SPA在淋巴瘤及横纹肌肉瘤免疫技术中的应用

葡萄球菌蛋白-A(SPA),是金黄色葡萄球菌细胞壁的一种蛋白戍份,具有与人及多种哺乳动物血清中IgG类抗体Fc段结合的特性,每个SPA分子可以结合二个免疫球蛋白分子,而且结合后并不影响IgG的Fab段和抗原作用。SPA由于不受第一抗血清动物种属的限制,本文将其应用于淋巴瘤(7例)横纹肌肉病(4例)免疫PAP法中,     

免疫磁分离及免疫比浊分析对福氏志贺菌的自动快速定量检测

目的 以SPA包被的磁珠和富含SPA的金黄色葡萄球菌分别与福氏志贺菌的多抗血清结合,制备福氏志贺菌特异的多抗磁珠和抗体致敏的金黄色葡萄球菌作为协同凝集试剂与免疫比浊试剂,利用免疫比浊分析探索其在福氏志贺菌自动快速定量检测中的初步应用.方法 福氏志贺菌F1a免疫日本大耳白兔制备多抗血清,磁珠包被SPA后再与多抗偶联,制成多抗免疫磁珠.以该磁珠捕获模拟标本的福氏志贺菌,接种MH平板37℃培养18～24 h,菌落计数后计算免疫磁珠的特异富集作用.富含SPA的金黄色葡萄球菌(No 1800株)经甲醛灭活后,与福氏志贺菌的多抗血清结合,制备特异抗体致敏的金黄色葡萄球菌,作为协同凝集试剂和自动定量检测的免疫比浊试剂,在日立7060全自动生化分析仪编制程序进行自动检测并进行初步的方法学评价.结果 福氏志贺菌Fla免疫日本大耳白兔获得了高质量的多抗血清,特异性好,凝集效价达1:320;制备多抗免疫磁珠对福氏志贺菌具有一定的富集作用,菌落计数显示磁珠处理的细菌捕获效率约为30%;抗体致敏的金黄色葡萄球菌,作为协同凝集试剂和自动定量检测的免疫比浊试剂,在玻片上能与待测福氏志贺菌产生明显的凝集现象,在日立7060全自动生化分析仪上定量检测灵敏、特异、线性良好.结论以福氏志贺菌的多抗血清分别致敏SPA包被的磁珠和富含SPA的金黄色葡萄球菌,制备特异的多抗磁珠对福氏志贺菌有一定的特异捕获与富集作用,抗体致敏的金黄色葡萄球菌作为协同凝集试剂与免疫比浊试剂对福氏志贺菌的自动、快速、定量检测具有较好的效果,为病原菌的快速诊断和自动定量分析提供了新的思路.     

标记葡萄球菌A蛋白在免疫学中的应用

葡萄球菌A蛋白(Staphylococcal protein A,SPA)是大多数金黄色葡萄球菌细胞壁所特有的一种成份。它能与人及多种哺乳动物IgG分子Fc段结合,而不影响该抗体与抗原的反应性。这一特性给免疫学研究提供了新的手段。近年来,将提纯的     

葡萄球菌A蛋白在免疫学技术中的应用(上)

葡萄球菌A蛋白(Staphylococcal ProteinA,简称SPA)是金黄色葡萄球菌细胞壁上的一种蛋白质,它具有以下特点:(1)能与人及多种哺乳动物血清IgG分子的Fc段发生非特异性结合;(2)SPA-IgG复合物与一般抗原抗体复合物一样,能激活补体系统;(3)抑制IgG调理素对吞噬和杀菌的促进作用;(4)导致离体豚鼠回肠产生类似过敏反应样     

用含A蛋白的葡萄球菌提取人血清IgG的初步探讨

自从1966年Forsgren阐明葡萄球菌A蛋白(SPA)能与人IgG分子的Fc段结合之后,开拓了其在免疫学中应用的新途径。1972年Hjelm采用IgG-Sepharose亲和层析柱分离SPA以及用SPA-Sepharose层析柱提纯IgG,由此简化了IgG的提纯方法。加之Sjholm证明和SPA结合的IgG可     

应用FITC-SPA菌体检测人外周血中SmIgG的B淋巴细胞

SPA具有与人IgG的Fc段结合的特性,将荧光素标记在含有SPA的金黄色葡萄球菌菌体上,直接和人的B淋巴细胞混和,FITC-SPA菌体能粘附在SmIgG+的细胞表面,便于计数。我们用该方法共检测正常人、SLE病人、PSS病人等67例的B淋巴细胞标本,同时用FITC-抗IgG作为对照组,两组在统计学上无显著差别(P>0.05)。     

以葡萄球菌A蛋白代替羊抗兔IgG应用于免疫组化显示大白鼠垂体的促黄体生成激素细胞

利用人的绒毛膜促性腺激素(HCG)与大白鼠的促黄体素(LH)有交叉反应,我们曾报道过用辣根过氧化物酶(HRP)标记的羊抗兔IgG抗血清作第二抗体,显示大白鼠垂体的促黄体生成激素细胞。为了探讨与其他动物的IgG分子结合,免去制备特异抗体,因此提取了葡萄球菌A蛋白SPA,利用SPA的广谱的第二抗体的特性,在原有工作的基础上试用酶联葡萄球菌A蛋白(HRP-SPA)和单纯的SPA分别代替免疫酶标组织化学间接法中HRP单抗兔     

应用酶标记金葡萄球菌A蛋白在尸检乙脑病毒组织中的免疫定位

金黄色葡萄球菌A蛋白具有与人和多种哺乳动物IgG的Fc段结合的特性,它容易与荧光素、辣根过氧化物酶、铁蛋白、~(125)I和胶体金等结合。Dubois—Dalcq和Falini等以辣根过氧化物酶标记葡萄球菌A蛋白用于免疫组化的研究,获得了满意的结果。国内丁宗武等首先成功地将辣根过氧化物酶标记在葡萄球菌蛋白A上,建立了一种新的酶联免疫方法(ELISA)。1984年凌静萍等将酶标记金葡菌A蛋白(HRA—SPA)应用于乙脑与狂犬小鼠脑组织的病毒抗原定位获得敏感性不低于酶标抗体法的结果。本文是将HRA—SPA应用在尸检乙脑病毒     

酶联SPA-斑点-ELISA检测体液(痕)ABO血型抗原

金黄色葡萄球菌A蛋白(SPA)具有与人和多种哺乳动物IgG的Fc段非特异性结合,稳定性好,易于长期保存等特点,是一种很好的免疫学试剂。本研究是将SPA用于斑点-ELISA的一种检测技术。基本原理与间接斑点-ELISA相同,只是以酶标记的SPA代替间接法中的酶标记第二抗体。直接、间接斑点-ELISA对20份唾液标本的研究结果表明,三种方法的灵敏度经统计学处理无显著差异,均能检出0.0001μl分泌型唾液的血型抗原。     

用PPA试纸检测青菜叶片内的有关病毒

<正> 作者曾报道用酶标试纸检测青菜叶片内的RMV,并指出:如果制备了抗抗体的酶标试纸,在一定条件下,则可检测任一抗原。进一步结合过氧化物酶交联金黄色葡萄球菌A蛋白(Peroxidase-Protein A,PPA)的应用,有可能得到更好的结果。金黄色葡萄球菌A蛋白(简称SPA)具有与多数哺乳动物血清IgG Fc段共价结合的性质,因此,可以用SPA代替抗IgG抗体(即抗抗     

抗体—SPA—PAP法在免疫病理检测中的应用

利用葡萄球菌蛋白A(SPA)和许多哺乳动物IgG分子具有亲合性,可以与任何片段IgG分子结合,不受一抗种属特异性限制,只需一套PAP试剂盒就可以对不同种属来源的一抗进行检测,敏感性明显高于SPA-PAP法及PAP法。     

用于小鼠及兔源IgG的通用型二抗PA/G-HRP融合蛋白的真核表达及活性检测

目的 制备可与小鼠及兔来源IgG结合的通用型二抗,并用于多种免疫检测实验.方法 全基因合成金黄色葡萄球菌蛋白A(SPA)、链球菌蛋白G(SPG)与辣根过氧化物酶(HRP)融合基因片段,定向克隆至真核表达载体pcDNATM3.1骨架中,瞬时转染入人胚肾HEK293F细胞进行表达.通过SDS-PAGE、Western bl...     

人可溶型FcγRIIb的制备及其功能初步研究

目的:检测正常人和SLE患者血清中可溶型FcγRIIb(husFcγRIIb)含量,诱导表达并纯化人可溶性FcγRIIb,检测其与血清中免疫复合物结合力及对B细胞抗体分泌功能的影响。方法:ELISA法检测人血清中可溶型FcγRIIb含量,IPTG诱导含有pET-sFcγRIIb的大肠杆菌BL21,镍琼脂糖磁珠纯化目的蛋白,可溶型FcγRIIb包被ELISA板,ELISA方法检测其与血清中免疫复合物结合能力,免疫磁珠法分选B细胞,分组刺激培养,ELISA检测培养物上清中IgM含量。结果:SLE患者血清中可溶型FcγRIIb浓度低于正常人(P<0.05);诱导表达并纯化获得相对分子质量(Mr)为41 500的重组蛋白;重组可溶型FcγRIIb可以与血清中免疫复合物结合,二者孵育后吸光度(A)值随血清中免疫复合物浓度逐渐增高,至受体结合度饱和时达最大;不同刺激条件下B细胞培养10 d,各实验组抗体浓度均高于细胞对照组(P<0.01),SPA组、SPA+husFcγRIIb组抗体浓度无显著差异(P﹥0.05),SPA+IgG型抗人IgM组抗体滴度明显高于SPA组(P<0.01),SPA+husFcγRIIb+IgG型抗人IgM组抗体滴度明显低于SPA+IgG型抗人IgM组(P<0.01)、SPA组(P<0.01)和SPA+husFcγRIIb组(P<0.01)。结论:SLE患者血清中可溶性FcγRIIb含量低于正常人,重组人可溶性FcγRIIb可以与血清中免疫复合物结合,抑制免疫复合物对B淋巴细胞的激活,减少IgM型抗体的分泌。     

尿IgG固相放免法测定

制葡萄球菌蛋白A(SPA)包被管, 利用其结合IgG特性, 建立了固相尿IgG放射免疫分析法. 在此方法中, 固相SPA既是标记与非标记IgG的特异性竞争结合剂, 同时又作为固相免疫分离剂, 使整个分析过程简单、稳定, 现报道如下: 　　材料和方法 　　1 试剂 　　天然SPA纯品, 上海生物制品研究所产品; IgG标准及标记物, 天津九鼎生物技术公司产品, 用其液相法放免试剂盒作为对照.     

用葡萄球菌A蛋白作为表面吸附剂来分离淋巴细胞的方法

用葡萄球菌A蛋白(SPA)分离带有特异表面标记的细胞的方法有多种,主要是根据SPA能与哺乳动物的IgG的Fc段起双价结合反应的原理而设计的。以往多用直接法分离细胞,而本文作者介绍了间接法分离技     

新型壳聚糖纳米氧化铁磁珠的制备和理化性能测定

目的 研制一种新型壳聚糖纳米氧化铁磁珠,并检测其理化性质,为更加优化的免疫磁珠技术奠定基础.方法 采用凝聚沉淀的方法,通过在纳米氧化铁磁珠表面包被一层壳聚糖分子,制备出壳聚糖纳米氧化铁磁珠.并对磁珠的粒径大小、显微特征、壳聚糖外壳和磁珠内核的关系以及壳聚糖磁珠的理化性能进行检测、分析.结果 制作过程简便、易行,制作出的壳聚糖纳米氧化铁磁珠粒径均匀,成球性与稳定性好.结论 成功制备了新型纳米壳聚糖氧化铁磁珠,为靶向药物载体、细胞分离、核酸提取等应用提供了实验材料.     

A蛋白酶免疫试验的发展在筛选杂交瘤中的应用

葡萄球菌A(staphylococcal protein A,简称SPA)它具有与人和多种哺乳动物IgG的Fc段结合的特性.许多学者应用SPA,并结合放射,荧光,酶等技术,建立了许多敏感,特异,快速和简便的     

血小板抗体的测定——悬液相放射免疫法

<正> 特发性血小板减少性紫癜是由于免疫因素引起,但长期以来缺乏理想的抗体检测方法。本文采用~(125)I标记的葡萄球菌A蛋白(SPA),直接与患者血小板表面的IgG(PA IgG)结合,而后在重力离心的作用下,使血小板穿过比重为1.012的中性油沉积于管底,与反应液分离,测出血小板沉积块所带放射性,从而计算出平均     

纳米尺度神经细胞膜蛋白单分子免疫细胞化学三维定位方法的建立

目的　建立纳米尺度神经细胞膜表面蛋白单分子三维标记的免疫细胞化学方法。方法　应用原子力显微镜 ,对分布在云母表面的抗NMDAR1亚基IgG 葡萄球菌蛋白A 胶体金颗粒免疫标记复合物分子进行扫描 ,明确其特定的三维结构作为对照标准 ,然后扫描结合了免疫标记复合物分子的神经细胞膜表面 ,对表面形貌作出对比后确定目的抗原的定位和复合物三维结构。并与激光共聚焦免疫荧光方法对比。结果　在空白云母表面 ,免疫复合物分子在原子力显微镜下呈现出均匀分散粒径为 4 9nm的特征性球形结构。在神经元表面结合免疫标记物后可以发现有大量的粒径为 5 3nm的球形或双球形 (短棒状 )结构 ,颗粒均匀 ,截面为双峰或单峰。而在LSCM下荧光呈颗粒点状分布 ,为多个FITC聚集显色的结果。结论　原子力显微镜下免疫胶体金标记技术可以在纳米尺度对目的膜受体蛋白进行定位和表面三维结构测定。NMDA受体蛋白可以结合 1个或 2个胶体金复合物 ,与LSCM相比 ,原子力显微镜下胶体金标记方法可以对单个膜NMDA受体蛋白抗原进行定位、定性、定量标记测定。     

用溶葡萄球菌素和亲和层析法制备SPA和其它制备方法的比较

本文比较了三种制备纯化SPA的方法。用加热和 DEAE-Sephadex A-25从金黄色葡萄球菌Cowan Ⅰ株制备SPA,得率低,纯度差。用溶葡萄球菌素和DEAE-Sephadex A-50法,虽得率较高,但操作麻烦,纯度也不够理想。现用溶葡萄球菌素和亲和层析二者结合的新工艺制备冻干SPA,得率高,纯度好,而且工艺简便。