水翁花对神经细胞氧化损伤保护作用的量效值

背景水翁花为中药桃金娘科植物水翁的干燥花蕾,已有报道水翁花提取物能通过抑制Na+/K+-ATP酶的活性加强心脏的收缩功能,同时降低心脏的收缩频率,水翁花提取物是否具有抗氧化方面的生物活性?目的观察水翁花对过氧化氢诱导的PC12神经细胞氧化损伤保护作用的量效关系.设计非随机对照的实验.单位华东理工大学生物工程学院生物反应器国家重点实验室.材料实验于2002-05/11在华东理工大学反应器国家重点实验室鲁华生物技术研究所完成.选择昆明种雄性小鼠8只.PC12神经细胞购自中国科学院上海细胞所.方法制备神经细胞氧化损伤模型.①水翁花细胞毒性测定在96孔微量培养板中加入PC12神经细胞,水翁花以RPMI 1640培养液稀释成0.001,0.01,0.1,0.5,1 g/L 5个浓度,每个浓度3孔,每孔接种2×103个细胞,另设空白对照组,即无药培养液组.标准条件下培养48 h,噻唑蓝比色法测定.②PC12神经细胞预先接种于96孔板中,培养24 h贴壁,分为正常对照组(正常细胞,不加H2O2和水翁花提取物)、0,0.01,0.1,0.5,1g/L水翁花提取物共7个组.除正常对照组外,其余细胞用200 μmol/L的H2O2处理,加入不同浓度的水翁花水提物,作用12 h后用噻唑蓝法测定细胞的存活率.③氧自由基水平测定PC12神经细胞处理同存活率测定法,采用CDCFH染色法测定细胞氧自由基水平.主要观察指标①水翁花提取物对PC12神经细胞的毒性.②水翁花提取物对氧化损伤的PC12神经细胞存活率影响.③水翁花提取物对氧化损伤的PC12神经细胞内、细胞外氧自由基水平的影响.结果①水翁花提取物在浓度低于0.055 g/L时,对神经细胞有保护作用,在0.055～1.00 g/L浓度时,对细胞生长几乎无任何影响.②在低于0.10 g/L的浓度下,水翁花提取物对H2O2诱导的PC12神经细胞的氧化损伤没表现出明显的保护作用.但当浓度为1.00 g/L时,对H2O2诱导的PC12神经细胞的氧化损伤表现出明显的氧化修复能力.③H2O2损伤后,PC12细胞内、外氧自由基水平显著升高,当水翁花提取物浓度为0.01 g/L时,能明显的降低氧化损伤神经细胞内、外的氧自由基水平.结论①水翁花水提物对H2O2诱导的PC12神经细胞的氧化损伤亦有很强的保护作用.②水翁花提取物抗氧化特性与提取液的浓度比有明显的关系,当浓度为1.00 g/L时,具有明显的修复能力;当浓度为0.01 g/L时能够降低细胞内外的氧自由基水平.     

ERK1/2和P38在7-二氟甲氧基金雀异黄素抗H2O2损伤PC12细胞中的作用

[目的]探讨7-二氟甲氧基金雀异黄素(FMGEN)对神经细胞氧化应激损伤的保护作用机制.[方法]以H2O2损伤PC12细胞为神经细胞氧化应激模型,多功能生化分析仪测定培养液上清中的乳酸脱氢酶(LDH)活性,Western-Blot测定磷酸化ERK1/2蛋白和磷酸化p38蛋白的表达水平.[结果]H2O2孵育的PC12细胞培养液中LDH量明显增高,FMGEN呈浓度依赖性的降低H2O2诱导PC12细胞LDH的释放;FMGEN处理细胞后均可使ERKl/2蛋白的磷酸化水平升高,ERK1/2特异性抑制剂U0126可显著阻断FMGEN对H2O2损伤PC12细胞的拮抗作用;FMGEN抑制H2O2激活PC12细胞P38,P38特异性抑制剂SB203580可显著减轻H2O2对PC12细胞的损伤作用.[结论]FMGEN对PC12细胞氧化应激损伤的拮抗作用可能与其激活ERK1/2和抑制P38的活性有关.     

灵芝多糖肽对氧化应激损伤PC12细胞的保护作用与神经生长因子的比较

目的探讨灵芝的主要有效成分灵芝多糖肽对H2O2氧化应激损伤PC12细胞的保护作用,并以神经生长因子作为阳性对照.方法实验于2004-01/06在第二军医大学神经科学研究所进行.以H2O2损伤PC12细胞为氧化应激损伤神经元的模型,将培养的PC12细胞随机分成4组①正常对照组PC12细胞在无血清的DMEM培养基中培养.②H2O2作用组PC12细胞与终浓度为200 μmol/L的H2O2作用4 h.③灵芝多糖肽组PC12细胞预先用终浓度为10 mg/L的灵芝多糖肽预处理24 h后,加入终浓度为200μmol/L的H2O2共同作用4 h.④神经生长因子组PC12细胞预先用终浓度为0.1 mg/L的神经生长因子预处理24 h后,加入终浓度为200μmol/L的H2O2共同作用4 h.采用MTT法检测细胞的存活率以及Western blotting检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3 P20活性片段.结果①细胞存活率H2O2作用组显著低于正常对照组[(38.6±7.1)%,(100±9.3)%,P＜0.01 ];灵芝多糖肽组和神经生长因子组显著高于H2O2作用组[(83.4±10.2)%,(75.9±7.4)%,P＜0.01],但两组间比较无差异(P＞0.05).②半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3 P20活性片段Westernblotting检测结果提示灵芝多糖肽组和神经生长因子组较H2O2作用组明显减少.结论适量灵芝多糖肽灵芝多糖肽能促进氧化应激损伤PC12细胞的存活,抑制H2O2诱导的PC12细胞凋亡,对氧化应激损伤PC12细胞具有保护作用,其效果与神经生长因子相似.     

灵芝多糖肽对氧化应激损伤PC12细胞的保护作用：与神经生长因子的比较

自的：探讨灵芝的主要有效成分灵芝多精肽对H2O2氧化应激损伤PC12细胞的保护作用，并以神经生长因子作为阳性对照。方法：实验于2004—01／06存第二军医大学神经科学研究所进行.以H2O2损伤PC12细胞为氧化应激损伤神经元的模型,将培养的PC12细胞随机分成4组：①正常对照组：PC12细胞在无血清的DMEM培养基中培养、②H2O2作用组：PC12细胞与终浓度为200μmol／L的H2O2作用4h，③灵芝多粮肽组：PC12细胞预先用终浓度为10mg／L的灵芝多糖肽预处理24h后，加入终浓度为200μmol／L的H2O2共同作用4h、④神经生长因子组：PC12细胞预先用终浓度为0．1mg／L的神经生长因子预处理24h后．加入终浓度为200μmol／L的H2O2共同作用4h,采用MTT法检测细胞的存活率以及Western blotting检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3P20活性片段.结果：①细胞存活率：H2O2作用组显著低于正常对照组[（38．6&;#177;7．1）％，（100&;#177;9．3）％，P〈0.01]；灵芝多糖肽组和神经生长因子组显著高于H2O2作用组[（83．4&;#177;10．2）％，（75.9&;#177;7．4）％．P〈0．01]，但两组间比较无差异（P〉0.05）.②半胱氩酸天冬氨酸蛋白酶3P20活性片段：Weslern blotting检测结果提示灵芝多糖肽组和神经生长因子组较H2O2作用组明显减少.结论：适量灵芝多精肽灵芝多精肽能促进氧化应激损伤PC12细胞的存活，抑制H2O2诱导的PC12细胞凋亡，对氧化应激损伤PC12细胞具有保护作用,其效果与神经生长因子相似.     

五味子乙素和五味子醇甲对PC12细胞氧化损伤的保护作用

目的:观察五味子乙素和五味子醇甲对过氧化氢(H2O2)PC12细胞氧化损伤的保护作用。方法:实验于2005-08/2006-07在首都医科大学附属北京中医医院中心实验室完成。①PC12细胞培养在RPMI1640培养液中,加入2.5,5,10,20μmol/L等不同浓度的五味子乙素和五味子醇甲,与细胞培养24h,然后加入0.1,0.2,0.3,0.5mmol/L不同浓度过氧化氢(H2O2)溶液,37℃作用30min。模型组细胞只加入H2O2;正常对照组只加入等量的培养基。②采用倒置显微镜观察PC12细胞形态学变化,四甲基偶氮唑盐比色法测定细胞生存率,用自动生化分析仪测定乳酸脱氢酶的活性,按试剂盒说明书用慧星法测定细胞内DNA损伤。结果:①五味子乙素及五味子醇甲对PC12细胞形态学的影响:倒置相差显微镜观察到PC12细胞被H2O2损伤后,细胞形态学发生变化,表现为胞体肿胀、突起断裂、细胞膜溶解等。经五味子乙素及五味子醇甲处理后细胞,状态明显改善,细胞数目较多,而且细胞形态较完整。②五味子乙素及五味子醇甲对细胞生存率的影响:PC12细胞经0.1,0.2,0.3,0.5mmol/L不同浓度H2O2处理30min后,与正常对照组相比,四甲基偶氮唑盐法测定其生存率,分别降低了4%,13%,40%,57%,(P<0.05或P<0.01)。不同浓度的五味子乙素及五味子醇甲(2.5～20μmol/L)均能提高细胞的生存率,并呈浓度依赖关系,浓度为5,10,20μmol/L时,与模型组比较,具有明显的差异(P<0.05或P<0.01),特别是10μmol/L五味子乙素及五味子醇甲的作用较强。③五味子乙素及五味子醇甲对细胞内乳酸脱氢酶和DNA损伤的影响:用0.3mmol/LH2O2处理细胞后细胞内乳酸脱氢酶漏出率高于正常对照组(P<0.01)。大量的DNA被损伤,与正常对照组比较,差异有显著性(P<0.01)。细胞与10.0μmol/L五味子乙素及五味子醇甲作用后发现细胞内乳酸脱氢酶漏出率低于模型组(P均<0.01)。DNA损伤明显抑制,与模型组比较,差异有显著性(P均<0.01)。结论:五味子乙素及五味子醇甲均能有效地减轻H2O2对神经细胞的氧化损伤作用。推测保护作用机制是通过清除氧自由基,减轻其对DNA的损伤等方面实现的。     

芦荟大黄素对PC12细胞骨架保护作用的实验研究

目的 研究芦荟大黄素(AE)对H2O2及甲醛引起的PC12细胞损伤的保护作用.方法 将PC12细胞分成AE+H2O2干预组、H2O2损伤组、AE+甲醛干预组、甲醛损伤组、AE对照组和正常对照组6组.各组加入相应药物干预2 h后用不同浓度H2O2或甲醛损伤后进行细胞骨架及凋亡染色、LDH检测.结果 AE+H2O2干预组LDH(67.7±5.5)U/L显著低于H2O2损伤组的(92.0±9.9)U/L(P<0.01);AE+甲醛干预组LDH与甲醛损伤组比较差异无统计学意义(P>0.05);AE+H2O2干预组细胞骨架损伤、凋亡较H2O2损伤组少.结论 AE可通过纠正H2O2诱导的细胞骨架的异常改变,阻滞或延缓PC12细胞的过度凋亡但对甲醛诱导的细胞骨架重排无明显保护作用.     

L-肌肽对过氧化氢诱导PC12细胞损伤的保护机制

目的探讨L-肌肽对H2O2诱导大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞（PC12细胞）凋亡保护的作用机制。方法在H2O2诱导PC12细胞凋亡模型的基础上加入肌肽,采用MTT比色法检测肌肽对H2O2抑制PC12细胞增殖的影响;RT-PCR法检测凋亡相关基因Caspase-3 mRNA的表达变化;免疫组织化学SABC法检测Caspase-3蛋白的表达,流式细胞仪检测细胞凋亡。结果不同浓度的肌肽对H2O2损伤的PC12细胞的存活率有显著的提高作用,20mmol/L浓度时达最大值（P〈0.05）;20mmol/L的肌肽作用于PC12细胞可降低其Caspase-3 mRNA的表达及Caspase-3蛋白的表达,流式细胞仪检测显示,肌肽可抑制细胞的早期和晚期凋亡。结论肌肽对H2O2损伤的PC12细胞有保护作用,机制可能是通过抑制Caspase-3的表达来抑制PC12细胞的凋亡而实现的。     

脑复聪对PC12细胞拟缺血损伤保护作用的血清学研究

目的观察中药复方脑复聪颗粒对H2 O2 损伤的大鼠肾上腺髓质嗜铬瘤分化细胞株 (PC12细胞 )的影响。方法选用SD雄性大鼠 ,分别灌胃脑复聪和蒸馏水后制备血清。培养的PC12细胞加入不同血清孵育后 ,再加入不同浓度的超氧化合物H2 O2造成拟缺血模型 ,采用MTT法观察细胞生存率。结果对受不同剂量H2 O2 损伤的PC12细胞 ,脑复聪含药血清可明显提高其生存率 (P <0 0 5— 0 0 1) ;加入脑复聪血清后的神经细胞可明显抵抗H2 O2 所致的损伤 ,细胞形态基本恢复正常。结论脑复聪颗粒对H2 O2 损伤的PC12细胞有明显保护作用。     

五味子乙素和五味子醇甲对PC12细胞氧化损伤的保护作用

目的：观察五味子乙素和五味子醇甲对过氧化氢（H2O2）PC12细胞氧化损伤的保护作用。方法：实验于2005—08／2006—07在首都医科大学附属北京中医医院中心实验室完成。①PC12细胞培养在RPMI1640培养液中，加入2．5，5，10，20μmoL／L等不同浓度的五味子乙素和五味子醇甲，与细胞培养24h，然后加入0．1，0．2，0．3，0．5mmol/L不同浓度过氧化氢（H2O2）溶液，37℃作用30min。模型组细胞只加入H2O2；正常对照组只加入等量的培养基。②采用倒置显微镜观察PC12细胞形态学变化，四甲基偶氮唑盐比色法测定细胞生存率，用自动生化分析仪测定乳酸脱氢酶的活性，按试剂盒说明书用慧星法测定细胞内DNA损伤。结果：①五味子乙素及五味子醇甲对PC12细胞形态学的影响：倒置相差显微镜观察到PC12细胞被H2O2损伤后，细胞形态学发生变化，表现为胞体肿胀、突起断裂、细胞膜溶解等。经五味子乙素及五味子醇甲处理后细胞，状态明显改善，细胞数目较多，而且细胞形态较完整。②五味子乙素及五味子醇甲对细胞生存率的影响：PC12细胞经0．1，0．2，0．3，0．5mmol／L不同浓度H2O2处理30min后，与正常对照组相比，四甲基偶氮唑盐法测定其生存率，分别降低了4％，13％，40％，57％，（P〈0．05或P〈0．01）。不同浓度的五味子乙素及五味子醇甲（25～20mnoL／L）均能提高细胞的生存率，并呈浓度依赖关系．浓度为5，10，20μmol／L时，与模型组比较，具有明显的差异（P〈0．05或P〈0．01），特别是10μmol／L五味子乙素及五味子醇甲的作用较强。②五味子乙素及五味子醇甲对细胞内乳酸脱氢酶和DNA损伤的影响：用0．3mmol／LH2O2处理细胞后细胞内乳酸脱氢酶漏出率高于正常对照组（P〈0．01）。大量的DNA被损伤，与正常对照组比较，差异有显著性（P〈0．01）。细胞与10．0μmol／L五味子乙素及五味子醇甲作用后发现细胞内乳酸脱氢酶漏出率低于模型组（P均〈0．01）。DNA损伤明显抑制，与模型组比较，差异有显著性（P均〈0．01）。结论：五味子乙素及五味子醇甲均能有效地减轻H2O2对神经细胞的氧化损伤作用。推测保护作用机制是通过清除氧自由基．减轻其对DNA的损伤等方面实现的。     

葛根总黄酮对过氧化氢所致PC12细胞氧化损伤的防护

背景:葛根具有防治高血压、心脏病、糖尿病和血液病等多种生物学功效,其提取物对S180肉瘤及Lewis肺癌的增殖有一定抑制作用。目的:观察葛根总黄酮对嗜铬细胞瘤细胞PC12细胞生长的影响和抗过氧化氢所致细胞氧化损伤的防护作用。设计:完全随机分组设计,对照实验。单位:解放军总医院生化科和老年病研究所。材料:葛根购自同仁堂药店,由本实验室用乙醇、乙酸乙酯按常规提取分离提纯葛根总黄酮,用理化方法和薄层色谱进行鉴定,定量测定提取物中葛根素含量为31.79%。四甲基偶氮唑盐(Sigma公司)。鲁米诺购自Sigma公司。抗氧化活性试剂用黄嘌呤氧化酶(Sigma公司)。PC12细胞为解放军总医院老年病研究所惠赠。方法:实验于2001-01/07在解放军总医院老年病研究所完成。①以20g/LDMEM细胞培养液(pH7.1～7.2)培养细胞。将培养细胞按随机抽签法分为2组:葛根总黄酮组和过氧化氢损伤 葛根总黄酮组,其中每组又根据葛根总黄酮的浓度平行分为5个质量浓度进行观察(0,1.0mg/L,10,100mg/L,1.0g/L),每组平行培养8孔,每孔100mL培养液(细胞数为1×109L-1),葛根总黄酮组于37℃条件下,加入葛根总黄酮培养72h;过氧化氢 葛根总黄酮组:在37℃条件下,加入葛根总黄酮培养48h后,再加入500mmol/L过氧化氢,继续培养24h。②用四甲基偶氮唑盐比色法检测细胞活性;用Griess方法测定培养液中亚硝酸盐含量,用次黄嘌呤/黄嘌呤氧化酶测定培养液中的超氧化物歧化酶活性,以观察葛根总黄酮对PC12细胞生长活性的调控;并外源性加入过氧化氢,观察葛根总黄酮对过氧化氢所致培养PC12细胞氧化损伤的防护作用;结果以抑制率表示[(空白A值-测定A值)/空白A值×100%],抑制率越高,说明培养液中清除O2-的能力越强。③数据间差异比较采用单因素方差分析。主要观察指标:葛根总黄酮对PC12细胞培养液中亚硝酸盐含量、超氧化物歧化酶活性、及细胞活性的影响。结果:①葛根总黄酮对PC12细胞活力的影响:1～10mg/L的葛根总黄酮对PC12细胞的生长无明显影响,100mg/L葛根总黄酮可促进PC12细胞的生长(P<0.05),当葛根总黄酮在培养液中的浓度增加至1.0g/L时,则表现出明显地抑制细胞生长效能(P<0.01)。培养液中葛根总黄酮浓度在1～100mg/L内可有效提高过氧化氢损伤组细胞的活力(P<0.05)。②葛根总黄酮对PC12细胞培养液清除O2-的影响:葛根总黄酮组和过氧化氢损伤 葛根总黄酮组清除O2-的能力均随着葛根总黄酮质量浓度的增加而逐渐升高(除外过氧化氢 葛根总黄酮组加入葛根总黄酮1mg/L时),具有明显量效关系。两组均在加入100mg/L和1g/L葛根总黄酮时PC12细胞培养液中超氧化物歧化酶活性明显高于未加入葛根总黄酮时(P<0.05～0.01)。③葛根总黄酮对PC12细胞亚硝酸盐的调控:低浓度(1～100mg/L)的葛根总黄酮使培养细胞亚硝酸盐生成减少,但培养液中葛根总黄酮浓度达1g/L时,亚硝酸盐生成量则增加。结论:①葛根总黄酮对培养的PC12细胞具有一定生长调控作用,低质量浓度(1～100mg/L)时促进细胞生长,高质量浓度(1g/L)时抑制细胞生长,但抗氧化能力最强。②在培养液中加入1～100mg/L的葛根总黄酮对过氧化氢所致PC12氧化损伤具有明显防护效能。     

韶关市农村留守儿童孤独感状况调查

目的了解广东省韶关市农村地区留守儿童孤独感现状及其影响因素。方法对韶关市某地区两所农村小学3～6年级学生中的489名留守儿童采用儿童孤独量表和自编调查表进行问卷调查。结果17．6％留守儿童存在孤独感，不同性别孤独感发生率无差异性，不同年龄及不同年级间孤独感发生率差异均有极显著性（P〈0.01）；随年级增加，孤独感发生率呈下降趋势（X^2趋势=5．970，P〈0.05）。留守儿童孤独感与健康状况、学习成绩、学习困难程度、父母教育方式、父母间关系和老师教育方式等因素显著相关（P〈0.01～0．05）。结论农村地区留守儿童中存在一定程度的孤独感问题，老师和家长应以正确的态度和方法对待留守儿童，以减少其孤独感的发生。     

产科新生儿不同部位经皮测黄报警预值的可靠性观察

目的对比观察产科新生儿不同部位经皮胆红素（TCB）报警预值的可靠性。方法132例产科新生儿采取随机数字分组法分为正常产组和剖宫产组各66例,新生儿均于产后第4天同一时间点应用KJ8000经皮测黄仪分别测量额、胸、腹、额胸、额胸腹TCB值,TCB〉12．9mg／dl者,取得亲属同意抽取静脉血检测血清胆红素（SB）,对比分析不同部位TCB及其与sB值的差异。结果两组分别有17例或21例达到TCB报警预值。两组TCB或sB相同方法及相同部位比较,差异无统计学意义（P〉0．05）;两组TCB不同部位对比,额部值最低、胸部值最高,且与其他部位同组对比差异均有统计学意义（P〈0．01）;两组sB值对比差异无统计学意义（t=1．53,P〉0．05）,与不同部位TCB对比均以胸部数值差异无统计学意义（P〉0．05）,而与其他部位TCB两组差异均有统计学意义（P〈0．01）。结论正常产与剖宫产新生儿术后sB对比差异无意义;TCB动态监测以胸部结果更接近SB。     

Determination of loss of quality of life

Physiatrists are a valuable resource in legal settings, where assessment of functional capacity to perform work and of future medical needs must be determined. Physiatrists help determine what future medical care is needed to restore and maintain an individual at the maximum level of life function. This article focuses on the use of a quality of life (QOL) rehabilitation model, rather than a medical model, for enhancing functional performance, modifying environments, and facilitating patient coping. We discuss use of the QOL model to describe and influence a patient's physical, psychological, cognitive, vocational/economic, and social/leisure domains.     

护士选择性应用静脉留置针现状分析

[目的]了解护士选择性应用留置针的现状以及主要影响因素,为指导临床留置针合理应用提供理论依据。[方法]采用自设问卷对138名护士留置针选择性使用情况及其影响因素进行调查。[结果]约1／4的护士并不知道应选择性使用留置针,近60％的护士在实际工作中选择留置针的意识较差;护士选择性应用留置针的决策受多因素影响;不同科室、职称及是否具有带教资格选择性应用留置针的影响因素不尽相同;绝大部分护士希望参加选择性应用留置针相关内容的培训。[结论]临床护士操作前考虑留置针选择的意识有待加强。建议实施有针对性的培训以提高护士选择性应用留置针的能力。     

血液透析患者家庭护理提供者的生活质量调查

目的:了解江汉油田血液透析(血液透析)患者家庭护理提供者(护理者)的生活质量。方法:对60例血液透析患者的家庭护理提供者进行一般情况和生活质量综合评定问卷(QOLI-74)调查,并进行相关性和多因素回归分析。结果:家庭护理提供者各维度的主观生活满意度与其客观指标相关,但也与其需求、年龄、文化程度、与患者的关系有关。结论:客观状态是影响主观生活满意度的重要因素,同时应考虑护理者的需求、年龄、文化程度、与患者的关系对护理者主观生活满意度的影响。