一起炭疽疫情病原的实验室检测

目的通过对新龙县炭疽疫情进行病原学检测,分离鉴定病原菌,以期为疫情的处置和防控提供科学依据。方法根据WS-283-2008炭疽诊断标准,采集此次疫情的患者的皮肤渗出液,病死牛和处死牛组织、及土壤标本进行炭疽芽孢杆菌的分离培养,对疑似的菌落进行革兰染色镜检,噬菌体裂解实验及青霉素抑制实验进行进一步鉴定。结果从三号牛(击毙)的鼻腔组织、四号牛(击毙)的耳朵组织、二号(病死牛)的耳朵组织及自然死亡小牛的耳朵组织标本中,各分离到四株炭疽芽孢杆菌。之前当地疾控中心,也采集了疑似皮肤炭疽患者的疱疹液送检,进行了培养和涂片革兰氏染色都未检测出疑似菌。结论突发皮肤炭疽中,采集宰杀的或病死动物标本,比采集疑似皮肤炭疽患者的标本更容易分离到炭疽芽孢杆菌;采取肉眼加显微镜下找原始平板中可疑的菌落做标记,按标记挑选可疑菌落进行进一步鉴定试验,比以往只在肉眼下挑可疑菌落,能快速分离到炭疽芽孢杆菌。     

一起皮肤炭疽疫情病原的实验室检测及毒力基因鉴定

目的 对2012年江苏省连云港市赣榆县一起皮肤炭疽疫情的病人临床标本及病牛肉标本进行快速分子诊断及毒力基因的鉴定。方法 用Real-time PCR方法对病人的血、焦痂标本及病牛肉标本进行炭疽杆菌染色体编码的rpoB基因及质粒PXO1、PXO2上pag、capA基因的检测,并对质粒上4种毒力基因(cya,pag,lef,cap)进行扩增并测序。结果 病人焦痂标本和病牛肉标本中均检测出rpoB基因和质粒PXO1、PXO2基因,4种毒力基因的测序结果证实扩增序列为炭疽杆菌质粒基因片段,病人标本与病牛肉标本的基因序列完全一致。结论 实验室检测结果证实此次皮肤炭疽疫情是由当地村民宰杀携带炭疽杆菌强毒株的病牛引起。     

贵州省2006-2011年炭疽芽胞杆菌检出情况与致病性研究

目的了解贵州省2006—2011年炭疽芽胞杆菌感染和分布情况,为贵州省炭疽疫情的预防控制和炭疽病09分子流行病学研究提供科学依据。方法对来自贵州省2006—2011年不同地区09830份疑似炭疽标本（外环境标本667份、患者标本151份和牲畜标本12份）,采用传统的革兰染色镜检、普通营养琼脂平板和血琼脂平板培养基分离培养炭疽芽胞杆菌,运用青霉素抑制试验和噬菌体裂解试验对可疑炭疽芽胞杆菌菌落进行鉴定。采用Real—time PCR技术检测88株经传统细菌学方法鉴定为炭疽芽胞杆菌菌株pX01质粒上的PA基因和pX02质粒上的CAP基因。结果从830份标本中分离出88株炭疽芽胞杆菌,总检出率为10．60％。2007年分离出炭疽杆菌的阳性标本最多,占36．36％;其次为2009年,占29．55％。阳性标本主要分布在黔西南州,其次为毕节地区和黔南州;册亨县、织金县和望谟县为炭疽杆菌检出数较多的监测县。88株炭疽芽胞杆菌CAP基因均为阳性。除2007年2株炭疽菌株PA基因为阴性外,其余86株PA基因均为阳性。结论贵州省炭疽疫源地面积广大,污染严重;检出的88株炭疽芽胞杆菌中97．73％的菌株同时具有两种毒力质粒,具有强致病性;该研究结果对贵州省炭疽疫情的预防控制及分子流行病学研究具有重要意义。     

四川省理塘县一起皮肤炭疽疫情病原的实验室检测

目的 通过对四川省理塘县一起疑似炭疽疫情的样本进行病原分离和鉴定,快速地明确传染源并采取相应的处理措施.方法 采集疑似炭疽患者的皮肤疱疹液、食用的牛肉及土壤样本按照WS 283-2008炭疽诊断标准对所有样本进行炭疽芽孢杆菌的镜检、分离培养、噬菌体裂解实验、青霉素抑制实验及PCR检测炭疽芽孢杆菌特异性基因等一系列实验进...     

北京市一起输入性肺炭疽疫情控制的探讨与思考北大核心CSCD

目的分析输入肺炭疽感染来源,描述流行病学特征,探讨肺炭疽疫情预防控制措施,为类似事件处置积累经验。方法收集患者一般社会学、流行病学、临床表现和病原学检测等信息,按照原卫生部《炭疽病诊断治疗与处置方案(2005年版)》采取预防控制措施。结果该起事件共涉及病例2例,1例肺炭疽,1例皮肤炭疽。实验室检测显示肺炭疽患者胸水荧光实时PCR炭疽芽孢杆菌(以下简称炭疽杆菌)核酸阳性,血清抗体胶体金检测阳性;皮肤炭疽患者血清抗体胶体金检测阳性;3份病死牛牛肉炭疽PCR核酸检测标本阳性,其中1份牛肉分离培养出炭疽杆菌。结论该事件为一起跨省炭疽聚集性疫情,肺炭疽疑似感染来自吸入高压水枪冲刷病死牛剥皮后地面污物过程中产生的含有炭疽杆菌的飞沫、尘埃或气溶胶。     

剥食病死牛肉引发人炭疽感染报告

调查2014-09四川省阿坝州红原县色地乡发生的因剥食病死牛肉而引起家庭聚集性皮肤炭疽感染的危险因素,按照炭疽诊断标准(WS283-2008),结合病人的流行病学特征展开调查、分析,并采集感染者3人的疱疹液和剩余牛肉2份进行病原学诊断。2份剩余牛肉和2份疱疹液标本中检出炭疽杆菌,另1份疱疹液中未检出炭疽杆菌。     

甘肃省甘南州两起炭疽疫情调查

目的 分析2019年廿肃省甘南藏族自治州(简称甘南州)两起炭疽疫情的流行特征及处置措施,为该地区炭疽预防和控制提供参考.方法 参照《炭疽诊断标准》WS 283-2008和《全国炭疽监测方案》开展流行病学调查,查阅病例临床资料并描述分析.结果 两起疫情共发病4例,涉及2个县3个自然村,一起发生于夏河县牧区(1例),医院报告为疑似肺炭疽,PCR检测痰标本,确诊为皮肤炭疽并发甲型流感导致的肺部感染,排除肺炭疽病例;另一起发生在临潭县(3例),通过购买卓尼县病牛输入,为家庭聚集性皮肤炭疽疫情,3人参与病牛剥皮,全部发病,5人食用病牛肉,发病3人.两起疫情均通过剥皮食用病死牛所致,二者间未呈现明显的流行病学联系.一年后回顾性调查两起疫情,并随访病例、现场采样评价消毒效果,未分离到炭疽杆菌.结论 疫区处理措施有效,但仍存在隐患,需加强监测;应加强当地群众的炭疽宣传教育和群众防病意识;同时,提高医务人员、实验室专业技术人员的业务能力,防止漏诊和误诊.     

察布查尔县一起炭疽疫情处置及疫情分析

目的了解炭疽在新疆察布查尔锡伯自治县的流行情况、发生原因,为制定炭疽防控措施提供科学依据。方法核实2013年8月2日察布查尔县托布中心托海村报告的炭疽疫情信息,对报告的5例炭疽患者通过流行病学调查、采样检测、疫源地处置、疫情上报等方式进行处置。结果 5例疑似患者的血液样本涂片和病原分离鉴定,3例疑似皮肤炭疽患者的样本直接分离出炭疽杆菌,2例患者临床使用抗生素3天以上,未分离出炭疽杆菌。结论 5例疑似患者经流行病学史、个案调查和临床表现初步诊断为皮肤炭疽。     

炭疽杆菌6小时快速鉴定法及其应用

观察炭疽杆菌在含血平板上幼稚菌落特征、溶血和粒性,再进行高效价噬菌体快速裂解试验、青霉素纸片串珠试验和活性炭NaHCO_3平板CO_2培养物的荚膜肿胀试验,可在6小时内完成包括测定菌种毒力和对青霉素敏感性的炭疽杆菌全面鉴定,通过实验室保存的106株炭疽杆菌和53株其他需氧芽胞杆菌试验以及278份疫区现场标本分离出128株细菌的鉴定,均取得了满意的结果,准确性与需时3～5天的常规鉴定法完全一致。由此建立了炭疽杆菌6小时快速鉴定程序和综合判定标准,还组装成“炭疽杆菌快速检验试剂盒”在一些单位使用,反映满意。     

2018-2019年宁夏皮肤炭疽流行特征及实验室检出情况分析

目的 了解2018-2019年宁夏皮肤炭疽疫情的流行特征及炭疽芽胞杆菌检出情况,为宁夏皮肤炭疽防控工作提供科学依据.方法 使用描述性流行病学方法分析2018-2019年宁夏皮肤炭疽疫情的三间分布规律,采集疑似病例样本进行炭疽芽胞杆菌分离培养及Real-time PCR检测.结果 2018-2019年共报告皮肤炭疽病例4...     

中国炭疽芽胞杆菌中11个串联重复序列位点的特征和分布

目的检测炭疽芽胞杆菌中可变数量串联重复序列(VNTR)的变化,分析我国菌株中VNTR的特征和分布规律。方法 PCR扩增,琼脂糖电泳和毛细管电泳,测序验证,BLAST比对等。结果 11个VNTR位点中有4个在所有菌株中没有差别,另外7个位点只在个别菌株中检测到差别,有差别的菌株多分布在新疆;11个VNTR位点均位于基因编码区内,编码对细菌生存重要的蛋白和一些功能不明蛋白。结论结果提示新疆的菌株类型较复杂;本研究中的VNTR位点比较保守,可能不能用于区别不同的炭疽芽胞杆菌,但对于了解炭疽芽胞杆菌的基因组特征以及鉴定炭疽芽胞杆菌具有一定的作用。     

2012-2015年贵州省炭疽芽胞杆菌分离鉴定及MLVA分型分析

目的 了解菌株的分子流行病学特征,为贵州省炭疽疫情的预防控制提供科学依据。方法 对2012-2015年贵州省间不同地区的409份标本(外环境388份、患者19份和牲畜2份)进行炭疽芽胞杆菌分离培养,采用革兰染色镜检、青霉素抑制试验和噬菌体裂解试验对可疑炭疽菌落进行鉴定,分析菌株检出情况。运用MLVA-15技术对炭疽芽胞杆菌分离株进行基因分型获得各VNTR位点的扩增长度并计算重复单元的重复数目。结合各VNTR位点重复数目,利用NTsys 2.10e软件对不同地区菌株进行聚类分析。结果 从409份标本中分离出34株炭疽芽胞杆菌,检出率为8.31%。其中341份土壤检出33株,检出率为9.68%;17份患者皮肤病灶渗出液检出1株,检出率为5.88%。2015年分离出炭疽杆菌的阳性率最高,占48.72% (19/39)。MLVA-15分析显示,34株菌株被分为3个MLVA型;聚类分析显示,34株菌株被分为A和B两簇,其中A簇又被进一步分为A1和A2分支。来自相同地区或年份的多数菌株聚类关系相对较近。结论 2012-2015年贵州省间各种疑似炭疽送检标本中,土壤的检出阳性率最高,贵州省炭疽芽胞杆菌菌株具有MLVA型别多样性,型别分布和聚类关系具有明显的地域性。     

2006-2016年贵州省炭疽芽胞杆菌SNR分型分析

目的 对贵州省2006-2016年分离的炭疽芽胞杆菌进行单核苷酸重复序列分型分析(SNR),了解菌株SNR型别特征,为炭疽疫情监测、调查与溯源提供技术手段和科学依据.方法 提取贵州省2006-2016年间不同地区的炭疽芽胞杆菌菌株基因组DNA,应用SNR各位点引物进行PCR扩增,将扩增产物进行毛细管电泳分析获得各位点序...     

内蒙古部分炭疽杆菌16S和23S rRNA基因间段分析

为了解在内蒙古分离的炭疽杆菌与其它地区的菌株之间有无差异,采用ＰＣＲ加酶切的方法对拨和的被试菌进行了１６Ｓ和２３Ｓ ｒＲＮＡ基因间段分析。结果发现所有实验菌株间的ＰＣＲ及酶切图谱一致,说明我区的炭疽杆菌与其它地区的菌株在遗传学上具有同源性,无本质差异。     

粗提抗原检测炭疽血清抗体ELISA方法的初步评价

目的 对使用粗提抗原检测炭疽血清抗体的酶联免疫吸附试验(ELISA)方法进行初步评价.方法 用间接ELISA方法检测人群血清(健康人血清42份、炭疽病人血清42份)特异性抗体,用阳性血清对照绘制标准曲线,按照标准曲线计算出每份血清标本的抗体相对含量,所得结果与重组致死因子(rLF)方法的检测结果进行比较.结果 病人组血清抗体相对含量中位数为1.19,健康人组血清抗体相对含量中位数为0.24,两组比较差异有统计学意义(uc=7.643,P＜0.05).粗提抗原检测与rLF检测结果并不完全对应,但两种方法显示出较高的一致性.结论 粗提抗原检测炭疽血清抗体的方法能区分大部分的病人和健康人,有一定的应用潜力,可用在炭疽疾病监测工作中.     

Detection of spores of Bacillus anthracis using the polymerase chain reaction.

The polymerase chain reaction (PCR) was used to identify spores of Bacillus anthracis. By using an assay capable of amplifying a 1247-bp fragment from the gene that encodes the edema factor of B. anthracis, as few as 10(3) copies of a plasmid containing the edema factor gene and as few as 2 x 10(4) spores were detected. Subjecting the product of this PCR to a second PCR designed to amplify a 208-bp fragment nested within the 1247-bp product improved detection to a single plasmid copy per PCR and to two spores of B. anthracis per PCR.     

荧光定量PCR快速检测炭疽芽孢杆菌的实验研究

目的利用LightCycler建立一种简便、特异的实时荧光定量PCR检测方法,用于炭疽芽孢杆菌的快速检测。方法采用SYBR GreenⅠ随机掺入法,利用本实验室建立的实时荧光定量PCR反应体系,根据炭疽芽孢杆菌荚膜和水肿因子设计引物,同时检测两个毒力相关质粒的存在,检测其灵敏度和特异性,并以盲测试验进行验证;在此基础上鉴定14株炭疽芽孢杆菌,并测试该法检测土壤模拟污染标本的灵敏度,实验中设置内对照以排除假阴性结果的存在。结果炭疽杆菌基因组DNA的检测灵敏度可达每反应体系0.53pg,两个克隆株提取质粒的检测限分别为每反应体系12拷贝、140拷贝;检测14株炭疽芽孢杆菌及29株非炭疽芽孢杆菌的PCR扩增结果表明,炭疽芽孢菌DNA均出现特异的扩增结果,29株对照菌的DNA均为阴性;土壤模拟污染标本检测灵敏度可达每反应体系36个芽孢;20次重复实验结果表明其平均值与标准差为14.602±0.640。结论该方法检测炭疽芽孢杆菌具有简便、快捷、灵敏度高和特异性好的特点,为临床诊断、环境监测、卫生防疫等方面,快速检出炭疽芽孢杆菌提供了有利的手段。