RNA干扰沉默Livin基因表达对食管癌裸鼠移植瘤的抑制作用

目的 利用RNA干扰技术在裸鼠体内抑制Livin基因表达,探讨RNA干扰对食管癌裸鼠移植瘤生长的抑制作用.方法 设计靶向Livin基因的siRNA,构建重组siRNA表达载体pRNAT.U6.1-siLivin并导人裸鼠皮下移植瘤,观察肿瘤生长情况.采用RT-PCR方法检测干预组和对照组Livin基因表达.结果 pRNAT-U6.1-siLjvin导入裸鼠皮下移植瘤后14 d,肿瘤体积明显变小.LivinmRNA表达明显降低.结论 pRNAT.U6.1-siLlvin可以明显抑制食管癌裸鼠移植瘤的增殖.     

短发夹状RNA抑制子宫颈癌CaSki细胞HPV 16 E7基因的研究

目的：研究短发夹状RNA（short hairpin RNA，shRNA）构建的人乳头瘤病毒（human papillomavirus，HPV）16E7siRNA表达载体转染宫颈癌细胞株CaSki细胞后，在体内外对CaSki细胞E7基因的抑制作用。方法：利用脂质体将构建有HPV16E7特异性小干扰RNA（small interfering RNA，siRNA）的表达载体P1、P2、P3转染CaSki细胞，以实时荧光定量RT—PCR及流式细胞仪检测不同时间点E7mRNA和蛋白的变化，并将载体P1转染后的细胞接种到裸鼠皮下，4周后观察裸鼠体内皮下移植瘤体积和质量的差异，并用免疫组化检测瘤体组织中E7蛋白的表达变化。结果：表达载体P1、P2、P3均能抑制Caski细胞E7mRNA和蛋白的表达。其中载体P1抑制作用最强，在抗性克隆形成后1周，对E7mRNA和蛋白的抑制率分别为92．86％、84．21％；在抗性克隆形成后4周，抑制率仍分别为68．95％、62．50％。在接种后4周载体P1组裸鼠体内皮下移植瘤的体积和重量明显小于空载体组和对照组，同时E7蛋白的表达也被有效抑制，抑制率为74．75％。结论：构建有shRNA的E7siRNA表达载体在体内外可明显抑制E7基因的表达。     

小干扰RNA沉默CXCR4和CXCR7对人子宫内膜癌Ishikawa细胞裸鼠移植瘤生长的抑制作用

目的:探讨针对趋化因子受体基因CXCR4和CXCR7的小干扰RNA(siRNA)对人子宫内膜癌Ishikawa细胞裸鼠移植瘤生长的影响.方法:将子宫内膜癌Ishikawa细胞株注射于裸鼠肩胛背部皮下建立动物模型,待肿瘤最长径达5～7mm后,将所有荷瘤裸鼠随机分组,分别给予CXCR4-siRNA和CXCR7-siRNA单独或联合瘤体内注射,并以阴性对照siRNA和生理盐水作为对照组,每3d治疗一次,共6个治疗周期.观察各组裸鼠移植瘤的生长,比较各组移植瘤的体积和质量的差异,并以实时荧光定量RT-PCR、Western blotting和免疫组化技术验证CXCR4和CXCR7的基因沉默效果.结果:成功建立Ishikawa细胞裸鼠移植瘤模型,与阴性对照siRNA组和空白对照组相比,CXCR4siRNA治疗组、CXCR-siRNA治疗组和CXCR4-siRNA+ CXCR7-siRNA治疗组的肿瘤的生长均明显受到抑制(均P＜0.05);CXCR4-siRNA和/或CXCR7-siRNA瘤体内直接注射能显著下调CXCR4、CXCR7 mRNA(均P＜0.05)和蛋白(均P＜0.01)的表达.结论:siRNA干扰CXCR4和CXCR7表达能够有效抑制人子宫内膜癌Ishikawa细胞裸鼠移植瘤的生长.     

RNA干扰Bcl-2基因表达对人胆管癌细胞及胆囊癌细胞株裸鼠移植瘤生长的抑制

目的:探讨Bcl-2基因的小干扰RNA(siRNA)真核表达载体干扰Bcl-2基因表达对人胆管癌细胞QBC939、胆囊癌细胞GBC-SD裸鼠体内移植瘤生长的抑制作用.方法:分别制作人胆管癌细胞QBC939、胆囊癌细胞GBC-SD细胞株移植瘤模型,随机分为3组,pSilencerTM-EGFP sh515组(实验组)、pSilencerTM-EGFP shCon组(空载体阴性对照组)和对照组.实验组用Bcl-2基因的小干扰RNA(siRNA)真核表达载体多点注射于移植瘤周围,空载体阴性对照组用空载体多点注射于移植瘤周围,对照组不作处理,观察其生长情况,计算肿瘤生长体积、生长率.6周后,处死裸鼠,剥离瘤体组织进行称重,并采用免疫组化检测Bcl-2蛋白的表达.结果:成功建立裸鼠人胆管癌细胞QBC939,胆囊癌GBC-SD细胞的动物模型.胆管癌细胞实验组、空载体阴性对照组、对照组瘤体平均体积(mm3)分别为:801.776±59.6,1383.980±78.2,1490.235±89.0.瘤体平均瘤体重量(g)为:0.90±0.11,1.49±0.31,1.63±0.22.平均生长率为:20.558%,35.587%,38.211%.人胆囊癌细胞实验组、空载体阴性对照组、对照组瘤体平均体积(mm3)分别为:729.736±66.6,1493.162±98.9,1548.668±101.0.瘤体平均瘤体重量(g)为:0.82±0.10,1.68±0.21,1.90±0.25.平均生长率为:18.711%,38.286%,39.709%.两组实验组分别和空载体阴性对照组、对照组比较有统计学意义(P<0.05),空载体阴性对照组和对照组比较无统计学意义(P>0.05).结论:针对Bcl-2基因siRNA真核表达载体通过局部多点注射于移植瘤周围可以有效降低Bcl-2基因的表达,该基因沉默后肿瘤细胞增殖受到抑制,体内瘤体生长减慢.     

糖基因和N-糖链介导入肝癌细胞转移及耐药性的研究

目的通过研究糖基因、N-糖链在人肝癌高、低转移细胞株MHCC97-H和MHCC97-L中的差异表达,明确二者与肝癌转移及其耐药的相关性,确证肝癌转移诊断及抗肿瘤治疗新靶点。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应（real-time PCR）分析糖基因,异硫氰酸荧光素（FITC）-凝集素结合分析糖链的特征;通过RNA干扰技术干预差异表达的糖基因,检测干扰前后MHCC97-H细胞的体外侵袭力及其药物敏感性。进一步修饰N-糖基化（衣霉素和糖基肽酶处理）,检On,0N-糖基化修饰前后MHCC97-H细胞的体外侵袭力、体内成瘤性及药物敏感性。结果糖基因、N-糖链在人肝癌高、低转移细胞株中表达差异有统计学意义;通过特异性RNA干扰技术使MHCC97-H细胞中N-乙酰氨基葡萄糖转移酶（MGAT5）表达下调时,该细胞在体外的侵袭能力下降,药物敏感性增强（t=7．312,P〈0．05）。MHCC97．H细胞经N．糖基化修饰后在体外的侵袭能力下降,体内成瘤性受到抑制,药物敏感性增强。结论人肝癌细胞中糖基因、糖蛋白N-糖链的差异表达与肿瘤细胞的转移及其耐药密切相关,可为肿瘤化疗提供新靶点。     

靶向信号转导和转录激活因子3的小干扰RNA对体内外乳腺癌细胞生长的抑制作用

目的 观察沉默信号转导和转录激活因子3(STAT3)基因对乳腺癌细胞MCF7体内外生长的抑制作用,探讨STAT3基因作为乳腺癌治疗靶点的可行性和有效性.方法 应用RNA干扰技术抑制MCF7细胞STAT3基因的表达,半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot法检测STAT3 mRNA及蛋白的表达,流式细胞仪检测MCF7细胞的凋亡率,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测MCF7细胞的增殖情况.在裸鼠皮下移植转染了STAT3 siRNA的MCF7细胞,观察其成瘤性.半定量RT-PCR和Western blot法检测成瘤标本的STAT3 mRNA和蛋白的表达.结果 转染48 h后,STAT3 siRNA转染组、非特异siRNA转染组和空白对照组的STAT3 mRNA表达量分别为0.327±0.020、1.035±0.050和1.093±0.018;转染72 h后,3组STAT3蛋白表达量分别为0.153±0.006、1.320±0.033和1.374±0.022,STAT3 siRNA转染组的STAT3 mRNA和蛋白表达水平,较非特异siRNA转染组和空白对照组均明显降低(P＜0.05).MTT实验结果显示,STAT3 siRNA转染组和非特异siRNA转染组的细胞生长抑制率分别为(44.00±5.10)%和(16.10±1.05)%,STAT3 siRNA转染组的细胞增殖能力明显下降(P＜0.05).流式细胞仪分析显示,STAT3 siRNA转染组、非特异siRNA转染组和空白对照组的细胞凋亡率分别为(14.79±0.22)%、(8.45±0.43)%和(7.06±0.71)%,STAT3 siRNA转染组明显高于非特异siRNA转染组和空白对照组(P＜0.05).STAT3siRNA转染组、非特异siRNA转染组和空白对照组在裸鼠体内最终的成瘤体积分别为(41.15±12.17)mm3、(101.36±21.90)mm3和(118.45±24.68)mm3,移植瘤重量分别为(21.4±10.6)mg、(57.2±21.9)mg和(88.6±12.2)mg,STAT3 siRNA转染组的移植瘤体积和重量明显低于非特异siRNA转染组和空白对照组(P＜0.05).STAT3 siRNA转染组移植瘤组织的STAT3 mRNA和蛋白表达水平均明显降低.结论 靶向STAT3的siRNA可以抑制乳腺癌MCF7细胞体内外的生长,STAT3有可能成为新的乳腺癌治疗靶点.     

胃癌相关基因GCRG213小干扰RNA表达载体的构建及其对胃癌细胞的影响

目的探讨胃癌相关基因GCRG213小干扰RNA(siRNA)转染对胃癌细胞MKN45的影响。方法设计两对针对GCRG213可转录为siRNA的DNA片段,退火后插入siRNA表达载体IMG-800。测序正确的重组子IMG-800-1(含干扰片段1)、IMG-800-2(含干扰片段2)和空载体经脂质体转染人胃癌细胞系MKN45细胞,G418筛选获得稳定转染的细胞株。采用半定量RT-PCR及Western免疫印迹法,比较转染不同质粒的MKN45细胞中GCRG213在mRNA和蛋白质水平上的表达差异。选取稳定转染不同质粒的MKN45细胞,采用细胞计数法绘制细胞生长曲线,流式细胞仪分析细胞的增殖状态,Annexin V FITC/PI双标记法检测凋亡细胞,平板克隆形成实验、裸鼠移植瘤实验分析转染细胞成瘤性。结果经测序证实,干扰片段退火后正确插入小干扰RNA表达载体IMG- 800,组成重组子IMG-800-1和IMG-800-2。重组子IMG-800-1、IMG-800-2和空载体经脂质体转染人胃癌细胞系MKN45细胞,G418筛选获得稳定转染的细胞株。与对应的空载体比较,RT-PCR结果显示,转染siRNA的MKN45细胞中,mRNA的表达分别下调44.9%和49.5%;Western印迹法结果显示,转染siRNA的MKN45细胞中,蛋白的表达分别下调55.3%和64.2%。与转染空载体的细胞相比,转染siRNA的MKN45细胞生长增殖速度明显减慢,细胞周期表现为处于G0～G1期的细胞有所增加,G2/M期和(或)S期的细胞比例减少,细胞凋亡率增加,细胞克隆形成数量减少,裸鼠体内成瘤性降低。结论胃癌相关基因GCRG213 siRNA转染,可抑制肿瘤细胞的生长和增殖,促进肿瘤细胞的凋亡,抑制肿瘤细胞的成瘤性。     

RMP基因沉默对肝癌SMMC-7721细胞增殖和迁移能力的影响

目的:建立RMP(RPB5-mediating protein)基因沉默的稳定细胞株,研究RMP小干扰RNA(small interfering RNA, siRNA)对人肝癌SMMC-7721细胞增殖和迁移的抑制作用.方法:首先,体外合成3条RMP基因的siRNA,并转染到SMMC-7721细胞中,RT-PCR检测3条siRNA对RMP基因表达的抑制作用,筛选出最佳干扰序列;然后,pGPU6-Neo-RMP-484真核表达载体转染,G418筛选出稳定干扰RMP基因的细胞株,RT-PCR法检测该稳定细胞株中RMP基因的干扰效率,MTT法检测RMP-siRNA对SMMC-7721细胞增殖及细胞黏附能力的影响,划痕实验检测细胞迁移能力的变化.结果:利用RNA干扰技术成功建立了RMP基因下调的稳定细胞株,与SMMC-7721细胞对照组比较,其RMP mRNA表达水平下调了(83.67±2.56)%.稳定转染siRNA的细胞株细胞增殖受到抑制,增殖抑制率可达(74.33±0.58)%.稳定转染细胞株的细胞黏附能力有所增加,迁移率则相应降低.结论:成功筛选出了稳定转染RMP-siRNA重组载体的细胞株.pGPU6-Neo-RMP-484重组载体能有效抑制RMP基因在肝癌SMMC-7721细胞内的表达,可作为RMP分子机制研究的细胞模型.RMP基因的下调能有效抑制肝癌细胞SMMC-7721的增殖,使其黏附率增加,同时细胞的迁移率降低.     

siRNA沉默PI3K基因激活FoxO3α基因并抑制人乳腺癌裸鼠移植瘤生长的实验研究

目的:探讨应用小分子干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)沉默磷酸肌醇-3-激酶(phosphatidylinositol-3 kinase,PI3K)基因对人乳腺癌细胞MCF-7中抑癌基因FoxO3α的表达及人乳腺癌裸鼠移植瘤模型的肿瘤生长的影响.方法:构建PI3K基因siRNA质粒Psilencerl.0-U6-PI3K-siRNA;乳腺癌细胞株MCF-7裸鼠背部皮下接种,建立人乳腺癌裸鼠移植瘤动物模型,成瘤后将实验动物分3组,每组9只,1组注射Psilencerl.0-U6-PI3K-siRNA质粒、另2组分别注射Psilencerl.0-U6空质粒或0.9%的氯化钠溶液作为对照.观察肿瘤体积变化、裸鼠生存时间;并用Western印迹法检测瘤组织中FoxO3α和PI3K的表达.结果:PI3K-siRNA质粒治疗组裸鼠的肿瘤体积明显缩小(P＜0.01),平均生存时间显著延长(P＜0.01);肿瘤内PI3K基因表达水平明显下降,而FoxO3α基因的表达水平明显升高.结论:PI3K基因siRNA能够明显抑制人乳腺癌裸鼠移植模型的PI3K基因的表达,上调抑癌基因FoxO3α的表达,抑制肿瘤生长,延长荷瘤鼠的生存时间.     

干扰RNA对HepG2肝癌细胞内源性c-myc表达的抑制作用

目的 研究干扰RNA(RNAi)对HepG2细胞的c-myc基因表达的干扰效应。方法 建立装载靶向c-mvc基因小干扰性RNA(siRNA)的表达载体。用脂质体法将此表达载体转染HepG2细胞株,以转染空载细胞作为对照。采用定量PCR和Western blot检测c-myc基因的表达。用流式细胞仪及荧光显微镜检测AnexinV标记的凋亡细胞。结果 转染siRNA的表达载体可以抑制内源c-myc基因在转录和转译上的表达,抑制率达67％。c-myc基因的表达抑制与HepG2细胞的凋亡相关联。结论 转染siRNA的表达载体可明显抑制肝癌细胞株HepG2 c-myc基因的表达,并伴有细胞的凋亡。     

RNA干扰Bcl-2基因表达对人胆管癌细胞及胆囊癌细胞株裸鼠移植瘤生长的抑制

目的：探讨Bcl-2基因的小干扰RNA（siRNA）真核表达载体干扰Bcl-2基因表达对人胆管癌细胞QBC939、胆囊癌细胞GBC-SD裸鼠体内移植瘤生长的抑制作用。方法：分别制作人胆管癌细胞QBC939、胆囊癌细胞GBC-SD细胞株移植瘤模型,随机分为3组,pSilencerTM-EGFP sh515组（实验组）、pSilencerTM-EGFP shCon组（空载体阴性对照组）和对照组。实验组用Bcl-2基因的小干扰RNA（siRNA）真核表达载体多点注射于移植瘤周围,空载体阴性对照组用空载体多点注射于移植瘤周围,对照组不作处理,观察其生长情况,计算肿瘤生长体积、生长率。6周后,处死裸鼠,剥离瘤体组织进行称重,并采用免疫组化检测Bcl-2蛋白的表达。结果：成功建立裸鼠人胆管癌细胞QBC939,胆囊癌GBC-SD细胞的动物模型。胆管癌细胞实验组、空载体阴性对照组、对照组瘤体平均体积（mm3）分别为：801.776±59.6,1383.980±78.2,1490.235±89.0。瘤体平均瘤体重量（g）为：0.90±0.11,1.49±0.31,1.63±0.22。平均生长率为：20.558%,35.587%,38.211%。人胆囊癌细胞实验组、空载体阴性对照组、对照组瘤体平均体积（mm3）分别为：729.736±66.6,1493.162±98.9,1548.668±101.0。瘤体平均瘤体重量（g）为：0.82±0.10,1.68±0.21,1.90±0.25。平均生长率为：18.711%,38.286%,39.709%。两组实验组分别和空载体阴性对照组、对照组比较有统计学意义（P〈0.05）,空载体阴性对照组和对照组比较无统计学意义（P〉0.05）。结论：针对Bcl-2基因siRNA真核表达载体通过局部多点注射于移植瘤周围可以有效降低Bcl-2基因的表达,该基因沉默后肿瘤细胞增殖受到抑制,体内瘤体生长减慢。     

RNAi对骨肉瘤细胞株HMGA1基因表达及侵袭力抑制的实验研究

目的:探讨RNA干扰(RNAi)技术对骨肉瘤细胞株(MG-63)中HMGA1基因表达和侵袭力的影响.方法:采用单细胞克隆技术,从MG-63中分离培养出高表达HMGAl的骨肉瘤细胞株,将细胞分成3组,通过PU6mRFP载体进行转染:实验组,转染HMGA1的小干扰RNA(siRNA);阴性对照组,转染HMGA1的无关序列;细胞对照组为未转染的MG-63细胞.转染细胞株后,荧光检测转染效率;用实时荧光定量RT-PCR和蛋白质印迹法分别从mRNA和蛋白质水平检测siRNA对HM-GA1表达的影响;Transwell趋化侵袭实验观察转染后细胞株侵袭能力的变化.结果:荧光检测转染效率,实验组为(55.68±6.74)%,阴性对照组为(49.87±4.33)%;细胞对照组观察不到明显的荧光细胞.实验组HMGA1 siRNA转染骨肉瘤细胞后,明显下调细胞中HMGAl mRNA及蛋白的表达,与转染时间和转染浓度相关;阴性对照组和细胞对照组在转染前后HMGAl基因的mRNA及蛋白质表达均无明显变化.实验组细胞株穿过侵袭膜的细胞数明显低于阴性对照组和细胞对照组,P<0.01.结论:HMGAl siRNA可以下调骨肉瘤细胞中HMGAl mRNA及其蛋白的表达,抑制骨肉瘤细胞侵袭能力.     

miR-199-3p通过对FGF2的调控抑制肝癌细胞MHCC97H的增殖、迁移作用及机制

目的:探讨miR-199-3p通过靶向调控抑制靶基因FGF2从而抑制肝癌MHCC97H细胞的增殖和迁移及机制。方法:qRT-PCR检测癌旁正常组织及肝癌肿瘤组织中miR-199-3p的表达水平;Transwell细胞侵袭实验检测肝癌细胞株Huh7、MHCC-97L、SMMC7721、HepG2和MHCC97H株其侵袭能力;qRT-PCR检测miR-199-3p在5株肝癌细胞系中的表达量;通过生物信息软件预测靶基因FGF2 mRNA 3' UTR的碱基存在miR-199-3p可能互补结合的位点并用荧光报告基因法及WB进行验证;通过qRT-PCR、免疫组化及Western blot检测FGF2在肝癌肿瘤组织和癌旁正常组织及各类肝癌细胞株表达的影响;Transwell、划痕、CCK8及流式细胞法检测miR-199-3p与FGF2对肝癌MHCC97H细胞增殖、侵袭、迁移及周期S期聚集能力的调控;采用MHCC97H细胞构建肝癌肿瘤异种移植小鼠模型进行肿瘤观测及免疫组化实验验证miR-199-3p对肝癌的调控作用。结果:miR-199-3p的表达水平与肝癌细胞侵袭转移能力相关;miR-199-3p能够通过抑制FGF2的mRNA翻译,抑制FGF2蛋白水平表达;FGF2与肝癌细胞侵袭转移能力相关;miR-199-3p可以负调控FGF2抑制肝癌MHCC97H细胞的生物行为;miR-199-3p 可抑制肝癌细胞中阳性信号,细胞增殖水平显著降低。结论:miR-199-3p通过抑制FGF2抑制肝癌细胞MHCC97H的增殖和迁移。     

RNA干扰HSF1增强碘125粒子放疗裸鼠胰腺癌移植瘤敏感性的分析

目的 探讨siRNA沉默HSF1基因对碘125粒子放疗裸鼠胰腺癌移植瘤效果的影响。方法 分别将空白胰腺癌细胞株及稳定转染的HSF1沉默的胰腺癌细胞株注射入裸鼠背部皮下,建立裸鼠胰腺癌移植瘤模型各8只。每组取4只继续自然生长,另4只给予碘125粒子放疗。20 d后处死裸鼠取瘤体,称重、计算抑瘤率、病理切片分析苏木精-伊红染色坏死评分、Tunel染色分析凋亡指数、QRT-PCR检测mRNA表达、Western blot检测蛋白质表达。结果 HSF1蛋白在空白细胞组中表达较高,而ShRNA-HSF1组中表达较弱,差异有统计学意义。与空白细胞组比较,ShRNA-HSF1组的体积增量比和瘤重显著性降低,抑瘤率和凋亡指数显著性升高。在自然生长条件下,ShRNA-HSF1能抑制Bcl2 mRNA和蛋白的表达,而促进Bax与Caspase 3 mRNA和蛋白的表达,经碘125粒子放疗后,Bcl2 mRNA和蛋白表达降低,而Bax与Caspase 3 mRNA和蛋白表达升高,ShRNA-HSF1进一步促进Bcl2蛋白表达降低,而进一步促进Bax和Caspase 3 mRNA蛋白表达升高。结论 RNA干扰...     

ANGPTIA基因对不同肝癌细胞株生长的影响

目的：观察血管生成素样蛋白4（angiopoietin-like4，ANGPTL4）基因对不同肝癌细胞株生长的影响。方法：用RT—PCR和Western印迹法检测9种不同肝癌细胞及永生化肝细胞中ANGPTL4的表达水平；选择ANGPTL4低表达的Huh-7、MHCC—LM3和中度表达的MHCC-97L共3个肝癌细胞株，以pEGFP-N1质粒为载体，用Lipofectamine2000脂质体转染ANGPTL4基因，用G418筛选结合FCM法对转染阳性细胞进行筛选，建立过表达ANGPTL4的稳定细胞株。制备细胞芯片，用Ki-67荧光免疫细胞化学技术检测3个稳定细胞株的体外增殖率，用裸小鼠体内成瘤实验观察ANGPTL4对这3个细胞株在裸小鼠体内生长的影响。结果：ANGPTL4mRNA在未转染肝癌细胞Huh-7和MHCC-LM3中低表达，在MHCC-97L细胞中中度表达，在Hep3B细胞中高表达。细胞芯片检测结果表明，与空载体组相比，稳定过表达ANGFFL4的Huh-7细胞体外增殖率较低（P=0．00074），而稳定过表达ANGPTL4的MHCC—LM3（P=0．07308）和MHCC-97L（P=0．01152）细胞株的体外增殖率则较高。体内实验证实，ANGPTL4可以明显抑制Huh-7细胞的裸鼠体内成瘤（P=0．00110），而促进MHCC-LM3细胞（P=0．05750）和MHCC-97L细胞（P=0．01891）的裸鼠体内成瘤。结论：ANGPTL4对不同肝癌细胞株的生长有不同影响，而对同一种细胞株体内和体外生长的影响基本一致。     

CHST13抑制肝癌细胞侵袭能力的研究

目的 通过研究磺基转移酶CHST13在人肝癌高转移细胞株MHCC97-H和人肝癌低转移细胞株MHCC97-L中的差异表达,明确其与肝癌转移的相关性,从而证实肝癌转移诊断及抗肿瘤治疗新靶点.方法 采用实时PCR、Western blot分析磺基转移酶CHST13在人肝癌高、低转移细胞株的差异表达,通过RNA干扰技术干预CHST13基因,检测干扰前后MHCC97-L细胞的体外侵袭力及体内成瘤性.结果 CHST13在人肝癌高、低转移细胞株中表达具有明显差异;下调MHCC97-L细胞中CHST13基因表达后,穿过基底膜的细胞数量[（30±3）个]明显多于未处理组[（14±2）个],体外侵袭力显著增强（t=2.8,P=0.005）;相对于正常细胞[（0.5±0.06）g],干扰后细胞的肿瘤平均重量[（0.9±0.10）g]明显增大,体内成瘤性明显提高（t=2.5,P=0.01）.结论 磺基转移酶CHST13与肝癌细胞的侵袭、成瘤性密切相关,其有望成为肝癌临床治疗的新靶点.     

慢病毒介导的USP9X基因RNA干扰对人胰腺癌细胞株裸鼠移植瘤生长的影响

目的研究慢病毒介导的连锁的泛素特异肽酶9(USP9X)基因RNA干扰对人胰腺癌细胞系裸鼠皮下移植瘤的影响。方法将靶向USP9X基因的干扰小RNA(siRNA)慢病毒(LV-siRNA-USP9X)和阴性对照慢病毒(LV-siRNA-NC)转染至SW1990细胞,并分别作为siUSP9X组和siNC组,未转染细胞作为对照组,分别将3组细胞系接种至裸鼠皮下,比较3组裸鼠接种第30天的移植瘤生长情况和瘤体重量。蛋白质印记(Western blot)法和免疫组织化染色检测3组裸鼠皮下移植瘤中survivin蛋白的表达情况,TUNEL法检测细胞凋亡指数(AI)。结果siUSP9X组USP9X蛋白的相对表达量均明显低于siNC组和对照组,差异均有统计学意义(P<0.01),干扰效率约为90%。siUSP9X组裸鼠的肿瘤体积明显小于siNC组和对照组裸鼠,且随着接种时间的延长,差异越来越明显。在接种第30天时,siUSP9X组裸鼠瘤体重量均小于siNC组和对照组裸鼠,抑瘤率为52%。siUSP9X组survivin蛋白的相对表达量和阳性表达率均低于siNC组和对照组,AI均高于siNC组和对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论慢病毒介导的USP9X基因沉默可明显抑制人胰腺癌细胞系裸鼠皮下移植瘤的生长,该现象可能与其下调survivin蛋白的表达并促进细胞凋亡有关,USP9X有可能成为胰腺癌基因治疗的一个新靶点。     

siRNA沉默PI3K基因激活FoxO3a基因并抑制人乳腺癌裸鼠移植瘤生长的实验研究

目的：探讨应用小分子干扰RNA（small interfering RNA，siRNA）沉默磷酸肌醇-3-激酶（phosphatidylinositol-3 kinase，PI3K）基因对人乳腺癌细胞MCF-7中抑癌基因FoxO3a的表达及人乳腺癌裸鼠移植瘤模型的肿瘤生长的影响。方法：构建PI3K基因siRNA质粒Psilencer1.0-U6-PI3K-siRNA；乳腺癌细胞株MCF-7裸鼠背部皮下接种，建立人乳腺癌裸鼠移植瘤动物模型，成瘤后将实验动物分3组，每组9只。1组注射Psilencer1.0-U6-PI3K-siRNA质粒、另2组分别注射Psilencer1．0-U6空质粒或0．9％的氯化钠溶液作为对照。观察肿瘤体积变化、裸鼠生存时间；并用Western印迹法检测瘤组织中FoxO3a和PI3K的表达。结果：PI3K-siRNA质粒治疗组裸鼠的肿瘤体积明显缩小（P〈0．01），平均生存时间显著延长（P〈0．01）；肿瘤内PI3K基因表达水平明显下降，而FoxO3a基因的表达水平明显升高。结论：PI3K基因siRNA能够明显抑制人乳腺癌裸鼠移植模型的PI3K基因的表达，上调抑癌基因FoxO3a的表达，抑制肿瘤生长，延长荷瘤鼠的生存时间。     

RNA干扰抑制血管内皮生长因子影响舌癌耐药细胞移植瘤增殖及血管生成

目的研究RNA干扰抑制血管内皮生长因子（VEGF）的表达对舌癌耐药细胞移植瘤增殖及血管生成的影响。方法用顺铂体外连续诱导法诱导舌癌Tca8113细胞系获得耐药细胞,将耐药细胞接种裸鼠皮下建立移植瘤模型,并随机分为空白对照组、空载体组、无关片段组、干扰质粒组。以脂质体法对空载体组、无关片段组、干扰质粒组进行瘤内及瘤周注射转染,RNA干扰抑制VEGF的表达,测量瘤体重量及体积,免疫组化法检测移植瘤PCNA、CD34,比较肿瘤增殖性及微血管参数,原位杂交法检测VEGFmRNA,免疫印迹法检测VEGF蛋白。结果干扰质粒组的瘤体体积、重量、PCNA平均光密度值、微血管参数均小于其他各组（P〈0．05）。干扰质粒组中VEGFmRNA及蛋白表达水平较其他各组明显下降（P〈0．05）。结论通过靶向VEGF的RNA干扰下调VEGF的表达,能抑制人舌癌耐药细胞移植瘤的增殖及血管生成,提示RNA干扰抑制VEGF可能为临床治疗耐药舌痛柽供新途径。