金黄色葡萄球菌对家蝇抗菌物质的诱导

[目的]探讨金黄色葡萄球菌对家蝇抗菌物质诱导表达的规律。[方法]室内饲养的家蝇三龄幼虫，感染金黄色葡萄球菌诱导处理后，分别于第0、12、24、36、48、60、72、84h提取血淋巴，以溶壁微球菌和金黄色葡萄球菌作指示菌，采用平板法作抑菌试验，以抑菌圈直径表示抗菌活力的大小，借以指示家蝇抗菌物质的诱导表达规律。[结果]经金黄色葡萄球菌诱导处理后，第12~36h提取的血淋巴抑菌活性较强，对溶壁微球菌的抑菌活性高峰出现在处理后12h，对金黄色葡萄球菌的抑菌活性高峰出现在处理后36h。[结论]感染金黄色葡萄球菌可诱导家蝇产生抗菌物质，血淋巴收集在诱导后12～36h最为合适。     

丝光绿蝇抗菌物质诱导研究

目的 探讨针刺体壁对丝光绿蝇抗菌物质的诱导表达规律。方法 丝光绿蝇三龄幼虫针刺体壁处理后，分别于第0、12、24、36、48、60、72、84h提取血淋巴，以金黄葡萄球菌为指示菌，采用平板滤纸片法作抑菌试验，用于显示丝光绿蝇抗菌物质的诱导表达，以抑菌圈直径表示抑菌活力的大小。提取诱导后48h的血淋巴，设置3、5、7ul不同的血淋巴加样量实验组，记录不同加样量对金黄葡萄球菌的抑菌效果。设置不同稀释浓度，记录不同浓度的血淋巴对金黄葡萄球菌的抑菌活力。观察诱导后48h的血淋巴对大肠杆菌、金黄葡萄球菌、白色葡萄球菌、变形杆菌、伤寒杆菌、副伤寒杆菌、枯草杆菌、溶壁微球菌等8种细菌的抑菌效果。结果 丝光绿蝇幼虫针刺体壁处理后，对金黄葡萄球菌的抑菌活力高峰出现在处理后48h。平板滤纸片法抑菌试验中，以加7ul血淋巴的抑菌效果最佳。丝光绿蝇诱导48h血淋巴1／2、1／4、1／8、1／16、1／32、1／64的不同稀释浓度，对金黄葡萄球菌均能产生明显的抑菌环。丝光绿蝇诱导后48h的血淋巴，对大肠杆菌、金黄葡萄球菌、白色葡萄球菌、变形杆菌、伤寒杆菌、副伤寒杆菌、枯草杆菌、溶壁微球菌等8种细菌都能产生明显的抑菌环。结论 针刺体壁能诱导丝光绿蝇体内产生抗菌物质，诱导的抑菌活力峰出现在处理后48h。抑菌试验加样以7ul为宜，诱导后丝光绿蝇的血淋巴，稀释至64倍，对金黄葡萄球菌仍有抗菌活性，提示有较强的抗菌活性。对8种细菌都能产生明显的抑菌环，提示具有较广的抗菌活性。     

家蝇抗菌物质诱导及高温处理后的抑菌活性

目的探讨家蝇幼虫经针刺诱导产生的抗菌物质经不同温度处理不同时间后的抑菌活性。方法室内饲养的家蝇3龄幼虫,经针刺诱导48h后提取血淋巴,100℃处理10s和30s及1、3、5min,80℃和60℃处理30s、1、3、5、10min后,采用磷酸盐缓冲液制备离心上清样品,分别观察记录其对溶壁微球菌和金黄色葡萄球菌的抑菌效果。结果经100、80℃处理后,对溶壁微球菌的抑菌环随处理时间的延长而环直径减小,60℃处理不同时间对溶壁微球菌的抑菌环大小无明显影响。100℃处理1min后以及80℃处理3min后对金黄色葡萄球菌无明显的抑菌环产生,60℃处理不同时间对金黄色葡萄球菌的抑菌环直径无明显影响。结论家蝇幼虫经针刺诱导产生的抗菌物质,其抑菌活性对高温有一定的稳定性,80～100℃加热处理,抑菌活性随处理时间延长而减弱,60℃高温处理10s至10min对其抑菌活性无明显影响。     

丝光绿蝇抗菌物质针刺诱导及对溶壁微球菌的抑菌活性研究

[目的]探讨针刺体壁诱导丝光绿蝇产生的抗菌物质对溶壁微球菌的抑菌活性。[方法]丝光绿蝇三龄幼虫经针刺体壁诱导后,48 h提取其血淋巴,设置3μl、5μl、7μl、10μl不同的加样量,观察对溶壁微球菌24 h后的抑菌效果。设置1/4、1/8、1/16、1/32、1/64、1/128不同的稀释浓度,加样量10μl,观察对溶壁微球菌24h后的抑菌效果。[结果]诱导后48 h的血淋巴不同加样量对溶壁微球菌均有大而明显的抑菌环产生,10μl环太大易变形,不易测量,以加7μl血淋巴对溶壁微球菌的抑菌效果最佳。稀释1/4、1/8、1/16、1/32、1/64浓度组均有抑菌环产生,抑菌环随稀释倍数增加而减小,稀释1/128时观察不到抑菌环。[结论]针刺诱导丝光绿蝇产生的抗菌物质对溶壁微球菌有较强的抑菌活性。     

诱导家蝇幼虫抗菌蛋白的提取及动力学研究

目的 比较两种方法提取家蝇幼虫抗菌蛋白抑菌活性，并观察两种诱导源所诱导家蝇幼虫血淋巴中抗菌蛋白产生的动力学变化。方法 用金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌诱导家蝇幼虫，在诱导后12，24，36，48，60h收集家蝇幼虫，80℃热水处死，分别用血淋巴、组织匀浆提取抗菌蛋白后进行抗菌活性的测定。结果 用组织匀浆提取的抗菌蛋白抑菌效果明显好于血淋巴；金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌诱导家蝇幼虫产生抗菌物质达最大活性时间分别为诱导后48，36h。结论 用组织匀浆提取家蝇幼虫抗菌蛋白是一种较好的方法；诱导后36～48h的抗菌蛋白活性最大。     

丝光绿蝇抗菌肽的热稳定性研究

目的探讨高温处理对丝光绿蝇抗菌肽抗菌活性的影响。方法丝光绿蝇Ⅲ龄幼虫针刺体壁诱导后，48h后提取其血淋巴，分别于100、80和60℃水浴0、0．5、1、3、5min等不同时间后，观察不同温度处理不同时间后对溶壁微球菌的抑菌效果。结果丝光绿蝇幼虫经针刺诱导的抗菌肽100℃水浴1min仍有抗菌活性，100℃处理3min后活性丧失；80及60℃水浴5min后仍有抗菌活性。结论针刺诱导的丝光绿蝇抗菌肽的抑菌活性具有一定的热稳定性。     

丝光绿蝇抗菌肽针刺诱导及初步电泳分离

目的探讨丝光绿蝇抗菌肽的诱导及电泳分离方法。方法丝光绿蝇3龄幼虫针刺体壁诱导后，第48小时提取其血淋巴，设置3、5、7、10μl不同的加样量和pH值60、6．5、7．0的琼脂平板，观察对溶壁微球菌的抑菌效果。置于100、80℃水浴30s、1、3和5min后，观察不同温度处理不同时间后的去杂蛋白效果和对溶壁微球菌的抑菌效果，并对各样品进行电泳分离。结果随加样量增加抑菌环直径增大，10μl环太大易变形，不易测量，以加7μl血淋巴对溶壁微球菌的抑菌效果最佳。平板pH值6．0时，对溶壁微球菌的抑菌环直径最大，随pH值增加而抑菌环直径减小。血淋巴100℃水浴30s、1min仍有抑菌活性，处理3和5min无抑菌活性；80℃水浴30s至5min均有抑菌活性，电泳显示100℃处理3和5min的样品与其他相比缺少2条蛋白区带。结论针刺诱导的丝光绿蝇抗菌肽在酸性条件下抑菌活性更强，分离时血淋巴预处理采用80℃水浴1—3min去杂蛋白效果较好，诱导的血淋巴100℃处理3和5min即丧失抗菌活性，电泳显示缺少2条区带，此2条差异区带可能为抗菌肽组分。     

不同诱导源诱导家蝇幼虫抗菌蛋白效果的比较

目的比较5种诱导源所诱导产生家蝇幼虫抗菌蛋白的抗菌活性,观察不同诱导源对家蝇幼虫抗菌蛋白产生的诱导效果.方法用金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、大肠埃希菌脂多糖、紫外线及热诱导家蝇幼虫,在诱导后不同时间提取抗菌蛋白进行抑菌实验,观察不同诱导源诱导后抗菌蛋白产生的高峰时间,并比较各诱导组高峰时间产生抗菌蛋白的抗菌活性.结果各诱导组诱导家蝇幼虫产生抗菌蛋白达最大活性时间为诱导后36～48 h（热诱导后家蝇幼虫很快化蛹,未观察抗菌蛋白产生高峰时间）;金黄色葡萄球菌诱导后的抗菌蛋白抗菌活性最佳,热诱导后的抗菌蛋白抗菌活性也较未诱导组好.结论各诱导源诱导后抗菌蛋白产生的高峰时间不同;细菌诱导的抗菌蛋白抑菌效果最好,热诱导也是一种较理想的诱导方法.     

家蝇抗菌物质的电泳分离及其条件优化

目的 研究以针刺诱导家蝇产生抗菌物质,对家蝇针刺诱导后抗菌物质的电泳分离条件以及热处理方法进行初步的探讨.方法 将家蝇3龄幼虫针刺体壁诱导48 h后提取血淋巴,100℃水浴血淋巴0、0.5、1、3、5 min,分别取上清液5、10、20、30μl进行酸性聚丙烯酰胺凝胶电泳,以分离家蝇的抗菌物质.结果 热处理和未经热处理的血淋巴都以20μl的加样量分离效果较好,热处理时间以100℃水浴加热1 min血淋巴的电泳效果较好.比较针刺诱导和未经诱导家蝇的血淋巴,结果显示诱导后血淋巴中的蛋白质无论是种类还是含量上都有所增加,经过100℃水浴加热1 min后,血淋巴条带的数量和丰度均有所增加.结论 100℃水浴加热1 min,加样量为20μl为家蝇血淋巴最佳处理效果.针刺诱导可以使家蝇血淋巴产生新的蛋白质,这些蛋白质可能是诱导产生的新的抗菌物质.

Abstract：

Objective To study the antibacterial substances produced by Musca domestica and heattreatment and electrophoresis isolation of the substances. Methods After the 3rd instar larval of Musca domestica being induced for 48 hours by pricking, the hemolymph was collected and bathed at 100 ℃ for 0,0.5,1,3,5 min. Antibacterial substances of Musca domestica was isolated by electrophoresis with acide polyacrylamide gel using 5,10,20,30 μl doses. Results 20 μl was the optimum dose both for bathed and non-bathed hemolymph. Water bath at 100 ℃ for 1 min was the optimum bath time for hemolymph. Comparing induced hemolymph with non-induced hemolymph, the protein of the induced hemolymph was increased in the number and content. After 100 ℃ bathed for 1 min,it showed that the bonds of hemolymph increased both in quantities and contents. Conclusion Optimum treatment is 100 ℃ bath for 1 min and 20 μl of adding dose. Pricking inducing can produce new proteins in hemolymph, which are the new induced antibacterial substances.     

家蝇幼虫抗菌蛋白的诱导及抗菌特性

目的用不同诱导源诱导家蝇幼虫,观察抗菌蛋白产生的规律及其抑菌特性,为进一步研究家蝇幼虫抗菌蛋白的产生及应用提供实验依据.方法用4种诱导源诱导后不同时间的组织匀浆提取抗菌蛋白进行抑菌实验,观察不同诱导源诱导后抗菌蛋白产生的高峰时间及各诱导组抗菌蛋白的抑菌特性.结果各诱导组抗菌蛋白的抑菌活性明显高于对照组,各诱导组抗菌蛋白的产生在诱导后36～48h达高峰;各诱导组产生的抗菌蛋白均能抑制几种革兰阴性菌、一种革兰阳性菌和耐药菌株,但对不同细菌的抑菌活性有差别.结论不同诱导源诱导家蝇幼虫后抗菌蛋白产生的高峰时间不同、产生的抗菌蛋白抗菌谱广.     

家蝇幼虫中与抗菌功能相关的蛋白和多肽的分析

目的　研究家蝇幼虫体内与抗菌功能相关的蛋白和多肽。方法　对家蝇 3龄幼虫进行针刺、带菌针刺、热激、超声 4种处理 ,于处理后 6、16、2 4、4 8、6 5h分别收集提取耐热水溶蛋白 ,比浊法测定抗菌活性 ,经逐步回归分析确定抗菌相关蛋白和多肽。结果　 4种处理均能诱导家蝇幼虫产生抗菌物质 ,其中表观分子量为 2 0kDa、2 2kDa的蛋白对金黄色葡萄球菌和枯草杆菌均有抗菌作用 ,13kDa、16kDa、2 6kDa蛋白只对上述两种菌中的一种有作用 ,37kDa、4 4kDa的蛋白对抗菌作用具有显著负贡献。结论　家蝇幼虫经过诱导后 ,会有多种与抗菌活性相关的蛋白和多肽开始表达或加强表达 ,它们彼此合作 ,共同建立一个完整的防御体系。     

家蝇幼虫血淋巴不同Tricine-SDS-PAGE分析方法比较

目的用3种不同的三羟甲基甘氨酸-十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(Tricine-SDS-PAGE)方法分析家蝇三龄幼虫血淋巴。方法分别用不含尿素也不含甘油的分离胶组成的普通Tricine-SDS-PAGE方法,分离胶中有尿素组分的三层胶方法,分离胶中有甘油组分的三层胶方法分析家蝇三龄幼虫血淋巴。结果家蝇幼虫血淋巴中含有丰富的小分子多肽,用不含尿素也不含甘油的分离胶组成的普通Tricine-SDS-PAGE方法不能有效分离分子量在<10.700 kDa的小分子蛋白或多肽;分离胶中有尿素组分的三层胶方法虽能清晰分离家蝇幼虫淋巴中<16.949kDa的小分子蛋白或多肽,但对其分子量的测定可能不够准确;而分离胶中有甘油组分的三层胶方法既能很好分离>14.4 kDa的蛋白,也能清晰分离<8.159 kDa的小分子多肽,并能较准确的反映其分子量大小,用于分析家蝇幼虫血淋巴效果较好。结论分析家蝇幼虫血淋巴应采用分离胶中有甘油组分的三层胶的电泳方法。     

家蝇幼虫血淋巴纯化蛋白对Hela肿瘤细胞抑制作用的形态学观察

目的 研究家蝇幼虫血淋巴纯化蛋白(anticancer protein from Musca domestica larva hemolymph,MAC-1)对体外培养的人官颈癌Hela细胞抑制作用引起的形态学改变.方法 应用四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)法、光学显微镜、HE和吖啶橙(AO)染色、透射电镜(SEM)的方法检测MAC-1对体外培养的人宫颈癌Hela细胞的抑制作用及形态学改变.结果 MAC-1对人宫颈癌Hela细胞株的增殖抑制作用呈剂量依赖性,同时呈时间依赖性.MAC-1 12.5 μg/ml作用12h后在倒置显微镜、HE及AO染色和透射电镜均观察到典型细胞凋亡形态变化.结论 MAC-1对人宫颈癌Hela细胞株具有抑制增殖及诱导凋亡作用.     

家蝇幼虫抗茵肽对弓形虫速殖子DNA的损伤作用

目的从家蝇幼虫血淋巴中分离纯化出有抗弓形虫作用的抗菌肽，观察其对弓形虫速殖子DNA的损伤作用。方法通过损伤加感染的方法诱导家蝇幼虫大量表达抗菌肽，然后经过研磨、离心和层析等过程，分离纯化并筛选出抗弓形虫作用的抗菌肽，采用流式细胞术（FCM）分析其对弓形虫速殖子DNA含量的影响。结果通过DNA含量直方图可以看出，实验组的速殖子数少于对照组，且两组分布参数存在较明显差异。正常的弓形虫速殖子处于M1期的较M2期的少，抗菌肽组则相反，处于M1期的较M2期的多，且M1峰值明显前移。结论家蝇幼虫血淋巴中存在抗弓形虫作用的抗菌肽，其可通过抑制弓形虫DNA的合成杀伤弓形虫。