转染分泌型aFGF基因对内皮祖细胞功能影响的研究

目的观察转染分泌型酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)基因对外周血内皮祖细胞(endothelial progenitor cell,EPC)功能的影响。方法从小型猪外周血中分离、培养和扩增EPC,将编码人分泌型aFGF基因的重组腺相关病毒(Adno-associated virus, AAV)转染EPC (EPC-aFGF),同时设立转绿色荧光蛋白(GFP)基因(EPC-GFP)和未转基因的EPC组(EPC)。转染后3 d,ELISA检测各组上清中aFGF的分泌情况,并以MTS法测定各组细胞的增殖能力, Transwell测定迁移能力,以及在基质胶上的血管生成能力和撤除血清与生长因子后的抗凋亡能力。结果ELISA检测表明转染目的基因EPC上清中的aFGF的量明显增加(P<0．05)。MTS测定显示EPC-aFGF的增殖能力具有增加的趋势,但无统计学意义(P=0．17),其迁移至Transwell下室细胞数明显增多(P<0．05),在基质胶上形成血管样结构的能力明显增加,且在撤除血清和生长因子后,凋亡的细胞数明显减少(P<0．05)。结论转染分泌型aFGF基因能够增强内皮祖细胞的迁移能力、体外血管形成能力和抗凋亡能力,为增强内皮祖细胞功能,提高其成血管效应提供了新的方法。     

犬缺血心肌内注射血管内皮生长因子基因的疗效

目的: 了解血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)基因,经心肌直接注射治疗犬心肌缺血模型后新生血管和侧枝循环形成以及心功能改善情况. 方法: 取实验用犬24只,结扎左冠状动脉前降支(LAD)近、中段,模型建造成功后,通过直接心肌注射将hVEGF165基因转染缺血部位心肌细胞,应用超声检查及冠状动脉造影(coronary angiography, CAG)进行监测,3 mo后处死,组织学切片观察心肌组织中毛细血管生成情况. 结果: 术后3 mo,CAG显示,治疗组新生血管数目和侧枝血管形成较对照组明显增加,TIMI血流也较对照组明显改善(P<0.05);超声检查显示,治疗组射血期及舒张早期局部心肌运动速度和二尖瓣环舒张早期平均运动速度均较对照组显著增加;组织学检查显示,治疗组心肌内毛细血管数为(41±8)/HP,而对照组为(9±6)/HP(P<0.01). 结论: 犬心肌缺血模型经心肌直接注射pcDNA3.1(-)/VEGF165,能促进心肌血管新生,加速侧枝循环建立,达到改善心功能的目的.     

VEGF基因转染乳鼠心肌细胞移植治疗心梗的研究

目的探讨腺病毒介导血管内皮生长因子165基因(AdVEGF165)转染乳鼠心肌细胞后血管内皮生长因子(VEGF)的表达及移植于大鼠慢性心梗(MI)模型后对心功能的影响。方法体外培养新生大鼠心室肌细胞、标记BrdU、转染AdVEGF165基因;收集培养液上清,ELISA法检测转染细胞VEGF的表达。结扎同种大鼠前降支建立心梗模型,4周后将心梗大鼠随机分为3组,分别注射移植转染心肌细胞(组Ⅰ)、AdVEGF165(组Ⅱ)、和DMEM培养基(组Ⅲ)。超声心动图检测移植前及移植4周后的心功能。处死大鼠,留取心脏标本作HE病理染色及免疫组化检测,并计数血管密度。结果AdVEGF165基因转染的心肌细胞表达VEGF升高,较对照组有显著性差异(P<0.01);超声检测心功提示转染细胞组(组Ⅰ)心功能较其他两组显著改善(P<0.01);免疫组化检测显示,移植细胞在移植区存活;HE染色血管计数显示转染组(组Ⅰ)有更多的新生血管形成(P<0.05)。结论AdVEGF165基因转染心肌细胞后表达分泌VEGF增加,可促进梗死区新生血管形成,改善心肌血供,有利于移植细胞的存活,能更好的改善心功能。     

血管内皮生长因子对小型猪心肌血管生成作用的研究

目的：检测血管内皮生长因子165（VEGF16）能否促进冠状动脉侧枝血管形成并改善心肌局部灌注与功能。方法：小型猪做成慢性心肌缺血模型后,将以腺病毒为载体的重组人VEGF165互补脱氧核糖核酸[(cD-NA)Ad-VEGF165]或β-半乳糖酶cDNA直接注入冠状动脉回旋支分布的心肌内,以心电图门控单光子发射计算机断层摄影术（SPECT）和离体心脏冠状动脉造影（CAG）检测冠状动脉侧枝生成、心肌灌注及功能变化。结果：与对照组和自身用药前SPECT检查相比。Ad-VEGF165治疗后心肌缺血面积（P＜0．01）和最大缺血程度（P＜0．01）明显减小左心室射血分数（P＜0．01）和LCX区局部室壁运动（P＜0．05）明显改善,离体心脏CAG采用Rentrop分级示治疗组侧枝血管生成明显多于对照组（P＜0．05）。结论：Av-VEGF165能诱导心肌侧枝血管形成并改善心肌灌注与运动功能。     

血管内皮细胞生长因子基因转染血管内皮祖细胞移植促进缺血皮瓣存活的实验研究

目的探讨VEGF165基因转染血管内皮祖细胞(EPCs)移植促进缺血皮瓣的血管新生,提高皮瓣存活率。方法体外分离、培养人脐血中EPCs,利用脂质体介导血管内皮细胞生长因子165(VEGF165)基因体外转染EPCs,然后移植于裸鼠随意皮瓣,皮瓣早期断蒂。结果脐血中分离培养的EPCs表达CD34、KDR及CD133,VEGF165基因转染EPCs体外及体内检测均有VEGF165蛋白的表达。转染VEGF165基因的EPCs组和EPCs组移植裸鼠皮瓣后,EPCs整合到缺血部位新生血管中,与对照组的皮瓣存活率分别为97 2% ±2 8%、60 3% ±2 1%、34 2% ±1 8% (P<0 05 ),而且前二组毛细血管密度、血流灌注差异均有统计学意义(P<0 05),较对照组均有明显改善(P<0 05)。术后第7d时三组皮瓣中的EPCs密度分别为136个/mm2 ±10个/mm2、75个/mm2 ±6个/mm2、0个/mm2 (P<0 05 ); 第11天时EPCs密度分别为305个/mm2 ±26个/mm2、199个/mm2 ±18个/mm2、0个/mm2 (P<0 05)。结论脐血中的EPCs体外培养后移植体内可促进缺血皮瓣的血管新生,提高存活率,而转染VEGF165基因的EPCs具有更强大的促血管新生的作用。     

血管内皮生长因子基因转染骨髓间充质干细胞对慢性肾衰竭大鼠血管新生的影响

目的：探讨血管内皮生长因子（ vascular endothelial growth factor , VEGF）基因转染骨髓间充质干细胞（ mesenchy-mal stem cells,MSCs）对慢性肾衰竭（chronic renal failure, CRF）大鼠肾小球内皮细胞修复和血管新生的影响。方法体外分离、培养大鼠MSCs,Ad5-hVEGF-EGFP转染MSCs并观察转染对细胞增殖,分泌VEGF的影响。50只雄性SD大鼠按数字表法随机分为假手术组、慢性肾衰竭组、MSCs移植组、Ad-VEGF注射组和VEGF基因转染的MSCs移植组,每组10只。采用分阶段5／6肾切除术制备大鼠慢性肾衰竭动物模型。假手术组与慢性肾衰竭组于切除右肾之前从该侧肾动脉注射不含血清的改良杜氏伊格尔（DMEM）培养液,其余3组分别给予MSCs,Ad-VEGF和VEGF基因转染的MSCs。8周后检测各组大鼠肾功能,并用免疫组化检测肾小球CD31表达情况。结果 Ad5-hVEGF-EGFP转染后对MSCs细胞增殖无影响,转染后分泌VEGF蛋白较空质粒转染组明显增加（P＜0.05）。 MSCs移植组和VEGF基因转染的MSCs移植组血肌酐（Scr）和尿素氮（BUN）均较慢性肾衰竭组降低（P＜0．05）;与MSCs移植组比较,VEGF基因转染的MSCs移植组Scr和BUN降低更显著（P＜0．05）。慢性肾衰竭组肾小球中CD31表达较假手术组显著降低（P＜0．05）,应用MSCs和VEGF165基因转染的MSCs干预后肾小球中CD31表达有所增加,VEGF基因转染的MSCs组增加更明显（P＜0．05）。结论慢性肾衰竭大鼠给予转染VEGF基因的MSCs移植后毛细血管内皮细胞数量增多,肾脏功能改善;其作用可能与基因转染增加VEGF表达及有利于肾小球毛细血管内皮修复、血管新生有关。     

低氧诱导因子-1α促进内皮祖细胞血管新生的实验研究

目的探讨低氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)在细胞中的过表达是否有利于缺血性疾病的治疗。方法在体外通过腺病毒介导人HIF-1α基因(Ad-HIF-1α)入人外周血内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPC),观察转染后EPC的扩增及迁移功能的改变及其在裸鼠缺血下肢局部的促血管新生作用。结果转染(Ad-HIF-1α)后的EPC在体外细胞扩增数成倍增加,迁移功能改善(P<0．05);移植异种Ad-HIF-12 EPCs至Balb／c鼠缺血下肢后可见外源性EPCs定向作用于缺血部位。Ad-HIF-1αEPCs较对照组进一步促进体内毛细血管数目增加(P<0．05),缺血面积减小(P<0.05)、缺血下肢的坏死／自体离断降低60％。结论在体外,Ad-HIF-1α转染后的EPCs扩增及迁移功能改善;在体内,可促进缺血下肢的局部血管新生。     

神经干细胞与血管内皮祖细胞共移植促进移入缺血再灌注模型大鼠脑内神经干细胞向神经元分化和突触的形成

目的研究神经干细胞与血管内皮祖细胞构建的复合移植体对移植入缺血再灌注模型大鼠缺血半暗区的神经干细胞向神经元分化及突触形成的影响。方法300只SD大鼠根据完全随机原则分为假手术组、缺血对照组、缺血神经干细胞移植组、缺血血管内皮祖细胞移植组和缺血共移植复合体移植组。分离培养新生大鼠海马神经干细胞和外周血管内皮祖细胞,利用神经干细胞和血管内皮祖细胞及层粘连蛋白共建共移植复合体;将神经干细胞、血管内皮祖细胞及共移植复合体分别移入缺血再灌注模型大鼠缺血半暗区,在1、3、7、14、30、60d,利用免疫荧光双标观察神经干细胞向神经元分化情况;免疫组化观察突触素P38在缺血半暗区的表达,RT-PCR检测突触蛋白-Ⅰ和连接蛋白43mRNA在缺血半暗区表达,Western blot法分析突触小泡蛋白在缺血半暗区表达。结果与缺血神经干细胞移植组相比,缺血共移植复合体移植组除1d外,其余各时间点Brdu-神经元特异性烯醇化酶双阳性细胞数增加(P<0.05,P<0.01);突触蛋白-Ⅰ和连接蛋白43mRNA表达增加(P<0.05,P<0.01);突触蛋白-Ⅰ蛋白表达增加(P<0.01,P<0.05);除1、3d外,其余各时间点突触素...     

血管内皮祖细胞对共同植入缺血再灌注模型大鼠脑内的神经干细胞增殖、凋亡和血管形成的调节

目的研究血管内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)与神经干细胞(neuron stem cells,NSCs)构建的复合移植体对移植入缺血再灌注模型大鼠缺血半暗带的神经干细胞增殖、凋亡和血管重建的影响。方法线栓法建大鼠脑缺血再灌注模型;血管内皮祖细胞、层粘连蛋白和神经干细胞构建的移植复合体移入模型鼠脑缺血半暗带;免疫组化观察Brdu标记的移入脑内神经干细胞和缺血半暗带血管新生,免疫荧光双标观察神经干细胞的凋亡情况。结果移植后各时间点Brdu标记的神经干细胞数NSCs+EPCs组明显高于NSCs组(P<0.05);NSCs+EPCs组在各时间点的凋亡率明显低于NSCs组(P<0.05);各时间点NSCs+EPCs组血管新生数量明显多于EPCs组、缺血对照组和NSCs组(P<0.05)。结论血管内皮祖细胞可以促进移植入缺血再灌注模型大鼠缺血半暗带的神经干细胞增殖,减少其凋亡;2种细胞共移植可以促进缺血半暗带的血管新生。     

不同外源性途径干预血管新生对脑缺血模型大鼠神经功能缺失修复的影响

目的探讨脑缺血区血管新生和神经功能缺失修复的关系以及选择较理想的外源性干预途径增加脑缺血区血管新生。方法选择240只SD大鼠分为假手术组、缺血对照组、缺血加VEGF腹腔注射组、缺血加血管内皮祖细胞移植组和缺血加血管内皮因子单克隆抗体组,在1、3、7、14、30、60 d观察各组脑缺血及周边区的血管密度和大鼠的电生理指标(体感诱发电位和运动诱发电位)及行为学(感觉损伤移交实验、轮转跑步机运动功能测定和mNSS改良神经功能评分)。结果缺血加VEGF腹腔注射组、缺血加血管内皮祖细胞移植组的新生血管密度除1 d外其他各时间点均高于缺血对照组(P<0.05),缺血加血管内皮因子单克隆抗体组在后5个时间点新生血管密度小于缺血对照组(P<0.05)。缺血加VEGF腹腔注射组、缺血加血管内皮祖细胞移植组和缺血加血管内皮因子单克隆抗体组在7 d后体感诱发电位和运动诱发电位与缺血对照组有统计学差异(P<0.05)。与缺血对照组相比,缺血加VEGF腹腔注射组、缺血加血管内皮祖细胞移植组和缺血加血管内皮因子单克隆抗体组在3 d后行为学评分有统计学差异(P<0.05)。结论通过外源性干预脑缺血模型大鼠缺血区血管新生,可以影响神经功能缺...     

hVEGF165/Ang-1联合转染对兔缺血心肌血管再生的影响

目的 探讨VEGF/Ang-1基因联合转染对缺血心肌区域血管再生及血管成熟的影响.方法 建立兔心肌缺血模型,实验动物随机分为5组(每组5只):hVEGF165/Ang-1双基因联合转染组(A组),hVEGF165单基因转染组(B组),Ang-1单基因转染组(C组),单纯梗死组(D组),正常对照组(E组).冠状动脉左前降支(LAD)结扎后在缺血心肌区域直接注射的方法转染 rAAV-9HRE-hVEGF165和(或)rAAV-TRE-Tight-Ang-1;Fitc-lectin和α-SMA免疫荧光染色,观察缺血心肌区域血管新生及成熟情况.结果 与B、C、D组相比,A组Fitc-lectin和α-SMA阳性血管数量显著增多(P<0.05).结论 与单一促血管生成基因转染比较,hVEGF165/Ang-1双基因联合转染可改善兔心肌梗死区域血管再生.     

酸性成纤维细胞生长因子基因转染猪慢性缺血心肌促进侧支血管的增生

目的：探讨人酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)基因重组腺病毒载体（Ad.aFGF)转染缺血心肌后促进侧支血管增生的作用。方法：实验用小型猪开胸于左冠回旋支（Lcx)放置Ameroid环，4周后，将Ad.aFGF(n=7)、Ad.Null(n=6)、PBS（n=6)直接注射到Lcx供血区域，每只10点，每点10^9pfu或100μl；4周后心脏超声检测局部心功能的改善，体外冠状动脉造影观察侧支血管的增生，注射点心肌Ⅷ因子免疫组化染色检测心肌中的新生血管。结果：冠状动脉造影显示Ad.aFGF组较其他两组心肌中有明显的侧支血管增生，局部室壁功能显著提高；Ⅷ因子免疫组化染色显示Ad.aFGF组心肌中新生血管的密度显著高于另两组（P＜0.01)。结论：Ad.aFGF转染慢性缺血心肌后可促进侧支血管增生，可以成为治疗缺血性心脏病的有效途径。     

自体骨髓单个核细胞心肌移植治疗猪慢性缺血性心脏病的实验研究

【目的】探讨自体骨髓单个核细胞心肌移植对猪慢性缺血心肌心功能的改善和促进血管新生的作用。【方法】小型猪左侧开胸在左冠状动脉回旋支起始部放置Ameroid环，4周后进行心脏超声波检测、冠状动脉造影和自体骨髓单个核细胞心肌移植，移植后4周进行心脏超声波检测，免疫组化计数血管密度。【结果】17只猪中有16只猪术后存活8周以上，活体冠状动脉造影显示左冠状动脉回旋支均闭塞。自体骨髓单个核细胞心肌移植组比对照组心功能有显著改善（P〈0．05），移植组的血管数密度显著高于对照组（P〈0．05），差异有统计学意义。【结论】自体骨髓单个核细胞心肌移植可改善慢性缺血心肌的心功能，其机理之一是通过改善缺血心肌的血供来实现。     

血管内皮生长因子转染骨髓间充质干细胞心肌移植对心肌梗死后大鼠心功能及血管新生的作用

目的建立重组人血管内皮生长因子(VEGF)165基因转染大鼠骨髓间充质干细胞(MSC)的方法,探讨该细胞心肌移植对缺血性心脏病心功能及血管新生的影响,并比较联合治疗与单独基因或细胞治疗的疗效差异。方法采用密度梯度离心-贴壁培养法获取Wistar近交系大鼠MSC,用脂质体将pcDNA3.1-hVEGF165转入该细胞,通过ELISA、RT—PCR和Western印迹检测后者VEGF的表达情况;以Wistar近交系大鼠建立心肌缺血模型,随机分成4组(每组12只),心肌梗死模型建立2周后,联合组在心肌梗死区移植转染VEGF165基因的MSC,细胞组移植等量的MSC,基因组注射脂质体-pcDNA3.1-VEGF165DNA复合物,对照组注射等容积培养液;另取12只未结扎冠脉的大鼠为假手术组。细胞移植4周后,用Buxco系统检测心功能;然后处死动物,取心肌标本,测量心肌梗死面积;用5-溴脱氧尿嘧啶(Brdu)、肌钙蛋白T免疫组化双染法确定移植细胞的存活与分化;用Ⅷ因子染色法检测血管新生,RT-PCR法检测VEGF165基因的体内表达情况。结果(1)pcDNA3.1-hVEGF165基因通过脂质体转染大鼠MSC后获稳定表达;(2)移植4周后,联合组心肌梗死面积(27．8％±3．0％)明显低于细胞组(37．0％±10．1％)与基因组(37．1％±5．2％,均P<0．05),心功能改善优于细胞组与基因组;(3)联合组心肌梗死区毛细血管密度(每视野40．2个±5．5个)高于细胞组(27．2个±6．3个,P<0．01)和对照组(18．5个±5．8个,P<0．01),较基因组(35．8个±7．7个)亦有增加的趋势(P=0．189);(4)Brdu、肌钙蛋白T双染示各治疗组心肌梗死区心肌细胞数量不同程度的多于对照组;(5)联合组VEGF基因的体内表达(hVEGFmRNA相对含量0．18±0．04)高于基因组(0．10±0．03,P<0．01)。结论转染VEGF基因的MSC移植可使鼠冠脉结扎造成的心肌梗死面积缩小、心功能明显改善,其疗效优于单独应用基因或细胞治疗,为缺血性心脏病的细胞基因联合治疗提供了理论依据。     

两种内皮祖细胞成血管能力的比较

目的:比较高增殖潜能内皮祖细胞(HPP-EPCs)和循环成血管细胞(CACs)两种内皮祖细胞的成血管能力.方法:利用基质胶上毛细血管样结构的形成实验比较两种细胞的体外成血管能力;利用免疫缺陷的无胸腺裸鼠建立后肢缺血模型评价两种细胞移植后体内促进新生血管形成的能力;并利用荧光标记示踪的方法研究移植的内皮祖细胞能否整合入新生的毛细血管中.结果:HPP-EPCs形成的毛细血管样结构数明显高于CACs(28.6±15.8vs4.7±3.4,P＜0.01).内皮祖细胞移植能增加肢体的保留比例,减少肢体脱失率,促进缺血肢体的血流恢复,而且HPP-EPCs移植组的增加程度较CACs移植组的为高.HPP-EPCs和CACs移植组的毛细血管密度均高于对照组(P＜0.001),且HPP-EPCs高于CACs移植组(P＜0.01).结论:HPP-EPCs较CACs具有更强的成血管能力.     

rAAV2VEGF165与rAAV2ANG-1联合转染促猪缺血心肌血管生成的研究

目的:探讨联合应用血管内皮细胞生长因子(VEGF165) 及血管生成素(ANG-1),对猪慢性缺血心肌中血管生成效应及心功能改善的影响.方法:完全腔镜下放置血管缩窄环于小型猪左冠状动脉回旋支(LCX),建立慢性心肌缺血模型.6周后行心电图、冠状动脉造影和心脏超声检查,确认LCX闭塞或相应心肌的缺血.16只动物随机均分为:单纯注射转染VEGF165组(组Ⅰ,n=4) 、单纯注射转染ANG-1组(组Ⅱ,n=4)、联合注射转染VEGF165与ANG-1组(组Ⅲ,n=4)和注射磷酸盐缓冲液PBS对照组(组Ⅳ,n=4).各组在胸腔镜下,心肌内直接注射rAAV2 ANG-1、rAAV2 VEGF165,剂量为5×1011 vg(virus/genome).治疗后,不同时间点ELISA检测VEGF165和ANG-1蛋白的分泌,冠状动脉造影观察侧枝循环形成的情况,行心脏超声检查观察左心室功能变化.3个月后取注射部位心肌,用Western blot检测VEGF165和ANG-1蛋白的表达情况,免疫组织化学观察心肌毛细血管密度与微小动脉生成情况.结果:放置血管缩窄环后6周,所有动物均出现LCX完全/次全闭塞,或LCX支配区域的心肌缺血.Ⅰ、Ⅲ两组猪体内的VEGF165蛋白分泌水平从基因转染后第7天开始上升,并于第14天达到高峰,随后逐渐下降,尤以Ⅰ组分泌水平为高;其它两组各时间点及组间的VEGF165蛋白分泌水平差异无统计学意义(P>0.05).同样,Ⅱ、Ⅲ两组猪体内的ANG-1蛋白分泌水平的变化与VEGF165蛋白分泌水平类似,尤以Ⅱ组分泌水平为高(P<0.01);其它两组各时间点及组间的ANG-1蛋白分泌水平差异无统计学意义;组Ⅲ中VEGF165与ANG-1蛋白水平变化同步.Western blot检测显示,基因治疗后3个月,组Ⅲ VEGF165、ANG-1蛋白水平都显著高于组Ⅳ(P<0.01),组Ⅲ与组Ⅰ间VEGF165蛋白表达无显著差异(P ＞0.05),组Ⅲ与组Ⅱ间ANG-1蛋白表达差异无统计学意义(P＞0.05).基因治疗3个月后,组Ⅲ左心室室腔缩小,心肌收缩力增强,LCX及其分支较基因转染前增粗、迂回,左回旋支发出侧支,左回旋支远端重新有造影剂充填.组Ⅰ、Ⅱ则有不同程度心肌收缩力增强,充盈改善,但均较组Ⅲ改善幅度小,回旋支见少许造影剂充填,但较组Ⅲ明显少,组Ⅳ处理前后无明显改变.超声检查显示,模型建立术后6周,左心室下壁及后壁变薄,局部运动减弱、不协调,收缩异常;基因转染后1个月、3个月,组Ⅰ、组Ⅱ、组Ⅲ心功能都较转染前有明显改善,组Ⅳ无明显变化;组Ⅲ 的EF与FS改善程度要明显好于其他各组.CD34免疫组化染色评价血管密度,组Ⅲ缺血区血管计数高于组Ⅰ、组Ⅱ,差异有统计学意义(P<0.05),对照组Ⅳ的心肌内毛细血管数目很少.应用α-SMA免疫组化染色评价小动脉形成,结果提示,基因转染3个月后组Ⅳ心肌中小动脉密度最低,其余各组心肌中均有较多的小动脉新生,尤以组Ⅲ最为显著.结论:完全腔镜下放置血管缩窄环及完成心肌内注射切实可行,在胸腔镜下建立的小型猪慢性心肌缺血模型中,心肌内注射rAAV2 VEGF165 、rAAV2 ANG-1可以有效地转染小型猪心肌组织,外源基因长期稳定表达,同时ANG-1能协同VEGF165作用,从而显著地提高其促进缺血心肌毛细血管和小动脉生成,促进有效侧枝循环形成并改善心功能.     

VEGF165基因转染的内皮祖细胞移植对大鼠肾脏缺血再灌注后的保护作用

评估VEGF165基因转染的内源性内皮祖细胞(EPCs)移植治疗肾脏缺血再灌注损伤(IRI)的作用,进一步完善EPCs对肾脏IRI产生保护作用的旁分泌机制。利用重组腺病毒载体Ad-VEGF165感染EPCs,并进行转染效率鉴定。并进一步移植治疗大鼠肾脏IRI,术后24h和72h分别评估血清肌酐及尿素氮水平;组织病理学检查评估各组大鼠术后肾损伤程度;Western blot检测大鼠肾脏IRI中血管内皮生长因子 (VEGF)、血管生成素-1 (Ang-1)及血管生成素-2 (Ang-2) 表达情况。结果发现利用重组腺病毒载体Ad-VEGF165转染的EPCs移植治疗后,大鼠肾脏功能明显改善,术后72h检测大鼠患肾,其内VEGF、Ang-1以及Ang-2表达水平均明显提升。因此,VEGF165基因转染的EPCs移植治疗可以有效的治疗大鼠肾脏IRI,其作用机制可能与EPCs归巢后旁分泌过量VEGF并进一步促进Ang-1、Ang-2等血管新生因子表达,从而促使肾脏血管新生有关。     

VEGF165转染内皮祖细胞移植对大鼠肾脏缺血再灌注的保护作用

目的：评估VEGF165基因转染的内源性内皮祖细胞（endothelial progenitor cells,EPCs）移植治疗肾脏缺血再灌注损伤（ischemia?reperfusion injury,IRI）的作用,进一步阐明EPCs对肾脏IRI产生保护作用的旁分泌机制。方法：40只成年雄性SD大鼠被随机分成4组,其中包括假手术组、缺血再灌注组、EPC移植组、携带VEGF165基因转染组。利用重组腺病毒载体Ad?VEGF165感染EPCs,并进行转染效率鉴定。并进一步移植治疗大鼠肾脏IRI,术后24 h和72 h分别评估血清肌酐及尿素氮水平;组织病理学检查评估各组大鼠术后肾损伤程度;免疫组化染色评估CD31表达情况;Western blot检测大鼠肾脏IRI中血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）、血管生成素?1（Ang?1）及血管生成素?2（Ang?2）表达情况。结果：研究发现利用重组腺病毒载体Ad?VEGF165转染的EPCs移植治疗后,大鼠肾脏血清肌酐、尿素氮水平和肾脏组织病理学明显改善,术后72 h检测大鼠患肾,其CD31、VEGF、Ang?1以及Ang?2表达水平均明显提升。结论：VEGF165基因转染的EPCs移植治疗可以有效治疗大鼠肾脏IRI,其作用机制可能与EPCs归巢后旁分泌过量VEGF并进一步促进Ang?1、Ang?2等血管新生因子表达,从而促使肾脏血管新生有关。     

内皮祖细胞移植对单侧输尿管梗阻大鼠肾小管周毛细血管重建的影响

目的 探讨骨髓内皮祖细胞移植对单侧输尿管梗阻大鼠肾小管周毛细血管重建的影响.方法 应用密度梯度离心法分离骨髓单个核细胞,内皮祖细胞选择性培养液培养后移植到单侧输尿管梗阻大鼠.应用免疫组织化学半定量单侧输尿管梗阻大鼠肾间质微血管密度的改变.应用Western blot检测血管生成素-1(Ang-1)和血管内皮生长因子(VEGF)表达.结果 单侧输尿管结扎模型(UUO)组在术后14、21d肾小管周毛细血管指数较假手术组明显下降(P<0.05),毛细血管变形表现为明显的扭曲、萎缩或扩张.移植组在14、21d肾小管周毛细血管指数(PCI)显著低于假手术组(P<0.05),但高于同期较UUO组(P<0.05).与假手术组比较,UUO组、移植组Ang-1、VEGF表达第7天显著增加,随后迅速下降,而移植组各时相点均高于同期UUO组(P<0.05).结论 内皮祖细胞移植以旁分泌、自分泌机制参与单侧输尿管梗阻大鼠肾小管周毛细血管重建.     

细胞移植在缺血性心脏病血管新生中的应用

作为弥补传统内外科治疗缺血性心脏病的不足,治疗性血管新生已成为挽救缺血性心肌组织的重要方法.通过对外周及造血干细胞中内皮祖细胞(EPC)表面抗原KDR、CD34的识别,对EPC分化和扩增,使其增加血管新生.该文着重就缺血心肌血管的再生机制、内皮祖细胞的来源、体外扩增及靶向定位、细胞表型作了归纳.对于细胞移植用于严重缺血性心脏病患者的临床试验初步显示患者临床症状减轻,MRI显示心肌灌注和心肌功能均有改善,但该研究仍处于Ⅰ期临床阶段,进一步大规模随机双盲试验有待明确细胞移植的长期疗效、靶向性和安全性.