抗人成纤维细胞干扰素的单克隆抗体

[Hochkeppel HK et al:Nature 291(5815):500,1981(英文)] 继Secher等1980年成功地分离了一株能产生鼠抗人IFN-α(Ly)单克隆抗体的杂交瘤细胞系,并将单克隆抗体首先用于干扰素的提纯之后,本文又报道建立了一株能持续稳定分泌鼠抗人成纤维细胞干扰素(IFN-β)单克隆抗体的杂交瘤细胞系。     

分泌抗人α干扰素单克隆抗体杂交瘤的建株及其特性

作者的目的在于获得大量产生抗人α干扰素(HuIFN-α)单克隆抗体(McAb)的杂交瘤,并利用它来分析IFN分子的结构和生物     

人α、β和γ干扰素单克隆抗体的制备、检测与应用

人干扰素是一类可溶性蛋白质抗原,分子量小、产量低、抗原性弱、杂蛋白多。制备与检测干扰素单克隆抗体(IFN-McAb)的难度均较大。近三年来,国外已先后将人α、     

人γ干扰素与α干扰素或β干扰素合用可增强抗病毒和抗细胞活性

作者联合应用人γ-干扰素(HuIFN-γ)和人γ-干扰素(天然或重组)或人β-干扰素(HuIFN-β),对IFN在转化的人羊膜WISH细胞、正常的二倍体纤维母细胞(Fs-4)和21三体纤维母细胞(Gm2767)的抗病毒和抗细胞活性进行了研究,结果如下:采用空斑试验法测定病毒产量,判断IFN的抗病毒活性,当HuIFN-α、β和γ以不同浓度(5、2.5和1.0U/ml)分别作用于WISH细胞,都能诱导抗病毒活性,且HuIFN-γ的作用比HuIFN-α或β强.以等浓度(2.5U/ml)     

重组人干扰素α-2b原液的制备

目的优化重组人干扰素α-2b原液的发酵纯化方法,降低生产成本,提高产品的安全性。方法构建重组大肠杆菌,通过逐级扩大培养、发酵、纯化,收集菌体;菌体裂解后,进行变性、复性,通过不同的纯化方法,得到符合质量标准的重组人干扰素α-2b原液;通过对各步工艺的考察,优化重组人干扰素α-2b的发酵、纯化方法。结果制得的重组人干扰素α-2b菌种表达量高,原液纯度可达95.0%以上,生物学比活性高于1×108U.mg-1,符合《中华人民共和国药典》的质量要求,安全性强。结论此法可应用于重组人干扰素α-2b原液的生产。     

抑制性消减杂交技术筛选干扰素α转染HepG2细胞中上调的表达基因

目的:应用抑制性消减杂交(suppression subtractive hybridization,SSH)技术筛选干扰素α(IFN-α) 真核表达质粒转染HepG2细胞后差异表达上调的基因。方法:首先构建IFN-α真核表达载体pcDNA3．1(-) -IFN-α,并转染HepG2细胞,以空载体pcDNA3．1(-)转染的HepG2细胞为对照;制备转染后的细胞裂解液, 提取mRNA并逆转录为cDNA,经RsaI酶切后,将实验组cDNA分成2组,分别与2种不同的接头衔接,再与对照组cDNA进行2次消减杂交及2次抑制多聚酶链反应(PCR),将产物与T／A载体连接,构建cDNA消减文库,并转化大肠杆菌进行文库扩增,随机挑选克隆PCR扩增鉴定,进行测序及同源性分析。结果:构建了pcDNA3．1(-)-IFN-α真核表达质粒,并成功构建了该质粒转染HepG2细胞后差异表达基因的cDNA消减文库。文库扩增后得到200个白色克隆,随机挑取70个进行菌落PCR分析,结果显示均含有插入片段,将含有200-1000 bp插入片段的35个克隆进行测序,并通过生物信息学分析获得17种已知基因序列和1个染色体序列。结论:应用SSH技术成功构建了pcDNA3．1(-)-IFN-α转染的HepG2细胞中差异上调表达基因的cDNA消减文库。该文库的建立为进一步阐明IFN-α作用的分子生物学机制提供了重要的理论依据。     

抗人内皮细胞生长抑制素单克隆抗体的制备和鉴定

研制抗内皮细胞生长抑制素（Endostatin，ES）单克隆抗体，为ES制剂提供更有效的质量控制手段和为内皮细胞抑制素介入基因治疗肿瘤提供临床评价工具。将重组的人ES蛋白纯化，免疫BALB／c小鼠，取ES蛋白免疫的小鼠脾细胞与小鼠骨髓细胞Ag8．653进行细胞融合，对杂交瘤细胞进行筛选，阳性孔经3次有限稀释法亚克隆，获得4株鼠抗人ES蛋白的杂交瘤细胞株，分别命名为：1C2、6C4、6134、6C5，以间接ELISA、Western免疫印迹等方法进行抗体鉴定。结果表明4株杂交瘤细胞分泌的单抗具有效价高，特异性好的特点，且免疫球蛋白亚型均为IgG1。其中1C2亲和力强，具有较高的应用价值。所得单克隆体具有一定的特异性和敏感性，可为ES的深入研究提供更好的条件。     

杂交性杂交瘤和双特异性单克隆抗体的产生

利用抗体的双价性交联两种抗原物质的概念并不新颖。用化学重组实验已制成杂交的抗体分子,并成功地用于组织化学以铁蛋白显示抗原位点。但因难以取得这样的杂交抗体,以致此法很少使用。其他免疫酶技术如“夹心法”或酶抗体法的应用已日益普及,后者需要纯化的抗体,而未标记酶法由于两种IgG抗体可用第三种抗体加以交联,因此毋需提纯有关的抗体。随着单克隆抗体     

人白细胞干扰素和基因工程干扰素α-1b治疗慢性乙型肝炎

目的：比较人白细胞干扰素（ＬＩＦＮ）和基因工程干扰素α－１ｂ（ｒＩＦＮα－１ｂ）治疗慢性乙型肝炎（ＣＨＢ）的疗效和不良反应。方法：ＣＨＢ病人８３例（男性６９例，女性１４例；年龄３２±ｓ８ａ）。Ａ组２９例，用ＬＩＦＮ３ＭＵ；Ｂ组２７例，用ｒＩＦＮα－１ｂ３ＭＵ，Ｃ组２７例用人血浆白蛋白冻干制品１０ｇ，３组均ｉｍ，ｑｄ×４ｗｋ，继以ｑｏｄ×８ｗｋ。结果：３组ＨＢｅＡｇ阴转率分别为３８％，４１％，７％；ＨＢＶ－ＤＮＡ阴转率分别为４０％，５２％，７％。Ａ和Ｂ组ＩＦＮ对ＨＢＶ复制的抑制作用显著优于Ｃ组（Ｐ＜０．０５），但Ａ和Ｂ组间无显著差异。Ａ组不良反应显著大于Ｂ组（Ｐ＜０．０５）。结论：２种不同来源的ＩＦＮ治疗ＣＨＢ均有显著疗效，２药无显著差别，但Ａ组不良反应明显。     

完全人源化抗TNF-α单克隆抗体Golimumab

强生Centocor公司和先灵葆雅公司联合开发的完全人源化抗TNF-α单克隆抗体golimumab应用了Medarex公司的HuMAb-Mouse^TM技术，为一种每月1次皮下注射产品，最近已在其全球首个市场——加拿大以Simponi商品名获准上市，其适应证包括与甲氨蝶呤联用治疗中度至重度类风湿性关节炎、单独或与甲氨蝶呤联用治疗活动性银屑病性关节炎和用于治疗活动性关节强硬性脊椎炎。“Golimumab每月1次皮下给药，为风湿病医生及其患者提供了一种重要且方便的新的治疗选择。”     

α-干扰素抗肝纤维化临床观察

目的：观察α-干扰素抗肝纤维化的作用。方法：选择性肝病（乙肝）病例40例为治疗组,应用α-2b干扰素,12周观察用药前后血清肝纤维化指标－透明质酸（HA）、Ⅳ胶原（Ⅳ-C）、Ⅲ型前胶原蛋白（PC（Ⅲ）、层粘蛋白（LN）改善情况,并与未用干扰素组16例做对照。结果：治疗组肝纤维化指标明显改善,具有统计学意义,各项指标P值均＜0．01;而对照组自身对照,P＞0．05。两组间差异显著。结论：α-干扰素有一种特殊的抗纤维化作用,但不是通过其抗病毒活性的间接作用。肝纤维化指标的改善与病毒是否被抑制不成正相关。其远期疗效、具体剂量、疗程以及适应证的选择,有待于进一步探索。     

抗人CDC7单克隆抗体的制备与鉴定

目的 制备抗人CDC7蛋白的单克隆抗体并鉴定其生物学特性.方法 以GST-CDC7为免疫原,免疫Balb/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞(SP2/0细胞)融合,经多次筛选及克隆化,建立可以稳定分泌抗人CDC7单克隆抗体的杂交瘤细胞株.用间接ELISA,Western Blot,免疫细胞化学(ICC)对此抗体特性进行鉴定.结果 筛选到1株能稳定分泌抗人CDC7的细胞株1F7D2C9.亚类鉴定为IgG2a,轻链为kappa链,ELISA法鉴定该抗体腹水效价为1∶102 400,抗体亲和常数为1.558×109 L/mol,Western Blotting分析表明,此抗体能特异识别细胞株的天然CDC7蛋白质.免疫细胞化学进一步显示CDC7分布于细胞核中.结论 成功制备了抗人CDC7单克隆抗体,为研究CDC7与细胞癌变的关系建立了基础.     

猪脾细胞干扰素与人α干扰素之间的抗原性关系

<正> 用中和试验在不同细胞上对干扰素抗血清与猪脾细胞干扰素(PSIFN)及人干扰素的中和能力进行了试验,结果证明人白细胞干扰素多克隆抗体具有明显的中和猪脾细胞干扰素的能力。而人γ干扰素抗体具有微弱的中和猪脾细胞干扰素能力。猪脾细胞干扰素不仅可在同源细胞表现出抗病毒活性,而且可在异源细胞表现出高的抗病毒活性,并与人白细胞干扰素具有许多相同的生物学及抗原特性而受到人们的重视。我们实验证明猪脾细胞干扰素和人     

干扰素-α及长效干扰素抗肝炎病毒作用机制的研究进展

干扰素-α是治疗慢性病毒性肝炎的主要药物之一,可通过影响肝细胞Jak-STAT信号通路,促进2′-5′-OAS、PKR和MxA等蛋白的生成发挥抗肝炎病毒作用。干扰素-α还可通过影响MAPK通路、IRS-1/PI3K-p70S6激酶通路等信号转导通路发挥作用。为延长其半衰期、增强疗效,目前已开发出多种长效干扰素,如聚乙二醇干扰素、人血清白蛋白融合干扰素、干扰素脂质体等,并有逐渐取代普通干扰素的趋势。开发出长效、高效的干扰素也越来越成为干扰素及病毒性肝炎治疗的重要发展方向。     

人源化抗人TNFα单克隆抗体纯化工艺的优化

目的考察中国仓鼠卵巢细胞(Chinese hamster ovary,CHO细胞)表达的人源化抗人TNFα单克隆抗体的亲和色谱过程中的杂质洗脱工艺,优化目的蛋白洗脱工艺条件。方法以目的蛋白回收率和宿主细胞蛋白残留量为评价指标,筛选最佳的杂质洗脱缓冲液;利用实验设计方法,以纯度、洗脱峰pH值、宿主细胞蛋白残留量为评价指标,考察目的蛋白洗脱缓冲液的pH值和浓度对工艺的影响,优化目的蛋白洗脱工艺条件。结果优化后的亲和色谱工艺,在保持目的蛋白高回收率(优化前为86.5%,优化后为86.7%)的同时,可显著降低目的蛋白洗脱峰中宿主细胞蛋白残留量(由1 218×10-6降低至78×10-6),提高目的蛋白纯度(优化前为95.5%,优化后为96.6%),减轻后续纯化压力;提高了目的蛋白洗脱峰的pH值(由3.59提高到4.25),有利于目的蛋白的稳定。结论优化了人源化抗人TNFα单克隆抗体的亲和色谱工艺,本工艺有效、可行。     

α-干扰素治疗基底细胞癌有效

美国Scripps研究所的科学家发现注射α-2b干扰素能完全破坏基底细胞癌。虽然还不知道其治疗作用的原理,但是他们已成功地治疗了8例患者,目前在该研究所和得克萨斯大学正在对90例患者进行治疗。虽然用刮除术、电灼和激光治疗基底细胞癌的治愈率达95%,用Mohs手术治     

抗乙酰胆碱酯酶单克隆抗体的产生

将SP 2/O-Ag 14/小鼠骨髓瘤细胞和用乙酰胆碱脂酶免疫的Balb/c小鼠脾细胞在PEG-1000作用下进行融合,获14株分泌抗乙酰胆碱酯酶单克隆抗体的杂交瘤细胞系。用酶联免疫吸附试验(ELISA)对其分泌的抗体滴度进行了检测,其免疫鼠腹水滴度最高可达1:2 560 000。对其中5株杂交瘤分泌的滴度很高的抗体做了特异性交叉免疫试验,仅与乙酰胆碱脂酶发生特异反应,与其它4种酶(胃蛋白酶、木瓜蛋白酶、链霉蛋白酶及胰蛋白酶)无交叉反应;对其中12株杂交瘤分泌的抗体还进行了免疫球蛋白类型鉴定及染色体检查。上述杂交瘤细胞经3～6个月稳定传代后冻存于液氮中1年多后复苏,其抗体水平未见下降。     

家蚕细胞基因工程人α—干扰素注射液抗I型单纯疱疹病毒作用

本文报导家蚕细胞基因工程人α－干扰素注射液具有明显抗ＨＳＶ－１的作用，在Ｖｅｒｏ细胞上，其有一定的细胞毒性，但随浓度降低而毒性减少，它能明显抑制ＨＳＶ－１致细胞病变，对ＨＳＶ－１的抑制指数为３．５－４．５，能有效地抑制ＨＳＶ－１在细胞内复制。在体实验表明该药对ＨＳＶ－１致小鼠脑炎，家兔角膜炎，豚鼠皮肤疱疹有明显治疗作用。