小剂量丙泊酚对食管鳞癌细胞Eca109生物学行为的影响

目的:探讨低剂量丙泊酚对食管鳞癌细胞Eca109的增殖、凋亡、迁移及侵袭等生物学行为的影响。方法:根据预实验结果设置低剂量丙泊酚组,干预食管鳞癌细胞Eca109后,利用MTT、流式细胞术、transwell检测对增殖、凋亡、迁移及侵袭的影响,应用实时荧光定量PCR检测血红素氧合酶1(HO-1)的表达变化。结果:低剂量Eca109可以促进Eca109的增殖、迁移与侵袭并抑制凋亡,实时荧光定量PCR显示干预后HO-1的表达增加且随浓度的增加而增加。结论:低剂量丙泊酚可以促进Eca109的增殖、迁移与侵袭并抑制凋亡,可能与促进HO-1的表达相关。     

血红素加氧酶-1对肝癌细胞细胞周期调控因子的影响

目的 观察血红素加氧酶-1(heme oxygenase 1,HO-1)对人肝癌细胞HepG2细胞周期调控因子的影响.方法 构建含有野生型和突变型HO-1基因的重组载体pcDNA3.1(+)-wtHO-1和pcDNA3.1(+)-mHO-1G143H.利用脂质体介导的方法将构建好的重组载体转染肝癌细胞系HepG2,以空载体转染作为对照组.通过G418筛选建立稳定表达野生型和突变型HO-1的HepG2肝癌细胞系.经半定量RT-PCR、Western印迹检测转染细胞系中HO-1 mRNA和蛋白的表达水平.在HO-1表达改变的稳转细胞系中,利用Western 印迹检测转染细胞系中P21、P27蛋白表达水平.结果 成功实现了野生型和突变型HO-1在HepG2细胞中的过表达;野生型和突变型HO-1过表达均能诱导抑癌基因p21和p27的表达.结论 HO-1过表达诱导抑癌基因p21和p27的表达与血红素分解产物无关.HO-1可能通过其它机制调节p21和p27的表达.     

P162对食管癌细胞株Eca109的放射增敏作用及其对p75NTR表达的影响

 目的：研究靶向Ras-GTP酶激活蛋白SH3功能区结合蛋白(G3BP)的新药P162对人食管癌细胞株Eca109的放射增敏作用及其对p75神经营养因子受体(p75NTR)表达的影响。方法：CCK-8法检测P162对食管癌细胞株Eca109增殖抑制的影响;集落形成实验检测P162对Eca109细胞的放射增敏效应,单击多靶模型拟合细胞存活曲线并计算放射增敏比;倒置显微镜观察细胞形态学改变;流式细胞术检测p75NTR的表达。结果：P162对食管癌细胞株Eca109有增殖抑制作用,且呈时间和剂量依赖性,2.5、5.0、10 μmol/L P162对Eca109细胞的放射增敏比分别为1.54、2.35和2.33。随着照射剂量的增加,食管癌细胞中p75NTR的表达增加,经5 μmol/L P162处理的实验组中p75NTR的表达明显低于未经处理的对照组。结论：P162对Eca109细胞有放射增敏作用,并且能抑制食管癌干细胞p75NTR的表达。P162的增敏作用可能与抑制食管癌干细胞有关。     

吴茱萸碱增强Eca-109食管鳞癌细胞的放射敏感性

目的探讨吴茱萸碱(Evo)对Eca-109食管鳞癌细胞放射敏感性的影响,探索其可能机制。方法采用MTT法检测(10、20、40、60、80、100、120)μg/m L吴茱萸碱对Eca-109细胞生长的抑制作用,确定最佳处理剂量。实验分为放射组(仅给予0、2、4、6、8 Gy X线照射处理)、联合组(给予80μg/m L吴茱萸碱和0、2、4、6、8 Gy X线照射处理),克隆形成实验检测吴茱萸碱对Eca-109细胞克隆形成能力的影响,流式细胞术检测细胞周期;Western blot法检测Eca-109细胞中Ku70、Ku80、DNA激活蛋白激酶催化亚基(DNA-PKcs)、DNA双链修复蛋白Rad51蛋白水平。结果吴茱萸碱呈剂量依赖性抑制Eca-109细胞的生长,80μg/m L吴茱萸碱的抑制作用最大。克隆形成实验结果显示80μg/m L吴茱萸碱联合放射治疗后,平均致死剂量(D0)、准域剂量(Dq)值显著小于单纯放射时的值,放射增敏比(SER)为1.86±0.06,拟合的生存曲线左移。吴茱萸碱可减少放射诱导的细胞G2/M期阻滞,可显著抑制放射诱导的Ku70、Ku80、DNA-PKcs、Rad51蛋白上调。结论吴茱萸碱具有增加食管鳞癌细胞株Eca-109放射敏感性的作用,可能与抑制细胞周期G2/M期阻滞和降低DNA损伤修复蛋白表达水平有关。     

miR-217调控lncRNAMALAT1影响食管鳞癌细胞的生物学行为

目的　探讨miR-217通过调控lncRNA MALAT1抑制食管鳞状细胞癌细胞的增殖,迁移和侵袭行为及其机制。 方法　qPCR检测miR-217在食管鳞状细胞癌组织和不同细胞株中的表达情况;双荧光素酶报告基因检测miR-217与MALAT1之间的相互作用;MTT增殖实验检测抑制miR-217后食管鳞状细胞癌细胞的增殖能力的变化情况;划痕愈合试验和Transwell侵袭实验检测抑制miR-217后食管鳞状细胞癌细胞的迁移和侵袭行为的变化情况;Western blotting实验检测miR-217对MALAT1下游相关蛋白表达情况的影响。 结果　与正常食管组织相比,食管鳞状细胞癌组织中miR-217的表达水平相对上调,与其他细胞株相比,Ec109细胞中miR-217表达最高;双荧光素酶实验证实miR-217能与MALAT1的3’ UTR特异性结合,可以调控MALAT1的表达与活性;抑制miR-217的表达后可以抑制食管鳞状细胞癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力;抑制miR-217后MALAT1下游MIA2,ROBO1表达明显下调。 结论　miR-217可以调控MALAT1的表达影响食管鳞状细胞癌细胞的生物学行为。     

shRNA干扰PLCε1基因对人食管癌Eca109细胞增殖和细胞周期的影响

目的探讨沉默PLCε1基因对食管癌Eca109细胞增殖和细胞周期的影响及其可能的机制。方法 PLCε11、PLCε12和PLCε13质粒表达载体用于沉默PLCε1,通用阴性对照质粒表达载体HK作为对照。用阳离子脂质体进行转染,筛选出干扰效果最好的质粒表达载体(PLCε12)。实验分为Eca109组、HK组和PLCε12组。MTT检测细胞的存活率。FCM检测细胞周期,RT-PCR检测细胞P16、Cyclin D1基因mRNA表达。结果 HK、PLCε12质粒表达载体转染Eca109细胞后48和72 h,PLCε12组Eca109细胞的存活率分别为80.73%和75.88%,显著低于HK组(P0.001)。Eca109细胞转染后24 h,PLCε12组处于S期的细胞比例明显低于HK组(P0.01),细胞周期阻滞于G0/G1期。质粒表达载体转染Eca109细胞48 h后,PLCε12组Eca109细胞P16基因mRNA表达水平明显高于HK组(P0.01)。结论沉默PLCε1基因可能通过上调Eca109细胞P16基因的表达,阻止细胞周期从G1期向S期的过渡,抑制Eca109细胞的增殖活性。     

细胞周期蛋白A对舌鳞癌细胞周期和抗原含量的影响

细胞周期蛋白ｃｙｃｌｉｎ是调节细胞周期活动的重要蛋白质,在细胞的增殖及肿瘤的发生中具有重要作用。近年来,对细胞周期调控分子机制的研究有了突破性进展,已知细胞生长周期由一系列细胞分泌的蛋白控制,并证实哺乳动物的ｃｙｃｌｉｎ有８种,其中ｃｙｃｌｉｎＡ／Ｃｄｋ２为Ｓ期和Ｇ２期所必需的〔１〕。细胞在由Ｇ１→Ｓ→Ｇ２→Ｍ期的转换过程中,存在着几个限制点,其中Ｇ２／Ｓ限制点是调控细胞周期进程的关键〔２〕。ｃｙｃｌｉｎＡ的合成在细胞周期由Ｇ１→Ｓ期明显增加,证明ｃｙｃｌｉｎＡ为Ｓ期的特征性细胞周期蛋白,存在于…     

食管鳞癌中Klf17蛋白表达及其对Eca109细胞迁移和侵袭能力的影响

目的探讨KLF17与临床病理特征的关系;探讨KLF17对Eca109细胞迁移和侵袭能力的影响及其作用机制。方法采用免疫组化法,检测KLF17在食管鳞癌及癌旁正常食管上皮中的表达;构建KLF17慢病毒过表达载体感染Eca109细胞,细胞分组为转染组(CON)、空载体转染组(Ad-GFP)和慢病毒转染组(Ad-KLF17)。Real timePCR检测KLF17 mRNA的表达、Western blot检测KLF17、E-cadherin和N-cadherin蛋白的表达;细胞划痕实验及体外Transwell实验观察Eca109细胞迁移和侵袭能力。结果 KLF17蛋白表达与侵袭深度、TNM分期显著相关(P0.05);real time-PCR及Western blot结果显示Ad-KLF17组KLF17及上皮标志物E-cadherin表达明显高于Ad-GFP组及对照组(P0.05),而间质标志物N-cadherin表达明显低于Ad-GFP组及对照组(P0.05);划痕实验与体外Transwell实验结果显示Ad-KLF17组细胞迁移距离及细胞数量明显短于和少于Ad-GFP组和对照组(P0.05)。结论 KLF17能抑制Eca109细胞发生上皮-间质转化,与其迁移、侵袭能力相关。     

上调人食管癌Eca109细胞Shh-Gli1信号通路对放射抗拒性及细胞周期的影响

目的:通过上调Sonic Hedgehog(Shh)信号通路关键因子Gli1,探究Shh信号通路与食管癌细胞放射抗拒性及细胞周期的关系。方法:用过表达Gli1质粒转染人食管癌Eca109细胞,记为Eca109-ox-Gli1组;转染空载质粒为阴性对照组;以不作处理的亲本细胞株为正常对照组。Real-time PCR与Western blot检测转染后细胞内Gli1的表达,集落形成实验检测细胞放射敏感性,流式细胞术检测转染前后细胞周期分布。结果:Real-time PCR与Western blot结果均显示Eca109-ox-Gli1组的Gli1表达显著高于阴性对照组和正常对照组(P0.05)。集落形成实验显示2 Gy射线照射后,Eca109-ox-Gli1组的存活分数较正常对照组明显升高(P0.05),转染后细胞对射线敏感性降低,放射抗拒性增加。Eca109-ox-Gli1组中S期细胞分布比例显著高于对照组(P0.01),再照射6Gy后,3组细胞均出现了G_2/M期阻滞,正常对照组相比于Eca109-ox-Gli1组G_2/M期细胞分布显著增高(P0.01)。结论 :上调Shh信号通路关键因子Gli1能够增强食管癌细胞的放射抗拒性,这一过程可能是通过调控细胞周期实现的。     

肽生长因子与细胞周期的调控

哺乳细胞生长周期受肽生长因子与经典激素的控制。细胞生长周期可简单地归结为以下几期:G_0期、G_1期,S期、G_2期、有丝分裂期和终端分化期。生长因子和激素通过调节G_0期←→G_2期→S期(主要是G_0期←→G_1期)和G_0期→终端分化期的转换来控制细胞的增殖。这一还原论式的描述源     

VEGF165反义RNA对人食管鳞癌细胞影响的实验研究

目的 :观察血管内皮生长因子16 5 (VEGF16 5 )反义RNA对人食管鳞癌细胞EC10 9的影响 ,探讨其治疗食管癌的可行性。方法 :采用亚克隆技术 ,构建并鉴定VEGF16 5 反义RNA的真核表达载体。以重组质粒转染人食管鳞癌细胞EC10 9后 ,将其接种于裸鼠皮下 ,分别利用原位杂交、激光共聚焦、图象分析及微血管计数等方法 ,观察转染前后EC10 9细胞的生物学性状和致瘤性。结果 :成功地构建了VEGF16 5 反义RNA的真核表达载体 ,并在EC10 9细胞中获得表达。转染细胞中VEGF16 5 的表达下降 75% ,其生物学性状不受外源基因表达的影响 ,但其在裸鼠皮下的致瘤性和和瘤组织中血管的生成明显下降。VEGF16 5 反义RNA转染组、空载体转染组和对照组中肿瘤的体积 ,分别为 (82 0± 112 .5)mm3 、(793 0± 10 3 5)mm3 和 (7850± 950 )mm3(P <0 .0 1) ;微血管的密度分别为 (8.5± 1.2 ) /mm2 、(44.3± 9.4) /mm2 和 (46.4± 12 .6) /mm2 (P <0 .0 1)。结论 :VEGF16 5反义RNA能够明显减少食管鳞癌细胞内VEGF16 5 的表达 ,具有抑制肿瘤生长和血管生成的作用 ,可望用于实体肿瘤的辅助治疗。     

曲古抑菌素A通过调控蛋白激酶C促进食管鳞癌细胞迁移

目的探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A(TSA)对人食管鳞癌细胞(ESCC)迁移能力的影响及其可能的作用机制。方法培养食管鳞癌细胞KYSE-150和EC9706;Transwell法检测TSA、蛋白激酶C(PKC)抑制剂AEB071对食管鳞癌细胞迁移的影响;观察TSA、PKC抑制剂AEB071对人食管鳞癌细胞形态学的影响;Western blotting检测E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(vimentin)、β-连环蛋白(β-catenin)、Slug、ac H3和H3蛋白的表达水平。结果TSA促进食管鳞癌细胞的迁移,PKC抑制剂AEB071部分抑制TSA促进食管鳞癌细胞的迁移作用;TSA促使细胞由类椭圆形的上皮样细胞形态向类似梭形的成纤维细胞样形态的上皮-间质转化(EMT),AEB071抑制TSA诱导的细胞形态学变化;TSA处理后E-cadherin蛋白表达水平降低,vimentin、β-catenin、Slug、ac H3表达水平升高,联合应用TSA与AEB071,TSA诱导的上述EMT相关蛋白水平的变化得到部分抑制,使E-cadherin蛋白表达水平增加,vimentin、β-catenin、Slug表达水平降低。结论TSA通过促进食管鳞癌细胞EMT增加其迁移能力,其机制可能由PKC相关信号通路介导。     

人食道鳞癌细胞在表皮生长因子刺激下可产生基质金属蛋白酶9

人食道鳞癌细胞在表皮生长因子刺激下可产生基质金属蛋白酶９［英］／ＳｈｉｌｎａＩ…／／ＢｒＪＣａｎｃｅｒ．－１９９３，６７（４）．－７２１～７２７肿瘤细胞破坏及穿透基底膜是其扩散的重要步骤。有报道肿瘤可分泌多种降解基质蛋白的酶类。作者曾用免疫组化方法证...     

表皮生长因子及其受体对雄性生殖系统的影响

表皮生长因子 (ＥＧＦ)是由 5 3个氨基酸组成的多肽单链 ,分子量为 60 45 ,它是一种促细胞分裂剂 ,能引起多种细胞分裂。细胞学和生物化学研究表明ＥＧＦ能加速核酸和蛋白质的合成 ,从而促进多种细胞分裂增殖 ,并影响细胞的分化。ＥＧＦ的生物学效应是通过与其受体 (ＥＣＦ Ｒ)结合发挥作用的。ＥＧＦ Ｒ是一个由 1 1 86个氨基酸组成的分子量为 1 70 0 0 0的跨膜糖蛋白 ,由结合区域 (位于胞膜外 )、跨膜区域和依赖ＥＧＦ的蛋白激酶 (ＰＫ)结构区域构成。后者位于胞内 ,具有酪氨酸激酶 (ｔｙｒｏｓｉｎｅｋｉｎａｓｅ)活性。ＥＧＦ与ＥＧＦ …     

转录因子YY1对口腔鳞癌细胞ITGB6基因表达的影响

 目的：研究肿瘤相关转录因子YY1 对口腔鳞癌细胞整合素β6（integrin β6, ITGB6）基因表达调控的影响。方法：用生物信息学方法预测分布在ITGB6启动子区域的转录因子YY1潜在的结合位点,构建萤光素酶报告基因质粒,利用双萤光素酶报告基因系统检测ITGB6启动子片段的转录活性;利用染色质免疫沉淀技术检测在天然染色质条件下转录因子YY1与ITGB6启动子的结合情况;采用定点突变方法检测YY1结合位点对ITGB6启动子活性的影响;利用RT-PCR方法检测过表达转录因子YY1对口腔鳞癌细胞ITGB6 mRNA表达水平的影响。结果：ITGB6启动子-421~-150 nt区域存在多个转录因子YY1潜在的结合位点。在口腔鳞癌细胞的天然染色质中,转录因子YY1结合于ITGB6启动子-421~-150 nt区域;定点突变YY1潜在结合位点对口腔鳞癌细胞中ITGB6启动子活性无显著影响。另外,过表达的YY1对口腔鳞癌细胞ITGB6 mRNA的表达水平也无影响。结论:转录因子YY1在口腔鳞癌细胞中结合于ITGB6基因启动子-421~-150 nt区域,但对ITGB6基因的基础转录水平无影响。     

P130CAS对食管癌细胞ECA109中Angiopoietin-2表达及其生物学行为的影响

目的探讨抑制P130CAS(P130 Crk-associated substrate)基因对食管癌细胞ECA109中Angiopoietin-2表达和生物学行为的影响。方法构建P130CAS基因siRNA慢病毒载体,感染ECA109细胞,荧光显微镜观察感染效率,应用RT-PCR和Western blot法检测其干扰效率。应用CCK-8法、划痕实验、Transwell实验、Western blot法检测抑制P130CAS基因表达对ECA109细胞增殖、迁移、侵袭能力和对Angiopoietin-2蛋白表达的影响。结果成功构建PLVT716 siRNA慢病毒载体,ECA109细胞P130CAS mRNA和蛋白表达明显下调(P0.05),并建立稳定细胞株;抑制P130CAS基因表达导致ECA109细胞增殖、迁移和侵袭能力显著减弱(P0.05),同时Angiopoietin-2表达明显下调(P0.05)。结论抑制P130CAS基因表达可抑制食管癌ECA109细胞的增殖、迁移和侵袭,同时可下调Angiopoietin-2表达。     

Photofrin光动力联合化疗对食管癌细胞株Eca-109增殖的影响

目的研究Photofrin光动力联合氟尿嘧啶和顺铂化疗药物对食管癌细胞株Eca-109增殖的抑制作用。方法将食管癌细胞株Eca-109分为6组，A：对照组，B：化疗组，C：化疗＋高剂量光敏剂治疗组，D：化疗＋低剂量光敏剂治疗组，E：高剂量光敏剂治疗组，F：低剂量光敏剂治疗组。种板孵育24h后，采用台盼蓝染色法检测肿瘤细胞的存活率；于化疗组加入化疗药（5-Fu＋DDP）作用12h，再按实验分组加入光敏剂血卟啉衍生物（HPD）低剂量或高剂量，4h后行630nm激光照射，光能量密度30J／cm^2，照光后继续培育24h，开始行MTT法检测食管癌细胞增殖的抑制率。结果除了低剂量光敏剂＋化疗组同高剂量光敏剂组差异不显著外．其余相互间差异均有统计学意义，高剂量光敏剂＋化疗组细胞抑制率较高，低剂量光敏剂组抑制率较低。结论在特定光源状态下,一定的光敏剂、光照能量密度、孵育时间，光敏剂孵育浓度是人食管癌细胞Eca-109体外光动力效应的主要影响因素。两种不同的HPD孵育浓度下细胞抑制率有显著性差异。相同光照能量密度及孵育时间下，孵育浓度越高，其杀伤效应越强。光动力与化疗联合对食管癌细胞的杀伤力提高，光动力与化疗有协同作用。     

表皮生长因子对高转移人卵巢癌细胞生长和播散的影响

目的：探讨表皮生长因子（ＥＧＦ）对高转移人卵巢癌细胞（ＨＯ－８９１０ＰＭ）生长和播散的影响。方法：用细胞生长曲线，形态变化，细胞迁移集落观察ＥＧＦ对细胞生长和迁移的影响。用免疫细胞化学和Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹方法观察ＥＧＦＲ和Ｎｅｕ癌基因蛋白在细胞的表达。结果：当培养液中加ＥＧＦ０．０１ｍｇ·Ｌ－１培养７天，细胞数量增加１１倍，对照细胞数量增加４．９倍。细胞形态变梭形，边界清楚，排列松散，有６３％的细胞长径大于１０μｍ。当加ＥＧＦ０．０１ｍｇ·Ｌ－１培养６天后，可见原始种植面积半径增至０．５０８ｃｍ，有９３２个细胞迁移到原始种植区外。对照细胞未发生迁移现象。免疫细胞化学显示均有ＥＧＦＲ和Ｎｅｕ癌基因蛋白表达。Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹方法显示均有ＥＧＦＲ和Ｎｅｕ癌基因蛋白条带。结论：ＥＧＦ能促进高转移人卵巢癌细胞生长，并且随着ＥＧＦ量的增加癌细胞迁移能力增强，该细胞ＥＧＦＲ和Ｎｅｕ癌基因蛋白表达也增强     

低氧对食管癌Eca109细胞体外迁移及侵袭的影响

 目的 探讨低氧对食管癌迁移及侵袭能力的影响及其作用机制。方法 采用CoCl2化学低氧法模拟肿瘤低氧微环境,半定量RT-PCR和免疫细胞化学分别检测不同低氧时相时食管癌Eca109细胞中低氧诱导因子-1α（HIF-1α）、E-钙粘蛋白及基质金属蛋白酶-2（MMP-2）mRNA及蛋白的表达。Western印迹法检测雷帕霉素联合低氧处理Eca109细胞后,HIF-1α、E-钙粘蛋白及MMP-2的变化。细胞划痕试验和Transwell实验检测雷帕霉素联合低氧对Eca109细胞迁移及侵袭能力的影响。结果 Eca109细胞在低氧状态下,HIF-1αmRNA无明显变化（P>0.05）,仅蛋白表达增多;E-钙粘蛋白的mRNA表达明显降低（P<0.05）,蛋白表达减少;MMP-2 mRNA表达明显升高（P<0.05）,蛋白表达增多。雷帕霉素在低氧状态下可显著抑制HIF-1α及MMP-2表达,促进E-钙粘蛋白高表达。经雷帕霉素处理后,Eca109细胞在低氧状态下,迁移速度减慢,侵袭穿膜细胞数减少（P<0.05）。结论 低氧使Eca109细胞中HIF-1α蛋白表达增多,后者可能通过下调E-钙粘蛋白、上调MMP-2表达促进食管癌在低氧状态下的迁移及侵袭。     

LINC00659靶向miR-149-5p调控食管鳞癌细胞Eca-109的增殖、迁移、侵袭及放射敏感性

目的 探讨长基因间非编码RNA 00659(LINC00659)是否靶向miR-149-5p调控食管鳞癌Eca-109细胞的增殖、 迁移侵袭及放射敏感性.方法 实时定量PCR(RT-qPCR)分析30对食管鳞癌组织、 对照组织中LINC00659和miR-149-5p表达量.将Eca-109细胞分为si-NC组、si-...