微小RNA检测技术的研究进展

微小RNA（miRNA）是一种21—25nt长的小分子RNA,广泛存在于真核生物中,是一组不编码蛋白质的小RNA,可通过序列互补与信使RNA（mRNA）分子相结合从而降解或抑制靶基因的翻译。MicroRNA的主要功能是调控基因的表达,在生物体的生长、发育及疾病发生中扮演着重要的角色。本文主要对检测microRNA的表达和功能研究的常用检测技术进行简要的综述。     

TthDNA聚合酶在丙型肝炎病毒RNA检测中的应用

用ＴｔｈＤＮＡ聚合酶行逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）扩增丙型肝炎病毒（ＨＶＣ）５′端非编码序列，对２６２例肝炎患者血清进行ＨＣＶＲＮＡ测定，结果ＨＣＶＲＮＡ阳性者５３例，阳性率２０．２％，凡阳性者用酶联免疫吸附法测其抗ＨＣＶＩｇＧ，其中３０例测到抗ＨＣＶ，阳性重叠率５６％（３０／５３）；ＨＣＶ ＲＮＡ阳性中的１５例同时用成髓细胞瘤病毒酶行传统逆转录－套式聚合酶链反应检测对照，１４例阳性，符合率     

定量PCR与传统RT-PCR检测HCV RNA的比较研究

目的用荧光定量PCR（FQ-PCR）和逆转录PCR（RT-PCR）法检测抗-HCV阳性血清中的HCVRNA，探讨两种方法检测结果的临床意义。方法抗-HCV阳性血清样本1062份，其中481份用RT-PCR法检测，465份用FQ-PCR法检测，另有116份同时用两种PCR法检测。结果RT-PCR法检测HCV RNA的阳性率为49．90％（240／481），FQ-PCR法的阳性率为62．58％（291／465），两种方法的阳性率有显著性差异（P〈0．001）。同时用两种方法检测116份，RT-PCR法阳性率为49．14％（57／116），FQ-PCR法阳性率为65．52％（76／116），也有显著性差异（P〈0.05）。FQ-PCR法检测的40份阴性中RT-PCR法检测出4例HCVRNA阳性。结论FQ-PCR检测HCVRNA比RT-PCR特异性高．但RT-PCR的敏感性较FQ-PCR高，部分FQ-PCR检测的阴性结果不能排除HCV RNA阳性的可能性。     

应用PCR检测丙型肝炎病毒RNA的影响因素

丙型肝炎病毒(HCV)RNA的血中浓度非常低.大约为每毫升血液中10~3个拷贝数。由于RNA酶(RNase)的降解作用,在血液标本中HCV RNA往往迅速被破坏.此外.HCV基因序列高度变异的特性直接影响逆转录多聚酶链式反应(RT-RCR)HCV RNA的阳性检出率。根据Flunel等人的调查(见附表).在丙型肝炎研究中.作为最基本的研究手段的RT-PCR方法的可重复性并不稳定,如何提高试验的灵敏度往往成为研究工作成败的关键。本文回顾了有关专家对这些问题的论述,以供参考。     

标本冻融对PCR检测HCV RNA结果的影响

标本冻融对ＰＣＲ检测ＨＣＶＲＮＡ结果的影响满昌军周均启毕金剑（济宁市传染病医院，山东济宁２７２１３１）关键词丙型肝炎病毒检测影响因素血液中ＨＣＶＲＮＡ浓度很低，标本保存或处理不当容易使ＨＣＶＲＮＡ水平降低而导致假阴性结果。我们用ＲＴ－ＲＣＲ检测冻融前...     

应用逆转录套式PCR检测血清丙型肝炎病毒RNA

应用逆转录套式PCR检测了经ELISA检测抗－HCV的86份血清，抗－HCV阳性血清66份，用PCR检测有37份是阳性，阳性符合率为56．1％，抗－HCV阴性血清20份，用PCR检测有8份是阳性，两种方法检测结果总符合率为57．0％。单项ALT升高、HB、HC和血液病患者HCV、RNA阳性率分别为37．5％，55．6％，62．5％和53．8％。用PCR检出HCV－RNA时间早于抗－HCV阳转时间，而且敏感性高于后者，是一种早期、灵敏及特异的HCV感染诊断方法。检测HCV－RNA有助于发现抗－HCV阴性的急、慢性丙型肝炎，根据HCV－RNA的连续检测，结合抗－HCV的消长状态，可用于丙型肝炎的预后判断和干扰素等药物疗效评价指标。     

国产HCV RNA分型试剂盒检测结果分析

目的分析丙型肝炎病毒(HCV)RNA分型试剂盒检测深圳市抗-HCV阳性献血者结果。方法收集2014-2015年158份深圳市抗-HCV阳性献血者血液样本,应用聚合酶链反应(PCR)-荧光探针法进行HCV RNA定量检测,病毒载量1.0×103 IU/mL的样本经HCV RNA分型试剂盒检测HCV基因型,分析不同基因型所占比例,病毒基因型与载量之间的相关性。结果 158份抗-HCV阳性献血者PCR-荧光探针法检出HCV RNA阳性样本54例,病毒载量1.0×103 IU/mL的45例,全部得到分型结果,HCV 1b型、2型、3型、6型分别占57.78%(26/45)、6.67%(3/45)、8.89%(4/45)、26.67%(12/45)。单因素方差分析结果显示,1b型与2型病毒载量差异有统计学意义(F=2.861,P0.05);不同性别间HCV RNA定量检测结果及抗-HCV S/CO值结果差异有统计学意义(P0.05);不同年龄段各基因型分布比例经Fisher精确检验,差异有统计学意义(P0.05)。结论 HCV 1b型、6型仍为深圳市无偿献血人群感染HCV的主要基因型,而HCV 2型和3型比例有所减少。     

RT—PCR单管法检测庚型肝炎病毒RNA

探讨建立了一种更简便，特异，灵敏的逆转录－巢式聚合酶链反应单管法检测庚型肝炎病毒ＨＧＶＲＮＡ，通过优化Ｍｇ＾２＋外引物浓度等实验参数，在一个Ｅｐｐｅｎｄｏｆ管中先后进行逆转录和巢式ＰＣＲ扩增等三步反应，３４２ｂｐ扩增终产物核苷酸序列采用直接测序法测定。本方法可检出１０＾４～１０＾５倍稀释的标准阳性血清，用ＲＴ－ＰＣＲ单管法与常规三步法比较检测了不同类型肝炎患者和职业献血员１７８份血清标志ＨＧＶＲＮ     

丙型肝炎病毒RNA检测操作方法探讨

丙型肝炎病毒(RNA)的核酸扩增荧光定量检测,对临床丙型肝炎的诊断及抗病毒药物疗效观察,提供了有力的佐证,然而临床基因扩增实验室污染问题还时有报道[1,2].     

血清抗HCV IgG和IgM及HCV RNA检测结果对比

本文选择122例急、慢性丙型肝炎患者进行血清抗HCVIgG和lgM及HCVRNA检测，并结合ALT结果进行分析，探讨三者的关系及临床意义。材料和方法一、病冽选择选择ALT升高的急性丙肝48例和慢性活动性丙肝39例，另选ALT正常稳定期丙肝35例和抗HCVIgG正常患者ZI例，并取30例健康献血员作     

肺炎支原体RNA和DNA检测在儿童支原体感染诊断中的应用评价

目的评价比较肺炎支原体(MP)的RNA和DNA的检测在儿童支原体感染诊断中的应用效果.方法选取2017年10月至2018年12月某院收治的86例肺炎患儿作为研究对象,对所有患儿在入院24 h内进行采集咽拭子标本,并分别用肺炎支原体RNA实时荧光核酸恒温扩增检测技术(MP-SAT)检测RNA和肺炎支原体DNA实时荧光定量PCR(MP-DNA)法检测DNA.并与最终诊断结果对比,比较MP的RNA和DNA的检测在儿童支原体感染诊断中的应用效果.结果经最终诊断,86例患儿中MP感染阳性49例,MP感染阴性37例.其中MP-SAT检测诊断的MP感染阳性者43例,阴性34例;MP-DNA检测的MP感染阳性者31例,阴性27例.MP-SAT检测诊断儿童MP感染的灵敏度、特异度、准确性分别为87.76%,91.89%,89.53%,MP-DNA检测诊断儿童MP感染的灵敏度、特异度、准确性分别为63.27%,72.97%,67.74%,MP-SAT检测诊断的灵敏度、特异度、准确性均高于MP-DNA检测诊断,差异有统计学意义(P<0.05).结论在儿童支原体感染的初期诊断中,RNA实时检测的灵敏度和准确性更高.     

DNA及RNA甲基化检测在肿瘤诊断中的研究进展

在恶性肿瘤的发生及发展过程中,遗传异常以及基因表观遗传学的改变起到了重要的作用。同遗传学异常一样,表观遗传的改变也是一种可反映肿瘤发生早期的分子机制。DNA甲基化作为表观遗传学的一种重要方式,在控制基因的表达、维持基因组稳定性、细胞分化和胚胎发育中起着重要的作用;RNA甲基化则主要包括后转录过程对真核基因表达的调控。因此,检测肿瘤细胞中这2种甲基化的异常成为早期诊断肿瘤的重要手段。本文就DNA及RNA甲基化与肿瘤的关系以及这2种甲基化检测方法做一综述。     

RNA干扰在肿瘤治疗中的应用及检测技术前景

早在1990年，人们就尝试利用反义链来抑制基因表达，并提出了核酸治疗的概念。RNA干扰（RNA interference，RNAi）是真核生物中普遍存在的抵抗病毒入侵、抑制转座子活动、调控基因表达的监控机制，随着此项技术的发展和机制研究的不断深入，其在感染性疾病、遗传病和肿瘤治疗中的作用日益受到人们的重视。[第一段]     

RNA病毒扩增检测的质控品和标准品研究进展

RNA病毒如丙型肝炎病毒(HCV)、人免疫缺陷病毒(HIV)、严重急性呼吸综合征冠状病毒(SARS-CoV)等的核酸检测对于感染的早期诊断和抗病毒治疗疗效的动态观察具有重要价值。自1983年发明聚合酶链反应(PCR)技术以来，出现了基因扩增的概念。目前多采用核酸扩增技术(NAT)检测病毒RNA，最常用的是逆转录(RT)-PCR方法。核酸扩增检测想得到可靠的结果，必须使用质控品进行严格的质量控制，而对病毒进行定量测定，通常还须有病毒RNA标准品。目前RNA病毒扩增检测的质控品和标准品分为两大类，一是裸露的RNA片段，二是内含特定RNA的病毒样颗粒或称之为带盔甲的RNA(armored RNA)。     

标本因素及保存条件对HCV RNA检测的影响

目的探讨溶血、脂肪血、保存温度和保存时间对HCV RNA检测的影响,确认用于核酸检测的标本正确采集、处理及保存的关键控制点。方法应用实时荧光PCR法,采用混样检测+单检的检测模式,对在不同浓度的血红蛋白或甘油三脂下以及在不同温度条件下保存不同时间后的HCV RNA标本进行检测,对检测的Ct值进行分析。结果小于7.93mmol/L的不同浓度甘油三脂对HCV RNA检测没有影响(P0.05),血红蛋白浓度为97g/L、34g/L、17g/L以及8g/L时,其对HCV RNA检测均有影响(P0.05),当血红蛋白浓度小于5g/L时,其对HCV RNA检测均无影响(P0.05);保存温度在-30℃下4周内,其检测Ct值差异均无统计学意义(P0.05)。在低于37℃条件下,4h内保存的HCV RNA标本检测Ct值差异均无统计学意义(P0.05)。在4℃的条件下保存72h内,HCV RNA标本检测Ct值差异无统计学意义(P0.05),25℃的条件下能保存48h(P0.05)。结论甘油三脂浓度小于7.93mmol/L对HCV RNA的检测没有影响,血红蛋白浓度大于8g/L时会影响HCV RNA的检测,用于HCV RNA检测的标本在4℃保存时最好在72h内完成检测。     

庚型肝炎病毒NS3区聚合酶链反应临床RNA检测

庚型肝炎病毒 ( HGV)在自然人群中有较高的感染率 ,主要以携带者形式存在 ,也广泛存在于输血后肝炎、非甲～戊型肝炎患者中。为了解 HGV在我国乙型肝炎、丙型肝炎及非乙非丙型肝炎患者中的存在状况 ,我们采用 HGV NS3区逆转录 -套式-聚合酶链反应 ( RT- Nested- PCR)法检测了 1