鼠疫菌感染兔血清抗体谱分析

目的分析鼠疫耶尔森菌感染的兔血清(鼠疫菌感染兔血清)中抗体产生的种类与规律,为了解鼠疫菌的致病机制及筛选新的疫苗亚单位提供实验依据。方法利用含有145个鼠疫菌毒力相关蛋白的蛋白质芯片检测鼠疫菌感染兔血清抗体谱,并与鼠疫菌活疫苗EV76株免疫兔血清(免疫兔血清)抗体谱比较。结果在鼠疫菌感染兔血清中共检测到41个蛋白相应的抗体,其中28个抗体在免疫兔血清中也检测到,有6个蛋白抗体只在鼠疫菌感染兔血清中检测到。结论鼠疫菌感染兔血清的抗体谱与免疫兔血清的抗体谱不完全一致,通过对鼠疫菌感染兔血清抗体谱的研究,可为深入了解细菌的致病机制及筛选新的疫苗亚单位奠定基础。     

青海省鼠疫患者血清抗体谱研究

目的研究在鼠疫感染过程中,患者对鼠疫耶尔森菌产生体液免疫反应的规律.寻找鼠疫菌新的具有免疫原性的蛋白。方法利用鼠疫耶尔森菌重要毒力相关蛋白芯片对鼠疫患者的血清抗体谱进行检测。结果利用含145个鼠疫耶尔森菌蛋白质的蛋白芯片。共检测到鼠疫患者血清中29个蛋白的抗体。其中13种蛋白的抗体在患者体内明显上升,除已知的8个具有免疫原性的蛋白外,发现了鼠疫菌5个新的具有免疫原性的蛋白(SycE、SycH、OmpA、pH6与YPO2098)。结论这5个新的具有免疫原性的蛋白将是下一步鼠疫疫苗研究的靶点。     

腺鼠疫患者血清抗体谱的研究

目的检测腺鼠疫患者血清抗体谱及抗体随时间变化趋势。方法利用一包含145个鼠疫耶尔森氏菌毒力相关蛋白质的蛋白芯片检测云南腺鼠疫患者血清抗体谱及抗体随时间变化趋势。结果在腺鼠疫患者体内检测到32种蛋白相应的抗体。结论FI抗体产生的速度最快、幅度最高、持续的时间最长;YopM、YopH、YopE抗体升高不明显;V抗体在患者体内未检测到;在发病后14 d才检测到pH6抗原的抗体,3个月时抗体荧光值没有下降,可持续半年。YopD的抗体在部分患者体内明显升高,但在半年后下降到正常水平。     

鼠疫血清抗体谱的研究进展(摘要)

目的 利用蛋白芯片技术对鼠疫血清进行检测,分析其血清抗体谱.方法 用制备好的蛋白芯片和未知的血清进行杂交后荧光检测并数据分析.结果 发现具有抗原性,免疫原性的相关蛋白.结论 通过分析血清抗体谱而得到新的具有免疫原性的蛋白作为潜在的候选疫苗组;得到新的可以用于鼠疫菌诊断的抗原,作为目前血清学检测的辅助诊断抗原;通过对系列血清抗体变化趋势以及不同种属间抗体谱的区别的分析,加深对鼠疫菌致病机制的认识.     

肺鼠疫患者血清蛋白抗体的测定

目的 分析肺鼠疫患者血清中蛋白抗体产生的种类和机体免疫应答能力,为筛选新的疫苗亚单位提供试验依据.方法 利用蛋白微阵列技术构建蛋白芯片.对2例肺鼠疫患者发病后6个月的血清,采用蛋白质芯片(含有149个鼠疫菌毒力相关基因蛋白)技术检测血清中鼠疫蛋白抗体的种类和机体的免疫应答能力.结果 患者1血清中除了YPMT1.23c、YPMT1.86、YP00406、YP01071基因编码的蛋白没检测出相应的蛋白抗体外,其他88种蛋白均检测出相应的蛋白抗体;患者2血清中检测出43种基因编码的蛋白抗体,其他49种没有检查到.有39种基因蛋白抗体在患者1、2血清中都存在,其中有YPMT1.81c、YPMT1.84、rv10、YPCD1.31c、YPCD1.28、YPCD1.58、YPMT1.62c、YP03247共8种蛋白抗体明显升高.与正常值比较,患者1、2血清中8种蛋白抗体升高的阳性倍数分别为:109.96、176.4,20.64、17.73,16.50、7.16,23.51、7.65,46.00、25.61,4.50、8.24,5.98、5.08,23.98、4.76.结论 通过对肺鼠疫患者血清抗体测定,8种蛋白抗体不仅可作为免疫诊断的靶标,同时也是今后亚单位疫苗的研究重点.     

大黄抑制鼠疫耶尔森菌的体外转录组学研究

目的应用鼠疫菌全基因组芯片研究大黄抑制鼠疫菌的分子作用机制。方法液体稀释法测定大黄对鼠疫菌的最低抑菌浓度(MIC),以10倍MIC作用鼠疫菌30min,提取鼠疫菌总RNA,逆转录合成cDNA,荧光素标记,与芯片杂交,扫描仪扫描,应用SAM软件分析结果。结果获得了大黄作用鼠疫菌的表达谱。大黄作用鼠疫菌的明显差异基因为498个,其中上调基因358个,下调140个。结论蛋白质合成基因、细胞膜相关基因、转运结合蛋白基因以及部分热休克基因的改变是大黄抑制鼠疫菌的主要作用机制。     

从表达菌培养液中提取鼠疫菌重组F1抗原

目的从表达鼠疫耶尔森氏菌F1蛋白的诱导培养液中提取纯化重组F1并检测其免疫反应性。方法收集诱导培养后离心去除菌体的培养液,采用硫酸铵沉淀法和PEG浓缩法提取F1蛋白,产物经镍离子金属螯合亲和层析纯化,免疫印迹(Western blot)鉴定其免疫反应性。结果硫酸铵沉淀法和PEG浓缩法均能从培养液中提取到重组F1蛋白,产物经纯化后可与鼠疫疫苗株免疫兔血清和既往鼠疫患者血清发生特异性结合反应。结论该表达菌表达效能较高,在诱导培养液中存在大量具有免疫学活性的重组F1蛋白。     

用鼠疫EV菌对草原雕进行模拟感染的实验报告

1984年4月～1987年4月我们用鼠疫EV菌感染的小白鼠饲喂草原雕(Aquila rapax nipa-lensis)进行了鼠疫模拟感染试验。结果,在收集的吐物中进行鼠疫FI抗原及鼠疫菌检测均为阴性。从受试的草原雕血清中也未能检出FI抗体。用鼠疫EV菌经草原雕皮下注射感染,在其血清中能检出FI抗体,且至少可保持240天。用不同N浓度的HCI及NaOH溶液水解鼠疫EV菌,对用鼠疫EV菌感染的小白鼠在2N以上的HCl及0.4N以上的NaOH溶液中作用12小时,可使小白鼠全部或部分水解,用抗体中和、反向血凝以及细菌学方法对上述溶液进行检测,在1N以上的HCl与0.4N以上的NaOH水解液中未能检测到FI抗原,细菌培养阴性。而在1N以下的HCl与0.4N NaOH以下的水解液中,则能检测到FI抗原,并培养出鼠疫菌。在鼠疫EV菌菌体的水解液中,检出FI抗原及鼠疫菌的N浓度比前者稍低。实验结果证明足够N浓度的酸、碱溶液,作用于EV菌体或感染鼠,均能使菌体蛋白质分解,而丧失抗原性。     

鼠疫菌pYC质粒对菌体蛋白质组影响的初步研究

目的 了解鼠疫菌pYC质粒对菌体蛋白质组的作用。方法 将含有pYC质粒的鼠疫菌与不含该质粒的鼠疫菌通过双向电泳的方法进行蛋白质组比对,并将差异蛋白进行质谱鉴定。结果 含有pYC质粒的鼠疫菌与不含该质粒的鼠疫菌的蛋白图谱可识别的蛋白点均在500个以上,两者总体上相似性较高;前者较后者在大小约70×103、等电点5.0左右处,明显多一个蛋白点簇,该蛋白簇经质谱鉴定均为伴侣蛋白GroEL,但该蛋白并非是pYC质粒编码蛋白。结论 pYC质粒对菌体蛋白质组有影响,其编码蛋白pYC_p10与pYC_p11,可能调控GroEL高表达。     

黄连素作用鼠疫耶尔森菌的体外表达谱

目的 探讨黄连索抑制鼠疫耶尔森菌(简称鼠疫菌)作用的分子机制.方法 应用鼠疫菌全基因组芯片表达谱进行黄连素作用鼠疫菌研究.液体稀释法测定黄连索作用鼠疫菌的最小抑菌浓度(MIC).应用10倍MIC的黄连索作用于鼠疫菌30 min后,提取鼠疫菌总RNA,反转录合成eDNA,Cy3,Cy5荧光染料标记,芯片杂交,扫描仪扫描,SAM软件分析结果 .结果 在鼠疫菌全基因组范围内黄连素作用鼠疫菌的明显差异表达基因有360个.其中明显上调基因333个,下调基因27个.依据鼠疫菌CO92株基冈功能分类结果 ,这些差异基因分属24个不同的功能类群,其中主要有细胞膜相关基冈83个,未知功能基因75个,转运结合蛋白基因48个.发生明显改变的基因功能类群是代谢相关基因,共有40个.结论 获得了黄连素作用鼠疫菌的表达谱.阐述了黄连作用鼠疫菌的分子机制,主要机制在于影响代谢相关基因的上调.     

Serologic survey of the sentinel animals for plague surveillance and screening for complementary diagnostic markers to F1 antigen by protein microarray

Plague is a deadly infectious disease caused by the gram-negative bacterium, Yersinia pestis. In 2005, five plague patients were confirmed in the Yulong County of the Yunnan Province, China. In this study, the serologic survey of > 2,900 serum samples from domestic dogs and cats in and around the county, where human plague occurred, confirmed that domestic dogs and cats could serve as sentinel animals for plague surveillance. Meanwhile, the antibody responses in the infected dogs and cats were profiled by microarray containing 218 proteins of Y. pestis. In addition to F1, LcrV, YPCD1.28c, and YPO2118 induced humoral responses in all or most of the individuals, providing complementary candidates to F1 antigen for diagnostic markers of plague.     

胶体金免疫层析测试条快速诊断鼠疫应用研究

目的观察胶体金免疫层析测试条快速诊断鼠疫的效果。方法用胶体金免疫层析抗体(抗原)测试条与鼠疫间接血凝试验(IHA)/反向间接血凝试验(RIHA)两种方法平行检测鼠疫的抗体(或抗原)。结果通过对实验感染动物、青海鼠疫疫源地内鼠疫患者(尸体)及染疫动物等396份样品的检测,两种方法符合率为100%。结论胶体金免疫层析法操作简单、方便、快速,适用于现场应用和鼠疫的快速诊断。     

云南省不同型鼠疫自然疫源地鼠疫菌生化特性比较

目的 通过对云南省不同流行地区、宿主、媒介分离出的鼠疫菌生化特性及毒力因子Pst Ⅰ的鉴定结果,比较云南省家、野鼠型鼠疫自然疫源地及新发现玉龙县鼠疫疫源地鼠疫菌生化特性的差别及疫源地相互之间的联系.方法 采用资料回顾方法,收集用试管法鉴定的云南省218株鼠疫菌生化特性(酵解鼠李糖、甘油、麦芽糖、阿胶糖、密二糖)和毒力因子Pst Ⅰ的结果,利用SAS 8.0统计软件进行汇总,采用双向无序R×C表χ2检验的Fisher确切概毕法对鉴定结果进行分析.结果 收集野鼠型鼠疫疫源地鼠疫菌48株.其中有1株发酵麦芽糖,48株均发酵甘油;收集家鼠型鼠疫疫源地鼠疫菌165株,其中有1株不发酵麦芽糖、发酵甘油,1株脱氮阴性,属变异菌株;收集玉龙县新分离鼠疫菌5株,均发酵甘油、麦芽糖.对不同疫源地鼠疫菌麦芽糖、甘油发酵试验结果进行比较,差异有统计学意义(P<0.01);对鼠疫菌鼠李糖、阿胶糖、密二糖发酵试验和毒力因子Pst Ⅰ进行比较.差异无统计学意义(P>0.01).结论 云南省不同型鼠疫自然疫源地鼠疫菌生化特性不同,其中家、野鼠型疫源地鼠疫菌生化特性有交串现象;玉龙县鼠疫菌生化特性与家、野鼠型疫源地鼠疫菌截然不同,与西藏北部旱獭鼠疫菌的生化特性接近.     

鼠疫耶尔森氏菌快速检测研究进展

目的论述一套对鼠疫耶尔森氏菌特异性强、快速、灵敏度高的快速检测方法,对鼠疫做到早发现、早预防、早诊断、早治疗,预防和控制鼠疫的发生和流行。方法查阅和收集国内外相关鼠疫耶尔森氏菌快速检测的文献和资料。结果鼠疫耶尔森氏菌检测技术向着快速、敏感、特异的标准化和国际化方向发展,其检测技术更加先进、齐全、完备。结论鼠疫耶尔森氏菌的检测技术从细菌学、血清学及分子生物学等正向更快速、更先进的方向发展,这对鼠疫防治将发挥重要作用。     

广西鼠疫菌生物学性状的研究

目的 研究广西鼠疫菌生化特性，确定该地区鼠疫疫源地的性质。方法 包括糖醇酵解试验、毒力因子检测、脱氮反应、营养需求等，采用Kado温和法提取质粒。结果 广西鼠疫菌对麦芽糖、阿胶糖酵解，而对鼠李糖、甘油不酵解。毒力因子(pgm)6株阳性，5株弱阳性、4株阴性。31株鼠疫菌经质粒图谱分析，其中2株菌缺失65MD，1株菌携带111MD大质粒，其余均含有4,6、45和65MD质粒。结论 按中国鼠疫菌生态分型标准，被试菌株属滇西闽居民区型。     

隆林县鼠疫暴发的流行病学特征及防治效果分析

目的 分析隆林县2000年鼠疫疫情的流行病学特征。方法 对疫区鼠疫病例进行个案调查和描述性分析，用IHA法检测指示动物、鼠和人血清中鼠疫FI抗体。结果 鼠疫疫情波及2个乡(镇)7个村13个自然屯及1个水泥厂，共发生腺鼠疫病人42例，发病率达1．06％。7月份为发病高峰，病人多为天生桥水库库区后靠移民，以0-29岁青少年儿童为主。从53只自毙鼠和11份病人淋巴液中分别分离出鼠疫菌11株和4株。119份鼠血清、71份犬血清、13份猫血清中分别检出FI抗体阳性l份、8份和6份。结论 2000年隆林鼠疫疫情流行特征与云南省相似。静息多年的鼠疫自然疫源地遭到人为破坏后，生态环境发生巨大变化可能是导致本次动物鼠疫流行并波及人间的重要原因。