抗肿瘤坏死因子-α 单克隆抗体对肝细胞凋亡和坏死的影响

目的：为了研究抗肿瘤坏死因子α单克隆抗体在肝细胞凋亡和坏死中的作用，方法：我们采用酶联免疫吸附法测定了抗鼠肿瘤坏死因子α（ＴＮＦα）、赖氏法测定谷丙转氨酶（ＡＬＴ）及肝组织病理。结果：模型组血浆ＴＮＦα及ＡＬＴ明显高于正常对照组（Ｐ＜０．０１），而抗ＴＮＦα单抗组血浆ＡＬＴ活性及ＴＮＦα含量较模型组明显降低（Ｐ＜０．０１），肝组织病理检查未发现有肝细胞凋亡和坏死发生。结论：上述结果提示ＴＮＦα单克隆抗体可以阻断实验性肝细胞凋亡和坏死的发生。     

TNF-α体外介导小鼠肝细胞凋亡和坏死

目的探讨TNF-α在体外作用于小鼠肝细胞时肝细胞所发生的病理及生化改变.方法采用原位灌洗法分离小鼠肝细胞,体外培养后分别加入TNF-α,GalN和GalN/TNF-α 5,10,20和30 h后,观察其形态学改变,测定培养上清液ALT和AST,抽提肝组织DNA,琼脂糖凝胶电泳观察生化学性质改变.结果 TNF-α单独作用于培养肝细胞,无肝细胞凋亡和坏死,经GalN致敏后,TNF-α可诱导大量肝细胞凋亡,早期(10 h)为凋亡,随后(20 h以后)出现肝细胞坏死,其程度随培养时间延长和药物剂量的增加而明显.单独使用GalN也可造成肝细胞凋亡和坏死,但程度较GalN/TNF-α合用轻.结论 TNF-α可诱导肝细胞凋亡和坏死,但须有肝细胞转录过程的抑制.     

TNF-α对肺泡Ⅱ型上皮细胞增殖能力的影响

目的探讨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对肺泡Ⅱ型上皮细胞株A549增殖及凋亡的影响。方法将2003年2月至2004年1月中国医科大学附属第一医院放射肿瘤科实验室的肺泡Ⅱ型上皮细胞株A549用TNF-α处理后计算存活细胞数,四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定细胞增殖能力,流式细胞仪检测细胞凋亡。结果TNF-α浓度和时间依赖性地抑制肺泡上皮细胞的增殖;TNF-α培养肺泡Ⅱ型上皮细胞12~48h后,凋亡的细胞数(%)明显高于对照组。结论TNF-α通过抑制肺泡Ⅱ型上皮细胞增殖和促进其凋亡,损伤肺泡上皮细胞,导致肺损伤。     

抗TNF-α蛋白Fab抗体的制备和鉴定

目的制备人源性抗肿瘤坏死因子（TNF）-α蛋白的可溶性Fab抗体。方法用固相化的TNF-α蛋白从人天然Fab噬菌体抗体库中筛选出表达抗TNF-α蛋白Fab抗体的阳性克隆,经酶切及连接反应构建可溶性表达噬菌粒并转化至大肠杆菌BL21（DE3）pLysS中,IPTG高效可溶性表达,SDS-PAGE及Western blot分析鉴定抗体表达情况,ELISA鉴定其抗原结合活性和特异性。结果筛选并表达了人源性抗TNF-α蛋白的Fab抗体,在非还原SDS-PAGE中形成相对分子质量47 kD的条带;Western blot分析证实表达的蛋白即Fab抗体;ELISA筛选出的2株抗体（TA-04、TA-13）具有良好的抗原特异性和抗原结合活性,与小牛血清白蛋白无交叉反应。结论成功制备并鉴定了人源性抗TNF-α蛋白的可溶性Fab抗体。     

抗肿瘤坏死因子-α单克隆抗体与小鼠发生慢性结肠炎的关系

目的探讨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)在实验性小鼠慢性结肠炎发病过程中的作用。方法1999-04~2002-05比利时鲁汶大学医学院和郑州大学第一附属医院使用严重联合免疫缺陷型(SCID)小鼠,并体内移植入同基因源性CD45RB CD4 T细胞诱发慢性结肠炎发生。此结肠炎小鼠接受抗TNF-α单抗治疗,观察其疗效并研究其作用机制。结果当CD45RBhigh、CD4 T细胞植入SCID小鼠4周后,结肠黏膜有大量炎性细胞浸润,TNF-mRNA水平明显升高。抗TNF-单克隆抗体治疗有效地阻断慢性结肠炎发生,降低结肠黏膜内CD4 T细胞和单核巨噬细胞浸润,并显著地降低肠黏膜固有层CD4 T细胞白细胞介素-2(IL-2)和干扰素(INF)分泌。结论TNF-α参与慢性结肠炎的病理生理过程。阻断TNF-α体内分泌和效应应答可用于慢性结肠炎的临床治疗。     

抗肿瘤坏死因子-α治疗的研究进展

肿瘤坏死因子(TNF)-α的过量表达与很多疾病密切相关,研究表明:适量的TNF-α在宿主抵抗微生物入侵和抑制肿瘤产生的防御系统中起着关键作用,但过量的TNF-α与其它炎性因子一起产生多种病理性损伤.以TNF-α为靶点开发的药物包括:抑制TNF-α生成的药物和直接作用于TNF-α中和其活性的药物,这些药物从不同层次不同水平抑制TNF-α的产生和发生作用从而达到抗TNF-α治疗的目的.本文就这些抗TNF-α治疗的研究进展作一综述.     

肿瘤坏死因子—α单克隆抗体阻断肝坏死发生的实验研究

利用丙酸杆菌和内毒素引起的肝坏死模型进行了鼠肿瘤坏死因子－α（ＴＮＦ－α）单克隆抗体阻断肝坏死发生的研究。其结果：（１）鼠ＴＮＦ－α单克隆抗体有效地中和或清除了小白鼠血中的ＴＮＦ－α；（２）投与鼠ＴＮＦ－α单克隆抗体后，２４小时死亡率为１７％，较对照组（８３％）明显降低；（３）血清转氨酶明显降低，被抑制在丙酸杆菌单独投与组小白鼠血清转氨酶的水平；（４）肝组织学未发现大片肝坏死。上述结果说明ＴＮＦ－     

血管内皮生长因子拮抗内皮细胞凋亡的实验研究

目的:研究血管内皮生长因子(VEGF)对血管内皮细胞凋亡及凋亡相关基因Bcl-2与apo-1/Fas mRNA表达的影响。方法:将体外培养的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)分成对照组、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)处理组、TNF-α加VEGF处理组;采用原位末端标记法、流式细胞术观察各组细胞的凋亡发生情况,通过RT-PCR法观察各组细胞中凋亡相关基因Bcl-2与apo-1/Fas mRNA表达的变化。结果:TNF-α处理组凋亡细胞和apo-1/Fas mRNA的表达明显高于对照组和TNF-α加VEGF处理组,而Bcl-2 mRNA表达情况相反。结论:VEGF能拮抗TNF-α诱导的内皮细胞凋亡,其抗凋亡的机制可能与其上调Bcl-2 mRNA表达与下调apo-1/Fas mRNA表达有关。     

hTNF-α基因转导的小鼠肝癌细胞株H22的某些生物学行为

目的：为制备有效的细胞因子基因修饰瘤苗,观察人肿瘤坏死因子α（ｈＴＮＦ－α）基因修饰前后是否有生物学行为的改变。方法：将含信号肽的ｈＴＮＦ－α ｃＤＮＡ基因用逆转录病毒载体导入小鼠肝癌细胞株Ｈ２２中,用Ｇ４１８筛选、克隆和扩增。经分子生物学方法和细胞生物学方法对基因修饰的正确性、表达和分泌进行了鉴定。结果：ｈＴＮＦ－α基因整合至Ｈ２２细胞基因组ＤＮＡ中,未发生重排,并表达外源ｈＴＮＦ－α。ｈＴＮＦ－α基因修饰的肿瘤细胞表面形态有很大的变化。有些经ｈＴＮＦ－α基因修饰的Ｈ２２克隆,Ｈ－２Ｉ类抗原表达增强,提高肿瘤细胞免疫原性,间接诱导机体抗肿瘤免疫。结论：为进一步选择较好的Ｈ２２－ｈＴＮＦ－α克隆进行动物体内试验打下基础。     

肿瘤坏死因子-α与酒精性肝病

酒精性肝病(alcoholic liver disease,ALD)的发生、发展过程与体内多种细胞因子,特别是肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-alpha,TNF-α)的过渡表达密切相关。TNF-α引起肝细胞凋亡与炎症反应等,并且可能与ALD发病的性别差异有关,抗TNF-α治疗明显减轻酒精引起的肝损害。     

肿瘤坏死因子-α与酒精性肝病

酒精性肝病（alcoholic liver disease，ALD）的发生、发展过程与体内多种细胞因子，特别是肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-alpha，TNF-α）的过渡表达密切相关。TNF-α引起肝细胞凋亡与炎症反应等，并且可能与ALD发病的性别差异有关，抗TNF-α治疗明显减轻酒精引起的肝损害。     

肿瘤坏死因子－α单克隆抗体阻断肝坏死发生的实验研究

利用丙酸杆菌和内毒素引起的肝坏死模型进行了鼠肿瘤坏死因子－α（ＴＮＦ－α）单克隆抗体阻断肝坏死发生的研究。其结果：（１）鼠ＴＮＦ－α单克隆抗体有效地中和或清除了小白鼠血中的ＴＮＦ－α；（２）投与鼠ＴＮＦ－α单克隆抗体后，２４小时死亡率为１７％，较对照组（８３％）明显降低；（３）血清转氨酶明显降低，被抑制在丙酸杆菌单独投与组小白鼠血清转氨酶的水平；（４）肝组织学未发现大片肝坏死。上述结果说明ＴＮＦ－α单克隆抗体可以阻断实验性肝坏死的发生，进一步证明了ＴＮＦ－α是肝坏死发生的重要因子。     

肝病患者血清TNFα和sTNFαR的相关关系及临床意义初探

采用ＥＬＩＳＡ双抗体夹心法和＾３Ｈ－ＴｄＲ释放法分别对１７６例各种肝病患者及３６例正常人血清ＴＮＦα和ｓＴＮＦαＲ进行测定。结果发现各种肝病患者血清ＴＮＦα和ｓＴＮＦαＲ均明显高于正常对照组（Ｐ〈０．０５），ＴＮＦα和ｓＴＮＦαＲ呈明显正相关。ＰＨＣ和ＣＡＨ患者血清ｓＴＮＦαＲ１／ｓＴＮＦαＦαＲ２比值明显升高；而ＭＨＣ和ＣＰＨ患者血清ｓＴＭＦαＲ／ｓＴＮＦ－Ｒ呃比值则明显减小（Ｐ〈０．０５）。疗     

骨髓间充质干细胞拮抗氧化型低密度脂蛋白

目的 探讨骨髓间充质干细胞(MSC)对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)凋亡的影响及有关机制.方法 将对数生长期的HUVEC分成三组:对照组单纯培养HUVEC;ox-LDL组的HUVEC给予100 mg/L ox-LDL培养24 h;ox-LDL+ MSC组使用细胞培养池共同培养HUVEC和MSC,并加入100mg/L ox-LDL培养24 h.采用流式细胞术检测HUVEC的凋亡情况,采用ELISA检测细胞培养上清液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)和血管内皮生长因子(VEGF)的含量,并通过Real-timePCR检测HUVEC中凋亡相关基因Bcl-2与Bax mRNA的表达情况.结果 在100 mg/L ox-LDL作用24 h后,细胞凋亡率明显上升,细胞培养上清液中TNF-α、VEGF含量明显上升,Bcl-2 mRNA表达下调,而Bax mRNA表达上调.MSC与HUVEC共培养可增加上清液中VEGF含量,减少TNF-α含量,上调Bcl-2 mRNA表达,下调Bax mRNA表达,使内皮细胞凋亡率明显下降.结论 MSC可以拮抗ox-LDL诱导的血管内皮细胞凋亡,可能与其分泌VEGF、抑制炎性反应并上调Bcl-2 mRNA表达及下调BaxmRNA表达有关,为MSC治疗动脉粥样硬化等内皮损伤性疾病进一步提供了理论基础.     

TNFα诱导大肠癌细胞凋亡的实验研究

目的:探索肿瘤坏死因子α(TNFα)诱导人大肠癌细胞凋亡的可能性及其发生规律。方法用细胞体外培养方法,以TNFα不同剂量、不同时间作用于人大肠癌Lovo细胞,经Hoechst33258荧光染色,光镜观察细胞的形态改变;DNA抽提、琼脂糖凝胶电泳,检测DNA断裂情况。结果:TNFα1×10~5μ/ml作用12—48h和1×10~4—1×10~5μ/ml作用48h,Lovo细胞出现逐渐明显的凋亡形态学改变;1×10~5μ/ml作用48h,DNA电泳出现显示凋亡特性的梯形条带。结论 TNFα能够诱导人大肠癌Lovo细胞凋亡,并存在时间与剂量效应。     

TNFα诱导大肠癌细胞凋亡的实验研究

目的探索肿瘤坏死因子α(TNF_α)诱导人大肠癌细胞凋亡的可能性及其发生规律。方法用细胞体外培养方法,以TNF_α不同剂量、不同时间作用于人大肠癌Lovo细胞,经Hoechsl 33258荧光染色,光镜观察细胞的形态改变;DNA抽提、琼脂糖凝胶电泳,检则DNA断裂情况。结果TNFal×10~5μ/ml作用12-48h和J×10~4-1 x10~5μ/ml作用48h.Lovo细胞出现逐渐明显的凋亡形态学改变;1×10~5μ/ml作用48h.DNA电泳出现显示凋亡特性的梯形条带。结论TNF_α能够诱导人大肠癌Lovo细胞凋亡,并存在时间与效果效应。     

TGF-α、TNF-α和VEGF对人嗜铬细胞瘤细胞增殖和凋亡的影响

目的研究转化生长因子α(TGFα)、肿瘤坏死因子α(TNFα)和血管内皮细胞生长因子(VEGF)对原代培养的人嗜铬细胞瘤细胞增殖和凋亡的影响。方法用噻唑兰(MTT)法观察TGFα、TNFα和VEGF对原代培养的人嗜铬细胞瘤细胞增殖的作用;用PI染色流式细胞分析、Hochest33342染色的方法检测上述细胞因子对人嗜铬细胞瘤细胞凋亡的影响。结果0.1～100μg/L的TGFα、TNFα和VEGF均促进人嗜铬细胞瘤细胞增殖。无血清培养72h,人嗜铬细胞瘤细胞的凋亡率为3.98%,100μg/L的TGFα、TNFα和VEGF对其凋亡无明显影响。结论TGFα、TNFα和VEGF刺激原代培养的人嗜铬细胞瘤细胞增殖,但对其凋亡无明显影响。     

抗肿瘤坏死因子-α单克隆抗体与小鼠发生慢性结肠炎的关系

目的探讨肿瘤坏死因子-α（TNF-α）在实验性小鼠慢性结肠炎发病过程中的作用。方法1999-04～2002-05比利时鲁汶大学医学院和郑州大学第一附属医院使用严重联合免疫缺陷型（SCID）小鼠，并体内移植入同基因源性CD45RB CD4^＋细胞诱发慢性结肠炎发生。此结肠炎小鼠接受抗TNF-α单抗治疗，观察其疗效并研究其作用机制。结果当CD45RB^high、CD4^＋ T细胞植入SCID小鼠4周后。结肠黏膜有大量炎性细胞浸润，TNF-mRNA水平明显升高。抗TNF-单克隆抗体治疗有效地阻断慢性结肠炎发生，降低结肠黏膜内CD4^＋T细胞和单核巨噬细胞浸润，并显著地降低肠黏膜固有层CD4^＋细胞白细胞介素-2（IL-2）和干扰素（INF）分泌。结论TNF-α参与慢性结肠炎的病理生理过程。阻断TNF-α体内分泌和效应应答可用于慢性结肠炎的临床治疗。     

高血压性脑出血患者血肿周围组织肿瘤坏死因子-α表达与血清肿瘤坏死因子-α含量和细胞凋亡的关系

目的 探讨高血压性脑出血患者血肿周围组织肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α ,TNF-α)表达与血清TNF-α含量和血肿周围组织细胞凋亡的关系.方法 30例高血压性脑出血患者根据发病到手术时间随机分为<6 h组、6～12 h组、12～24 h组、24～48 h组、48～72 h组和>72 h组(每组n=5),各组患者临床基本情况、出血量、出血部位、术前格拉斯哥昏迷量表评分和手术持续时间均无显著差异.酶联免疫吸附双抗体夹心检测血清TNF-α含量,免疫组化法检测血肿周围组织TNF-α表达,TUNEL染色法检测血肿周围组织凋亡细胞.结果 血肿周围组织TNF-α阳性细胞数量和血清TNF-α含量分别在出血后12～24 h和24～48 h达高峰,分别为(57.81±6.21)个/高倍视野和(78.45±7.17)pg/ml,且两者呈正相关(r=O.924,P<0.05);血肿周围组织TNF-α阳性细胞数量与凋亡细胞数量呈正相关(r=0.871,P<0.05).结论 高血压性脑出血患者血清TNF-α含量显著增高,血肿周围组织TNF-α阳性细胞数量和凋亡细胞数量均显著增加.血清TNF-α含量与血肿周围组织TNF-α阳性细胞和凋亡细胞数量呈正相关.     

TNF-alpha体外介导小鼠肝细胞凋亡和坏死

目的探讨TNF-α在体外作用于小鼠肝细胞时肝细胞所发生的病理及生化改变.方法采用原位灌洗法分离小鼠肝细胞,体外培养后分别加入TNF-α,GalN和GalN/TNF-α 5,10,20和30 h后,观察其形态学改变,测定培养上清液ALT和AST,抽提肝组织DNA,琼脂糖凝胶电泳观察生化学性质改变.结果 TNF-α单独作用于培养肝细胞,无肝细胞凋亡和坏死,经GalN致敏后,TNF-α可诱导大量肝细胞凋亡,早期(10 h)为凋亡,随后(20 h以后)出现肝细胞坏死,其程度随培养时间延长和药物剂量的增加而明显.单独使用GalN也可造成肝细胞凋亡和坏死,但程度较GalN/TNF-α合用轻.结论 TNF-α可诱导肝细胞凋亡和坏死,但须有肝细胞转录过程的抑制.