热休克蛋白90在多发性骨髓瘤中的研究进展

热休克蛋白(HSP) 90是一类ATP依赖性分子伴侣.HSP90可活化并稳定多种客户蛋白,其中许多客户蛋白都涉及重要的信号通路.HSP90影响许多生理过程,如信号转导、胞内运输和蛋白降解,其已成为肿瘤治疗的新靶点之一.HSP90在多发性骨髓瘤(MM)中过度表达,而抑制HSP90可诱导MM细胞凋亡,并抑制其重要的存活和增殖通路.HSP90在MM耐药机制中发挥着重要作用,这使得HSP90抑制剂成为新型的MM治疗药物.     

热休克蛋白90抑制剂治疗多发性骨髓瘤的研究进展

多发性骨髓瘤是一种浆细胞异常增生的恶性肿瘤,占血液系统恶性肿瘤的第二位.在过去的15年,多发性骨髓瘤的治疗有了明显的进展,以硼替佐米为代表的蛋白酶体抑制剂和以沙利度胺及其衍生物雷利度胺为代表的免疫调节药物等多种靶向药物的临床应用为多发性骨髓瘤患者的治疗提供了新的治疗方法.尽管如此,多发性骨髓瘤目前仍然不可治愈,因此需探索新的治疗方法以改善多发性骨髓瘤患者的生存和预后.研究表明·热休克蛋白90在骨髓瘤细胞中高表达,已成为多发性骨髓瘤治疗的一个新靶点,热休克蛋白90抑制剂可诱导骨髓瘤细胞凋亡,并能增加其他靶向治疗药物的敏感性.     

Toll样受体、热休克蛋白90与多发性骨髓瘤

Toll样受体（Toll like receptors,TLRs）是一类介导天然免疫的跨膜信号传递受体家族,在细胞活化信号的转导中起重要作用,是联系天然免疫与获得性免疫的桥梁。多发性骨髓瘤（multiplemyeloma,MM）是B细胞起源的恶性肿瘤,其病因至今不详。近年来的研究表明天然免疫在MM患者反复感染发生中起重要作用,国外有研究报道认为MM患者遭受频繁感染是因为病原体通过Toll样受体诱发B细胞多克隆活化所致。     

黄连素对多发性骨髓瘤细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨黄连素对多发性骨髓瘤细胞活性和凋亡的影响。方法:通过CCK-8试验检测不同浓度黄连素作用下多发性骨髓瘤U266细胞的增殖;ELISA试验检测不同浓度黄连素作用下U266分泌IL-6的情况;细胞凋亡试验检测不同浓度黄连素作用下U266骨髓瘤细胞凋亡行为变化;透射电子显微镜(transmission electron microscope,TEM)和扫描电子显微镜(scanning electron microscope,SEM)观察U266细胞的超微结构。结果:随着浓度(40~160μmol/L)的改变,黄连素以剂量和时间依赖的方式抑制U266细胞细胞增殖和IL-6分泌;黄连素以剂量依赖的方式诱导U266细胞G2/M期停滞和凋亡,80μmol/L黄连素处理后的U266细胞的超微结构发生凋亡的形态特征。结论:黄连素能抑制人多发性骨髓瘤细胞的活性,诱导骨髓瘤细胞G2/M期停滞并诱导细胞凋亡。     

热休克蛋白90在多发性骨髓瘤患者中的表达及临床意义

目的:检测多发性骨髓瘤(MM)患者骨髓标本中HSP90的表达情况,并探讨其临床意义.方法:利用免疫组化技术检测HSP90在76例MM患者及29例健康供者中的表达;收集临床资料,分析HSP90表达情况与临床指标的相关性.结果:MM患者骨髓标本中HSP90表达阳性患者数明显高于对照组;HSP90表达水平与患者的β2-微球蛋...     

热休克蛋白90和凋亡抑制蛋白Livin在病理性瘢痕中的表达

背景:近年来研究表明热休克蛋白90和凋亡抑制蛋白Livin在细胞的凋亡过程中扮演着非常重要的角色,而两者在病理性瘢痕形成过程中的作用研究至今鲜有报道。目的:从基因和蛋白水平分别检测热休克蛋白90和凋亡抑制蛋白Livin在病理性瘢痕中的表达情况及两者之间的关系。方法:分别采用RT-PCR方法和免疫组织化学方法检测热休克蛋白90和Livin在24例瘢痕疙瘩、26例增生性瘢痕、22例非病理性瘢痕和20例正常皮肤组织中的表达水平。结果与结论:瘢痕疙瘩,增生性瘢痕中热休克蛋白90和Livin的阳性表达水平高于非病理性瘢痕及正常皮肤组织(P<0.05)。病理性瘢痕中热休克蛋白90和Livin表达呈正相关(rs=0.436,P<0.05)。RT-PCR检测结果与免疫组织化学结果基本一致。结果提示热休克蛋白90和Livin在病理性瘢痕的形成过程中可能起着重要作用,且二者之间可能具有协同作用。     

靶向MTH1抑制多发性骨髓瘤细胞增殖和诱导凋亡的作用研究

目的:检测MTH1在多发性骨髓瘤(MM)患者CD138阴性细胞(CD138-)及CD138阳性细胞(CD138+)中的表达,探讨MTH1抑制剂对MM细胞株U266细胞的形态、增殖和凋亡等细胞生物学特性的影响。方法:分离MM患者CD138-及CD138+并提取RNA,应用Q-PCR分别检测NUDT家族的表达情况。利用MM细胞系U266观察白细胞介素-6(IL-6)对MTH1表达变化的影响。在荧光显微镜下观察TH588作用于U266细胞48 h后的形态变化,用DAPI染色法观察细胞核的变化。应用荧光素酶活性检测TH588对U266细胞增殖的影响,应用流式细胞术检测TH588对U266细胞凋亡的影响。结果:MM患者CD138+中MTH1、NUDT2、NUDT5及NUDT21表达较CD138-高(P 0.05)。荧光素酶报告显示TH588处理U266细胞后,与对照组相比,荧光强度值明显降低,且药物浓度越大,荧光强度值越低(r=-0.91);应用IL-6能使MTH1表达水平增高,荧光显微镜下观察,TH588处理U266细胞48 h后,细胞出现皱缩、变小以及形状不规则等表现,DAPI染色后,TH588处理过的细胞呈现细胞核缩小、染色不均、花瓣状和放射状等凋亡特征;流式细胞术分析结果显示,TH588处理U266细胞48 h后,存活细胞比例明显降低(P 0.05)。结论:MTH1在部分MM患者的CD138+中高表达,U266细胞在IL-6的作用下可见MTH1表达增高,MTH1抑制剂TH588对MM U266细胞株具有明显地抑制增殖和诱导细胞凋亡的作用。     

地西他滨联合安罗替尼对多发性骨髓瘤细胞增殖和凋亡的影响

目的：探讨地西他滨联合安罗替尼治疗多发性骨髓瘤（MM）的生物学效应及可能的机制。方法：分别应用不同浓度的地西他滨、安罗替尼以及地西他滨+安罗替尼处理MM细胞系和原代细胞,CCK-8法检测两药对细胞增殖的影响,并计算协同指数,流式细胞仪检测细胞凋亡率,Western blot检测药物对c-Myc蛋白的影响。结果：地西他滨和安罗替尼单药均能有效地抑制MM细胞系NCI-H929和RPMI-8226的增殖,并且诱导细胞凋亡;两药联合组抑制细胞增殖和诱导凋亡的效果明显强于单药组。两药联合在原代MM患者细胞中也显示出较强的细胞毒性。地西他滨和安罗替尼能够下调MM细胞中c-Myc蛋白的水平,并且联合用药组的c-Myc水平最低。结论：地西他滨联合安罗替尼能够有效地抑制MM细胞的增殖并且诱导其凋亡,这为地西他滨联合安罗替尼治疗MM提供了一定的实验基础。     

G蛋白偶联受体激酶6对多发性骨髓瘤细胞增殖和凋亡的影响及其机制研究

目的:研究G蛋白偶联受体激酶6(G protein-coupled receptor kinase 6,GRK6)对多发性骨髓瘤细胞增殖和凋亡的影响及其作用的机制。方法:收集多发性骨髓瘤患者标本及健康对照组标本作为体内试验研究对象。分离获得的原代多发性骨髓瘤浆细胞和骨髓瘤细胞系U266、NCI H929为体外试验细胞组。分别用Western blot和quantitative real-time PCR检测GRK6的蛋白表达和mRNA表达。用Brd U试剂盒测定骨髓瘤细胞在GRK6抑制剂CX-4945的处理条件下的增殖变化,应用Annexin V-FITC/PI试剂盒检测其凋亡水平。结果:多发性骨髓瘤组中GRK6的表达明显高于对照组(P0.05),在Ⅰ期的表达高于对照组,Ⅱ期高于Ⅰ期,Ⅲ期高于Ⅱ期(P0.05)。GRK6在多发性骨髓瘤患者标本中蛋白和mRNA的表达均显著高于健康对照组。U266和MM细胞对抑制剂CX-4945呈现高敏性,而NCI H929对其敏感性低。GRK6 siRNA处理细胞后,GRK6在3组骨髓瘤细胞中的表达均显著下调。在细胞增殖检测实验中,CX-4945处理组U266、NCI H929和MM细胞增殖率分别为(58.25±18.24)%、(64.32±20.03)%和(45.42±25.01)%;凋亡检测中,U266、NCI H929和MM细胞凋亡率为(62.82±53.21)%、(43.25±47.05)%和(85.67±40.32)%。结论:多发性骨髓瘤GRK6的表达增强。GRK6抑制剂CX-4945能调节Rac1分子并抑制骨髓瘤细胞的增殖,促进其凋亡。GRK6参与骨髓瘤细胞的增殖和凋亡通路。     

热休克蛋白与肿瘤细胞凋亡

热休克蛋白是受各种应激原刺激后诱导产生的一组应激蛋白，具有维持蛋白稳定、促进细胞生存等功能，在细胞生长、发育、分化、基因转录方面发挥重要作用。近年研究对其结构功能有了更深入的了解，热休克蛋白在肿瘤中高表达，与肿瘤细胞增殖密切相关，可通过调控细胞凋亡的线粒体和死亡受体信号转导通路以及应激与生长信号转导通路，抑制肿瘤细胞凋亡。     

热休克蛋白与肿瘤细胞凋亡

热休克蛋白是受各种应激原刺激后诱导产生的一组应激蛋白,具有维持蛋白稳定、促进细胞生存等功能,在细胞生长、发育、分化、基因转录方面发挥重要作用。近年研究对其结构功能有了更深入的了解,热休克蛋白在肿瘤中高表达,与肿瘤细胞增殖密切相关,可通过调控细胞凋亡的线粒体和死亡受体信号转导通路以及应激与生长信号转导通路,抑制肿瘤细胞凋亡。     

Flavopiridol联合Bortezomib对多发性骨髓瘤的细胞增殖抑制作用

目的探讨细胞蛋白激酶抑制剂Flavopiridol及蛋白酶抑制剂Bortezomib在体内抑制多发性骨髓瘤细胞U266的细胞增殖作用及其机制。方法以不同浓度的Flavopiridol及Bortezomib分别、联合作用于U266细胞,用MTT法检测细胞增殖抑制作用。采用western blot法检测Bcl-2及Mcl-1表达变化;结果①Flavopiridol比Borte-zomib对U266细胞增殖抑制作用更强,IC50值分别为52.5nM,25nM。②与单独用药相比,Flavopiridol联合Borte-zomib作用于U266细胞,IC50值有明显的下降为17.5nM。③Flavopiridol及Bortezomib给药前后,Bcl-2蛋白表达无变化,而Mcl-1蛋白表达明显下降。结论 Flavopiridol联合Bortezomib用药能在体内明显抑制多发性骨髓瘤细胞U266的生长,其机制主要是通过诱导细胞凋亡来抑制增殖。     

三氧化二砷联合抗坏血酸对骨髓瘤细胞增殖与凋亡的作用

近年国内外学开始将三氧化二砷（As2O3）试用于难治性、复发性多发性骨髓瘤（MM）的治疗，已取得一定疗效，为了探讨其作用机制，并寻找低毒有效的联合治疗方案，我们观察As2O3及As2O3联合抗坏血酸（AA）对RPMI 8226细胞的增殖、杀伤与促凋亡效应的影响，进而探讨上述效心过程与死亡受体DR4、DR5的信号转导关系。     

自噬调节药物对多发性骨髓瘤细胞增殖、凋亡和自噬的影响

目的:探讨自噬调节药物包括自噬激活剂(雷帕霉素)、自噬抑制剂(羟氯喹和3-甲基腺嘌呤)对人多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226增殖、凋亡和自噬的影响。方法:采用不同浓度雷帕霉素(RAPA)、羟氯喹(HCQ)、3-甲基腺嘌呤(3-MA)处理RPMI 8226细胞,用CCK-8法检测药物对细胞增殖的作用,流式细胞术检测药物作用24 h后细胞凋亡率,应用单丹磺酰戊二胺(MDC)染色观察自噬小体数量,Western blot检测各组细胞自噬相关蛋白LC-3b和凋亡相关蛋白(caspase-3、PARP和BCL-2)的表达情况。结果:RAPA和HCQ可呈时间及剂量依赖性抑制RPMI8226细胞的增殖,并增加细胞的凋亡,而3-MA无明显抑制细胞增殖作用,也无诱导凋亡作用。MDC染色结果显示,细胞内自噬泡数量随着RAPA浓度的提高逐渐增多,而随着HCQ和3-MA浓度升高自噬泡数量却逐渐减少。Western blot结果显示,RAPA可诱导自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ和凋亡蛋白caspase-3及PARP表达上调,但抑制抗凋亡蛋白BCL-2表达;HCQ抑制LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ和BCL-2表达,但可上调caspase-3和PARP表达;3-MA可下调LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ表达,但对caspase-3、PARP及BCL-2表达均未显示明显影响。结论:RAPA能抑制RPMI8226细胞增殖,诱导RPMI8226细胞凋亡和自噬,HCQ则在抑制自噬和增殖的同时也可诱导凋亡,3-MA可抑制细胞自噬但对细胞增殖和凋亡影响不大。     

剂量依赖性热休克处理对肺癌细胞增殖凋亡的影响

目的：研究热休克反应在肺癌细胞GLC-82增殖过程中的的作用。方法：采用体外培养人肺癌细胞株GLC-82，并进行增殖实验，将细胞随机分为热休克组和非热休克组，每组再分为4组，对照组，肿瘤细胞坏死因子25μg／L组，肿瘤细胞坏死因子50μg／L组，肿瘤细胞坏死因子100μg／L组。采用吖啶橙荧光染色观察细胞的凋亡情况；采用四甲基偶氮噻唑盐比色法检测肿瘤细胞的细胞增殖情况；以^3H-胸腺嘧啶脱氧核苷掺人试验检测肿瘤细胞的DNA合成情况。每项实验中各组均设5个复孔用于统计分析。主要观察肿瘤坏死因子α对体外GLC-82细胞的细胞毒性作用及热休克对此作用的拮抗作用。热休克对肺癌细胞GLC-82凋亡及对GLC-82DNA合成影响。结果：①肿瘤坏死因子α对体外GLC-82细胞的细胞毒性作用及热休克对此作用的拮抗作用：非热休克组随着肿瘤坏死因子α浓度升高，反应细胞生长抑制率的吸光度值呈明显下降趋势；而热休克组细胞在同样浓度的肿瘤坏死因子刺激作用下，吸光度值下降趋势缓慢，生长抑制作用减弱，表明热休克可拮抗肿瘤坏死因子α对体外GLC-82细胞的细胞毒性作用，促进细胞增殖。②热休克所致肺癌细胞GLC-82凋亡的镜下观察结果：肿瘤细胞经吖啶橙染色后胞核染成黄绿色，胞浆和核仁的RNA为橘红色。加入肿瘤坏死因子α后，细胞呈现凋亡改变。凋亡细胞的荧光镜下特点为：细胞膜及核膜完整；细胞核染色质凝集浓染，呈单个或多个圆球形或月牙形凝集于核膜；细胞体积明显缩小，荧光强度增强，胞膜不断出芽、脱落，细胞变成数个大小不等的内膜包囊的凋亡小体。③热休克对肺癌细胞GLC-82的凋亡作用：经热休克处理后，凋亡细胞数量比较非热休克组明显减少，并与肿瘤坏死因子α呈剂量依赖关系，肿瘤坏死因子α浓度为100μg／L时，热休克组凋亡指数明显低于非热休克组[(9．40&;#177;2，12)，(16.70&;#177;5．19)，P&;lt;0.01]。④热休克对肺癌细胞GLC-82DNA合成的影响：在非热休克组细胞中，随着肿瘤坏死因子α的浓度增加，闪烁计数率逐渐减低，表明细胞DNA合成就减少：而热休克组细胞在不同浓度的肿瘤坏死因子α作用下，闪烁计数率均比非热休克组增高，表明DNA合成增多，表明热休克拮抗肿瘤坏死因子α的细胞毒作用，而对细胞GLC-82的生长起促进作用。结论：热休克组细胞比非热休克细胞凋亡指数明显降低，细胞生长抑制率明显增高，闪烁计数率值升高，DNA合成增多，热休克明显抑制肿瘤坏死因子α的细胞毒作用，拮抗凋亡作用而促进细胞生长增殖，而且其作用有剂量依赖性。     

剂量依赖性热休克处理对肺癌细胞增殖凋亡的影响

目的:研究热休克反应在肺癌细胞GLC-82增殖过程中的的作用。方法:采用体外培养人肺癌细胞株GLC-82,并进行增殖实验,将细胞随机分为热休克组和非热休克组,每组再分为4组,对照组,肿瘤细胞坏死因子25μg/L组,肿瘤细胞坏死因子50μg/L组,肿瘤细胞坏死因子100μg/L组。采用吖啶橙荧光染色观察细胞的凋亡情况;采用四甲基偶氮噻唑盐比色法检测肿瘤细胞的细胞增殖情况;以3H-胸腺嘧啶脱氧核苷掺入试验检测肿瘤细胞的DNA合成情况。每项实验中各组均设5个复孔用于统计分析。主要观察肿瘤坏死因子α对体外GLC-82细胞的细胞毒性作用及热休克对此作用的拮抗作用。热休克对肺癌细胞GLC-82凋亡及对GLC-82DNA合成影响。结果:①肿瘤坏死因子α对体外GLC-82细胞的细胞毒性作用及热休克对此作用的拮抗作用:非热休克组随着肿瘤坏死因子α浓度升高,反应细胞生长抑制率的吸光度值呈明显下降趋势;而热休克组细胞在同样浓度的肿瘤坏死因子刺激作用下,吸光度值下降趋势缓慢,生长抑制作用减弱,表明热休克可拮抗肿瘤坏死因子α对体外GLC-82细胞的细胞毒性作用,促进细胞增殖。②热休克所致肺癌细胞GLC-82凋亡的镜下观察结果:肿瘤细胞经吖啶橙染色后胞核染成黄绿色,胞浆和核仁的RNA为橘红色。加入肿瘤坏死因子α后,细胞呈现凋亡改变。凋亡细胞的荧光镜下特点为:细胞膜及核膜完整;细胞核染色质凝集浓染,呈单个或多个圆球形或月牙形凝集于核膜;细胞体积明显缩小,荧光强度增强,胞膜不断出芽、脱落,细胞变成数个大小不等的内膜包囊的凋亡小体。③热休克对肺癌细胞GLC-82的凋亡作用:经热休克处理后,凋亡细胞数量比较非热休克组明显减少,并与肿瘤坏死因子α呈剂量依赖关系,肿瘤坏死因子α浓度为100μg/L时,热休克组凋亡指数明显低于非热休克组犤(9.40±2.12),(16.70±5.19),P<0.01犦。④热休克对肺癌细胞GLC-82DNA合成的影响:在非热休克组细胞中,随着肿瘤坏死因子α的浓度增加,闪烁计数率逐渐减低,表明细胞DNA合成就减少;而热休克组细胞在不同浓度的肿瘤坏死因子α作用下,闪烁计数率均比非热休克组增高,表明DNA合成增多,表明热休克拮抗肿瘤坏死因子α的细胞毒作用,而对细胞GLC-82的生长起促进作用。结论:热休克组细胞比非热休克细胞凋亡指数明显降低,细胞生长抑制率明显增高,闪烁计数率值升高,DNA合成增多,热休克明显抑制肿瘤坏死因子α的细胞毒作用,拮抗凋亡作用而促进细胞生长增殖,而且其作用有剂量依赖性。     

巨噬细胞炎症蛋白1α对多发性骨髓瘤细胞增殖与迁移能力的影响

我们通过检测多发性骨髓瘤（MM）患骨髓及KM3细胞培养上清液中巨噬细胞炎症蛋白1α（MIP-1α）水平，体外运用细胞培养技术分析瘤细胞在MIP-1α作用下的增殖、迁移作用，从而探讨MIP-1α对瘤细胞增殖与迁移能力的影响。     

大黄素衍生物E11的筛选及对多发性骨髓瘤细胞增殖抑制和诱导凋亡作用的研究

目的:筛选抑制多发性骨髓瘤细胞增殖作用最强的衍生物,研究大黄素衍生物对两种多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226及U266细胞抑制增殖和诱导凋亡的作用。方法:以大黄素为母体合成16种大黄素衍生物,从中筛选出大黄素衍生物E-11进行实验。应用MTT比色法及细胞集落形成实验观察大黄素衍生物E11对RPMI8226、U266细胞增殖的影响;应用DAPI染色法在荧光显微镜下观察大黄素衍生物作用后的细胞形态变化;应用DNA片段化检测大黄素衍生物E11诱导细胞凋亡的作用。结果:MTT结果显示,16种大黄素衍生物作用于RPMI8226细胞48 h后,除了E10、E15无法计算外,其余14种半数抑制浓度(IC50)在0. 83-34. 68μmol/L之间。MTT结果显示,大黄素衍生物E11作用于RPMI8226、U266细胞48 h的IC50分别为0. 831±0. 045μmol/L和1. 039±0. 093μmol/L。细胞集落形成实验均显示,大黄素衍生物E11能抑制2种细胞集落的形成,在一定范围内呈浓度及时间依赖性(r=0. 72)。DAPI染色后在荧光显微镜下能看到大黄素衍生物E11作用后的RPMI8226、U266细胞出现典型的凋亡形态学改变;应用DNA片段化可观察到典型的DNA凋亡梯带。结论:在合成的16种大黄素衍生物中,E11对多发性骨髓瘤RPMI8226细胞的抑制增殖作用最强。大黄素衍生物E11对RPMI8226、U266细胞有明显的抑制增殖、诱导凋亡的作用。