25％±8．8％、47．22％±2．25％和21．36％±10．98％,喉鳞状细胞癌组织中 RASSF1A 的表达强度低于喉角化症及正常喉粘膜组织,差异均有统计学意义（P＜0．05）,喉角化症与正常喉黏膜组织中的 RASSF1A 阳性表达率差异无统计学意义（P＞0．05）。在 I～IV期喉癌组织中 RASSF1A 的表达强度逐渐降低,差异有统计学意义（P＜0．05）,而高分化、中分化及低分化癌组织中 RASSF1A 阳性细胞表达率比较,差异无统计学意义（P＞0．05）。结论RASSFlA 表达降低可能与喉鳞状细胞癌的发生发展有关,对鉴别癌前病变与喉癌具有一定意义。     

喉癌组织中CHFR基因mRNA表达水平及启动子区甲基化的研究

目的:探讨CHFR基因表达水平及启动子区CpG岛过甲基化与喉癌发生发展的关系.方法:采用荧光定量PCR技术和甲基化特异性PCR技术检测50例喉癌组织(喉癌组)和15例正常喉组织(对照组)CHFR基因mRNA表达情况及启动子区CpG岛过甲基化情况.结果:①CHFR基因在对照组mRNA全部表达,在喉癌组mRNA有2例(4%)表达缺失,48例表达量明显下调(相对表达量为0.50±0.12),其中Ⅰ和Ⅱ期相对表达量(0.30±0.04),Ⅲ期和Ⅳ期相对表达量(0.70±0.21),与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.01).②在对照组中未发现CHFR基因启动子区甲基化,在喉癌组中CHFR基因启动子区甲基化率为22%(11/50),其中Ⅰ期和Ⅱ期患者共10例,Ⅲ期1例,Ⅳ期未发现甲基化,与对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.01).③甲基化的喉癌标本mRNA相对表达量为0.11±0.05,2例mRNA表达缺失.未甲基化的喉癌标本mRNA相对表达量为0.75±0.13.甲基化和mRNA表达相关,γ=0.387(P<0.05).结论:喉癌组织中CHFR基因mRNA表达缺失或下调,CHFR基因启动子区CpG岛过甲基化在喉癌组织中是频发事件,二者密切相关,可能与喉癌的发生发展有关,有望能成为喉癌的早期诊断及治疗靶点基因之一.     

喉癌细胞系中RASSF1A基因启动子去甲基化与基因表达的研究

目的:探讨甲基化转移酶抑制剂[5-氮杂-2′-脱氧胞苷(5-Aza-dC)]及组蛋白去乙酰化转移酶抑制剂[曲古抑菌素A (TSA)]对喉癌细胞系中抑癌基因RASSF1A甲基化水平及基因表达的影响.方法:5-Aza-dC及TSA处理体外培养的Hep-2细胞,应用Realtime PCR方法及甲基化特异性PCR(MSP)方法分别检测药物干预前后细胞中抑癌基因RASSF1A表达及甲基化情况.结果:①在Hep-2细胞中未经药物干预前抑癌基因RASSF1A表现为甲基化,抑癌基因RASSF1A弱表达.②在5-Aza-dC及TSA的作用下,Hep-2细胞系中RASSF1A基因的甲基化状态得到了逆转.其中5-Aza-dC及TSA联合应用效果与单独应用5-Aza-dC效果相似,单独应用TSA无明显效果.③在5-Aza-dC及TSA的作用下,Hep-2细胞系中RASSF1A基因表达上调,其中5-Aza-dC作用较TSA作用强,2种药物联合应用起协同增效作用.结论:喉癌细胞系中抑癌基因RASSF1A启动子甲基化可能是导致其基因失活的主要原因但并不是惟一原因.应用5-Aza-dC及TSA能够通过逆转抑癌基因RASSF1A的DNA甲基化水平和组蛋白去乙酰化水平从而使其表达得到了增强.     

EMS1蛋白在喉癌组织中的表达及临床意义

目的：探讨EMS1在喉癌组织中的表达及与各临床病理因素的关系。方法：采用流式细胞术检测40例喉癌组织和40例相应癌旁组织中EMS1的表达,并以20例非喉癌患者喉部正常黏膜组织作对照。结果：喉癌组织中EMS1蛋白的表达量及阳性表达率均明显高于癌旁组织及正常喉黏膜组织（P〈0．05）,癌旁组织及正常喉黏膜组织间的EMS1表达差异无统计学意义（P〉0．05）。EMS1蛋白的表达与喉癌组织中的淋巴结转移、临床分期、分化程度差异有统计学意义（P〈0．05）;与临床分型、肿瘤大小、吸烟量、年龄和性别差异无统计学意义（P〉0．05）。结论：EMS1蛋白的高表达可促进喉癌的发生、发展,其蛋白检测可作为判断喉癌分化、浸润、转移、分期的重要指标。     

喉癌及癌前病变中细胞周期调控基因甲基化的研究

目的探讨细胞周期调控基因P14,P15及P16在喉癌发生发展中的作用。方法选取20例喉癌癌前病变（包括喉角化8例、白斑4例和成人复发性喉乳头状瘤8例）、30例喉鳞状细胞癌（声门型）及10例癌旁组织。采用甲基特异性聚合酶链反应（methylationspecific PCR,MSP）检测P14,P15及P16基因启动子区过甲基化。结果P14,P15及P16基因启动子过甲基化发生率在癌前病变中分别为10％（2／20）、15％（3／20）、20％（4／20）;在喉癌中分别为30．0％（9／30）、40．0％（12／30）、36．7％（11／30）;在癌旁组织中未检测到过甲基化事件。结论细胞周期调控基因p14,p15及p16启动子区过甲基化发生于喉癌早期病变中,可作为喉癌前病变及早期喉癌筛查的指标之一。     

S0X2蛋白在喉癌组织中的表达及临床意义

目的:探讨SOX2在喉癌组织中的表达及与各临床病理因素的关系。方法:采用流式细胞术检测45例喉癌组织和45例相应癌旁组织中SOX2的表达,并以20例非喉癌患者喉部正常黏膜组织作为对照。结果:喉癌组织中SOX2蛋白的表达量及阳性表达率均明显高于癌旁组织及正常喉黏膜组织(P<0.05),癌旁组织与正常喉黏膜组织间的SOX2表达差异无统计学意义(P>0.05)。SOX2蛋白在喉癌组织中的表达与淋巴结转移、临床分期和分化程度差异有统计学意义(P<0.05);与临床分型、肿瘤大小、年龄和性别差异无统计学意义(P>0.05)。结论:SOX2蛋白的高表达可促进喉癌的发生和发展,其蛋白检测亦可作为判断喉癌浸润、转移以及预后的重要指标。     

斯钙素2在喉鳞状细胞癌中的表达及预后的相关性研究

目的:本研究通过检测喉癌和癌旁正常组织中斯钙素2(STC2)的表达水平,探讨其与喉癌临床病理相关因素及预后之间的关系。方法:回顾性分析2005-01-2009-03期间收治的81例喉癌病例,癌旁正常标本30例作为对照组。采用免疫组织化学的方法检测喉癌组织和癌旁正常组织中STC2的表达。结果:1STC2在喉癌组中的表达显著高于对照组,2组差异有统计学意义(P<0.05);2喉癌中STC2的表达与肿瘤淋巴结转移、临床分期、T分期、病理分级、肿瘤的部位相关,组间差异有统计学意义P<0.05),而与性别、年龄无明显相关,差异无统计学意义(P>0.05);3在肿瘤表达STC2分组生存分析中,STC2表达阳性的喉癌患者比表达阴性的患者预后差(P<0.05);4喉癌的临床分期作为喉癌预后的预测因子之一(P<0.05),而STC2表达水平不能作为喉癌预后的独立预测因子(P>0.05)。结论:STC2表达水平与喉癌患者累积生存时间呈负相关。     

表皮生长因子受体在喉癌组织不同部位中的表达及与分化的关系

目的:通过检测表皮生长因子受体(EGFR)在喉癌组织标本不同部分的表达,定量分析EGFR表达与喉癌组织分化之间的关系。方法:收集36例喉癌组织标本,根据病理分级分为高、中、低分化3个组。运用Western Blot方法检测EGFR在癌组织、癌旁组织及正常组织中的表达,结合图像分析技术定量分析EGFR表达与喉癌组织分化之间的关系。结果:不同分化的喉鳞状细胞癌组织、癌旁组织中EGFR相对表达量差异均有统计学意义(均P<0.05)。正常组织在不同分化病例中EGFR相对表达量差异无统计学意义(P>0.05),同一分化鳞状细胞癌组织、癌旁组织及正常组织间EGFR相对表达量差异有统计学意义(P<0.05)。结论:EGFR在喉癌组织中有高表达,与癌组织的分化有相关性,对研究喉癌的发生发展有一定的临床意义。     

IDO和BIN1在喉鳞状细胞癌组织中的表达及其临床意义

摘要：目的通过检测喉鳞状细胞癌(laryngeal squamous cell carcinoma)患者肿瘤组织中吲哚胺2,3 双加氧酶(indoleamine 2,3 dioxygenase,IDO)和桥接整合因子1(bridging integrator 1,BIN1)的表达,探讨其在喉癌发生发展中的作用。方法应用免疫组织化学染色法检测50例喉鳞状细胞癌肿瘤组织和23例正常喉黏膜组织中IDO和BIN1的表达,并分析两者表达的相关性及其与患者临床特征的关系。结果IDO在50例喉癌中阳性表达率为60%,而在癌旁正常喉黏膜组织中IDO表达为17.39%,与癌旁正常喉黏膜组织比较,喉癌IDO阳性表达率明显增高,差异具有统计学意义(P<0.01);BIN1在50例喉癌中阳性表达率为50%,而在癌旁正常喉黏膜组织中BIN1蛋白阳性表达率为95.65%,与癌旁正常喉黏膜组织比较,BIN1阳性表达率明显降低,差异具有统计学意义(P<0.01);而且IDO在原发灶和转移灶中的表达显著增高,BIN1在原发灶和转移灶中的表达降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。在喉癌肿瘤组织中,IDO表达与有无淋巴结转移、临床分期相关;BIN1表达与肿瘤分化程度、有无淋巴结转移、临床分期相关。结论喉癌患者肿瘤组织和颈部转移淋巴结中IDO表达水平明显提高,而BIN1表达水平显著降低,并且与患者临床特征紧密相关,这两者可能是影响喉癌发生发展的重要因素。     

喉癌组织中PD-L1的表达及意义

目的:探讨程序性死亡配体-1(PD-L1)在喉癌及癌旁组织中的表达及临床意义。方法:采用免疫组织化学和Western-blotting技术分别检测31例喉癌组织和24例癌旁组织中PD-L1的蛋白表达水平及差异。结果:PD-L1在喉低、低中分化鳞状细胞癌中的表达明显高于高分化癌组织,前者PD-L1主要表达于血管,瘤细胞少见,后者血管常呈弱表达而局部瘤细胞呈阳性表达;PD-L1的表达与淋巴转移相关。癌旁组织中PD-L1表达明显低于癌组织,然其表达水平与其对应癌组织呈正相关。结论:PD-L1可能在喉癌特别是低及低中分化喉癌的发生、发展和(或)转移中起到一定作用,有望成为喉癌尤其是低、低中分化喉癌治疗的一个新靶点。     

骨桥蛋白与尿激酶型纤溶酶原激活物在喉鳞状细胞癌中的表达及临床意义

目的探讨骨桥蛋白（OPN）和尿激酶型纤溶酶原激活物（uPA）在喉鳞状细胞癌组织中的表达及其与喉癌侵袭、转移的关系。方法应用免疫组织化学方法检测64例喉癌组织、18例癌旁正常黏膜中OPN和uPA的表达,从部位、分化程度、临床分期、淋巴结转移等不同方面分别进行对照分析,比较其有无差异。 结果64例喉癌组织中OPN与uPA蛋白的阳性表达率分别为62.5%(40/64)、65.6%(42/64)。OPN与uPA的表达与肿瘤组织临床病理分期和有无淋巴结转移有关(P＜0.05),与患者年龄、性别、肿瘤的部位及分化程度等无关(P＞0.05),且二者表达呈正相关（r=0.6625,P＜0.05)。 结论OPN和uPA基因蛋白在喉癌的侵袭转移过程中起着重要作用,有望成为反映喉癌生物学特性及评价预后的重要标记分子。