膜联蛋白A5在人子宫颈鳞癌组织中的表达

目的 探讨人子宫颈鳞痛发生发展过程中,膜联蛋白A5(ANXA5)表达的变化. 方法 收集人子宫颈鳞癌组织25例和人正常子宫颈组织15例,细胞裂解液裂解组织细胞,蛋白定量试剂盒进行蛋白定量后,Westernblotting法检测ANXA5在人子宫颈鳞癌组织和人正常子宫颈组织中的表达;为进一步确定ANXA5的表达部位及其变化,我们收集人子宫颈鳞癌蜡块45例和人正常子宫颈组织蜡块20例,用免疫组织化学ABC法对两种组织ANXA5的表达进行检测,原位杂交法在RNA水平进行检测. 结果 Westen blotting显示人子宫颈鳞癌组织ANXA5比人正常子宫颈组织表达增强;免疫组织化学及原位杂交均显示人子宫颈癌组织中ANXA5的染色比人正常子宫颈组织染色重,阳性信号分布于细胞质和细胞膜. 结论 ANXA5在人子宫颈鳞癌组织中的表达比在人正常子宫颈组织中的表达增高;ANXA5与人子宫颈鳞癌的发生有密切联系.     

Galecin-3在膜联蛋白A7表达抑制的HeLa细胞中的表达变化

目的探讨膜联蛋白A7(ANXA7)表达抑制的HeLa细胞galectin-3(gal-3)的表达改变。方法将细胞分为实验组、阴性对照组和空白对照组。采用RNA干扰技术将靶向ANXA7的siRNA和阴性对照siRNA脂质体2000转染法分别转染宫颈癌细胞系HeLa细胞,空白对照组不予任何处理。转染48h后采用Western blotting法和RT-PCR法分别在蛋白水平和mRNA水平进行抑制效果的鉴定。Western blotting和实时定量PCR法分别检测ANXA7表达抑制的HeLa细胞中galectin-3的表达改变。结果靶向ANXA7的siRNA可显著抑制ANXA7的表达;当ANXA7表达受抑后,galectin-3在HeLa细胞中的表达显著下降,与阴性对照组和空白对照组相比,差异有显著性(P0.05)。结论 ANXA7表达抑制的宫颈癌细胞系HeLa细胞中galectin-3的表达显著下调,这可能是ANXA7表达受抑的细胞行为学发生改变的机制之一。     

膜联蛋白A7在人宫颈鳞癌和正常组织中的表达

目的 探讨膜联蛋白A7在人宫颈鳞癌和正常组织中的表达情况. 方法 应用免疫组织化学SP法,检测人宫颈鳞癌和正常宫颈组织蜡块各25例中膜联蛋白A7的表达差异;Western .blotting和半定量RT-PCR法检测人宫颈鳞癌和正常组织新鲜标本各25例中膜联蛋白A7的表达差异. 结果 膜联蛋白A7在组织中蛋白和mRNA水平表达一致,均为宫颈鳞癌组织表达高于正常宫颈组织,差异有统计学意义. 结论 膜联蛋白A7在人宫颈鳞癌表达上调, 可能成为宫颈癌诊断的一个新的指示靶点.     

膜联蛋白A7低表达对胃癌MGC-803细胞生物学特性的影响

目的 探讨膜联蛋白A7(ANXA7)低表达对人胃癌低分化细胞MGC-803的影响。方法 将细胞分为实验组、阴性对照组和空白对照组。采用RNA干扰技术将靶向ANXA7的siRNA和阴性对照siRNA以脂质体转染法分别转染胃癌细胞系MGC-803细胞, 空白对照组不予任何处理。转染48h后,采用Western blotting 和实时定量-PCR法进行抑制效果的鉴定。检测ANXA7低表达对MGC-803细胞黏附、伸展、剥脱和迁移等生物学行为的影响。 结果 靶向ANXA7的siRNA可显著抑制ANXA7的表达;ANXA7表达受抑后,细胞黏附、伸展和剥脱能力降低,与阴性对照组和空白对照组相比,差异显著（P<0.05）。细胞迁移变化不显著。结论 ANXA7表达降低后MGC-803细胞行为学发生明显改变。     

应用蛋白质组学和组织芯片研究annexin A2在胃癌中的表达

目的: 研究胃癌中膜联蛋白A2(ANXA2)的差异表达及其与胃癌临床病理参数的关系。方法: 激光捕获显微切割技术(LCM)纯化15例胃腺癌细胞(GAC)和其癌旁正常胃黏膜上皮细胞(NGEC),采用¹⁸O/¹⁶O分别标记2种细胞样本酶切后的多肽混合物。纳升级反相液相色谱串联质谱(Nano-RPLC-MS/MS)定量鉴定GAC和NGEC的差异表达蛋白质。Western blotting验证差异蛋白ANXA2的表达。免疫组化方法检测组织芯片中75对胃癌组织和癌旁组织中ANXA2的表达,分析ANXA2表达与胃癌临床病理参数的关系。结果: 共筛选出78个差异表达蛋白质,其中ANXA2蛋白的表达水平在GAC中较NGEC中明显上调(2.32∶ 1),Western blotting检测ANXA2蛋白表达在GAC组升高(P<0.01);免疫组化显示:ANXA2的表达与胃癌的浸润深度、淋巴结转移、分化程度、TNM分期和肿瘤大小相关(P<0.01),与年龄、性别和远处转移无关(P>0.05)。结论: ANXA2蛋白的上调可能在胃癌的生物学行为中发挥重要作用。     

膜联蛋白A2对人宫颈癌HeLa细胞增殖、迁移和凋亡的影响

 目的：研究膜联蛋白A2（annexin A2, ANXA2）对人宫颈癌HeLa细胞增殖、迁移和凋亡能力的影响。方法：以HeLa细胞为研究对象,构建过表达载体以及ANXA2-siRNA,转染入细胞。将细胞分为正常对照组、scrambled组、ANXA2过表达组及ANXA2-siRNA组。应用real-time PCR法检测ANXA2 mRNA表达水平及Western blotting检测ANXA2蛋白表达水平。分别采用MTT法、Boyden小室法和流式细胞术观察ANXA2对HeLa细胞增殖、迁移及凋亡能力的影响。结果：ANXA2过表达组可以显著促进HeLa细胞的增殖和迁移;ANXA2-siRNA组明显抑制HeLa细胞的增殖和迁移;ANXA2对HeLa细胞凋亡几乎无影响。结论:沉默ANXA2对人宫颈癌细胞的凋亡无显著影响,但可显著抑制其增殖能力和迁移能力。ANXA2可能在宫颈癌的发生发展中具有十分重要的作用,提示它有可能成为宫颈癌治疗的分子靶点。     

HOXB7基因沉默对人胃癌细胞活力、迁移和侵袭的影响

目的:探讨靶向沉默HOXB7基因对人胃癌SGC-7901细胞活力、迁移和侵袭作用的影响及潜在机制。方法:设计靶向HOXB7的siRNA,然后瞬时转染胃癌SGC-7901细胞,实时荧光定量PCR和Western blot法检测siRNA靶向沉默的效果。MTT法检测细胞的活力,Western blot法检测细胞周期相关蛋白CDK4和cyclin D1蛋白的表达水平,Transwell小室侵袭实验检测SGC-7901细胞的侵袭能力,实时荧光定量PCR和Western blot法检测胃癌SGC-7901细胞PTEN和VEGF的表达水平以及p-AKT的蛋白水平。结果:胃癌组织中HOXB7基因在mRNA和蛋白水平的表达均显著高于对照组织。siRNA可有效靶向沉默SGC-7901细胞中HOXB7的表达,且沉默HOXB7表达后SGC-7901细胞活力明显下降,同时细胞周期相关蛋白CDK4和cyclin D1的表达亦下调。靶向沉默HOXB7可明显抑制SGC-7901细胞中AKT的磷酸化水平,抑制胃癌细胞的侵袭转移,同时下调VEGF的表达水平,抑制胃癌组织中的肿瘤血管生成。结论:HOXB7作为一个癌基因,可上调细胞周期相关蛋白CDK4、cyclin D1和侵袭相关分子VEGF的表达,上调AKT的磷酸化水平,进而抑制PTEN的功能,促进胃癌细胞SGC-7901的生长、迁移和侵袭能力。     

膜联蛋白A5在不同临床分期的宫颈鳞癌组织中的表达

目的 检测膜联蛋白A5(ANXA5)在临床不同分期的宫颈癌组织中的表达差异,探讨膜联蛋白A5作为宫颈鳞癌分期标志物的可行性.方法 采用国际妇产科协会(FIGO)的国际分期法,将病例分为Ⅰ期26例,Ⅱ期20例,Ⅲ期14例.用RT-PCR检测RNA水平ANXA5的表达情况;用Western blotting法和免疫组织化学...     

敲低膜联蛋白A5对人胃癌MGC-803和MKN-45细胞周期的影响

目的 探讨敲低膜联蛋白A5（ANXA5）对人胃癌细胞系MGC-803、MKN-45细胞周期相关蛋白表达的影响。 方法 将细胞分为干扰组、阴性对照组及空白对照组,采用脂质体转染法将靶向膜联蛋白A5的siRNA以及阴性siRNA分别转染干扰组和阴性对照组MGC-803、MKN-45细胞,空白对照组不加任何试剂。转染后48 h采用Real-time PCR和Western bloting分别从mRNA和蛋白水平检测ANXA5的表达,确定ANXA5被敲低之后,Real-time PCR和Western bloting检测各组p21^cip1 mRNA和P21^cip1的表达,Western bloting检测各组细胞周期蛋白D1（cyclinD1）蛋白的表达,流式细胞术检测各组细胞周期的变化情况。 结果 敲低ANXA5后,与阴性对照组和空白对照组相比,两种细胞的p21^cip1mRNA和P21^cip1蛋白均显著降低（P<0.05）,cyclinD1（P<0.05）也显著降低。 结论 敲低ANXA5可下调MGC-803、MKN-45细胞中p21^cip1mRNA和P21^cip1蛋白以及cyclinD1的表达,推测ANXA5可能通过作用于细胞周期相关蛋白而引发细胞周期阻滞从而影响着胃癌的发展。     

lncRNA HOTAIR在胃癌中的表达及对胃癌细胞增殖及自噬的影响

目的研究lncRNA HOTAIR在胃癌中的表达及其对胃癌细胞增殖和自噬的影响,探讨lncRNA HOTAIR调控胃癌细胞自噬的机制。方法收集2015年1月—2017年12月于中国医科大学附属肿瘤医院确诊为胃癌的60例癌组织及其配对癌旁组织;实时荧光定量PCR (RT-PCR)检测HOTAIR表达水平,CCK-8实验检测siHOTAIR及si-ATG3对细胞增殖影响,蛋白免疫印迹实验检测HOTAIR对细胞自噬水平及ATG3表达水平影响,免疫荧光实验检测HOTAIR对胃癌细胞自噬的影响。结果 HOTAIR在胃癌组织及癌细胞株MGC-803、BGC-823、SGC-7901中表达水平显著高于癌旁正常组织及人胃黏膜细胞株GES-1。通过转染si-HOTAIR,构建胃癌HOTAIR干扰细胞株;与空载对照组相比,HOTAIR干扰组胃癌细胞增殖水平降低,胃癌细胞自噬标志蛋白LC3表达水平降低,LC3-Ⅱ/Ⅰ比例降低,P62表达增高,自噬相关蛋白ATG3表达亦降低。结论胃癌组织中HOTAIR表达上调,抑制HOTAIR促进了胃癌细胞增殖能力;且HOTAIR能够通过ATG3促进自噬水平。     

Significance of Fas and FasL protein expression in cardiac carcinoma and local lymph node tissues

Objective: To investigate the relation of Fas and Fas ligand (FasL) protein expression with carcinogenesis and metastasis of cardiac carcinoma. Methods: Immunohistochemistry was used to detect Fas and FasL protein expression in 64 cardiac carcinoma tissue samples and 20 normal gastric tissue samples. Relation between FasL and Fas expression, age and gender of gastric cancer patients, and pathological subtype and lymph node metastasis of gastric cancer was analyzed. Results: The Fas expression level was significantly higher in normal gastric tissue samples than in cardiac carcinoma tissue samples (85.0% vs. 25.0%, P<0.001), while the FasL expression level was significantly lower in normal gastric tissue samples than in cardiac carcinoma tissue samples (30.0% vs. 81.3%, P<0.001). The Fas expression level was significantly higher in invasive lymph nodes than in non-invasive lymph nodes (82.9% vs. 56.5%, P<0.003) and in well-differentiated gastric carcinoma tissue samples than in poorly-differentiated cardiac carcinoma tissue samples (50.0% vs. 18.0%, P=0.015). The FasL expression level was significantly lower in well-differentiated cardiac carcinoma tissue samples than in poorly- differentiated cardiac carcinoma tissue samples (42.9% vs. 84.0%, P=0.021). The Fas and FasL expression levels (25.0% and 81.3%) were significantly different in cardiac carcinoma tissue samples (P<0.001), but had a non-linear correlation (P=0.575). Conclusion: Abnormal Fas and FasL expressions in cardiac carcinoma and lymph node tissues are involved in carcinogenesis and metastasis of gastric cancer.     

miR-140在人胃癌组织中的表达及对SGC-7901胃癌细胞功能的影响

 目的: 研究microRNA-140(miR-140)在人胃癌和正常胃组织中的表达水平,以及调控miR-140表达后对SGC-7901胃癌细胞功能的影响。方法: 采用实时荧光定量PCR检测miR-140在人胃癌和正常胃组织中的表达水平;将miR-140 mimics(miR-140上调表达)和miR-140 inhibitors(miR-140下调表达)分别通过脂质体转染至人胃癌SGC-7901细胞中,同时设置未转染对照组(control组)和miRNA无义序列转染对照组(NC组)。实时荧光定量PCR检测转染后各组细胞中miR-140的表达变化;MTT方法检测各组细胞的生长活力和顺铂(DDP)作用下的生长抑制率;流式细胞术检测各组的细胞周期和凋亡率;Transwell实验检测各组细胞侵袭能力;Western blot检测各组细胞中组蛋白脱乙酰酶4(HDAC4)蛋白表达。结果: miR-140在人胃癌组织中表达水平显著低于正常胃组织(P<0.05)。与control和NC组相比,miR-140 mimics组中SGC-7901细胞活力和侵袭能力下降,细胞周期被阻滞,DDP作用下细胞生长抑制率和凋亡率上升,且HDAC4蛋白表达下调,差异均有统计学意义(P<0.05);而miR-140 inhibitors组中SGC-7901细胞活力和侵袭能力上升,细胞周期被促进,DDP作用下细胞生长抑制率和凋亡率下降,且HDAC4蛋白表达上调,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论: miR-140在胃癌组织中低表达,可作为抑癌因子调控胃癌细胞活力、细胞周期变化、凋亡、侵袭并通过下调HDAC4发挥作用。miR-140可能作为胃癌诊断和治疗的新靶点。     

Angiogenesis-associated protein annexin II in breast cancer: selective expression in invasive breast cancer and contribution to tumor invasion and progression

Many advanced human tumors including breast cancer overproduce plasmin that is known to promote angiogenesis and metastasis. The mechanism of this effect is poorly understood. Here we report that annexin II, an endothelial co-receptor for tPA (tissue-type plasminogen activator) and plasminogen, was undetectable in normal and hyperplastic ductal epithelial cells and ductal complexes. By contrast, it was consistently expressed in invasive breast cancer and ductal carcinoma in situ (DCIS) indicating its involvement in breast cancer. Using the well established invasive/metastatic MDA-MB231 cell line and the noninvasive/nonmetastatic MCF-7 human breast cancer cell line, we investigated the mechanism by which annexin II regulates breast cancer progression and metastasis. Western and Northern blot analyses demonstrate selective expression of annexin II in MDA-MB231 cells but not in poorly invasive MCF-7 cells suggesting its participation in invasive breast cancer. Since annexin II is a receptor for plasminogen, we tested whether MDA-MB231 cells are capable of producing plasmin in vitro. MDA-MB231 cell membranes induced plasmin generation in a time-dependent manner while those from MCF-7 cells failed to convert plasminogen to plasmin. The generated plasmin is capable of degrading ECM consequently facilitating cell invasion and migration, biological functions required for angiogenesis and metastasis. Plasmin generation and its dependent invasion and migration can be blocked by a monoclonal antibody to annexin II or angiostatin, potent inhibitors of angiogenesis, breast cancer, and metastasis. Our findings indicate that annexin II-dependent localized plasmin generation by human breast cancer cells could contribute to angiogenesis and metastasis. These results suggest that annexin II may be an attractive target for new anti-angiogenic and anti-breast cancer therapies.     

胃癌组织活化白细胞黏附分子的表达及其与临床病理的相关性

目的 观察活化白细胞黏附分子(ALCAM)在胃癌组织中的表达水平及其与临床病理的关系.方法 采用实时定量PCR和免疫组织化学方法分别检测33例胃癌及正常胃组织中ALCAM的mRNA和蛋白表达水平,分析其表达情况与临床病理资料的相关性.结果 胃癌ALCAM的mRNA表达水平[0.008 7(0.005 8～0.0167)]高于正常胃组织[0.0011(0.000 1～0.063 5),P＜0.05],尤其是低分化癌[0.012 8(0.008 2～0.0167)]及伴淋巴结转移者[0.0174(0.008 6～0.0307)]ALCAM的mRNA表达水平明显升高.免疫组织化学检测显示,无论胞质阳性染色或胞膜阳性染色,胃癌组织中ALCAM蛋白表达水平明显高于正常胃组织,有淋巴结转移的胃癌组织胞质ALCAM阳性比例[(100%(21/21)]明显高于无转移的胃癌组织[66.7%(8/21),P＜0.05].结论 胃癌组织中ALCAM高表达,且与胃癌淋巴结转移有关.     

ELMO1在胃癌细胞侵袭和迁移中的作用

目的:探讨吞噬和细胞运动蛋白1(ELMO1)的表达在胃癌细胞侵袭和迁移中的作用和功能。方法:用Western blot和实时荧光定量PCR实验检测5种胃癌细胞和1种人正常胃黏膜上皮细胞ELMO1的蛋白和mRNA表达水平,并筛选出ELMO1表达量高的胃癌细胞株;用细胞转染实验沉默胃癌细胞株的ELMO1;用细胞划痕实验以及Trenswell小室迁移和侵袭实验检测抑制该基因的表达对胃癌细胞侵袭和迁移能力的影响。结果:胃癌细胞中ELMO1的表达量明显高于人正常胃黏膜上皮细胞(P0.01),其中SGC7901细胞的ELMO1表达量最高;在SGC7901细胞中ELMO1-siRNA可显著沉默ELMO1的表达(P0.05);沉默ELMO1可显著降低胃癌细胞侵袭和转移的能力(P0.01)。结论:ELMO1在胃癌细胞中高表达,并可促进胃癌细胞的侵袭和迁移。     

DARPP-32在胃癌中的表达及其意义

目的 探讨DARPP-32蛋白在胃癌组织、细胞系及耐药细胞系中的表达及意义。方法用免疫组织化学SABC法检测96例胃癌组织及57例正常胃黏膜中DARPP-32的表达,用Western蛋白印迹检测胃癌组织及细胞系中DARPP-32的表达。结果 胃腺癌组织中DARPP-32的表达率(92.7％,89/96)显著高于正常胃组织(52.6％,30/57,P<0.05),且DARPP-32表达与胃腺癌的分化、浸润、转移无关(P>0.05)。在胃癌患者的癌组织中DARPP-32和剪切产物t-DARPP均表达,其表达水平显著高于其癌旁组织(t=2.45,P=0.015),并以t-DARPP的表达为主。在人胃癌细胞系中也存在DARPP-32和t-DARPP的表达,而且DARPP-32在SGC7901耐药细胞株SGC7901/VCR和SGC7901/ADR中的表达水平较其亲本细胞明显下调。结论 DARPP-32在胃腺癌组织中的表达增高,DARPP-32参与胃癌的发生,其信号转导通路可能存在于胃上皮细胞,并与胃癌的发生及多药耐药相关。