番茄红素对人肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响

目的 研究番茄红素(Lycopene,LP)对人肝癌HepG2细胞生长的影响并初探其机制。方法取对数生长期HepG2细胞设空白对照组、LP(5 μg/mL)组、LP(10 μg/mL)组、LP(20 μg/mL)组和顺铂(40 μg/mL)组,每组设10个复孔;各组分别给药干预48 h后,噻唑蓝(MTT)比色法测定细胞增殖抑制率,流式细胞术(FCM)检测细胞周期和细胞凋亡状况,RT-PCR法检测Bax mRNA和Bcl-2 mRNA表达,Western blot法检测Caspase-3蛋白表达。结果 与空白对照组比较,经LP(10 μg/mL、20 μg/mL)或顺铂40 μg/mL干预48 h能够显著提高HepG2细胞增殖抑制率,延长细胞周期中G₀/G₁期而缩短G₂/M期,提高细胞凋亡率,上调促凋亡Bax mRNA表达并下调抑凋亡Bcl-2 mRNA表达,提高Bax/Bcl-2比值,上调Caspase-3蛋白表达,LP上述作用具有一定的剂量依赖性。结论 LP具有抑制人肝癌HepG2细胞增殖并促进其凋亡的作用,其机制可能与LP干预细胞周期分布和调节凋亡相关基因蛋白表达有关。     

槲皮素、姜黄素对人肝癌HepG2细胞增殖和凋亡作用的比较

目的:探讨槲皮素和姜黄素对人肝癌HepG2细胞株增殖及凋亡的作用。方法:不同质量浓度的槲皮素(0、10、20、50、100μmol/L)和姜黄素(0、2、5、10、20μmol/L)分别作用HepG2细胞24、48、72 h,以As2O3(0、2、5、10、20μmol/L)为阳性对照,MTT法检测HepG2细胞的增殖,流式细胞术检测HepG2细胞的凋亡。结果:槲皮素、姜黄素及As2O3作用后,HepG2细胞形态发生变化、生长速率变慢,HepG2增殖率随着时间和药物浓度的增加逐渐减低,72 h时3种药物高浓度组HepG2细胞增殖率分别为(31±5.8)%、(51±4.6)%、(54±5.8)%。槲皮素和姜黄素均有明显的促凋亡作用,并呈时间和浓度依赖性;高浓度(100μmol/L)槲皮素作用最强,相同浓度下的姜黄素与As2O3作用相当。结论:槲皮素和姜黄素能明显抑制HepG2细胞增殖,促进其凋亡,并且这种作用强于As2O3。     

CA3诱导肝癌HepG2细胞凋亡及其机制CSCD

目的探讨CA3(CIL56)对肝癌HepG2细胞增殖及凋亡的影响及其机制。方法体外培养HepG2细胞,分别加入不同浓度CA3(0、0.25、0.5、1.0、2.0和4.0 mmol/L)作用24和48 h。增强型CCK-8试剂检测不同浓度CA3对细胞增殖的影响;流式细胞术检测细胞凋亡率;检测细胞内活性氧(ROS)的变化;Western blot法分析YAP1、Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白的表达。结果增强型CCK-8试剂检测结果显示,0.25、0.5、1.0、2.0、4.0 mmol/L的CA3作用HepG2细胞24和48 h后,细胞增殖率分别为(80.5±0.3)%、(79.4±0.2)%、(76.2±0.2)%、(76.4±0.1)%、(49.3±0.4)%和(75.3±0.2)%、(64.8±0.3)%、(48.4±0.2)%、(32.2±0.4)%、(31.9±0.2)%。流式细胞术结果显示,CA3浓度升高至2 mmol/L时,凋亡率增加到58.48%。CA3处理后,HepG2细胞内活性氧产量增加,YAP1、Bcl-2蛋白表达降低,Bax、Caspase-3表达增高。结论 CA3可抑制HepG2细胞增殖并诱导凋亡,其机制可能与细胞内活性氧产量增加,调节YAP1、Bcl-2、Bax及Caspase-3蛋白的表达有关。     

氨基葡萄糖对人肝癌HepG2细胞增殖及凋亡的影响

目的:研究氨基葡萄糖对人肝癌HepG2细胞增殖及凋亡的影响,并初步探讨其分子机制。方法:CCK-8法检测人肝癌HepG2细胞的增殖情况。流式细胞术检测细胞周期及细胞凋亡。Western blot检测ERK及P-ERK蛋白的表达水平。结果:氨基葡萄糖可以抑制人肝癌HepG2细胞的增殖,且该作用随着药物浓度的增加而逐渐增强。1.0mmol/L氨基葡萄糖作用72h可以使G0/G1期细胞比例增加,S期细胞比例降低。同时,2.0mmol/L及4.0mmol/L氨基葡萄糖处理72h可以使人肝癌HepG2细胞发生凋亡。另外,随着药物浓度的增加,人肝癌HepG2细胞中ERK蛋白的磷酸化水平逐渐降低。结论:氨基葡萄糖可能是通过降低ERK1/2蛋白的磷酸化水平影响细胞周期,从而抑制人肝癌HepG2细胞的增殖并诱导其发生凋亡。     

三氧化二砷与肿瘤坏死因子联合对人肝癌细胞系HepG2抑制作用的研究

近年来，国内外对砷剂与肿瘤的研究发展很快。已有研究表明，三氧化二砷(As2O3)可在体外抑制肝癌细胞的增殖，且主要是通过其诱导凋亡作用实现的。但尚未有As2O3和TNF-α联合作用于肿瘤细胞的报道。为减弱砷剂毒性，并充分利用FNF-α的诱导凋亡作用。我们将二者联合应用，观察它们对肝癌细胞HepG2的影响及作用机制。     

钩藤酸E对人肝癌HepG2细胞的抑制作用及其机制研究

目的:通过体外实验研究钩藤酸E(UAE)抑制人肝癌细胞HepG2的细胞增殖作用,并进一步研究其作用机制.方法:MTT法考察钩藤酸E对人肝癌HepG2细胞的生长抑制作用,通过电镜观察细胞微细结构变化,流式细胞术进一步验证细胞凋亡,并检测细胞周期变化.结果:研究发现UAE能抑制HepG2细胞增殖.电镜分析证实UAE引起细胞凋亡.流式细胞术检测细胞凋亡主要发生于G0/G1期.结论:钩藤酸E诱导人肝癌细胞HepG2的细胞增殖,诱导其发生凋亡.     

拓扑替康诱导人肝癌细胞株HepG2凋亡的初步研究

背景与目的:拓扑替康(topotecan,TPT)是新一代水溶性、半合成喜树碱类衍生物,系拓扑异构酶I抑制剂、细胞周期特异性抗肿瘤药物;肝癌为我国发病率居第三位的恶性肿瘤,现有治疗方法的临床疗效均不理想。本文研究TPT诱导肝癌细胞株HepG2凋亡的作用,及其细胞毒作用。方法:运用MTT、HE染色、透射电镜、流式细胞仪、免疫组化技术等实验方法,对TPT杀伤HepG2细胞的程度进行了测定并观察了其诱导凋亡的过程。结果:TPT能通过诱导HepG2细胞凋亡的方式,杀伤HepG2细胞,TPT对HepG2细胞具有较强的体外杀伤作用,并存在明显的剂量、时间依赖关系,IC50约为95μg/L。TPT将HepG2细胞阻断在S期,并进一步诱导其凋亡。凋亡形态特征表现为典型的间期凋亡:细胞核染色质固缩,呈新月形聚集于核膜周缘,胞质浓缩,出现空泡。在TPT诱导HepG2细胞凋亡的过程中,不影响bcl-2基因蛋白正常表达(P>0.05)。结论:TPT能诱导HepG2细胞凋亡,细胞毒性较强。     

磁微球对肝癌HepG2细胞增殖影响的研究

目的:观察不同浓度的磁性纳米颗粒对肝癌HepG2细胞生长的影响.方法:化学共沉淀法制备磁流体,以浓度0、4和8 mg/mL的磁微球分别作用于HepG2细胞,48 h后流式细胞仪检测细胞凋亡情况.以不同浓度的磁微球作用于HepG2细胞不同时间,MTT检测其增殖率的变化.电镜观察磁微球作用于肝癌HepG2细胞后的形态学变化.结果:制备的磁流体为黑色胶体混悬液,透射电镜观察发现,颗粒以椭圆形和球形居多,颗粒大小多为70 nm左右.4 mg/mL磁流体作用于HepG2细胞48 h后的凋亡率为(32.73±4.80)％,8 mg/mL磁流体作用于HepG2细胞48 h后的凋亡率为(53.87±5.35)％,与HepG2细胞自身凋亡率的(21.15±1.06)％相比,差异均有统计学意义,P值均＜0.05.磁微球浓度为4 mg/mL分别作用HepG2细胞24和48 h的细胞抑制率分别为17.97％和20.22％、8 mg/mL则为35.93％和35.27％,与磁微球浓度为0 mg/mL作用相同时间的抑制率比较差异均有统计学意义,t值分别为2.237,2.483,2.985和3.173,P值均＜0.05.结论:磁微球可对抑制肝癌HepG2细胞增殖,但不成剂量时间依赖关系.     

大黄素在体外诱导人肝癌细胞HepG2发生凋亡的初步研究

背景与目的:大黄素(3-甲基-1,6,8-三羟蒽醌)是大黄等多种中药的有效成分之一。研究表明大黄素对于乳腺癌细胞、肺癌细胞的生长具有抑制作用,但目前大黄素抗肿瘤的作用机理尚不明确。本研究拟讨论大黄素在体外对肝癌细胞HepG2的作用及其机理。方法:应用MTT、软琼脂克隆形成、DNAladder凝胶电泳及流式细胞术等方法,研究中药单体大黄素对肝癌细胞HepG2生长增殖的影响以及作用机理。结果:大黄素在较低浓度可抑制肿瘤细胞的生长,MTT实验测得的半数抑制浓度(IC50)为(36±2.6)μg/ml。在软琼脂实验中,大黄素可以浓度依赖的方式抑制细胞克隆的形成。经DNAladder及流式细胞仪检测发现,大黄素能诱导HepG2细胞凋亡,与阴性对照相比,随着药物浓度从10μg/ml增加到20μg/ml,AnnexinV染色细胞显著增多,由27.3%增至59.6%;当药物浓度增至40μg/ml时,培养液中几乎无活细胞,由碘化丙啶和AnnexinV双重标记的凋亡后期以继发性坏死细胞为主。结论:中药单体大黄素在体外能抑制肝癌细胞HepG2的生长增殖,并能诱导该细胞凋亡。     

口虾蛄乙酸乙酯提取物对鼻咽癌CNE-2Z细胞增殖和周期的影响

目的:观察口虾蛄乙酸乙酯提取物对鼻咽癌CNE-2Z细胞增殖和周期的影响。方法:MTT比色法检测药物对细胞的增殖抑制率,[3H]-TdR标记法测定药物对细胞DNA合成的影响,流式细胞术分析细胞周期。结果:口虾蛄乙酸乙酯提取物对CNE-2Z细胞的增殖和DNA合成有显著的抑制作用,并呈明显的时间-剂量依赖关系,当提取物浓度>400μg/mL时,其对CNE-2Z细胞的掺入抑制率高于浓度为20μg/mL的5-FU对该细胞系的掺入抑制率。流式细胞术检测结果显示,随着乙酸乙酯提取物浓度的增加,G1期和G2/M期细胞所占的百分比逐渐降低,S期细胞所占百分比逐渐增加,P<0.01。结论:口虾蛄乙酸乙酯提取物能抑制CNE-2Z细胞的增殖效应,其机制可能与引起细胞周期阻滞于S期有关。     

舒尼替尼促进人肝癌细胞HepG2的凋亡及其分子机制

目的：探讨苹果酸舒尼替尼对人肝癌HepG2细胞凋亡的作用及其机制。方法：常规体外培养HepG2细胞,利用MTT法检测舒尼替尼杀伤HepG2细胞的IC50,Western blotting 检测药物处理前后HepG2细胞分子靶点蛋白表达,膜联蛋白(Annexin-V)/碘化丙啶(PI)双标法和TUNEL染色法检测舒尼替尼处理前后HepG2细胞凋亡情况,实时荧光定量PCR检测药物处理前后HepG2细胞凋亡基因 mRNA的表达情况。结果：舒尼替尼杀伤HepG2细胞的IC50值为（3.22±0.50）μmol/L。以对HepG2细胞无明显抑制作用的剂量1 μmol/L舒尼替尼处理HepG2细胞后,细胞内VEGFR1、VEGFR2、PDGFRα、Kit、FLT3蛋白表达均有不同水平下降（均P<0.05）,HepG2细胞的凋亡率\[(15.18±1.28)% vs (5.90±0.45)%,P<0.05\]、凋亡指数（AI）\[(23.54±4.73) vs (4.17±0.64), P<0.05\]均显著升高。舒尼替尼处理HepG2细胞后,上调促凋亡基因Bax、NOXA、PUMA、P53 mRNA表达水平（均P<0.05),降低抑凋亡基因Bcl-2、X-IAP mRNA表达水平（均P<0.05）。结论： 舒尼替尼能够诱导肝癌HepG2细胞凋亡,其机制可能是通过上调促凋亡基因的表达及降低抑凋亡基因表达水平来实现的。     

Growth index, assessed with Ki-67 and ssDNA labeling; a significant prognosticator for patients undergoing curative resection for hepatocellular carcinoma

BACKGROUND AND OBJECTIVES: The aggressiveness and greater malignant potential of cancers are characterized by several biological phenomena such as accelerated growth invasiveness, and the ability to form distant metastasis. Thus, knowledge of such biological difference may be a more accurate prognosticator for cancer patients. Tumor growth depends on the degree of imbalance between cell production and loss. This study aimed to clarify a possible role for the modified prognosticator, growth index (GI); defined as the difference between Ki-67 (%) and single-stranded DNA (ssDNA) (%) labeling indices, in patients undergoing curative resection for hepatocellular carcinoma (HCC). METHODS: Tissue specimens were obtained from 40 HCC patients who underwent curative surgery. Immunohistochemical staining was performed using the avidin-biotin-peroxidase-complex method. RESULTS: The GI in HCC ranged from -1.90% to 28.65%, median 3.73. GI was related to histologic grade, intrahepatic metastasis, and pathologic T stage. Cumulative survival was poorer in patients with higher GI (> or = median value). Multivariate analysis demonstrated that GI is an independent prognosticator along with vascular invasion and intrahepatic metastasis. CONCLUSIONS: The higher GI values were significantly associated with histologic aggressive features of HCCs, and GI was a significant independent prognosticator in HCC patients after curative resection.     

In vitro and in vivo study of phloretin‐induced apoptosis in human liver cancer cells involving inhibition of type II glucose transporter

Phloretin (Ph), a natural product found in apples and pears with glucose transporter (GLUT) inhibitory activity, exerts antitumor effects. However, little is known about its effects on human liver cancer. The purpose of this study is to test the cytotoxic effects of Ph on HepG2 cells and to identify the underlying molecular pathways. Human hepatocellular carcinoma specimens and HepG2 show a high level of GLUT2 transporter activity in the cell membrane. Real‐time PCR and MTT assays demonstrate that Ph‐induced cytotoxicity correlates with the expression of GLUT2. Flow cytometry and DNA fragmentation studies show that 200 μM Ph induces apoptosis in HepG2, which was reversed by glucose pretreatment. GLUT2 siRNA knockdown induced HepG2 apoptosis, which was not reversed by glucose. Western blot analysis demonstrates that both intrinsic and extrinsic apoptotic pathways in addition to Akt and Bcl‐2 family signaling pathways are involved in Ph‐induced cell death in HepG2 cells. Furthermore, using flow cytometry analysis, a mitochondrial membrane potential assay and Western blot analysis, we show that cytochalasin B, a glucose transport inhibitor, enhances the Ph‐induced apoptotic effect on HepG2 cells, which was reversed by pretreatment with glucose. Furthermore, we found significant antitumor effects in vivo by administering Ph at 10 mg/kg intraperitoneally to severe combined immune deficiency mice carrying a HepG2 xenograft. A microPET study in the HepG2 tumor‐bearing mice showed a 10‐fold decrease in ¹⁸F‐FDG uptake in Ph‐treated tumors compared to controls. Taken together, these results suggest that Ph‐induced apoptosis in HepG2 cells involves inhibition of GLUT2 glucose transport mechanisms. © 2008 Wiley‐Liss, Inc.     

肝细胞肝癌组织MCM2和FAP-1表达及其与癌细胞增殖和凋亡的相关性研究

目的:研究微型染色体维持蛋白2(MCM2)和Fas相关磷酸酯酶-1(FAP-1)在肝细胞肝癌组织中的表达及其与肝细胞肝癌增殖和凋亡的关系。方法:免疫组化SP法检测40例肝细胞肝癌、15例癌旁肝硬化和10例正常肝组织中MCM2和FAP-1蛋白的表达水平并进行分析。结果:40例肝细胞肝癌组织中29例MCM2表达阳性,28例FAP-1表达阳性,而在癌旁肝硬化和正常肝组织中两者均未见表达。肝细胞肝癌组织中MCM2的表达与患者性别、年龄、肿瘤大小和转移差异无统计学意义,P>0.05;而与分化程度有关,肿瘤分化越低,MCM2阳性率越高,P<0.05。MCM2与FAP-1两者呈正相关,P<0.05。结论:MCM2和FAP-1可能均参与了肝细胞肝癌的发生发展,两者可能相互协同共同促进了癌细胞异常增殖。     

CAAP1抑制肝癌HepG2细胞凋亡而促进其增殖、迁移和侵袭

目的:探讨CAAP1对肝癌HepG2细胞凋亡、增殖、迁移和侵袭的影响及其作用机制.方法:构建CAAP1过表达载体pcDNA3/CAAP1和敲降载体pSilencer 2.l-U6 neo/shR-CAAPl,转染肝癌HepG2细胞后,qPCR和WB实验分别检测CAAP1mRNA和蛋白的表达水平.实验分为过表达对照组(p...     

Bestrophin 3高表达促进人肝癌细胞株HepG2的凋亡

目的：研究Bestrophin 3高表达对人肝癌细胞株HepG2凋亡能力的影响,并初步探讨其作用机制。 方法： 将Bestrophin 3腺病毒以感染复数(multiplicity of infection, MOI)10、20、40、80转染HepG2细胞株,Western blotting检测转染细胞内Bestrophin 3的表达,确定最佳MOI值。设对照组（未转染病毒）、LacZ组（转染携带LacZ的对照腺病毒载体）、Ad-Best3组（以最佳MOI值转染Bestrophin 3腺病毒）,CCK-8法和流式细胞术分别检测Bestrophin 3过表达对HepG2细胞增殖、凋亡的影响,Western blotting检测Bestrophin 3过表达对HepG2细胞内Bcl-2、Bax以及细胞色素C表达的影响,JC-1染色观察Bestrophin 3过表达对HepG2细胞线粒体膜电位的影响。 结果： Bestrophin 3腺病毒转染HepG2细胞的最佳MOI为40,转染后细胞过表达Bestrophin 3。Ad-Best3组的细胞存活率显著低于对照组和LacZ组\[(79.37±1.76)% vs (98.67±3.02)%、(99.67±325)%,均P<0.05\],而其细胞凋亡率显著升高\[（29.47±2.37）% vs （5.47±0.37）%,（4.95±0.44）%,均P<0.05\]。 Ad-Best3组HepG2细胞内Bcl-2的蛋白表达显著减少,Bax的蛋白表达显著增加,导致Bcl-2/Bax比值显著降低（0.32±0047 vs 1.00±000, P<0.05）;Ad-Best3组HepG2细胞的线粒体膜电位显著降低 \[(0.64±0.09)% vs （1.00±0.00)%, P<0.05\],同时线粒体中细胞色素C明显减少（P<0.05）,而细胞质中细胞色素C水平显著升高（P<0.05）。结论：过表达Bestrophin 3可能通过促使线粒体释放细胞色素C从而促进肝癌细胞株HepG2的凋亡。     

尼美舒利对不同COX-2表达水平的食管鳞癌细胞的抑制作用

目的：比较选择性环氧合酶-2（COX-2）抑制剂尼美舒利对不同COX-2表达水平的食管鳞癌细胞的抑制作用。方法：选取食管鳞癌细胞株EC 109、KYSE 150和TE-1,采用Western blot方法测定COX-2蛋白表达、MTT法检测细胞增殖抑制,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡,观察尼美舒利对各组细胞的增殖抑制和促凋亡作用。结果：COX-2蛋白在EC 109细胞中呈高表达,KYSE 150细胞中呈中等度表达,TE-1细胞不表达COX-2蛋白。尼美舒利在50μmol/L-400μmol/L浓度区间可抑制EC 109、KYSE 150细胞的增殖（P〈0.05）,并呈剂量依赖性,在400μmol/L时对TE-1细胞有抑制作用。EC 109细胞尼美舒利的IC50值最低,KYSE150次之,TE-1最高。尼美舒利可使EC 109和KYSE 150的细胞周期阻滞于G0/G1期,并诱导细胞凋亡,但对TE-1细胞无上述作用。结论：尼美舒利对表达COX-2的食管鳞癌细胞有较好的增殖抑制和促凋亡作用。     

玻连蛋白促进肝癌细胞株增殖及迁移的初步研究

目的： 了解玻连蛋白(VTN)对肝肿瘤细胞株SMMC7721增殖和迁移能力的影响。方法： 采用不同浓度VTN包被培养皿后接种、培养细胞,采用激光共聚焦显微镜观察VTN包被后细胞骨架成分微管蛋白形态的变化,用细胞增殖试剂分析VTN对细胞增殖率的影响及分析VTN对凋亡诱导剂抑制增殖作用的影响,采用Transwell侵袭实验检测VTN对细胞迁移能力的影响。结果：激光共聚焦观察结果显示VTN包被有助于促进细胞贴壁及细胞骨架蛋白形态结构的维持;VTN可促进肿瘤细胞的生长且呈剂量效应,并可减弱凋亡诱导剂对细胞增殖的抑制;Transwell侵袭实验结果显示VTN包被可促进细胞迁移。结论：体外实验条件下,VTN有助于肝癌细胞株SMMC7721的增殖及迁移,提示VTN在肝癌发生过程中可能具有促进肿瘤细胞增殖和迁移的生物学作用。     

尼美舒利对不同COX-2表达水平的食管鳞癌细胞的抑制作用

目的:比较选择性环氧合酶-2(COX-2)抑制剂尼美舒利对不同COX-2表达水平的食管鳞癌细胞的抑制作用。方法:选取食管鳞癌细胞株EC 109、KYSE 150和TE-1,采用Western blot方法测定COX-2蛋白表达、MTT法检测细胞增殖抑制,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡,观察尼美舒利对各组细胞的增殖抑制和促凋亡作用。结果:COX-2蛋白在EC 109细胞中呈高表达,KYSE 150细胞中呈中等度表达,TE-1细胞不表达COX-2蛋白。尼美舒利在50μmol/L-400μmol/L浓度区间可抑制EC 109、KYSE 150细胞的增殖(P<0.05),并呈剂量依赖性,在400μmol/L时对TE-1细胞有抑制作用。EC 109细胞尼美舒利的IC50值最低,KYSE150次之,TE-1最高。尼美舒利可使EC 109和KYSE 150的细胞周期阻滞于G0/G1期,并诱导细胞凋亡,但对TE-1细胞无上述作用。结论:尼美舒利对表达COX-2的食管鳞癌细胞有较好的增殖抑制和促凋亡作用。