红霉素对哮喘大鼠外周血单个核细胞ERK/NF-κB信号通路的影响

目的：探讨哮喘大鼠外周血单个核细胞（PBMCs）ERK/NF-κB信号通路的变化及红霉素的干预作用。方法：分离培养正常对照组、哮喘组、红霉素处理组大鼠的PBMCs。分别采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）、Western Blotting技术检测PBMCs ERK mRNA、NF-κB mRNA、磷酸化ERK、NF-κB的表达。结果：哮喘组PBMCsERK mRNA、NF-κB mRNA、磷酸化ERK、NF-κB表达水平较正常对照组显著升高（P均〈0.05）,红霉素处理组PBMCs ERK mRNA、NF-κBmRNA、磷酸化ERK、NF-κB表达水平均较哮喘组显著降低（P均〈0.05）。通过直线相关分析发现,PBMCs磷酸化ERK与NF-κB表达呈显著正相关（r=0.693,P〈0.01）。结论：PBMCsERK/NF-κB信号通路可能参与支气管哮喘的病理生理过程,而红霉素可能通过作用于ERK/NF-κB信号通路发挥其抗炎效应。     

红霉素对哮喘大鼠磷酸化P38及Th2类细胞因子的影响

目的：探讨红霉素对哮喘大鼠磷酸化P38及Th2类细胞因子的影响。方法：分离培养正常对照组、哮喘组、红霉素处理组大鼠的外周血单核细胞（PBMCs）。分别采用ELISA方法检测细胞上清液中IL-4、IL-5、IL-13浓度。逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）、Western blotting技术检测PBMCs P38mRNA、P38磷酸化蛋白的表达。结果：哮喘组PB-MCs P38mRNA、P38磷酸化蛋白表达水平及细胞上清液中IL-4、IL-5、IL-13的浓度较正常对照组显著升高（P〈0.05） ,红霉素处理组P38 mRNA、磷酸化蛋白表达水平及细胞上清液中IL-4、IL-5、IL-13的浓度较哮喘组显著降低（P〈0 .05）。通过直线相关分析发现,PBMCs P38磷酸化蛋白与细胞上清液中IL-4、IL-5、IL-13的表达水平之间均呈显著正相关（r分别=0 .75、0 .82、0 .70 ,P均〈0 .05）。结论：P38可能参与支气管哮喘的病理生理过程。红霉素可能通过作用于P38这一靶点发挥其免疫调节作用。     

红霉素对哮喘大鼠核因子NF-KB及Th2类细胞因子的影响

目的：探讨红霉素对哮喘大鼠NF-kB、Th2类细胞因子的影响。方法：分离、培养正常对照组、哮喘组、红霉素处理组大鼠的外周血单核细胞（PBMCs）。分别采用ELISA法检测细胞上清液中IL-4、IL-5、IL-13浓度。逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）、Western blotting技术检测PBMCsNF—xBmR—NA、NF．KB蛋白的表达。结果：哮喘组PBMCsmR．NA、NF—kB蛋白表达水平及细胞上清液中IL-4、IL-5、IL-13的浓度较正常对照组显著升高（P〈0．05）,红霉素处理组NF-kB mRNA、NF—kB蛋白表达水平及细胞上清液中IL-4、IL-5、IL-13的浓度较哮喘组显著降低（P〈0．05）。通过直线相关分析发现,PBMCsNF—kB蛋白与细胞上清液中IL-4、IL-5、IL-13的表达水平之间均呈显著正相关（r分别为0．78、0．86、0．71,P均〈0．05）。结论：NF—kB可能参与支气管哮喘的病理生理过程。红霉素可能通过作用于NF—kB这一靶点发挥其免疫调节作用。     

哮喘气道重塑大鼠中磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶的表达对黏液细胞增殖的影响及布地奈德的干预作用

目的：观察磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶在哮喘气道重塑大鼠肺组织的表达及对其黏液细胞增殖的作用及布地奈德对哮喘气道重塑大鼠肺组织中磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶的表达和黏液细胞增殖的干预作用。方法：30只雄性SD大鼠随机分为对照组（C组）、哮喘气道重塑组（A组）、布地奈德治疗组（B组）。建立哮喘气道重塑模型,肺组织用于Masson三色染色、过碘酸．雪夫氏染色,免疫组化染色,光镜电镜观察。结果：光镜及电镜均发现A组明显的气道重塑病理改变,B组较A组有所减轻;图像分析结果：支气管壁厚度及平滑肌厚度比较,A组均明显高于C组,B组明显低于A组,但仍高于C组。气道黏液细胞百分比比较,A组明显高于C组（P〈0．01）,B组明显低于A组（P〈0．05）,但B组仍高于C组（P〈0．01）。各组大鼠气道上皮磷酸化p38MAPK表达的比较,A组明显高于C组（P〈0．01）;B组明显低于A组（P〈0．05）。磷酸化p38MAPK表达水平与黏液细胞百分比呈显著正相关（n=30,r=0．813,P〈0．01）。结论：气道上皮磷酸化p38MAPK表达增加可能促使哮喘气道重塑大鼠黏液细胞增殖;布地奈德能抑制哮喘气道重塑大鼠中磷酸化p38MAPK的表达从而抑制黏液细胞增殖。     

罗红霉素对哮喘大鼠NF—κB及气道炎症的影响

目的：观察罗红霉素对哮喘大鼠NF-κB、气道炎症、气道高反应性的影响。方法：30只雄性SD大鼠随机分成正常对照组（C组）、哮喘组（A组）、罗红霉素组（R组）,每组10只。用卵白蛋白（OVA）制备哮喘大鼠模型。各组大鼠在末次激发后24h,检测气道反应性后放血处死：ELISA测定支气管肺泡灌洗液（BALF）中的IL-4、IL-5、IFN-γ的浓度;免疫组化检测支气管上皮NF-κB p65活化。结果：哮喘组大鼠气道反应性高于对照组（P〈0．01）,罗红霉素组与哮喘组比较气道反应性下降（P〈0．05）;BALF中IL-4、IL-5,哮喘组含量均高于对照组（P〈0．01）,罗红霉素组均低于哮喘组（P〈0．01）,罗红霉素组BALF中IFN-γ低于对照组（P〈0．01）但高于哮喘组;哮喘组大鼠支气管上皮NF-κB蛋白的活化明显高于对照组,罗红霉素组低于哮喘组（P〈0．01）。支气管上皮NF—κB p65活化与BALF中的IL-4、IL-5的含量呈显著正相关（r=0．856,P〈0．01;r=0．912,P〈0．01）;大鼠BALF中的IL-4、IL-5的含量与Raw增加25％时（PC25Raw）呈显著负相关（r=-0．713,P〈0．01;r=-0．772,P〈0．01）,与Cdyn下降15％时（PC15Cdyn）呈显著负相关（r=-0．738,P〈0．01;r=-0．818,P〈0．01）。结论：罗红霉素可能部分通过抑制NF-κB活性而纠正哮喘Th1／Th2细胞因子失衡,罗红霉素降低哮喘大鼠的气道反应性可能和减少IL-4、IL-5的表达有关。     

微囊蛋白-1蛋白参与哮喘气道平滑肌细胞增殖中ERK1／2调控以及罗红霉素的干预

目的：在细胞水平研究微囊蛋白-1（caveo-1in-1）对气道平滑肌细胞（ASMCs）的增殖作用以及对ERK1／2的通路调控,探讨caveolin-1抑制ASMCs增殖的可能机制。方法：复制哮喘大鼠模型,光镜观察肺组织病理变化,透射电镜观察ASMCs上微囊（caveolae）的结构及变化,用组织贴壁法体外培养气道平滑肌细胞,实验设正常对照组（A组）、哮喘组（B组）、ERKl／2信号通路阻断剂PD98059（C组）、罗红霉素组（D组）、caveo—lae结构破坏药物8-甲基环糊精组（E组）;用CCK-8法检测各组细胞的增殖情况,逆转录-聚合酶链测定（RT-PCR）和蛋白质印迹法（WesternBlot）检测ERKmRNA和p-ERK1／2蛋白的表达;WesternBlot法检测各组caveolin-1蛋白细胞表达。结果：CCK-8检测结果显示D组及C组ASMCs增殖反应低于B组,D组（0．59±0．15） vs B组（0．96±0．14）,P〈0．05,C组（0．63±0．11） vs （0．96±0．14）,P〈0．05;E组ASMCs增殖反应较B组进一步活跃（1．26±0．21） vs （0．96±0．14）,P〈0．05。D组及C组ASMCs上caveolin-1的表达较B组明显升高,P〈0．01,pERKl／2蛋白以及ERKInRNA表达较B组降低,E组相反。D组ASMCs的ERK mR-NA和p-ERK1／2蛋白表达水平均显著低于B组及E组（P〈0．01）。结论：caveolin-1可能是ASMCs内信号转导的负调控蛋白,这-作用可能是通过抑制ERK信号通路实现。罗红霉素可能上调caweolin-1蛋白的表达量,抑制ERK mR-NA表达和翻译,从而抑制哮喘大鼠ASMCs的增殖。     

Smad2／3和Smad7蛋白在血中性粒细胞中的表达与哮喘发病关系的实验性研究

目的：观察Smad2／3和Smad7蛋白在大鼠哮喘血中性粒细胞（PMN）中的表达,探讨PMN能否通过Smads体系参与哮喘气道炎症的发病过程。方法：卵白蛋白（OVA）诱导大鼠哮喘模型,20只SD大鼠随机分成哮喘组和正常对照组,分离纯化血PMN,免疫细胞化学法检测PMNSmad2／3和Smad7蛋白的表达水平。结果：哮喘组（0．142±0．021,OD值）Smad2／3蛋白的表达水平显著高于正常对照组（0．081±0．011,OD值）（P〈0．01）,而哮喘组（0．125±0．024,OD值）Smad7蛋白的表达水平显著低于正常对照组（0．257±0．047,OD值）（P〈0．01）。两者的表达呈显著负井目关（n=19,r=-0．891,P〈0．01）。结论：Smads体系在哮喘时处于失衡状态,受体调节型Smad占优势。哮喘时PMN合成Sinad2／3和Smad7蛋白的功能增加,PMN可能部分通过Smads体系参与哮喘的气道炎症过程。     

哮喘大鼠硫化氢含量与胱硫醚-γ-裂解酶mRNA表达的实验性研究

目的：观察哮喘大鼠硫化氢（H2S）含量与胱硫醚-γ-裂解酶（CSE）mRNA的表达,探讨HS和CSE在哮喘发病机制中的作用。方法：采用哮喘大鼠模型,将30只SD大鼠随机分成哮喘组、正常对照组、地塞米松治疗组,分光光度法测定血浆HS的含量,RT-PCR法测定肺组织CSEmRNA的表达水平。结果：哮喘组血浆H2S的含量显著低于正常对照组[（61±16vs84±15）μmol／L,P〈0．01],地塞米松治疗组[（73±16）μmol／L]与哮喘组和正常对照组相比无统计学差异（均P〉0．05）。哮喘组肺组织CSE mRNA的表达水平显著低于正常对照组（0．14±0．02vs0．46±0．05,P〈0．01）,地塞米松治疗组（0．33±0．04）显著性低于正常对照组但高于哮喘组（P均〈0．01）。血浆H2S的含量和肺组织CSE mRNA的表达水平呈显著正相关（n=30,r=0．504,P〈0．01）。结论：哮喘大鼠血浆HS含量与肺组织CSE mRNA的表达水平均下降,它们可能参与了哮喘的炎症过程。地塞米松改善哮喘炎症的机制可能部分通过H1S／CSE体系。     

黄芪提取物对糖尿病大鼠骨骼肌组织胰岛素信号转导的影响

目的：研究黄芪提取物对2型糖尿病大鼠骨骼肌组织胰岛素信号转导的影响。方法：将SD大鼠随机分为正常对照组、黄芪提取物对照组、2型糖尿病组（TIIDM组）和2型糖尿病黄芪提取物治疗组（TIIDM＋EA组），分别给予相对应的饮食或药物，5周后观察大鼠一般情况，测血糖和胰岛素信号转导蛋白的表达。结果：TIIDM组体质量显著高于对照组（P〈0．01）；TIIDM组和TIIDM＋EA组血糖均高于对照组（P〈0．01），TIIDM＋EA组血糖低于TIIDM组（P〈0．01）；TIIDM组骨骼肌组织胰岛素信号转导蛋白的表达均低于对照组（P〈0．01）。两对照组之间各项指标差别无显著性（P〉0．05）。结论：EA可降低TIIDM大鼠血糖和体质量水平，其机制可能与增强糖尿病大鼠骨骼肌组织胰岛素信号转导蛋白的表达，改善胰岛素信号转导有关。     

依达拉奉对创伤性脑损伤大鼠神经细胞凋亡的影响

目的研究依达拉奉对创伤性脑损伤大鼠脑组织细胞凋亡及Bcl-2蛋白表达的影响。方法72只SD大鼠随机分为依达拉奉治疗组、对照组和假手术组，按伤后6、12、24、48h分成12组（每组6只）。建立大鼠自由落体脑损伤模型（Feeney’smodel），用免疫组织化学染色及原位细胞凋亡检测法（TUNEL法）测定各个组大鼠伤后6、12、24、48h脑组织Bcl-2蛋白表达和凋亡细胞数。结果依达拉奉治疗组各时间点细胞凋亡数均明显小于对照组及假手术组的（P〈0．01）；各个时间点的Bcl-2蛋白表达均明显高于对照组及假手术组的（P〈0．01）。结论依达拉奉可以上调创伤性脑损伤大鼠脑组织的Bcl-2蛋白表达，抑制细胞凋亡。     

活化蛋白C经胞外信号调节激酶途径抑制肿瘤坏死因子-α介导的炎症反应

目的观察活化蛋白C(APC)能否经胞外信号调节激酶(ERK)途径抑制肿瘤坏死因子-α(TNF-α)介导的炎症反应。方法分离培养并分成3组:正常对照组、TNF-α组、TNF-α+rhAPC组人脐静脉内皮细胞。分别用ELISA法检测细胞上清液中细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、血管细胞粘附分子-1(VCAM-1)、E-选择素(E-selectin)浓度;用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)与western bloting技术,检测人脐静脉内皮细胞ERKmRNA、磷酸化ERK蛋白的表达。结果 TNF-α组,细胞上清液中ICAM-1、VCAM-1、E-selectin的浓度较正常对照组显著升高(均P<0.05)。TNF-α+rhAPC组,细胞上清液中ICAM-1、VCAM-1、E-selectin的浓度较TNF-α组显著降低(均P<0.05)。TNF-α组,人脐静脉内皮细胞ERK mRNA、磷酸化蛋白表达水平较正常对照组均显著升高(均P<0.05)。TNF-α+rhAPC组,ERK mRNA、磷酸化蛋白表达水平较TNF-α组均显著降低(均P<0.05)。结论活化蛋白C通过抑制黏附分子的产生来调节TNF-α介导的炎症反应,其作用机制之一可能是通过ERK途径来实现。     

The effects of chronic aluminum exposure on learning and memory of rats by observing the changes of Ras/Raf/ERK signal transduction pathway

Objective

To investigate the effects of chronic aluminum (Al) exposure on learning and memory function of rats by observing the changes of Ras/Raf/ERK (Ras/ERK) signaling pathway.

Methods

Eighty weaned Wistar rats were divided into four groups ad libitum, 20 rats in each group. The four groups were fed with drinking water containing 0% (control), 0.2%, 0.4% and 0.6% (Al exposure) AlCl₃ for 3 months individually to set up aluminum exposure models. The laboratory was maintained at 18–23 °C and 45–55% relative humidity. Graphite furnace atomic absorption spectrometry was used to detect the content of Al in brain and blood. Western blot and real-time PCR (RT-PCR) were used to determine the protein and mRNA expression levels for Ras, Raf1, ERK2 and CREB.

Results

Chronic Al exposure increased the content of Al in rats’ blood and brain. It increased expression of Ras in the hippocampi compared with the control but the expression decreased along the Al exposure groups (p < 0.05). Similarly, Raf1, ERK2 and CREB expressions decreased compared to the control in a dose-dependent manner (p < 0.05).

Conclusion

Chronic Al exposure may affect learning and memory through impact on Ras/ERK signal pathway.     

布地奈德对哮喘大鼠中性粒细胞诱导型一氧化氮合酶表达的影响

目的：观察诱导型一氧化氮合酶（iNOS）蛋白在哮喘大鼠血中性粒细胞（PMN）中的表达,探讨PMN参与哮喘炎症的可能机制,并研究布地奈德的影响。方法：采用卵白蛋白（OVA）和Al（OH）3制备大鼠哮喘模型,分离纯化血PMN,免疫细胞化学法检测PMN中iNOS蛋白的表达水平,比色法测定支气管肺泡灌洗液（BALF）中NO浓度。结果：哮喘组大鼠PMN中iNOS蛋白的表达水平显著高于正常对照组（P〈0.01）,布地奈德治疗组PMN中iNOS蛋白的表达水平显著低于哮喘组（P〈0.01）;哮喘组支气管壁iNOS蛋白的表达水平显著高于正常对照组（P〈0.01）,布地奈德治疗组支气管壁iNOS蛋白的表达水平显著低于哮喘组且高于正常对照组（均P〈0.01）;哮喘组BALF中NO浓度显著高于正常对照组（P〈0.01）,布地奈德治疗组BALF中NO浓度显著低于哮喘组（P〈0.01）;PMN中iNOS蛋白的表达水平与BALF中NO浓度呈显著正相关（n=29,r=0.754,P〈0.01）;支气管壁iNOS蛋白的表达水平与BALF中NO浓度呈显著正相关（n=29,r=0.760,P〈0.01）。结论：哮喘大鼠PMN合成iN-OS蛋白的功能增加,PMN可能部分通过iNOS参与哮喘的发病,这种功能可以部分被布地奈德所抑制。     

中重度哮喘急性发作患儿血中EAN-78的表达及甲基强的松龙对其表达的影响

目的：观察中重度哮喘急性发作患儿血中内皮源性中性粒细胞激活肽-78（EAN-78）的表达水平及甲基强的松龙（甲强龙）对其的影响。方法：选择中重度哮喘急性发作患儿为观察对象,分为甲强龙干预前、后组,小儿外科斜疝患儿（无哮喘病史）为对照组,留取外周血标本检测中性粒细胞（PMN）数目,并采用流式细胞术检测EAN-78的含量。结果：观察组血ENA-78水平明显高于对照组（P〈0．01）,其中干预前组血ENA-78水平又明显高于干预后组（P〈0．01）;观察组外周血PMN均分别较对照组明显增高,差异有统计学意义（P〈0．01）,但干预前、后两组外周血PNN计数比较差异无统计学意义（P〉0．05）;甲强龙干预前组血ENA-78的表达与PNN数目呈显著正相关（n=32,r=0．865,P〈0．01）。结论：中重度哮喘急性发作时患儿血中ENA-78的表达及PMN数量是升高的,它们可能共同参与了哮喘发病的炎症过程;甲强龙部分通过抑制ENA-78的表达来减轻气道炎症。     

参归仁合剂对产后抑郁大鼠雌激素和额叶p-CREB及p-ERK1/2的影响

目的 探讨补虚化淤方药参归仁合剂对产后抑郁大鼠模型雌激素(E2)的水平、额叶环磷腺苷反应元件结合蛋白(CREB)、细胞外调节蛋白激酶(ERK1/2)蛋白磷酸化水平表达的影响.方法 将25只SD大鼠,随机分为正常对照组、模型组、参归仁高、低剂量组(14.0、3.5 g·kg-1)、左洛复(盐酸舍曲林)对照组(4.5 mg·kg-1).采用灌胃给药方式,连续30 d.分别取血、额叶组织,采用放射免疫法检测大鼠的E2水平,采用免疫印迹法检测额叶p-CREB、p-ERK1/2的表达水平.结果 与正常组比较,模型组大鼠血清中E2、p-CREB、p-ERK1/2表达的水平明显降低;与模型组比较,参归仁高、低剂量组和左洛复组的额叶p-CREB的表达量明显升高,参归仁低剂量组和左洛复组的额叶p-ERK1/2表达量升高.结论 参归仁合剂能够明显提高PPD大鼠的E2水平,促进额叶p-CREB、p-ERK1/2的表达上调.     

大鼠脑创伤后ERK通路对皮质神经细胞c-fos蛋白表达及凋亡的影响

目的:探讨细胞外调节激酶(ERK)信号转导机制在颅脑创伤中的作用。方法:建立大鼠重型弥漫性颅脑创伤(TBI)模型,92只雄性SD大鼠分为创伤组和对照组,其中创伤组又分为伤后10min、30min、3h、6h、24h、48h和72h7个时相组,采用免疫组化、蛋白印迹方法分别定性、定量检测以上两组ERK的表达,用免疫组化法检测c-fos蛋白表达,用原位末端标记法检测凋亡细胞。结果:创伤组p-ERK1/2和c-fos的表达及TUNEL阳性细胞在不同时间大多高于对照组:创伤组p-ERK1/2蛋白表达在伤后10min已较对照组明显升高(P<0.05),伤后6h达高峰,24h仍有大量表达,仍明显高于对照组(P<0.01),至伤后48h降至对照组水平(P>0.05);创伤组c-fos免疫反应性在伤后10min开始升高(P<0.01),伤后6h达高峰(P<0.01),48h以后明显减弱,但仍高于对照组(P<0.01);镜下对照组未见TUNEL阳性细胞,创伤组伤后3h偶见TUNEL阳性细胞,6h明显增多,48h达高峰,均显著高于对照组(P<0.01)。结论:大鼠脑创伤后ERK通路过度激活,可能通过诱导c-fos蛋白表达,进而导致神经细胞凋亡。