蛋白激酶C抑制剂对脑缺血大鼠突触体游离钙的影响

目的：探讨蛋白激酶Ｃ（Ｐｒｏｔｅｉｎ ｋｉｎａｓｅ Ｃ,ＰＫＣ）参与神经损伤机制。方法：采用大鼠全脑缺血模型,观察脑缺血／再灌流后突触体游离钙的变化及ＰＫＣ的抑制剂灯盏花对突触体游离钙的影响。结果：脑缺血／再灌流可以导致突触体游钙增加的抑制剂灯盏花可以阻止脑缺血／再灌流导致突触体游离钙增加。结论：ＰＫＣ参与神经元缺血性损伤可能与其促进钙内流有关。     

人参皂甙单体Rb3对缺血神经元胞内游离钙的影响

目的 :研究人参的主要生物活性物质 -人参皂甙 (GS)的单体Rb3(GSRb3)对大鼠海马皮质神经元缺血损伤的保护作用。方法 :大鼠海马神经元培养后 ,分别给予模拟缺血、模拟缺血 +不同浓度的Rb3培养后 ,采用激光共聚焦技术 ,测定不同情况下大鼠海马皮质神经元胞内游离钙的情况。结果 :Rb3对大鼠模拟缺血海马神经元胞内游离钙的升高有明显抑制 ,模拟缺血 10min后 ,与正常对照组相比胞内钙增加 ( 73 .5± 10 .3 1) % (P <0 .0 0 1) ;在模拟缺血液中分别加入 2 0 μM、40 μM、60 μM、80 μM的Rb1灌流 10min后 ,胞内钙增加分别为 ( 19.8± 3 .41) % ,( 14 .1± 2 .78) % ,( 10 .5± 3 .62 ) %和 ( 11.5± 4.3 0 ) % ,与缺血组相比差异有显著性 (P <0 .0 1～ 0 .0 0 1)。结论 :GSRb3可通过减轻细胞内的钙超载来对缺血神经元进行保护 ;保护作用呈浓度依赖性 ,在 60 μM时达到最大     

蛋白激酶C与培养神经元缺氧后caspase-3表达及细胞凋亡关系的研究

目的 探讨蛋白激酶C（PKC）对神经元缺氧调亡的影响及作用机制。方法 建立体外培养Wistar胎鼠皮层神经元模型及培养神经元缺氧模型,用3种不同浓度的PKC催化亚基特异性抑制剂Calphostin C预孵育培养神经元后进行缺血处理,观察神经元下述指标的改变;神经元存活率、caspase-3（CPP32）和细胞凋亡的规律。结果 随着缺氧时间的延长和Calphostin C浓度的增加,培养神经元的存活数量显著下降、caspase-3和TUNEL荧光染色阳性率及平均荧光强度均显著升高。结论 ①PKCt caspase-3均参与了缺氧神经元调亡;②PKC抑制剂Calphostin C可加重缺氧神经元凋亡;且该作用是通过caspase-3信号转导途径实现的。③PKC的激活在缺氧神经元凋亡中起保护作用。     

两种Ca^2＋依赖性蛋白激酶对脑缺血的敏感性研究

以蒙古沙土鼠双侧颈动脉结扎为缺血模型，研究了缺血１０ｍｉｎ及复流６ｈ后的大脑皮质可溶性及颗粒性ＰＫⅡ和ＰＫＣ这两种蛋白激酶的活性变化。发现缺血１０ｍｉｎ后可溶性和颗粒性ＰＫⅡ的活性分别下降为对照组的５９．１％和６２．５％，而复流６ｈ后又恢复至对照组的８６．３％和８４．２％；可溶性和颗粒性ＰＫＣ的活性分别下降为对照组的８４．４％和８４．５％，复流６ｈ后恢复至对照组的９０．４％和８９．４％。结果提示，     

蛋白激酶C激活调控FOS表达参与缺血诱导神经元凋亡的研究

目的：探讨蛋白激酶C（PKC）与神经元凋亡的可能机制，方法：采用大鼠全脑缺血模型，观察脑缺血／再灌流后PKC活性，FOS表达及神经元凋亡的变化。结果：脑缺血／再灌流可以导致PKC的移位激活伴FOS表达及神经元凋亡的增加；用蛋白激酶C抑制剂灯盏花可以阻止上述变化。结论：蛋白激酶C的激活可能通过促进FOS表达参与了脑缺血／再灌流诱导的神经元凋亡。     

蛋白激酶C在人绒毛膜癌JAR细胞中作用的研究

研究蛋白激酶C对人绒毛膜癌JAR细胞分泌人绒毛膜促性腺激素 (hCG)的影响 ,探讨PKC在调控JAR细胞hCG分泌中的作用。不同浓度的PKC激动剂 phorbol 12 -myristrate 13 -acetate(PMA )急性和慢性刺激、PKC抑制剂chelerythrinechlorine(CHEL)分别作用JAR细胞 ,测定hCG分泌量变化和细胞内磷酸化丝裂原激活的蛋白激酶 (mitogen -activatedproteinkinase ,MAPK)的改变。结果显示不同浓度PMA急性刺激时 ,抑制JAR细胞hCG分泌 ,在 2 0 0nmol/L时 ,其抑制作用最强 ;PMA慢性刺激时 ,JAR细胞hCG分泌量增加 ,在 2 0 0nmol/L时 ,其作用最强。CHEL作用JAR细胞时 ,hCG分泌量升高 ,在 60 0nmol/L时 ,其作用最强。对照组及各实验组都有活性的MAPK的表达 ,与对照组相比 ,PMA慢性刺激组、CHEL组MAPK磷酸化水平升高 ;PMA急性刺激组MAPK磷酸化水平降低。PKC参与调节JAR细胞hCG的分泌 ,活性升高时 ,下调MAPK磷酸化 ,使JAR细胞hCG分泌减少 ,而活性降低时 ,增强MAPK磷酸化 ,JAR细胞hCG分泌量增加     

高血糖对大鼠视网膜蛋白激酶C的影响

目的 :观察高血糖对STZ诱发糖尿病大鼠视网膜蛋白激酶C(ProteinkinaseC ,PKC)表达的影响。方法 :将 6 0只大鼠分为对照组 1 0只和观察组 5 0只。观察组用STZ造模。 9个月时将大鼠处死 ,通过免疫组织化学法观察两组大鼠视网膜PKC的表达。结果 :观察组PKC蛋白表达增加 ,与对照组比较差异有意义 (P <0 .0 1 )。结论 :高血糖具有促使糖尿病大鼠视网膜组织PKC激活的作用     

脊髓损伤后蛋白激酶C在脊髓前角神经元的表达

蛋白激酶C(PKC)可能通过多种途径参与脑损伤后继发性损伤．PKC在大鼠脊髓中存在多种PKC同工酶，但PKC在损伤脊髓组织中分布及损伤后变化规律仍不清楚，本实验应用免疫组化定位及图像分析，以明确大鼠SCI后不同时相点PKC的分布变化规律，为进一步研究PKC与SCI的关系提供依据。     

蛋白激酶C激活调控Bcl-2与缺血诱导神经元凋亡关系的研究

目的：探讨蛋白激酶C激活参与神经元凋亡的可能机理。方法：采用大鼠全脑缺血模型,观察脑缺血／再灌流后蛋白激酶C活性、Bcl-2表达及神经元凋亡的变化。结果：脑缺血／再灌流可以导致蛋白激酶C的移位激活伴Bcl-2表达及神经元凋亡的增加;用蛋白激酶C抑制剂灯盏花可以阻止上述变化。结论：蛋白激酶C的激活促进Bcl-2表达可能与脑缺血／再灌流诱导的神经元凋亡有关。     

铅对大鼠海马神经元胞质PKC活性的影响

目的 :观察不同低浓度醋酸铅不同染铅时间对大鼠海马神经元原代培养细胞胞质蛋白激酶C(PKC)活性及神经元细胞生长的影响。方法 :出生 4～ 8dWistar大鼠海马神经元原代细胞培养 ,显微照相 ,并不同时间不同浓度染铅 ,应用改良的Takai法测定PKC活性的变化。结果 :0 .1～ 1.0 μmol/L染铅 ,PKC活性依浓度依赖方式被激活 ,染铅浓度 >1.0 μmol/L ,PKC活性下降 ;染铅 15min后PKC活性升高并保持。低浓度醋酸铅并可抑制原代神经元细胞生长 ,呈浓度依赖方式。结论 :低浓度醋酸铅可持续激活大鼠海马神经元原代培养细胞胞质PKC ,抑制原代神经元细胞生长。     

异丙酚对心肺复苏后大鼠海马神经元胞内游离钙水平的影响

目的观察异丙酚对大鼠脑复苏后海马神经元胞内游离钙[Ca2 ]i水平的影响。方法26只SD大鼠随机分为三组,异丙酚组(P组、n=10),乳剂组(L组、n=10)和生理盐水组(N组、n=6)。建立窒息性心跳骤停大鼠心肺脑复苏的模型,心肺复苏成功后P组大鼠给予异丙酚10mg/kg静脉推注,继之以30mg/(kg.h)速率持续输注1h;L组大鼠则以等容积的1%脂肪乳剂按同样方式处置;N组大鼠除不作窒息、心肺复苏以外,其它操作同上两组,用等容积的生理盐水处置。复苏后2h在戊巴比妥麻醉下开颅,分离右侧海马测定神经元游离钙。结果各组大鼠之间在心肺复苏前后各时间点相应的温度、血压、呼气末二氧化碳浓度等指标的差异无统计学意义(P>0.05);和N组相比,P组、L组[Ca2 ]i明显升高(P<0.05),但P组、L组之间[Ca2 ]i差异无统计学意义(P>0.05)。结论心肺复苏后2h大鼠海马神经元胞内游离钙水平显著升高;异丙酚不能减缓胞内游离钙的升高。     

PTEN表达下调对神经元胞内游离钙离子和神经元凋亡的研究

目的：探讨神经元缺血缺氧损伤再灌后，下调PTEN在阻断Ca^2＋内流及凋亡调控方面的保护机制。方法：建立神经元缺糖缺氧（oxygen-glucose deprivation，OGD）损伤模型，转染shRNAspten-GFP质粒，用Western blotting检测PTEN水平，Fura 2-AM法测定胞内Ca^2＋浓度，流式细胞术和AO／EB检测神经元凋亡。结果：与正常组相比OGD后细胞凋亡率和胞内Ca^2＋浓度显著升高（P〈0．05）；与对照组相比经shRNAspten干预后胞内Ca^2＋浓度和细胞凋亡率明显降低（P〈0．05）。结论：shRNAspten-GFP能成功转染到神经元中，PTEN表达下调可阻断Ca^2＋内流并对缺糖缺氧诱导的细胞凋亡有拮抗作用，从而达到神经元保护的目的。     

低剂量辐射对T淋巴细胞游离钙和蛋白激酶C的影响

低剂量辐射对Ｔ淋巴细胞游离钙和蛋白激酶Ｃ的影响刘树铮，苏旭，韩振波，张迎春，齐进本研究目的在于阐明全身７５ｍＧｙＸ射线照时后Ｔ细胞［Ｃａ２＋］ｉ和ＰＫＣ的变化，为探讨低剂量辐射增强免疫的分子机制提供基础资料。一、材料和方法１．实验动物：雄性昆明小鼠，...     

辛伐他汀及oxLDL对人脐静脉内皮细胞蛋白激酶C活性和胞质内游离钙水平的影响

目的：探讨氧化低密度脂蛋白（oxLDL)及3-羟基-3甲基戊二酰酶A（HMG-CoA)还原酶抑制剂辛伐他汀对人脐静脉内皮细胞（HUVEC）蛋白激酶C（PKC）活性和胞质内游离钙浓度（[Ca^2 ]）i的影响。方法：HUVEC的PKC活性采用γ-^32P-ATP磷酸转移法,细胞内游离钙采用Fluo-3/Am荧光负式,流式细胞术检测。结果：oxLDL呈剂量依赖方式促进HU-VECＰＫＣ活性增加,１２min时达峰值,然后缓慢下降,３０min时仍维持较高水平;胞质内［（Ｃa^2 ]i升高分快速相和持续相２个时相;移去细胞外液钙,oxＬＤＬ仍引起快速相,但持续相消失;辛伐他湘则能明显抑制oxLDL引起的ＨＵＶＥＣＰＫＣ活性增加,并显降低持续相胞质内钙水平,而对快速相无影响。结论：oxＬＤＬ能引起ＨＵＶＥＣ内信号通路ＰＫＣ及［（Ｃa^2 ]i的动态变化,二密切相关。oxLDL刺激ＨＵＶＥＣ［Ｃa^2 ]i升高的快速相是由胞质钙池释放引起,持续相升高主要由胞外钙内流引起,辛伐他汀抑制ＨＵＶＥＣＰＫＣ活性可能是通过胞内［（Ｃa^2 ]i变化起作用。     

缺血性神经元的损伤机制

缺血性脑血管病是严重危害人类健康的常见病、多发病,脑缺血后引起的神经元损伤,常常导致严重的后遗症。目前对缺血性神经元损伤机制的研究愈来愈引起人们的重视。有人认为,兴奋性氨基酸毒性是缺血性神经元损伤的主要原因,也有人提出Ca2+、氧自由基、一氧化氮及其它一些毒...     

丙酮酸脱氢酶激动剂对高糖诱导的内皮细胞功能紊乱的改善作用

目的研究丙酮酸脱氢酶激动剂二氯醋酸二异丙胺(DADA)对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的功能的影响及可能机制。方法以体外培养的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)作为靶细胞,进行了以下研究:1.DADA对高糖诱导的血管EC功能指标一氧化氮(NO)和可溶性细胞间黏附分子-1(sICAM-1)的影响;2.用激光共聚焦显微镜及Westernblotting杂交分别观察高糖诱导的PKCα、PKCδ的位置变化及蛋白表达量的影响;实验分组:对照组:浓度为5.5mM;高糖组:浓度为30mM;DADA(1×10-5M,1×10-4Mor1×10-3M) 高糖组。结果1.30mM高糖可诱导EC功能紊乱:高糖可诱导EC功能紊乱:NO浓度降低,sICAM-1水平增加,DADA可抑制高糖诱导的上述变化;高糖可诱导HUVECs的PKCα及PKCδ表达位置转移;PKCδ表达增强,但对PKCα表达影响不明显。结论DADA可以纠正高糖所致内皮细胞功能紊乱,可能部分是通过PKCα及PKCδ途径来实现的。     

培养大鼠皮层神经元缺氧损伤与蛋白激酶活化关系的研究

目的检测神经元缺氧后膜性PKA(蛋白激酶A)和PKC(蛋白激酶C)活性变化,以及它们的特异性抑制剂对神经元凋亡率的影响.方法建立培养的神经元"缺血"模型,然后用不同浓度的特异性PKA抑制剂Rp-cAMP和特异性PKC抑制剂Calphostin C预孵育培养神经元再进行"缺血"实验,用放射酶分析法测定神经元缺氧后的膜性蛋白激酶活性,各组缺氧神经元的凋亡百分率由TUNEL荧光试剂盒测定.结果随着神经元缺氧时间的延长,神经元膜性PKA和PKC活性均增加;随着Calphostin C浓度的增加,细胞凋亡率显著增加;相反随着Rp-cAMP浓度的增加,细胞凋亡百分率显著减少.结论①PKA和PKC信号转导通路均参与了缺氧神经元损伤;②缺氧后培养神经元PKA和PKC对凋亡的调控功能相反,提示在培养的缺氧神经元中PKA和PKC信号转导属于单相控制系统,可能二者在细胞中的比例决定着缺氧神经元的存亡.     

血管性痴呆小鼠海马神经元蛋白激酶C表达特征

目的观察血管性痴呆(VD)小鼠海马神经元蛋白激酶C(PKC)的变化特征。方法将3月龄雄性昆明小鼠60只随机分为假手术组、模型组。模型组采用双侧颈总动脉结扎、反复缺血再灌注法制备VD模型,假手术组仅暴露双侧颈总动脉但不结扎。术后第29天、30天,采用跳台实验和水迷宫实验测试2组小鼠行为学改变,并采用免疫组织化学法观察2组海马CA1区神经元PKC表达的变化。结果模型组小鼠在跳台实验和水迷宫实验中的学习、记忆成绩均低于假手术组,差异有统计学意义(P<0.05)。模型组小鼠PKC免疫反应阳性神经元平均光密度值(0.27±0.07),显著低于假手术组(0.32±0.06),差异有统计学意义(P<0.05)。结论VD小鼠海马神经元PKC表达减少,推测此现象参与了VD发病过程。     

大鼠全脑缺血／再灌流脑组织蛋白激酶C活性的变化

目的：探讨脑缺血／再灌流致蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）活性变化的规律及其参与神经元损伤的机制。方法：采用Ｗｉｓｔａｒ大鼠４血管闭塞模型，观察脑缺血／再灌流致ＰＫＣ活性（用磷基转移法测得ＰＫＣ活性）变化的规律，结合既往的研究讨论ＰＫＣ活性改变参与神经元损伤的机制。结果：脑缺血／再灌流可以致膜性ＰＫＣ活性明显增加，同时胞浆ＰＫＣ活性明显下降。结论：脑缺血／再灌流可以致ＰＫＣ移位激活，ＰＫＣ移位激活参与脑损伤的