一种快速、高灵敏度的免疫测定技术

总部设在美国乔治亚州阿特兰大的梅勒(MUREX)公司最近研制出一种新的专用诊断系统,它能以手动方式快速而高灵敏度地进行酶免疫的定性测定,整个过程仅需十分钟。这一系统的基本组成部分,是一个随用即弃的圆盘形装置(试验盒)。其上有漏斗形口,试剂可直接注入过滤器中,内有吸收物质,以保存在分析时使用的液体。试验使用了双抗体技术,其中单克隆抗体与乳液微粒结合,另一抗体与碱性磷酸酶相连接。在用后即弃的试验盒内,从固相颗粒悬浮液中分离出过量酶标记抗体。试验为阳性时,在装置底部显示出肉眼可见的兰色斑点,毋需辅助仪器读出。     

米曲霉β—半乳糖苷酶催化合成低聚半乳糖

研究了温度、ＰＨ酶量和起始乳糖浓度对低聚半乳糖合成的影响，发现乳糖水解为单糖和合成低聚糖所需的最佳条件并不相同；     

ROSA26小鼠中枢神经系统半乳糖苷酶的表达与分布

目的:观察成年ROSA26小鼠中枢神经系统半乳糖苷酶(X-Gal)的表达与分布.方法:应用X-Gal组织化学结合尼氏染色及免疫组织化学双标技术研究B-gal在该嵌合体脑内的表达与分布特征.结果:X-Gal组织化学染色显示在该线系小鼠脑和脊髓中均广泛表达转基因β-gal活性产物,但以灰质为主.X-Gal和尼氏双重染色表明,β-gal在神经元、室管膜细胞和脉络丛上皮细胞中均有表达.免疫组化进一步显示β-gal广泛表达于神经元中,但在星形胶质细胞中则未见表达.结论:ROSA26小鼠中枢神经细胞稳定而广泛的表达β-gal,此转基因模式动物将可用于神经细胞培养、移植及其它相关神经生物学研究.     

磁性分离酶联免疫测定技术在糖尿病的临床应用

目的引进磁性分离酶联免疫测定（ＭＡＩＡ）新技术,应用于糖尿病的临床实践。方法初诊１型糖尿病（ＩＤＤＭ）１０例,轻症２型糖尿病（ＮＩＤＤＭ）４１例,及健康正常对照１５例,作口服葡萄糖耐量试验（ＯＧＴＴ）,使用瑞士ＳｅｒｏｚｙｍｅⅠ系统和ＭＡＩＡ进口试剂测定胰岛素（Ｉｎｓ）和Ｃ肽（Ｃ－Ｐ）。结果ＭＡＩＡ批内变异系数（ＣＶ）为３．８３％,批间ＣＶ为７．３８％;灵敏度分别为０．５２ｍＩＵ／Ｌ和０．４２ｐｍｏｌ／Ｌ。ＭＡＩＡ结果与放射免疫法（ＲＩＡ）之间有显著直线相关（Ｐ＜０．０１）。健康人ＯＧＴＴ试验时,空腹Ｉｎｓ和Ｃ－Ｐ分别为（１６．１９±６．７６）ｍＩＵ／Ｌ和（５０４．２０±１７７．２４）ｐｍｏｌ／Ｌ,在３０～６０ｍｉｎ达到峰值,平均为（６３．５３±７．９８）ｍＩＵ／Ｌ和（２１８８．７５±２７９．０８）ｐｍｏｌ／Ｌ。ＩＤＤＭ患者Ｉｎｓ和Ｃ－Ｐ空腹水平低,ＯＧＴＴ试验无峰值出现;而ＮＩＤＤＭ患者峰值则延迟。结论ＭＡＩＡ稳定可靠,特异性高,无放射性污染,优于ＲＩＡ,在糖尿病临床实践中有较大应用价值。     

重组α—半乳糖苷酶A替代治疗法布里病的安全性和有效性

据《N Eng1 J Med》2001年345卷第1期报道 法布里(Fabry'S)病为溶酶体α-半乳糖苷酶A缺乏症,由于N-脂酰鞘氨醇三己糖苷(globotriaosylceramide)及相关的糖鞘脂(glycosphingolipids)进行性积聚而引起,受累病人有肾脏、心脏和脑微血管病变。美国纽约     

逆转录病毒转移的β—半乳糖苷酶基因在成纤维细胞中的表达

为了研究逆转录病毒载体转移外源基因的实用性，我们采用小鼠白血病病毒（ＭｏＭＬＶ）载体将大肠杆菌的β－半乳糖苷酶基因（ｌａｃＺ）和抗新霉素（Ｎｅｏ＾Ｒ）基因转移到大鼠成纤维细胞内，对整合后的前病毒结构和基因表达进行了酶活性测定和ＤＮＡ分析。结果表明：ｌａｃＺ基因可以在大鼠皮肤成纤维细胞和２０８Ｆ细胞株中较长时间地表达；前病毒整合位点。靶细胞特性和整合后的载体结构与转入基因表达的稳定性紧密相关。     

磁分离酶联免疫测定技术在甲状腺激素测定中的应用价值

引进加拿大Biochem Immunosystems公司的磁分离酶联免疫技术(MAIA)做甲状腺激素测定,灵敏度可达1×10＝12g检测级.经一年的实验,本文认为MAIA是一种灵敏、快速、特异性强、重复性好、显色稳定的试验.本文用来自内蒙古各地的153名健康人做正常参考值测定,与上海和网外正常参考值比较,结果 发现:内蒙地区男、女甲状腺激素水平与上海地区比较有显着差异,P＜ 0.01,促甲状腺激素(TSH)无差异.内蒙地区与国外正常参考值比较除总T3无差异外,P>0.05,其余均有显著性差异,P<0.01.用上海地区正常参考值,判定328名患者甲状腺激素结果异常,而套用内蒙地区正常参考值,328名中只有161名甲状腺激素异常,167名结果正常.本文又对可能影响MAIA试验的因素:高血脂、高血糖、高血红蛋白血清做了交互影响试验,结果:甘油三酯达3.23mmol/L时,对试验有影响,F=11.65,血清中血糖20mmol/L,血红蛋白达13g/L,对试验无影响.     

不同类型标本的衰老相关—β—半乳糖酸苷酶染色方法

目的：研究衰老相关－β－半乳糖苷酶（ＳＡ－β－Ｇａｌ）组化染色在不同类型组织切片中的应用。方法：比较血涂片、冰冻切片及石蜡切片在不同条件下ＳＡ－β－Ｇａｌ的显色效果。结果与结论：冰冻切片结果良好；石蜡切片经抗原修复后，结果不及未经抗原修复者；血涂片以４０ｇ／Ｌ多聚甲醛固４５ｍｉｎ者效果最佳。ＳＡ－β－Ｇａｌ可用于不同类型的组织标本。     

腺病毒介导的β—半乳糖苷酶在小鼠气道上皮的转基因表达

目的：以β－半乳糖苷酶基因为标志基因研究重组复制缺陷腺病毒在 小鼠肺内气道上皮细胞中的转基因表达。方法：带有LacZ表达基因的重组复制缺陷腺病毒（AdCMVLacZ）,经鼻腔吸入法和气管内注射法两种途径分别感染小鼠肺组织,此后在不同时间取小鼠肺组织经多聚甲醛固定后,以X-gal染色。石蜡包埋切片后用核固红复染。结果：β－半乳糖苷酶经重组复制缺陷腺病毒AdCMVLacZ感染小鼠气道和肺泡上皮细胞,并高效表达目的基因,表达时间可长达31天,重复感染后仍可表达13天。结论：重组复制缺陷腺病毒可携带外源性基因在小鼠气道上皮细胞内进行高效、稳定和较为长期的转基因表达。     

磁分离酶联免疫测定技术在甲状腺功能监测的临床应用

目的　MAIA和RIA方法的比较。　方法　初诊甲状腺功能亢进症(Hyperthyroidism)41例,甲状腺功能减退症(Hypothyroidism)10例,及健康正常对照15例,测定游离三碘甲状腺原氨酸(Free triiodothyronine,FT3)、游离甲状腺素(Free thyroxine,FT4)和促甲状腺素(Thyroid-stimulating hormone,TSH)。　结果　正常健康对照组,FT3、FT4 和TSH分别为(3 08±1 08)pmol/L、(15. 12±4 .36)pmol/L和(2. 36±0. 65)μIU/ml。甲状腺功能亢进症患者 FT3、FT4 高于正常人,TSH水平低于正常人。而甲状腺功能减退症患者与甲状腺功能亢进症患者刚好相反。　结论　MAIA方法稳定可靠,特异性高,无放射性污染,在甲状腺激素的临床检测中有较大的应用价值。     

β－半乳糖苷酶在急性胰腺炎模型大鼠血清中的活性变化水平及意义

目的：探讨β－半乳糖苷酶在急性胰腺炎模型大鼠血清中的活性变化水平及意义。方法雄性Wistar 大鼠30只,体重200～250 g,随机分为3组。分别为空白对照组（CON组,n＝10）、轻症急性胰腺炎组（MAP组,n＝10）和重症急性胰腺炎模型组（SAP 组,n＝10）。分别予以开腹后仅翻动胰十二指肠关腹、主胰管内注射1％牛磺胆酸钠溶液（0.1 mL／100 g体重）、主胰管内注射5％牛磺胆酸钠溶液（0.1 mL／100 g体重）。全自动生化仪检测各组血清淀粉酶、脂肪酶、丙氨酸氨基转移酶及钙离子水平。取胰腺组织4％多聚甲醛固定后切片, HE 染色后光镜下观察3组胰腺组织病理学改变并评分,免疫组织化学法检测各组肿瘤坏死因子－α（ TNF－α）表达情况。酶联免疫吸附（ ELISA）法检测各组血清中β－半乳糖苷酶活性、血清白细胞介素－6水平及胰腺组织β－半乳糖苷酶活性水平。结果与CON组相比较,MAP组和SAP组大鼠血清淀粉酶、脂肪酶、丙氨酸氨基转移酶、白细胞介素－6水平及胰腺组织β－半乳糖苷酶活性明显升高（P＜0.05）,血清钙离子及血清β－半乳糖苷酶活性水平明显降低（ P＜0.05）。光镜下可见腺叶组织坏死严重、毛细血管扩张充血、组织间隙增宽、大量炎性细胞浸润等,胰腺组织病理评分明显升高（P＜0.05）、TNF－α表达明显增加。与MAP组相比较,SAP组大鼠血清淀粉酶、脂肪酶、丙氨酸氨基转移酶、白细胞介素－6水平及胰腺组织β－半乳糖苷酶活性明显升高（P＜0.05）,血清钙离子及血清β－半乳糖苷酶活性水平明显降低（ P＜0.05）,胰腺组织坏死严重、病理评分升高、TNF－α表达增加。结论血清β－半乳糖苷酶活性水平在大鼠急性胰腺炎时明显下降,且下降程度与病情严重程度有关。     

α—半乳糖苷酶消除猪血管内皮Galα（1,3）Gal的初步研究

为了探讨预防异种器官移植产生的免疫排斥反应,采用α－半乳糖苷酶（α－ｇａｌａｃｔｏｓｉｄａｓｅ）处理猪股静脉内皮,观察猪血管内皮上的主要异种抗原决定簇α－半乳糖α（１,３）半乳糖（Ｇａｌα（１,３）Ｇａｌ）的表达变化及血管内皮形态学改变,结果发现用α－半乳糖苷酶能在３０分钟内消除猪血管内皮上的异种抗原Ｇｌａα（１,３）Ｇａｌ被处理的猪血管内皮在１小时内未见形态学的病理改变,提示α－半乳糖苷酶直接处     

重组β—半乳糖苷酶腺病毒载体的构建及其在血管闰滑肌细胞中的表达

目的构建表达β-半乳糖苷酶(β-gal)的重组腺病毒,以期为再狭窄的基因治疗研究提供一个对照载 体和为腺病毒介导的基因转移的安全性、可行性、转染效率的研究提供一有用的工具。方法采用基因重组方法构 建穿梭质粒pAd-β-gal,通过同源重组法制备出重组腺病毒Ad-β-gal,转染的293细胞用X-gal染色鉴定Ad-β -gal的正确与否。通过测定260nm的紫外光吸收值估计病毒高度。原代大鼠血管平滑肌细胞采用组织块培养 法。Ad-β-gal以100moi感染VSMCs并行X-gal染色,以观察β-gal在VSMCs中的表达情况。结果成功构建了 pAd-β-gal穿梭质粒和Ad-β-gal重组腺病毒,转染的293细胞和VSMCs经X-gal染为蓝色,病毒浓度为9×l011 pfu/ml,以100moiAd-β-gal转染VSMCs,其转染效率接近l00%。结论表达β-gal的重组腺病毒构建成功,并在 VSMCs中得到有效表达,本研究为将来再狭窄基因治疗研究提供了一对照载体,也为腺病毒介导的基因转移的安 全性、可行性、有效性的研究提供了一有用的工具。     

用尿半乳糖苷酶评价庆大霉素的肾毒性作用(附10例病例分析)

测定10例用庆大霉素(GM)治疗的婴儿肺炎(G 组)的 N-乙酰-β氨基葡萄糖酶(NAG)、β-D-半乳糖苷(GAL)以及庆大霉素血药浓度,以未用 GM 组的婴儿作对照(Ⅰ组)。发现尿 NAG 与 GAL 的变化有相关关系(γ=0.8),GAL/NAG 比值(G/N)明显降低(P<0.05),同时与 GM 谷浓度有相关关系(γ=-6.5)。结果表明:GM 谷浓度在肾毒性作用中意义较大,而 G/N 是反映 GM 肾毒性作用及修复的较为敏感的指标。     

RT-PCR结合GeneScan检测SARS病毒的高灵敏度技术的建立及应用

目的建立高度敏感的检测SARS病毒(SARS—CoV)RNA的技术，提高SARS病毒检出率。方法用RT—PCR技术扩增SARS—CoV 138bp片段并荧光标记后，用ABI-310毛细管电泳仪和GeneScan软件对扩增产物进行分析，并以峰高的方式给出产物的相对产量，参考空白对照和阴性对照的峰高定出本批实验检测基线。高于基线为SARS病毒阳性。结果检测了来自20例SARS患的67份标本，与常规的琼脂糖凝胶电泳法的结果(23／67)相比，GeneScan法(38／67)检测SARS—CoV的灵敏度提高22．4％。全部20例患的1-5种标本中都有1种、2种甚至3种、4种检出为阳性。病程1-22天的患均能检出阳性。结论ABI-310仪检测SARS—CoV的灵敏度较高，有助于早期诊断。     

建立检测血清HBV DNA的多聚酶链反应技术

建立检测血清HBV DNA的多聚酶链反应技术。人工合成adr、adw和ayw三个业型HBV的两个共有序列NC1和NC2作为引物扩增一长428bp且含一BglⅡ酶切点的HBV C基因片段。含FD酶的反应体系在水浴93℃30秒、55℃60秒、72℃90秒依序循环30周期,当克隆HBV DNA模板最小加量为10 fg时,产物作琼脂糖凝胶电泳经溴化乙锭染色在紫外线下观察仍可见428 bp位置的阳性荧光带。阳性产物经BgⅠⅡ酶切后分为125 bp和303 bp的两个特异片段。同一条件下的阴性对照则出现阴性结果。这一技术用以检测经常规DNA提取的127例HBsAg阳性血清,结果HBV DNA检出率达88％,其中HBeAg阳性血清HBV DNA检出率为97％,抗HBeAg阳性血清HBV DNA检出率为82％。