水翁花对神经细胞氧化损伤保护作用的量效值

背景水翁花为中药桃金娘科植物水翁的干燥花蕾,已有报道水翁花提取物能通过抑制Na+/K+-ATP酶的活性加强心脏的收缩功能,同时降低心脏的收缩频率,水翁花提取物是否具有抗氧化方面的生物活性?目的观察水翁花对过氧化氢诱导的PC12神经细胞氧化损伤保护作用的量效关系.设计非随机对照的实验.单位华东理工大学生物工程学院生物反应器国家重点实验室.材料实验于2002-05/11在华东理工大学反应器国家重点实验室鲁华生物技术研究所完成.选择昆明种雄性小鼠8只.PC12神经细胞购自中国科学院上海细胞所.方法制备神经细胞氧化损伤模型.①水翁花细胞毒性测定在96孔微量培养板中加入PC12神经细胞,水翁花以RPMI 1640培养液稀释成0.001,0.01,0.1,0.5,1 g/L 5个浓度,每个浓度3孔,每孔接种2×103个细胞,另设空白对照组,即无药培养液组.标准条件下培养48 h,噻唑蓝比色法测定.②PC12神经细胞预先接种于96孔板中,培养24 h贴壁,分为正常对照组(正常细胞,不加H2O2和水翁花提取物)、0,0.01,0.1,0.5,1g/L水翁花提取物共7个组.除正常对照组外,其余细胞用200 μmol/L的H2O2处理,加入不同浓度的水翁花水提物,作用12 h后用噻唑蓝法测定细胞的存活率.③氧自由基水平测定PC12神经细胞处理同存活率测定法,采用CDCFH染色法测定细胞氧自由基水平.主要观察指标①水翁花提取物对PC12神经细胞的毒性.②水翁花提取物对氧化损伤的PC12神经细胞存活率影响.③水翁花提取物对氧化损伤的PC12神经细胞内、细胞外氧自由基水平的影响.结果①水翁花提取物在浓度低于0.055 g/L时,对神经细胞有保护作用,在0.055～1.00 g/L浓度时,对细胞生长几乎无任何影响.②在低于0.10 g/L的浓度下,水翁花提取物对H2O2诱导的PC12神经细胞的氧化损伤没表现出明显的保护作用.但当浓度为1.00 g/L时,对H2O2诱导的PC12神经细胞的氧化损伤表现出明显的氧化修复能力.③H2O2损伤后,PC12细胞内、外氧自由基水平显著升高,当水翁花提取物浓度为0.01 g/L时,能明显的降低氧化损伤神经细胞内、外的氧自由基水平.结论①水翁花水提物对H2O2诱导的PC12神经细胞的氧化损伤亦有很强的保护作用.②水翁花提取物抗氧化特性与提取液的浓度比有明显的关系,当浓度为1.00 g/L时,具有明显的修复能力;当浓度为0.01 g/L时能够降低细胞内外的氧自由基水平.     

五味子乙素和五味子醇甲对PC12细胞氧化损伤的保护作用

目的：观察五味子乙素和五味子醇甲对过氧化氢（H2O2）PC12细胞氧化损伤的保护作用。方法：实验于2005—08／2006—07在首都医科大学附属北京中医医院中心实验室完成。①PC12细胞培养在RPMI1640培养液中，加入2．5，5，10，20μmoL／L等不同浓度的五味子乙素和五味子醇甲，与细胞培养24h，然后加入0．1，0．2，0．3，0．5mmol/L不同浓度过氧化氢（H2O2）溶液，37℃作用30min。模型组细胞只加入H2O2；正常对照组只加入等量的培养基。②采用倒置显微镜观察PC12细胞形态学变化，四甲基偶氮唑盐比色法测定细胞生存率，用自动生化分析仪测定乳酸脱氢酶的活性，按试剂盒说明书用慧星法测定细胞内DNA损伤。结果：①五味子乙素及五味子醇甲对PC12细胞形态学的影响：倒置相差显微镜观察到PC12细胞被H2O2损伤后，细胞形态学发生变化，表现为胞体肿胀、突起断裂、细胞膜溶解等。经五味子乙素及五味子醇甲处理后细胞，状态明显改善，细胞数目较多，而且细胞形态较完整。②五味子乙素及五味子醇甲对细胞生存率的影响：PC12细胞经0．1，0．2，0．3，0．5mmol／L不同浓度H2O2处理30min后，与正常对照组相比，四甲基偶氮唑盐法测定其生存率，分别降低了4％，13％，40％，57％，（P〈0．05或P〈0．01）。不同浓度的五味子乙素及五味子醇甲（25～20mnoL／L）均能提高细胞的生存率，并呈浓度依赖关系．浓度为5，10，20μmol／L时，与模型组比较，具有明显的差异（P〈0．05或P〈0．01），特别是10μmol／L五味子乙素及五味子醇甲的作用较强。②五味子乙素及五味子醇甲对细胞内乳酸脱氢酶和DNA损伤的影响：用0．3mmol／LH2O2处理细胞后细胞内乳酸脱氢酶漏出率高于正常对照组（P〈0．01）。大量的DNA被损伤，与正常对照组比较，差异有显著性（P〈0．01）。细胞与10．0μmol／L五味子乙素及五味子醇甲作用后发现细胞内乳酸脱氢酶漏出率低于模型组（P均〈0．01）。DNA损伤明显抑制，与模型组比较，差异有显著性（P均〈0．01）。结论：五味子乙素及五味子醇甲均能有效地减轻H2O2对神经细胞的氧化损伤作用。推测保护作用机制是通过清除氧自由基．减轻其对DNA的损伤等方面实现的。     

黄芪注射液对培养神经细胞损伤的保护作用

目的：研究黄芪对体外培养的胎鼠大脑皮层神经细胞损伤的保护作用。方法：在体外培养大鼠胎鼠的大脑皮层细胞，通过去除培养液中的小牛血清造成细胞损伤，实验组每毫升培养液中加入不同剂量的黄芪（0．05－0．5g)，观察黄芪对上术损伤的作用。结果：黄芪治疗组（0.2-0.5g/ml)的神经细胞线粒体活性较单纯去血清组明显增高（P＜0．05），在0．05－0．5g/ml范围内黄芪的抗损伤作用呈剂量相关性增加。结论：黄芪对体外培养的神经细胞去血清损伤有保护作用。     

五味子乙素和五味子醇甲对PC12细胞氧化损伤的保护作用

目的:观察五味子乙素和五味子醇甲对过氧化氢(H2O2)PC12细胞氧化损伤的保护作用。方法:实验于2005-08/2006-07在首都医科大学附属北京中医医院中心实验室完成。①PC12细胞培养在RPMI1640培养液中,加入2.5,5,10,20μmol/L等不同浓度的五味子乙素和五味子醇甲,与细胞培养24h,然后加入0.1,0.2,0.3,0.5mmol/L不同浓度过氧化氢(H2O2)溶液,37℃作用30min。模型组细胞只加入H2O2;正常对照组只加入等量的培养基。②采用倒置显微镜观察PC12细胞形态学变化,四甲基偶氮唑盐比色法测定细胞生存率,用自动生化分析仪测定乳酸脱氢酶的活性,按试剂盒说明书用慧星法测定细胞内DNA损伤。结果:①五味子乙素及五味子醇甲对PC12细胞形态学的影响:倒置相差显微镜观察到PC12细胞被H2O2损伤后,细胞形态学发生变化,表现为胞体肿胀、突起断裂、细胞膜溶解等。经五味子乙素及五味子醇甲处理后细胞,状态明显改善,细胞数目较多,而且细胞形态较完整。②五味子乙素及五味子醇甲对细胞生存率的影响:PC12细胞经0.1,0.2,0.3,0.5mmol/L不同浓度H2O2处理30min后,与正常对照组相比,四甲基偶氮唑盐法测定其生存率,分别降低了4%,13%,40%,57%,(P<0.05或P<0.01)。不同浓度的五味子乙素及五味子醇甲(2.5～20μmol/L)均能提高细胞的生存率,并呈浓度依赖关系,浓度为5,10,20μmol/L时,与模型组比较,具有明显的差异(P<0.05或P<0.01),特别是10μmol/L五味子乙素及五味子醇甲的作用较强。③五味子乙素及五味子醇甲对细胞内乳酸脱氢酶和DNA损伤的影响:用0.3mmol/LH2O2处理细胞后细胞内乳酸脱氢酶漏出率高于正常对照组(P<0.01)。大量的DNA被损伤,与正常对照组比较,差异有显著性(P<0.01)。细胞与10.0μmol/L五味子乙素及五味子醇甲作用后发现细胞内乳酸脱氢酶漏出率低于模型组(P均<0.01)。DNA损伤明显抑制,与模型组比较,差异有显著性(P均<0.01)。结论:五味子乙素及五味子醇甲均能有效地减轻H2O2对神经细胞的氧化损伤作用。推测保护作用机制是通过清除氧自由基,减轻其对DNA的损伤等方面实现的。     

热休克蛋白27对人晶状体上皮细胞氧化损伤的保护作用及其机制

目的：观察热休克预处理诱导的热休克蛋白27对晶状体上皮细胞的保护作用。 方法：实验于2004—01／12在中国医科大学卫生部小儿先天畸形重点实验室完成。体外培养人晶状体上皮细胞系HLB—C3细胞，随机分为4组：①正常对照组。②氧化损伤组：细胞中加入200μmol／LH2O2作用6h。③热休克处理组：42℃预热30min后，37℃恢复2h，处理同氧化损伤组。④放线菌酮组：预热前30min加入放线菌酮（25mg／L），其余处理同热休克处理组。观察各组细胞存活率、超氧化物歧化酶和过氧化氢酶活性；DNA ladder和Annexin V—FITC流式细胞仪检测晶状体上皮细胞凋亡率；免疫印迹法检测各组中热休克蛋白27和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3的表达。 结果：①细胞活力：氧化损伤组低于正常对照组（0．24&;#177;0．02，0．28&;#177;0.04，P〈0．01），热休克处理组高于氧化损伤组（0．27&;#177;0．04，P〈0．05），放线菌酮组低于热休克处理组（0．23&;#177;0．01，P〈0．01）。②细胞凋亡率：氧化损伤组高于正常对照组[（15．69&;#177;1．54）％，（4．17&;#177;0．83）％，P〈0．01]；热休克处理组低于氧化损伤组[（8．34&;#177;1．19）％，P〈0．01]；放线菌酮组高于热休克处理组[（13．58&;#177;1．21）％，P〈0．01]。③超氧化物岐酶和过氧化氢酶活性：氧化损伤组低于正常对照组（P〈0．01），热休克处理组高于氧化损伤组（P〈0．05），放线菌酮组低于热休克处理组（P〈0．01）。④热休克蛋白27表达：正常对照组细胞中略有表达，氧化损伤组表达稍有增加，热休克处理组表达明显增多，放线菌酮组未见表达。⑤半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3的表达：正常对照组细胞表达较弱，氧化损伤组表达增多，热休克处理组的表达少于氧化损伤组。 结论：热休克预处理诱导的热休克蛋白27对氧化损伤的晶状体上皮细胞起着保护作用。其保护机制可能是：①对与晶状体抗氧化有关的酶防御系统的影响：②小分子热休克蛋白对抗细胞凋亡。     

鼠尾胶原在心肌细胞氧化损伤中的保护作用

背景：胶原蛋白具有抗氧化作用,但既往在实验室主要将鼠尾胶原用于促进细胞贴壁和支架构建,对于其抗氧化作用目前尚无相关研究。目的：探讨鼠尾胶原对过氧化氢导致离体心肌细胞氧化损伤的保护作用。方法：将原代培养的SD大鼠乳鼠心肌细胞随机接种到铺有鼠尾胶原的培养皿（实验组）和普通培养皿（对照组）中,并且均用0,10,100μmol/L H2O2诱导。24 h后,以电子显微镜观察各组乳鼠心肌细胞的形态,应用MTT 比色法检测心肌细胞存活率,TUNEL 法检测心肌细胞凋亡形态,流式细胞技术检测心肌细胞凋亡率,黄嘌呤氧化酶法检测超氧化物歧化酶活力,硫代巴比妥比色法检测丙二醛水平,Western-Blot 检测凋亡蛋白Bax、Bcl-2的表达。结果与结论：两组培养皿中,随着过氧化氢浓度的增高,均可见细胞凋亡状态明显加重,细胞存活率及细胞内过氧化氢活力明显下降,细胞凋亡率及细胞内丙二醛水平明显增高,Bcl-2/Bax比值显著降低,呈剂量依赖性。而在相同浓度过氧化氢诱导下,与对照组相比,实验组细胞凋亡状态明显减弱,细胞存活率、超氧化物歧化酶活力及Bcl-2/Bax比值增高,细胞凋亡率和丙二醛水平明显减低。表明鼠尾胶原对过氧化氢所致的心肌细胞氧化损伤具有保护作用,其机制可能与提高超氧化物歧化酶活力,减少丙二醛产生及提高Bcl-2的表达有关。     

热休克蛋白27对人晶状体上皮细胞氧化损伤的保护作用及其机制

目的:观察热休克预处理诱导的热休克蛋白27对晶状体上皮细胞的保护作用。方法:实验于2004-01/12在中国医科大学卫生部小儿先天畸形重点实验室完成。体外培养人晶状体上皮细胞系HLB-C3细胞,随机分为4组:①正常对照组。②氧化损伤组:细胞中加入200μmol/LH2O2作用6h。③热休克处理组:42℃预热30min后,37℃恢复2h,处理同氧化损伤组。④放线菌酮组:预热前30min加入放线菌酮(25mg/L),其余处理同热休克处理组。观察各组细胞存活率、超氧化物歧化酶和过氧化氢酶活性;DNAladder和AnnexinⅤ-FITC流式细胞仪检测晶状体上皮细胞凋亡率;免疫印迹法检测各组中热休克蛋白27和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3的表达。结果:①细胞活力:氧化损伤组低于正常对照组(0.24±0.02,0.28±0.04,P<0.01),热休克处理组高于氧化损伤组(0.27±0.04,P<0.05),放线菌酮组低于热休克处理组(0.23±0.01,P<0.01)。②细胞凋亡率:氧化损伤组高于正常对照组[(15.69±1.54)%,(4.17±0.83)%,P<0.01];热休克处理组低于氧化损伤组[(8.34±1.19)%,P<0.01];放线菌酮组高于热休克处理组[(13.58±1.21)%,P<0.01]。③超氧化物岐化酶和过氧化氢酶活性:氧化损伤组低于正常对照组(P<0.01),热休克处理组高于氧化损伤组(P<0.05),放线菌酮组低于热休克处理组(P<0.01)。④热休克蛋白27表达:正常对照组细胞中略有表达,氧化损伤组表达稍有增加,热休克处理组表达明显增多,放线菌酮组未见表达。⑤半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3的表达:正常对照组细胞表达较弱,氧化损伤组表达增多,热休克处理组的表达少于氧化损伤组。结论:热休克预处理诱导的热休克蛋白27对氧化损伤的晶状体上皮细胞起着保护作用。其保护机制可能是:①对与晶状体抗氧化有关的酶防御系统的影响:②小分子热休克蛋白对抗细胞凋亡。     

阿魏酸对过氧化氢损伤内皮细胞的保护作用

[目的]通过考察信号转导途径MAPK家族研究阿魏酸对氧化损伤的内皮细胞的保护作用机理。[方法]噻唑兰（MTY）比色法检测细胞活力，免疫印迹分析（western-blot）方法检测蛋白磷酸化。[结果]发现用过氧化氢刺激内皮细胞会使将近50％左右细胞死亡，而阿魏酸的加入可以使细胞活力恢复到正常水平的90％左右。并发现过氧化氢可以激活MAPK家族（ERK、p38、JNK），而阿魏酸的加入可以抑制这种作用。[结论]推测阿魏酸可能通过抑制外源性H2O2介导的MAPK途径的激活，从而起到对氧化损伤内皮细胞的保护作用。     

欧洲越桔和笃斯越桔对神经细胞氧化损伤的保护作用

目的：比较欧洲越桔和笃斯越桔对氧化应激损伤PC12细胞的保护作用，并观察其作用是否具有剂量依赖性。方法：实验于2004-10,2005-01在华东理工大学生物工程学院生物反应器国家重点实验室进行。PC12细胞以含12．5，25，50mg／L的欧洲越桔标准提取物和笃斯越桔标准提取物的DMEM培养液预孵8h后，以500μmol／L的H2O2干预12h作为氧化应激损伤的模型，采用MTT比色法计算细胞死亡抑制率评估细胞存活情况（抑制率越高，存活细胞越多），DCFH—DA荧光染色法测定细胞内活性氧化物清除抑制率评估细胞内活性氧化物水平（抑制率越低，细胞内活性氧化物水平越低），Hoechst染色法观察细胞核形态学，流式细胞仪检测细胞凋亡。结果：①细胞死亡抑制率：笃斯越桔标准提取物25，50mg／L组高于欧洲越桔标准提取物25，50mg／L组（27．78％，23．66％；46．05％，41．67％），两种药物均为剂量越大，其抑制率越高。②PC12细胞内活性氧化物清除抑制率：笃斯越桔标准提取物25，50mg／L组低于欧洲越桔标准提取物25，50mg／L组（67．58％，80．61％；41．86％，56．69％），且剂量越大，其抑制率越低。③细胞凋亡率：正常对照组为0．69％，500μmol／L H2O2作用12h后。为30．19％。预先给予欧洲越桔标准提取物和笃斯越桔标准提取物处理后，分别为9．45％，8．82％。结论：欧洲越桔和笃斯越桔对氧化应激损伤PC12细胞均具有保护作用，笃斯越桔作用优于欧洲越桔，且具有剂量依赖性效应。其机制可能与其能降低细胞内活性氧化物水平，进而抑制神经细胞凋亡有关。     

欧洲越桔和笃斯越桔对神经细胞氧化损伤的保护作用

目的:比较欧洲越桔和笃斯越桔对氧化应激损伤PC12细胞的保护作用,并观察其作用是否具有剂量依赖性。方法:实验于2004-10/2005-01在华东理工大学生物工程学院生物反应器国家重点实验室进行。PC12细胞以含12.5,25,50mg/L的欧洲越桔标准提取物和笃斯越桔标准提取物的DMEM培养液预孵8h后,以500μmol/L的H2O2干预12h作为氧化应激损伤的模型,采用MTT比色法计算细胞死亡抑制率评估细胞存活情况(抑制率越高,存活细胞越多),DCFH-DA荧光染色法测定细胞内活性氧化物清除抑制率评估细胞内活性氧化物水平(抑制率越低,细胞内活性氧化物水平越低),Hoechst染色法观察细胞核形态学,流式细胞仪检测细胞凋亡。结果:①细胞死亡抑制率:笃斯越桔标准提取物25,50mg/L组高于欧洲越桔标准提取物25,50mg/L组(27.78%,23.66%;46.05%,41.67%),两种药物均为剂量越大,其抑制率越高。②PC12细胞内活性氧化物清除抑制率:笃斯越桔标准提取物25,50mg/L组低于欧洲越桔标准提取物25,50mg/L组(67.58%,80.61%;41.86%,56.69%),且剂量越大,其抑制率越低。③细胞凋亡率:正常对照组为0.69%,500μmol/LH2O2作用12h后,为30.19%。预先给予欧洲越桔标准提取物和笃斯越桔标准提取物处理后,分别为9.45%,8.82%。结论:欧洲越桔和笃斯越桔对氧化应激损伤PC12细胞均具有保护作用,笃斯越桔作用优于欧洲越桔,且具有剂量依赖性效应。其机制可能与其能降低细胞内活性氧化物水平,进而抑制神经细胞凋亡有关。     

Stem cells treatment for sciatic nerve injury

INTRODUCTION: Sciatic nerve injury is common and usually results in degeneration of the distal axons and muscle denervation. Chronic muscle atrophy and fibrosis limit the recovery of muscle function and severely compromises efforts to restore muscle function. Despite early diagnosis and modern surgical techniques there is still poor functional recovery. AREAS COVERED: Stem cell transplantation has been investigated as a promising treatment strategy for peripheral nerve injury, and has demonstrated utility in limiting neuronal damage. The focus has been on the isolation of stem cells from bone-marrow and adipose tissue in addition to embryonic and neuronal stem cells. Transplantation of these cells into transected sciatic nerve in animal models demonstrates clinical improvement, inducing vigorous nerve regeneration accompanied by myelin synthesis. Cell replacement, trophic factor production, extracellular matrix molecule synthesis, guidance, remyelination, microenvironmental stabilization and immune modulation have been postulated as possible mechanisms for stem cell implantation. EXPERT OPINION: Although further research is still needed, this therapeutic approach will probably become a routine treatment technique in the coming years, especially with bone marrow mesenchymal stem cells. We believe that the most promising results were noted for the use of stem cells of this origin in the treatment of sciatic nerve injury.     

Stem cells treatment for sciatic nerve injury

Introduction: Sciatic nerve injury is common and usually results in degeneration of the distal axons and muscle denervation. Chronic muscle atrophy and fibrosis limit the recovery of muscle function and severely compromises efforts to restore muscle function. Despite early diagnosis and modern surgical techniques there is still poor functional recovery.

Areas covered: Stem cell transplantation has been investigated as a promising treatment strategy for peripheral nerve injury, and has demonstrated utility in limiting neuronal damage. The focus has been on the isolation of stem cells from bone-marrow and adipose tissue in addition to embryonic and neuronal stem cells. Transplantation of these cells into transected sciatic nerve in animal models demonstrates clinical improvement, inducing vigorous nerve regeneration accompanied by myelin synthesis. Cell replacement, trophic factor production, extracellular matrix molecule synthesis, guidance, remyelination, microenvironmental stabilization and immune modulation have been postulated as possible mechanisms for stem cell implantation.

Expert opinion: Although further research is still needed, this therapeutic approach will probably become a routine treatment technique in the coming years, especially with bone marrow mesenchymal stem cells. We believe that the most promising results were noted for the use of stem cells of this origin in the treatment of sciatic nerve injury.     

干细胞在神经创伤修复中的应用

背景：干细胞具有很强的增矾和分化能力,已在神经组织损伤修复方面展示了不可估嚣的临床应用前景。但是,目前有关神经干细胞的组织来源、定向诱导分化、移植技术和神经功能修复的功能判定等方面尚存在诸多难题。目的：阐述干细胞在神经创伤修复中的应用研究进展。方法：检索干细胞在神经创伤修复应用中的相关研究文献,检索词为“干细胞（stem cell）,骨髓间充质干细胞（bonemarrowmesenchymalstemcells）,神经干细胞（neuralstem cell）,胚胎干细胞（embryonicstemcell）,脂肪干细胞（adipose-derivedstemcells）,脐血干细胞（umbilicalcordbloodstemcells）,成体干细胞（adultstemcells）,脑损伤／创伤性脑损伤（traumaticbraininjury）,脊髓损伤（spinalcordinjury）,神经创伤（traumaticnerveinjury）,生长因子（growthfactor）,修复（repair）”,语言分别设定为中文和英文,对骨髓间充质干细胞、神经干细胞、胚胎干细胞、脐血干细胞及脂肪干细胞在神经创伤修复中的应用研究进行深入分析。结果与结论：干细胞是一具有自我更新、高度增殖和多向分化潜能的特殊细胞,其最显著的生物学特性是既有自我更新的能力,又具有多向分化的潜能。日前,已经从许多组织或器官中成功地分离出,其中包括胚胎干细胞,造血干细胞和骨髓间质干细胞等。此外,还有近来研究渐多的神经干细胞、肌肉干细胞、成骨干细胞、内胚层干细胞及视网膜干细胞等。干细胞的多向分化潜能为神经创伤修复开辟了新的途径,其在脑损伤以及脊髓损伤后的神经修复以及功能重建的研究方面已取得很大的进展,被认为具有广阔的应用前景,与之相关的问题均有待于进一步的研究。     

磁刺激对脊髓损伤后神经细胞凋亡的影响及机制研究

目的 观察磁刺激对脊髓损伤(SCI)后SD大鼠的神经细胞凋亡及诱导型一氧化氮合酶(iNOS)生成的影响.方法 雄性SD大鼠32只,分为磁刺激组16只,对照组16只,每组又分为SCI后第6小时,第12小时,第24小时和第72小时4个时间点,每个时间点4只.2组采用脊髓横切法造成SCI模型,磁刺激组在每个时间点给予磁刺激后即处死,对照组在伤后相应时间点处死.用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法标记凋亡细胞,用免疫组化法检测诱导型一氧化氮合酶阳性细胞.观察各时间点的凋亡指数和诱导型一氧化氮合酶阳性细胞率.结果 凋亡细胞在伤后第6小时即出现在脊髓组织中,第24小时与第72小时凋亡细胞数显著增加;iNOS阳性细胞在SCI后第6小时和第12小时时间点几乎没有表达,从第24小时到第72小时显著升高.与对照组相比,在伤后第6小时和第12小时,磁刺激组的凋亡指数末见明显减少(P＞0.05);但是在第24小时和第72小时的时间点上,磁刺激组的凋亡阳性细胞显著少于对照组(P＜0.01).诱导型一氧化氮合酶阳性细胞率两组在各个时间点上的差异无统计学意义(P＞0.05).结论 磁刺激可以降低SCI后神经细胞的继发性损伤,抑制神经细胞的凋亡,对SCI早期的神经细胞具有保护作用,然而其机制是否通过对诱导型一氧化氮合酶表达的抑制而实现的需要进一步研究.

Abstract：

Objective To investigate effects of magnetic stimulation on apoptosis of nerve cells and the production of inducible nitric oxidate synthase (iNOS) after spinal cord injury (SCI). Methods Thirty-two SpragueDawley male rats were randomly divided into a magnetic stimulation group (n = 16) and a control group (n = 16).SCI models were established by spinal cord transection in both groups. Rats were sacrificed at the 6th, 12th, 24th and 72nd hour post-injury, but the rats in the stimulation group received magnetic stimulation before being sacrificed.Apoptosis index (AI) and iNOS-positive cells rate were recorded at each time point. Results Apoptotic cells could be observed by the 6th hour post-injury, and were elevated from the 24th to the 72th hour. iNOS-positive cells were few at the first two time points, but had increased significantly at the 24th and 72nd hour post-injury. Compared with the control group, the apoptosis index of the stimulation group decreased a little at the 6th and 12th hour, but not significantly. The difference was quite significant at the 24th and 72nd hour, however, and the AI in the stimulation group decreased much more than that in the control group. There was little difference in the rate of iNOS-positive cells between the control and stimulation groups at any time point. Conclusions Magnetic stimulation could inhibit neural apoptosis and protect neurons from secondary SCI, but it has little effect on iNOS production.     

坐骨神经瓦勒变性大鼠许旺细胞生物学特性及分泌功能变化

背景：研究表明外周神经损伤后,许旺细胞在基底膜管内形成Bunger带,引导再生轴突延伸,但具体作用机制目前尚不清楚。目的：观察大鼠坐骨神经损伤后瓦勒变性对许旺细胞生物学特性及分泌功能的影响。方法：建立大鼠坐骨神经横切模型,分为坐骨神经瓦勒变性组（坐骨神经横断组）和手术对照组。采用神经段单酶消化法分离培养许旺细胞,光镜下观察细胞形态变化,S-100免疫荧光鉴定。取第1代许旺细胞,利用计数法绘制14 d内许旺细胞的生长曲线,MTT法检测14 d内许旺细胞增殖活性,酸性磷酸酶法检测许旺细胞黏附能力,ELISA法检测神经生长因子浓度。结果与结论：坐骨神经段培养第14天,坐骨神经横断组神经段边缘可见大量许旺细胞,呈线形排列;手术对照组许旺细胞数量少,呈散在分布,两组许旺细胞S-100均呈阳性表达。许旺细胞传代培养第3天,两组许旺细胞均进入对数增长期,随时间延长,细胞数及细胞增殖吸光度值均呈上升趋势,坐骨神经横断组细胞数及增殖吸光度值明显高于手术对照组（P〈0.05）;坐骨神经横断组许旺细胞黏附能力明显高于手术对照组（P〈0.05）;ELISA 法检测示,坐骨神经横断组神经生长因子浓度在培养第4,6,8,10,12,14天时均高于手术对照组（P〈0.05）。结果表明大鼠坐骨神经损伤后两三周,瓦勒变性对许旺细胞生物学功能具有显著影响,可诱导许旺细胞幼稚化,促使许旺细胞在短期内迅速分裂增殖,并分泌大量神经营养因子及细胞外黏附成分,为再生轴突的延伸提供适宜的神经微环境;并增加细胞黏附能力,为外周神经损伤修复提供适宜的神经微环境。     

电针对局灶性脑缺血成年大鼠神经干细胞增殖、分化的影响

目的:观察电针对成年大鼠局灶性脑缺血后神经干细胞增殖、分化的影响,探讨其治疗脑梗死的可能机制。方法:采用线栓法制备大鼠MCAO模型,应用BrdU/NeuN、BrdU/GFAP免疫荧光双标法观察再灌注损伤后第4、7、14天时大鼠神经干细胞增殖、分化情况。结果:脑缺血后第4、7、14天3个时间点室管膜下区、缺血边缘区均有BrdU阳性细胞表达,BrdU阳性细胞数在第7天达高峰;电针组第7天BrdU阳性细胞数高于相同时间段模型组(P<0.05);电针组BrdU/GFAP双标阳性细胞数在7天高于相同时间段模型组(P<0.05);电针组和模型组BrdU/NeuN双标阳性细胞数在缺血后第4、7和14天差异无显著性(P>0.05)。结论:缺血损伤可诱发室管膜下区、缺血边缘区神经干细胞的增殖,少量的新增殖细胞可以向神经元和星型胶质细胞分化;电针可以促进脑缺血后细胞增殖作用并可激发新增殖细胞向星型胶质细胞分化,而对向神经元细胞分化则影响不明显。     

电针对大鼠损伤坐骨神经再生的影响

目的:探讨电针对受损伤的周围神经功能恢复的影响。方法:Wistar大鼠60只切断左侧坐骨神经并缝合,随机分成电针组与模型组。电针组每天穴位电针20min。分别于术后2,4及8周动态观察髓纤维形态学变化、坐骨神经动作电位幅值的变化。模型组不作任何处理。结果:电针组坐骨神经动作电位幅值恢复率2,4及8周时分别为(11.98±4.12)%,(45.03±7.21)%,(82.41±15.97)%时优于模型组(9.46±4.17)%,(15.02±16.98)%,(33.97±7.46)%(P<0.05);有髓神经纤维数、有髓神经纤维直径及截面积在术后各观察点电针组明显多于模型组(P<0.01)。结论:穴位电针对损伤神经的再生和功能恢复有促进作用。     

白细胞介素-6对周围神经损伤后神经细胞FOS表达的影响

背景神经系统正常情况下低水平 FOS表达,损伤后 FOS表达增强,白细胞介素- 6(interleulin- 6, IL- 6),在中枢神经系统损伤后能抑制,神经细胞 FOS表达,但周围神经损伤后神经细胞 FOS表达与 IL- 6的关系的研究目前尚未见报道. 目的观察周围神经损伤后神经细胞 FOS表达及 IL- 6对其表达的影响. 设计完全随机对照的前瞻性实验研究. 地点和对象 2002/08～ 12在广东医学院实验动物中心完成,实验对象为 DS大鼠 48只,体质量 250～ 340 g,雌雄不拘. 干预大鼠在无菌条件下显露左侧坐骨神经,实验组神经内注射 IL- 6 2 mL,对照组神经内注射生理盐水 2 mL.术后 1 h挤压损伤坐骨神经,分别于伤后 1, 2, 3, 4 h取出标本进行免疫组化染色. 主要观察指标观察实验组和对照组 FOS免疫阳性细胞. 结果伤后 1, 2, 3, 4 h对照组 FOS免疫阳性细胞分别为 548± 14, 640± 12, 718± 21, 732± 11;实验组分别为 202± 13, 212± 17, 245± 22, 288± 14.随挤压时间的延长而增加.实验组各时间 FOS免疫阳性细胞数较对照组明显减少(t=- 1.812, 2.128, P< 0.05; t=- 2.864, 3.159, P< 0.01)差异有显著性意义. 结论 IL- 6对周围神经损伤后神经细胞 FOS表达有抑制作用,提示 IL- 6参与神经损伤后的调控过程.     

针刺激对大鼠坐骨神经损伤后神经生长因子mRNA表达的影响

目的:探讨针刺对神经生长因子信使RNA(NGF mRNA)表达的影响,并且从这一角度分析评价电针频率的不同,及电针与手针对神经生长的影响。方法:78只雄性SD大鼠随机分为5组,治疗1组(n=18),疏波,电压2V,频率:F1:5Hz。治疗2组(n=18):疏波,电压2V,频率:F1:100Hz。治疗3组(n=18):手针。模型组(n=18):行坐骨神经损伤手术造模,不行治疗。对照组(n=6),正常成年大鼠。治疗组与模型组均行坐骨神经损伤手术造模,术后第2天开始给予电针及针刺治疗,电针正极接在近心端,负极接在远心端。分别夹在"环跳"、"足三里"处的针柄上,每次30min,每日2次。手针针刺相同穴位,每次30min,每日2次。术后1、2、6周取治疗组大鼠神经损伤部位远侧坐骨神经干0.6cm,应用原位杂交的方法和图像分析处理系统定量测定坐骨神经组织中NGF mRNA水平。结果:治疗组NGF mRNA表达明显增加,均高于模型组(均P<0.01);治疗1组NGF mRNA表达始终处于高水平,明显高于模型组(P<0.01)。结论:针刺激是促进周围神经损伤再生的重要手段,其中5Hz低频电针效果最佳。