食管癌患者围手术期外周血调节性B细胞的检测及临床意义

目的检测食管癌患者围手术期外周血调节性B细胞的表达水平,分析其与手术疗效的关系。方法收集食管癌患者和体检健康者的外周血标本,用Ficoll试剂提取单个核细胞(PBMC),用流式细胞术(FCM)检测术前、术后1 d、术后7 d的食管癌患者及体检健康者调节性B细胞(包括B10、Br3及Breg)的表达水平。结果食管癌患者CD5+CD19+细胞、B10细胞和Breg细胞表达水平分别为(3.20±0.35)%、(2.52±0.37)%和(8.39±0.92)%,均高于健康人对照组(1.77±0.25)%、(1.57±0.28)%和(2.96±0.23)%,差异有统计学意义(P均0.05),而Br3细胞(6.07±0.46)%与健康人对照组(5.93±0.28)%比较差异无统计学意义(P0.05);与术前比较,食管癌患者B10、Br3细胞术后1 d表达水平明显升高,Breg细胞表达水平明显降低,差异均有统计学意义(P均0.05),而术后7 d与术前比较,CD5+CD19+细胞、B10和Breg细胞差异均有统计学意义(P均0.05);与术后1 d与术后7 d比较,仅CD5+CD19+、B10、Br3细胞表达水平差异有统计学意义(P均0.05)。结论食管癌患者围手术期外周血调节性B细胞的表达水平呈现动态变化,可用于手术疗效监测。     

高白细胞急性髓系白血病B细胞淋巴瘤因子2(BCL-2)的表达及临床意义

本研究旨在探讨B细胞淋巴瘤因子2(BCL-2)在高白细胞急性髓系白血病(AML)发病中的作用。采用流式细胞术(FCM)检测48例AML患者胞内BCL-2水平,采用酶联免疫实验(ELISA)检测40例AML患者血清BCL-2含量。结果表明:高白细胞和非高白细胞AML患者的血清BCL-2含量均明显高于正常人(P<0.05),胞内BCL-2水平与正常人比较无显著性差异(P>0.05)。高白细胞、非高白细胞AML患者之间胞内及血清BCL-2含量均无显著性差异(P>0.05)。高白细胞、非高白细胞AML患者及正常对照者的胞内和血清BCL-2含量无显著相关性(P>0.05)。结论:AML患者的白血病细胞过多地产生BCL-2并分泌至血清,此结果可能参与AML的发生,但BCL-2的凋亡抑制作用对高白细胞AML的发病并未产生重要影响。     

PLK1在套细胞淋巴瘤中的表达及临床意义

目的:研究PLK1在套细胞淋巴瘤中的表达,探讨shRNA干扰沉默PLK1基因表达对套细胞淋巴瘤Jeko-1细胞增殖、凋亡、周期的影响。方法:应用免疫组织化学S-P法检测42例套细胞淋巴瘤和30例反应性增生淋巴结炎患者组织中PLK1蛋白并进行分析与比较。PLK1 shRNA慢病毒感染Jeko-1细胞,应用RQ-PCR检测PLK1 mRNA的表达及Western blot检测PLK1蛋白的表达,鉴定PLK1 shRNA干扰沉默效果,CCK-8试验检测细胞增殖,AnnexinⅤ/PI双染检测细胞凋亡, PI单染检测细胞周期,Western blot测定凋亡相关蛋白BAX BCL-2、Caspase-3的变化。结果:套细胞淋巴瘤患者组织中PLK1阳性率66.67%(28/42),明显高于增生淋巴结炎患者组织的20%(6/30)(P 0.05)。PLK1阳性表达与套细胞淋巴瘤患者B症状、IPI评分、Ann-Arbor临床分期存在相关性(P 0.05)。PLK1 shRNA慢病毒感染Jeko-1细胞72 h后,PLK1 mRNA和PLK1蛋白表达明显下降(P0.05),PLK1 shRNA组细胞增殖率明显低于对照和Neg shRNA组(P 0.05),PLK1 shRNA组细胞的凋亡率为(27.42±3.44)%,明显高于对照组的(1.23±0.42)%和Neg shRNA组的(2.07±0.58)%(P 0.05)。细胞周期分析发现,PLK1 shRNA组的G2/M期细胞比例为(27.21±3.59)%,高于对照组的(13.28±2.63)%及Neg shRNA组的(14.34±2.37)%(P 0.05)。凋亡相关蛋白检测显示,促凋亡蛋白BAX上调,抑制凋亡蛋白BCL-2表达下调、caspase-3表达上调。结论:PLKl在套细胞淋巴瘤患者组织中过量表达,干扰沉默PLK1基因可抑制人套细胞淋巴瘤Jeko-1细胞细胞增殖,诱导细胞凋亡,阻滞细胞周期于G2/M期。     

反转录荧光定量聚合酶链反应联合检测hMAM和BCL-2在乳腺癌诊断中的应用

目的研究反转录荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测B细胞淋巴瘤/白血病-2(BCL-2)和乳腺癌人乳腺珠蛋白(hMAM)基因在外周血循环肿瘤细胞(CTCs)中的表达水平,探讨BCL-2和hMAM 2种乳腺癌相关基因联合检测在乳腺癌诊断中的临床应用价值。方法采用RT-qPCR法,并以甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)为内对照检测健康对照组(55例)、乳腺癌组(171例)和良性乳腺疾病组(91例)外周血CTCs中BCL-2和hMAM的表达水平。结果外周血CTCs中BCL-2和hMAM在健康对照组和良性乳腺疾病组表达水平差异无统计学意义(P0.05),乳腺癌组表达水平高于健康对照组、良性乳腺疾病组,差异有统计学意义(P0.05)。hMAM和BCL-2联合检测灵敏度显著高于单一基因。结论联合检测外周血CTCs中hMAM和BCL-2基因表达水平可提高乳腺癌诊断的灵敏度,有效辅助临床诊断乳腺癌。     

MYC、BCL-2和BCL-6检测在弥漫性大B细胞淋巴瘤患者预后判断中的价值

目的:分析BCL-2、BCL-6和MYC检测在弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)患者中预后判断中的价值。方法:收集2012年3月至2015年3月本院收治的DLBCL患者163例患者的淋巴瘤组织标本,采用免疫组织化学方法检测患者BCL-2、BCL-6和MYC的表达水平,并用间期荧光原位杂交技术对IGH/BCL-2融合、BCL-6基因断裂及MYC基因断裂进行检测,进一步分析BCL-2、BCL-6和MYC表达水平与DLBCL患者临床病理特征及预后的相关性。结果:MYC、BCL-2及BCL-6均呈现棕黄色或棕褐色的阳性信号,其中MYC主要于细胞膜上呈现阳性表达,BCL-2主要于细胞质及局部细胞膜上呈现阳性表达,BCL-6主要于细胞核上呈现阳性表达。ECOG体能状态评分≥2分者BCL-2表达水平较2分者明显升高,且免疫亚型为CD5~+、生发中心B细胞样(GCB)者BCL-2表达水平较非GCB者明显升高(P0.05);国际预后指数(IPI)评分为3-5者MYC表达水平较0-2分者明显升高(P0.05);免疫亚型为CD5~+、GCB者BCL-6表达水平较非GCB者明显降低(P0.05)。经Cox多变量分析结果发现,BCL-2、BCL-6和MYC的表达水平与DLBCL患者总生存期和无进展生存期均存在显著关系(P0.05)。结论:BCL-2、BCL-6和MYC作为重要的分子标志物,在评估DLBCL患者预后中具有较高的判断价值。     

褐藻多糖硫酸酯通过调控PCNA-AS1表达对宫颈癌细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨褐藻多糖硫酸酯对宫颈癌细胞增殖和凋亡的影响及可能的作用机制。方法体外培养宫颈癌Hela细胞,褐藻多糖硫酸酯作用Hela细胞后,细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法检测Hela细胞抑制率,流式细胞术检测细胞凋亡率,蛋白印迹(Western Blot)法检测细胞中细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、p21、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)和B淋巴细胞瘤-2相关蛋白(Bax)蛋白表达水平,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测细胞中PCNA-AS1基因表达水平。转染PCNA-AS1小干扰RNA或PCNA-AS1过表达载体至Hela细胞后,上述相同方法观察干扰PCNA-AS1表达或过表达PCNA-AS1的同时使用褐藻多糖硫酸酯处理对Hela细胞抑制率、凋亡率及CyclinD1、p21、Bax和Bcl-2的蛋白表达的影响。结果褐藻多糖硫酸酯作用Hela细胞后,细胞抑制率、凋亡率及p21和Bax蛋白表达水平显著升高(P0.05),CyclinD1和Bcl-2蛋白及PCNA-AS1表达水平显著降低(P0.05)。干扰PCNA-AS1表达后,Hela细胞抑制率、凋亡率及p21和Bax蛋白表达水平显著升高(P0.05),CyclinD1和Bcl-2蛋白表达水平显著降低(P0.05)。过表达PCNA-AS1的同时使用褐藻多糖硫酸酯作用Hela细胞,细胞抑制率、凋亡率及p21和Bax蛋白表达水平显著降低(P0.05),CyclinD1和Bcl-2蛋白表达水平显著升高(P0.05)。结论褐藻多糖硫酸酯可抑制宫颈癌Hela细胞增殖并诱导细胞凋亡,其作用机制可能与下调PCNA-AS1表达有关。     

盐酸青藤碱对Jeko-1细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制研究

目的:探讨盐酸青藤碱对人套细胞淋巴瘤Jeko-1细胞株增殖、凋亡及AKT信号通路的影响。方法:应用四甲基偶氮唑盐方法(MTT)绘制细胞生长曲线,流式细胞仪检测细胞凋亡的变化,Western blot检测细胞周期蛋白CyclinD1、凋亡相关蛋白BCL-2、BAX、Caspase-3及Akt信号通路相关蛋白Akt、p-Akt、p-mTOR、p-P70S6K的变化。结果:盐酸青藤碱能明显抑制Jeko-1细胞株的增殖,Jeko-1细胞经终浓度为0、1、2和4 mmol/L盐酸青藤碱作用24 h后,凋亡率分别为(2.21±1.05)%、(11.29±2.42)%、(18.79±2.84)%和(31.05±3.52)%,其差异有统计学意义(P0.01);Western blot检测发现,细胞周期蛋白CyclinD1、凋亡相关蛋白BCL-2表达下降,而BAX、Caspase-3蛋白表达上调,Akt信号通路相关蛋白中Akt表达无变化,而p-Akt、p-mTOR、p-P70S6K蛋白磷酸化水平降低。结论:盐酸青藤碱可明显抑制Jeko-1细胞增殖,其机制有可能通过下调Akt信号通路中的p-Akt、p-mTOR、p-P70S6K磷酸化水平,从而抑制Akt信号通路,促进细胞凋亡。     

MicroRNA-15a抑制骨髓瘤细胞生长及其机制研究

目的:研究microRNA-15a(miR-15a)在多发性骨髓瘤(MM)细胞生长中的作用及可能机制。方法:慢病毒颗粒感染MM细胞株U266和RPMI8226,流式细胞术(FCM)分选获得稳定转染MM细胞株。CCK-8法检测miR-15a高表达前后MM细胞的增殖情况;AO/EB染色、Hoechst 33258荧光染色法及FCM检测miR-15a高表达前后MM细胞凋亡的情况;FCM检测miR-15a高表达前后MM细胞周期的情况;real-time PCR方法检测miR-15a高表达前后MM细胞miR-15a、BMI-1及BCL-2 mRNA的表达;Western blot方法检测miR-15a高表达前后MM细胞BMI-1蛋白表达。结果:获得高表达miR-15a的MM稳定转染细胞株。CCK-8结果显示miR-15a高表达可抑制M M细胞(U266和RPM I8226)的增殖;AO/EB、Hoechst 33258染色和FCM结果显示,miR-15a高表达可显著诱导MM细胞(U266和RPM I8226)的凋亡,U266和RPM I8226细胞高表达组与对照组细胞凋亡率分别为:90.52%vs37.08%,59.40%vs 44.17%;同时,miR-15a高表达可诱导MM细胞(U266和RPM I8226)G1期阻滞,G1期细胞分别为(41.50±0.64)%、(45.31±0.77)%。real-time PCR结果显示,在高表达miR-15a抑制骨髓瘤细胞生长的过程中BCL-2 mRNA表达显著降低,BMI-1 mRNA表达则没有改变,但是Western blot结果却显示BMI-1蛋白表达出现显著降低。结论:miR-15a高表达通过诱导骨髓瘤细胞周期阻滞和凋亡抑制骨髓瘤细胞生长,其机制涉及miR-15a在转录后水平对BMI-1、BCL-2基因的负调控。     

B细胞非霍奇金淋巴瘤患者细胞增殖和凋亡相关指标检测结果分析

目的:分析B细胞非霍奇金淋巴瘤(B cell non-Hodgkin's lymphoma,B-NHL)患者细胞增殖和凋亡相关指标的检测结果。方法:分别检测72例B-NHL患者的经病理诊断证实的病灶组织石蜡包埋标本(实验组)和50例淋巴结反应性增生患者的淋巴结石蜡标本(对照组)的增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)、X连锁凋亡抑制蛋白(X-linked inhibitor of apoptosis,XIAP)和B细胞淋巴瘤/白血病-2基因(B-cell lymphoma/leukemia-2,BCL-2)表达情况,并分析其与病理因素的关系。结果:实验组PCNA阳性细胞百分率及XIAP、BCL-2阳性率均显著高于对照组(P0.05);Ⅲ-Ⅳ期B-NHL患者PCNA阳性细胞百分率显著高于Ⅰ-Ⅱ期患者(P0.05);不同病理因素B-NHL患者XIAP和BCL-2阳性率并无明显差异(P0.05);PCNA低阳性表达组无进展生存期显著长于PCNA高阳性表达组(P0.05);XIAP~+组与XIAP-组无进展生存期并无显著差异(P0.05);BCL-2~+组与BCL-2~-组无进展生存期亦无显著差异(P0.05)。结论:增殖因子PCNA与凋亡因子XIAP、BCL-2均参与了B-NHL的发生,其中PCNA阳性情况对临床分期有明显影响。     

流式细胞术检测B淋巴细胞表面免疫球蛋白轻链及临床意义

目的 探讨流式细胞术检测外周血B淋巴细胞表面免疫球蛋白(Ig)轻链的实验方法和临床意义.方法 采用流式细胞术,以CD19设门,分析了20例健康对照者和13例淋巴瘤患者B细胞表面Ig kappa与lambda型轻链的表达.结果 对照组kappa型轻链阳性B细胞为(51.4±5.2)%,lambda型轻链阳性B细胞为(39.2±4.3)%,两型轻链B细胞之比值为1.31±0.28;淋巴瘤患者B细胞中kappa型轻链8例(61.5%),lambda型轻链5例(38.5%),两型轻链B细胞的比值或者均小于0.01,或者大于56.78,显著超出健康人比值范围.结论 流式细胞术直接检测B细胞表面kappa轻链与lambda轻链的表达有助于鉴别反应性B淋巴细胞增生和肿瘤性慢性B淋巴细胞增生.     

PTEN及BCL-2在急性髓系白血病中的表达及意义

目的:探讨人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源蛋白的基因(PTEN)及B细胞淋巴瘤/白血病-2(BCL-2)在急性髓系白血病(AML)中的表达及意义。方法:采用Real-time PCR和Western blot法检测80例AML(包括56例初治患者,16例缓解患者,8例复发患者)及30例非血液病患者骨髓中PTEN及BCL-2的mRNA及蛋白表达水平,并分析二者与临床病理参数的关系。结果:初治和复发组患者骨髓细胞PTEN mRNA及蛋白表达水平均显著低于对照组及缓解组(P0.01),BCL-2 mRNA及蛋白表达量均显著高于对照组及缓解组(P0.01)。PTEN与BCL-2 mRNA表达水平与AML患者年龄,性别及白细胞计数无相关性(P0.05)。AML患者中PTEN与BCL-2蛋白及mRNA表达水平均呈负相关(r=-0.432,r=-0.569)。结论:PTEN及BCL-2参与AML的发生发展,并对AML的化疗效果起着指示作用。     

shRNA沉默NSD2基因表达对OCI-Ly3细胞增殖、凋亡及Akt/mTOR信号通路的影响

目的:探讨干扰shRNA下调NSD2基因表达对弥漫大B细胞淋巴瘤OCI-Ly3细胞增殖、凋亡及Akt /mTOR信号通路的影响。方法:NSD2 shRNA慢病毒转染OCI-Ly3细胞,应用real time Q-PCR检测NSD2 mRNA的表达和Western blot法检测NSD2蛋白的表达,以鉴定NSD2 shRNA的沉默效果,应用CCK-8试验检测细胞增殖,AnnexinⅤ/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot测定组蛋白H3K36二甲基化水平(H3K36me2)、BAX BCL-2、caspase-3、Akt、磷酸化Akt(p-Akt)、磷酸化mTOR(p-mTOR)、磷酸化P70核糖体蛋白S6激酶(phosphorylation P70 ribosomal protein S6 kinase,p-P70S6K)的变化。结果:NSD2 shRNA慢病毒转染OCI-Ly3细胞72 h后,real time Q-PCR和Western blot检测显示NSD2的mRNA和蛋白表达均有明显下降(P0.05),NSD2 shRNA组细胞增殖率明显低于对照和Neg shRNA组(P0.05),NSD2 shRNA组细胞的凋亡率明显高于对照组和和Neg shRNA组(30.37±4.22)%vs(1.36±0.52)%和(2.17±1.43)%(P0.05);促凋亡蛋白BAX表达上调,抑制凋亡蛋白BCL-2表达下调,caspase-3表达上调;H3K36me2水平较对照组明显下降,而检测Akt /mTOR通路蛋白发现,Akt总蛋白水平未明显下降,但是活性形式的磷酸化p-Akt、p-mTOR和p-P70S6K表达下调。结论:干扰沉默NSD2基因可抑制弥漫大B细胞淋巴瘤OCI-Ly3细胞增殖,诱导细胞凋亡,其机制可能是调节组蛋白H3K36me2水平变化,特异性地抑制Akt /mTOR信号通路的活性。     

CD180在B细胞慢性淋巴增殖性疾病中的表达特点及其诊断价值

目的:通过多参数流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测B细胞慢性淋巴增殖性疾病(B cell chronic lymphoproliferative disorders,B-CLPD)中CD180的平均荧光强度(mean fluorescence intensity,MFI),探讨CD180在B-CLPD中的表达特点及其在鉴别诊断中的价值。方法:利用FCM检测178例B-CLPD病人骨髓中异常B淋巴细胞表面CD180的MFI。以正常对照组为参照,分析各类型B-CLPD中CD180的表达情况,并比较不同亚型中的表达差异。结果:(1)除脾脏弥漫性红髓小B细胞淋巴瘤(SDRPL)外,各类型B-CLPD中CD180的表达强度均显著低于正常对照组;(2)慢性淋巴细胞性白血病(chronic lymphocytic leukemia,CLL)中CD180 MFI明显低于其余类型B-CLPD;(3) CD180在毛细胞白血病(HCL)中的表达强度显著高于边缘区淋巴瘤(MZL)、套细胞淋巴瘤(MCL)、淋巴浆细胞淋巴瘤/华氏巨球蛋白血症(LPL/WM);(4)在脾脏边缘区淋巴瘤(SMZL)、毛细胞白血病(HCL)、毛细胞白血病变异型(HCLv)以及SDRPL等原发于脾脏的淋巴瘤中,有绒毛组和无绒毛组CD180表达强度有显著差异。结论:利用多参数FCM,检测CD180和其他免疫标志表达水平,有助于区分B-CLPD不同亚型。     

地西他滨联合硼替佐米对套细胞淋巴瘤细胞株的增殖抑制作用及其相关机制

目的:观察地西他滨(DAC)联合硼替佐米(BTZ)对套细胞淋巴瘤(MCL)细胞系Jeko-1和Grante519细胞增殖的影响,并探讨其相关作用机制。方法:用不同浓度的DAC、BTZ单药和2药联合在体外对人MCL细胞株Jeko-1、Grante519细胞进行处理,采用CCK8法检测不同处理因素对细胞的增殖抑制作用,流式细胞术检测上述药物对细胞凋亡的影响,RT-PCR和Western blot方法从m RNA和蛋白水平检测上述药物对MCL细胞凋亡和信号传导相关基因PCDH8、NF-κB、Caspas3、BCL-2、CCND1和BAX表达水平的影响。结果:低浓度DAC能明显抑制Jeko-1、Grante519细胞的增殖并诱导其凋亡,效应呈剂量和时间依赖性(r=0.892,r=0.812;r=0.886,r=0.784)。单药DAC处理后,在Jeko-1和Grante519细胞中均可观察到Caspase3、BAX和PCDH8表达水平的升高(均P0.01),BCL-2、CCND1表达水平的降低(均P0.05),但对NF-κB表达水平无显著影响;高浓度BTZ能明显抑制Jeko-1和Grante519细胞的增殖,并诱导其凋亡,效应呈剂量和时间依赖性(r=0.854,r=0.763;r=0.927,r=0.742);单药BTZ能引起Jeko-1和Grante519细胞中Caspase3、BAX表达水平升高(P0.01),NF-κB、BCL-2和CCDN1表达水平的降低(P0.01),但对PCDH8表达水平无明显影响;与单药处理组相比,DAC联合BTZ显著增加了对Jeko-1和Grante519细胞的抑制率和凋亡率(P0.01),并显著提高Jeko-1和Grante519细胞PCDH8、Caspase3、BAX表达水平(P0.01),明显降低NF-κB、BCL-2和CCND1表达水平(P0.01)。结论:DAC与BTZ具有正协同作用,其对MCL细胞的增殖抑制作用可能是2药联合后加强了对NF-κB信号通路的抑制作用,并且下调BCL-2水平,上调BAX水平,从而引起下游的Caspase3蛋白表达水平进一步升高,以达到更高的抗肿瘤作用。     

多发性骨髓瘤患者BAFF与BCL-2 mRNA的表达及意义

本研究探讨B细胞活化因子(BAFF)和B细胞淋巴瘤/白血病-2基因(BCL-2)mRNA在多发性骨髓瘤(MM)患者骨髓单个核细胞(BMMNC)中表达水平及BAFF和BCL-2对MM的发生、发展及预后的意义。收集40例MM患者及10例正常对照的骨髓标本,获取BMMNC;采用实时荧光定量PCR(real time PCR)的方法检测BMMNC中BAFF与BCL-2 mRNA的表达,并同步收取血浆,检测β2-MG分泌水平;按Durie-Salmon(D-S)分期标准对MM患者进行临床分期。结果表明,①BAFF与BCL-2 mRNA在MM组中表达升高,与对照组比较差异有统计学意义,治疗后平台期BAFF与BCL-2 mRNA表达水平明显减低(p<0.05);②复发/难治性多发性骨髓瘤患者BAFF与BCL-2 mRNA的表达水平较正常对照组及平台期患者明显升高(p<0.05),初发组与复发/难治组之间表达无显著差异。BAFF与BCL-2 mRNA表达与患者病程D-S分期和β2-MG水平有相关性。结论:MM患者BAFF与BCL-2mRNA表达水平升高,并且MM初治组、复发/难治组BAFF与BCL-2 mRNA表达水平均高于平台组,提示BAFF和BCL-2可能参与MM的发生、发展的病理机制;BAFF与BCL-2 mRNA表达水平与MM肿瘤负荷呈正相关,提示BAFF和BCL-2表达水平可以作为评判MM患者预后的新指标。     

系统性红斑狼疮患者外周血CXCL13及其受体CXCR5表达水平的研究

目的检测系统性红斑狼疮(SLE)患者血清趋化因子CXCL13水平及其受体CXCR5在外周血B细胞、滤泡辅助T细胞(TFH)上的表达,分析CXCL13、TFH细胞水平与疾病活动的相关性,探讨CXCL13及CXCR5受体在SLE发病机制中的可能作用。方法酶联免疫吸附法(ELISA)检测58例SLE患者血浆CXCL13水平,以流式细胞术检测24例SLE患者外周血中CXCR5在CD19+B细胞、TFH细胞上的表达水平。结果 1血清CXCL13SLE患者组为365.96±216.02(pg/ml),高于健康对照组145.66±207.25(pg/ml)(P0.01)与SLE缓解组167.19±145.37(pg/ml);CXCL13水平与SLE患者的SLEDAI评分、抗核抗体滴度呈正相关(P0.05)。2SLE患者B细胞CXCR5的表达率为79.03±20.59%,显著低于健康对照组94.25±4.52%,P0.05。3:SLE活动组TFH细胞水平(%)15.36±7.01高于健康对照组8.92±5.11%,P0.05;TFH细胞水平与患者的SLEDAI评分呈正相关(P0.05),与C3、dsDNA无相关性(均P0.05)。结论 SLE患者外周血CXCL13及表达其受体CXCR5的TFH细胞水平增高,并与病情的活动性相关,提示CXCL13有可能积极参与至SLE的发病机制中,并更有可能为SLE的治疗提供新的靶点。     

白藜芦醇逆转急性髓系白血病细胞HL-60/ADR耐药的凋亡机制

目的:探讨白藜芦醇(Resveratrol,Res)逆转急性髄系白血病细胞HL-60/ADR耐药的凋亡机制。方法:将HL-60/ADR细胞分为对照组(Control)、阿霉素(ADR)处理组、Res处理组和ADR+Res联合处理组4组。应用CCK-8法测定细胞增殖抑制率,流式细胞术检测细胞内阿霉素(ADR)自发荧光强度和细胞凋亡率;RT-PCR法检测耐药基因MRP1、抗凋亡基因BCL-2和促凋亡基因BAX mRNA表达水平,Western blot法测定MRP1、BCL-2和BAX蛋白表达水平。结果:25、50、100和200μmol/L Res作用于HL-60/ADR细胞48 h后,细胞的最大抑制率分别为44%、61%、76%和81%,呈浓度依赖性(r=0.876,P0.05);与ADR组的半数抑制浓度(IC50)(8.534±1.111μmol/L)相比,ADR+Res组HL-60/ADR细胞的IC50(1.591±0.373μmol/L)明显减少(P0.05)。ADR联合Res后HL-60/ADR耐药细胞内ADR自发荧光强度明显增加(P0.05);Res组和ADR+Res组细胞凋亡率均显著增加(P0.05)。Res组和ADR+Res组的MRP1 mRNA、BCL-2 mRNA表达水平显著下降(P0.05),BAX mRNA表达水平明显上升(P0.05)。Res组和ADR+Res组M RP1、BCL-2蛋白表达水平显著下降(P0.05),BAX蛋白明显上升(P0.05)。结论:白藜芦醇具有逆转HL-60/ADR细胞耐药的作用,可能是通过促进HL-60/ADR细胞凋亡、抑制耐药蛋白M RP1而发挥作用,其促凋亡机制与抑制BCL-2和增强BAX表达有关。     

5种乳腺癌相关基因临床应用价值的探讨

目的探讨荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)法检测外周血mRNA中B细胞淋巴瘤/白血病-2基因(BCL-2)、细胞周期蛋白D1(CCND1)、黏蛋白1(MUC1)、原癌基因人类表皮生长因子受体2(HER-2)和人乳腺珠蛋白(hMAM)5种乳腺癌相关基因在乳腺癌诊断中的应用。方法 FQ-PCR法测定50例健康女性体检者(健康对照组)、92例良性乳腺疾病患者(良性乳腺疾病组)和196例乳腺癌患者(乳腺癌组)外周血mRNA中CCND1、BCL-2、MUC1、HER-2和hMAM mRNA的表达量。结果CCND1、BCL-2、MUC1、HER-2和hMAM mRNA表达水平在乳腺癌组显著高于健康对照组和良性乳腺疾病组,差异有统计学意义(P0.05),其在健康对照组和良性乳腺疾病组间差异无统计学意义(P0.05);5种基因mRNA在健康对照组和良性乳腺疾病组及乳腺癌组的Ⅰ期的阳性表达率差异无统计学意义(P0.05),而乳腺癌组的Ⅱ期和Ⅲ+Ⅳ期则显著高于健康对照组、良性乳腺疾病组和乳腺癌组的Ⅰ期组的阳性表达率,差异有统计学意义(P0.01)。结论采用FQ-PCR技术检测乳腺癌mRNA时,应考虑到质量控制、mRNA水平和异质性、肿瘤不同阶段等各个方面的因素,才能有效正确地将乳腺癌相关基因用于乳腺癌的诊断、治疗和预后。     

跨膜蛋白活化物及钙调亲环素配体相互作用分子在狼疮肾炎患者外周血中的表达及其临床意义

目的研究狼疮肾炎(lupus nephritis,LN)患者跨膜蛋白活化物及钙调亲环素配体相互作用分子(TACI)的表达及其与疾病活动度的关系。方法分别采用逆转录实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-RT-PCR)方法,检测42例LN患者,30例非LN患者,40例健康体检者外周血单个核细胞(PBMC)TACI mRNA表达水平;采用流式细胞术(FCM)检测外周血B淋巴细胞表面TACI表达百分率;采用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测血清中抗双链DNA抗体(dsDNA)水平;采用速率散射比浊法检测血清中补体C3的水平。结果①LN组非LN组和和健康对照组TACI mRNA表达水平分别为:6.07±0.46,7.73±0.60和8.02±0.51。LN组TACI mRNA表达水平高于非LN组及健康对照组;非LN组TACI mRNA表达水平高于健康对照组(P<0.01)。②LN组、非LN组和健康对照组B淋巴细胞表面TACI表达百分率分别为:(7.95±1.58)%,(3.98±1.29)%和(2.87±0.56)%。LN组B淋巴细胞表面TACI表达百分率显著高于非LN组和健康对照组;非LN组高于健康对照组(P<0.01)。③LN患者PBMC中TACI mRNA的表达水平与抗dsDNA抗体呈显著正相关(r=0.312,P<0.05);与补体C3呈显著负相关(r=-0.315,P<0.05)。结论 LN患者TACI表达水平升高,可能参与了LN的发病过程;治疗后TACI表达水平降低,减轻炎症损害,可能成为评价疗效和预后的新指标。     

细胞角蛋白19联合B细胞淋巴瘤/白血病-2基因mRNA检测诊断乳腺癌的临床研究

目的探讨联合检测B细胞淋巴瘤/白血病-2基因(B cell lymphoma/leukemia 2 gene,BCL-2)与细胞角蛋白19(Nuclear oncogene,ck19)基因表达水平在乳腺癌诊断中的应用。方法建立荧光定量聚合酶链反应(Fluorescence Quantita-tive-Polymerase Chain Reaction,FQ-PCR)法,并以甘油醛-3-磷酸脱氢酶(Glyceraldehydes-3-Phosphate Dehydrogenase,GAPDH)为内对照测定20名健康女性体检者(正常对照组)、35例良性乳腺疾病患者(良性乳腺疾病组)和89例乳腺癌患者(乳腺癌组)外周血中BCL-2和ck19的表达量。结果乳腺癌组患者BCL-2和ck19表达水平与GAPDH的比值显著高于正常对照组和良性乳腺疾病组(均P<0.05),而正常对照组与良性乳腺疾病组间BCL-2和ck19表达水平与GAPDH的比值差异无统计学意义(P>0.05)。3组GAPDH差异无统计学意义(P>0.05)。BCL-2与ck19联合检测的灵敏度高于单个基因的检测。结论FQ-PCR技术可以快速定量检测BCL-2和ck19 mRNA,两者联合检测可有效提高对乳腺癌诊断的灵敏度。