原位杂交检测增生和癌变前列腺组织中前列腺分泌蛋白94 mRNA的表达

根据前列腺分泌蛋白 94(PSP94)和PSP5 7的基因结构特点 ,设计并合成了以地高辛标记的两条探针 ,利用组织原位杂交的方法 ,对增生和癌变前列腺组织中PSP94mRNA的表达量进行了比较。结果显示 ,2 0例增生前列腺组织 ,有 1 0例PSP94和PSP5 7共同探针的杂交信号比PSP94特异探针杂交信号强 ,1 0例相反。它们的共同点是均以腺体增生为主。而 7例前列腺癌组织中除 1例外 ,其余 6例PSP94特异探针的杂交信号均比PSP94和PSP5 7共同探针的杂交信号强。增生和癌变前列腺组织杂交结果比较 ,癌变前列腺组织PSP94特异探针杂交信号均比增生前列腺组织强。     

PSP94—TNFαD11a质粒DNA注射体内表达规律

将带有目的基因PSP94－TNFαD11a的pcDNA3.0质粒DNA，以50μg／只剂量注射到39只雄性昆明小鼠的股四头肌内，第2、3、4、5、10、15、20、25天分别摘眼球取血收集血清，每组3只动物血清混合。同时取注射部位骨骼肌，研磨后离心取上清。用ELSIA方法检测血甭和骨骼骨上清中融合蛋白的表达，观察不同时间的蛋白表达水平。提取14天骨骼肌组织的总RNA，进行RT－PCR分析目的的基因mRNA的表达水平。结果，在裸质粒注射后9天可检出目的蛋白的表达，第14天出现表达高峰，观察至25天仍可检察到蛋白表达。     

正常人前列腺组织PSP mRNA的表达

用ＲＴ－ＰＣＲ和ｃＤＮＡ序列测定法分析５名正常中国人前列腺组织中前列腺分泌蛋白（ＰＳＰ）ｍＲＮＡ的表达。结果表明,在这５名正常前列腺组织中均同是存在ＰＳＰ９４和ＰＳＰ５７ｃＤＮＡ,且基因序列与文献报道的从前列腺癌和增生前列腺组织中获得的完全一致。这可能对ＰＳＰ进一步的基础研究和应用有一定的意义     

人MD-2/GST融合蛋白在大肠杆菌的表达

构建人髓样分化蛋白－2（human myeloid differentiation proterin-2,hMD-2)与谷胱甘肽巯基转移酶（glutathione-S-transferase,GST)的融合蛋白（hMD-2/GST)表达载体PGEX－4T－1／hMD-2，在大肠杆菌中融合表达hMD-2/GST。以真核表达载体PEF－BOS／hMD-2为模板，用PCR法在MD－2编码序列上下游引入酶切位点和终止密码子，将hMD-2编码序列克隆入原核表达载体PGEX－4T－1的相应酶切位点，用PCR和酶切筛选，鉴定重组质粒PGEX－4T－1/hMD-2，并对插入基因片断测序，重组质粒PGEX－4T－1／hMD-2转化大肠杆菌，经IPTG诱导后用SDS－PAGE分析表达产物。结果PCR，酶切鉴定和序列测实MD－2编码序列正向插入原核表达载体PGEX－4T－1的相应酶切位点，片断与PCR扩增产物大小相同，序列无误，阅读框架正确，SDS－PAGE证实hMD-2/GST在大肠杆菌中表达，表达量约占菌体总蛋白的30％，说明成功构建了PEGX－4T－1／hMD-2载体，hMD-2/GST融合蛋白在大肠杆菌中得到初步表达，为MD－2后续研究作了必要的准备。     

一种新的血管生成抑制因子-TSF的设计及表达

目的 选择PF4和TSP1的高活性片段设计融合基因－TSF，在大肠肝菌表达，细胞水平上检测表达产物的生物学活性。方法 PF4的C－末端13肽和TSP1的429－459片断31肽通过Gly-Pro-Gly肽桥设计为融合蛋白－TSF。采用pGEX-2T载体在E.coli JM109中表达TSF蛋白。采用MTT方法测定TSF及其相关性GST－TSF，PF4（58－70），TSP1（429－459）等对血管内皮细胞，平滑肌细胞，QGY7721人肝癌细胞，HLF人肺成纤维细胞等生长的抑制效应。结果 合成的TSF融合基因，克隆到pGEX-2T载体，转化E .coli JM109，获得了TSF蛋白的高效表达。建立了TSF蛋白的纯化复性方法，获得了GST－TSF融合蛋白及TSF蛋白。TSF，GST－TSF，PF4（58－70）和TSP1（429－59）均特异抑制血管内皮细胞的生长，其中TSF的活性最强，活性大小次序为TSF＞GST－TSF＞PF4（58－70）＞TSP1（429－459）。结论 融合表达蛋白－TSF在细胞水平上能高效特异抑制血管内皮细胞的生长。     

RhoA/ROCK Ⅰ信号通路相关蛋白在前列腺癌中的表达

目的观察RhoA和Rho激酶Ⅰ(ROCKⅠ)蛋白在前列腺癌中的表达,探讨RhoA/ROCKⅠ信号传导途径在前列腺癌形成过程中的可能作用。方法选取2005年1月-2008年5月住院手术的前列腺癌患者20例(前列腺癌组),年龄57～86(73±7)岁,行根治性前列腺切除术并留取前列腺癌组织,以及良性前列腺增生患者36例(良性前列腺增生组),年龄50～83(71±7)岁,行尿道前列腺电切除术,留取增生的前列腺组织。免疫组化法测定两组前列腺癌与增生前列腺组织中RhoA和ROCKⅠ蛋白的表达。结果前列腺癌组RhoA和ROCKⅠ蛋白的表达水平(0.225±0.068、0.273±0.070)均明显高于良性前列腺增生组(0.126±0.047、0.176±0.040,P<0.01)。相关分析显示,RhoA与ROCKⅠ蛋白的表达水平呈显著正相关(r=0.487,P<0.01)。结论RhoA和ROCKⅠ蛋白在前列腺癌中表达增加,且高于良性前列腺增生组织;RhoA/ROCKⅠ信号传导途径可能参与了前列腺癌的形成。     

nm23、p53及C-erbB-2癌基因产物在前列腺癌中的表达

用ＬＳＡＢ（Ｌａｂｅｌｅｄｓｔｒｅｐｔａｒｉｄｉｎｂｉｏｔｉｎ）免疫组化方法,对前列腺癌和前列腺增生症进行了肿瘤转移抑制基因ｎｍ２３和癌基因蛋白产物ｐ５３、Ｃ－ｅｒｂＢ－２的表达检测,探讨它们的表达特征与前列腺癌的临床和预后的关系。１材料与方法病理诊...     

PE38与人源化抗肝癌单链抗体重组免疫毒素的构建及表达

目的：构建绿脓杆菌外毒素PE38融合人源化鼠抗肝癌单链抗体（hscFv)原核表达载体，对其产物作初步鉴定，为肝癌的导向治疗奠定基础。方法：采用分子克隆技术，PCR法扩增PE38基因片段，克隆人GST－融合蛋白表达载体pGEX-4T-1-hscFv中，重组克隆载体经酶切及DNA序列测定证实两片段连接正确，受IPTG诱导表达后，SDS－PAGE及Westem blot分析GST融合蛋白结果。结果：成功构建免疫毒素表达载体pGEX-4T-1-hscFv-PE38（以下简称pGEXh-PE38);SDS-PAGE清晰显示Mr为90000的目的蛋白条带，光密度薄层扫描提示表达量为11％，Western blot在相同位置显示蛋白印迹，证实载体构建及表达均正确。结论：利用基因重组技术，在原核细胞中表达重组免疫毒素hscFv-PE38，为尝试肝癌治疗试验的一条有效途径。     

人NPTX2基因原核表达载体构建及重组蛋白的表达纯化

目的 在大肠埃希菌中表达人神经元正五聚蛋白2(NPTX2),并对该重组蛋白进行纯化、鉴定.方法 双酶切 pReceiv-er-M15 NPTX2质粒获得人NPTX2全长cDNA,经Not I 和EcoR I 双酶切后,连接至谷胱甘肽-S-转移酶(GST)融合表达载体pGEX-4T-1中,经限制性酶切、PCR和测序验证正确后,转化至大肠埃希菌BL21(DE3),经IPTG诱导重组蛋白表达,采用Western blotting鉴定表达产物,亲和层析法纯化GST-NPTX2蛋白.结果 经酶切与测序鉴定证实原核重组载体pGEX4T-1-NPTX2构建成功,表达产物相对分子量为70kD左右,与预期值相符,Western blotting证实该蛋白具有免疫反应特异性,亲和层析法获得了纯化的GST-NPTX2蛋白.结论 构建了pGEX-4T-NPTX2原核表达载体,并在大肠埃希菌BL21中诱导表达了GST-NPTX2融合蛋白.亲和纯化获得较高纯度的GST融合蛋白,为下一步继续研究NPTX2的生物学功能奠定了基础.     

E-cadherin蛋白在前列腺癌组织中的表达及临床意义

目的　探讨上皮细胞钙粘素 (E cadherin ,E Cad)在前列腺癌组织中的表达及其临床意义。方法　应用免疫组织化学 (SP)方法测定 42例前列腺癌及 3例正常和 7例良性前列腺增生组织中E Cad蛋白的表达。结果　 42例前列腺癌组织中 2 1例E Cad蛋白表达阳性 ( 5 0 %)。随肿瘤细胞病理分级、临床分期程度的增高 ,癌细胞表达E Cad蛋白阳性率降低 ,高、中分化组 2 2例前列腺癌中 19例E Cad蛋白表达阳性( 86%) ,与低分化组 2 0例中 2例 ( 10 %)阳性表达 ;A +B期和C +D期前列腺癌组织中的阳性表达率分别为 65 5 %( 19/ 2 9)和 15 3 %( 2 / 13 ) ,各组间比较有显著性差异 ( χ2 =2 4 43 ,P <0 0 0 5 ;χ2 =9 0 3 ,P <0 0 0 5 )。而正常和良性前列腺增生组E Cad蛋白均呈阳性免疫反应。结论　E Cad蛋白异常表达在前列腺癌的恶性进展中起重要作用 ,检测E Cad蛋白的表达有利于判断病期及预后。     

消化道肿瘤患者血清甲状腺激素含量、核T_3占据率与甲状腺激素生物效应指标间关系的探讨

本文采用核T_3占据率(q％)代表血清T_3含量与核T_3受体的饱合程度,探讨消化道肿瘤病人血清T_3含量、q％和甲状腺激素(TH)生物效应指标三者之间关系。结果表明:消化道肿瘤病人血清T_3含量下降,TH生物效应常用指标——血清胆固醇含量变化不大,其原因可能系q％尚在正常范围内,血清T_3含量虽下降但不致引起TH生物效应指标的变化。     

肿瘤转移关键酶:人乙酰肝素酶氨基端亚基的表达纯化及鉴定

目的:乙酰肝素酶在肿瘤转移的过程中起重要作用,其氨基端小亚基蛋白(Mr为8×103)对其功能活性是不可缺少的。得到此蛋白将有助于深入研究乙酰肝素酶的功能活性。方法:我们从人胎盘cDNA文库中分离乙酰肝素酶蛋白全长编码基因,将乙酰肝素酶氨基端小亚基的基因克隆入pGE-X2TK,转化大肠杆菌进行融合表达。经发酵,纯化,复性得到乙酰肝素酶的氨基端亚基蛋白。结果:得到6.9g纯度>90%的氨基端小亚基融合蛋白。GSTpull-down实验表明,此融合蛋白可与乙酰肝素酶羧基端大亚基蛋白结合。复性后的融合蛋白可被激酶切割为GST蛋白和乙酰肝素酶氨基端亚基蛋白。结论:所得的乙酰肝素酶的氨基端小亚基蛋白为进一步研究该亚基蛋白在细胞内的免疫亚定位及功能奠定了基础。     

前列腺偶发癌15例诊治分析

目的讨论前列腺偶发癌的发病情况和治疗效果。方法回顾性分析2002～2007年行前列腺电切术及经膀胱前列腺摘除术440例患者的资料,术后病理诊断前列腺癌15例,14例行睾丸切除术并内分泌治疗,1例给予内分泌治疗,随访观察。结果前列腺偶发癌的检出率为3.41%,所有患者随访8个月至8年,未见前列腺癌转移及致死病例。结论前列腺偶发癌的检出率低于国内相关报道,缺乏特异性的临床表现,诊断有赖于术后病理,多数患者可采用手术及内分泌治疗。     

人前列腺特异性抗原的原核表达及多克隆抗体制备

目的：建立人前列腺特异性抗原（prostate specific antigen,PSA）的可溶性大肠杆菌表达系统,获得高活性重组人PSA及多克隆抗体,为临床相关疾病的监测、诊断和治疗提供关键材料。方法：构建可溶性表达载体pET-S1-S2-PSA质粒,采用化学法将pET-S1-S2-PSA质粒转化大肠杆菌BL21（DE3）细胞,IPTG诱导BL21（DE3）细胞表达rPSA,阳离子交换层析纯化rPSA,经Western印迹鉴定后免疫大耳白兔制备PSA抗体,ELISA法检测抗体效价。结果与结论：构建了可溶性表达载体pET-S1-S2-PSA,获得了可溶性高表达rPSA的BL21（DE3）细胞株,并制备了可特异性结合天然PSA的抗体,其效价在1∶20000以上。